常见植物的脱毒与快速繁殖技术

第二节果树脱毒与快繁
（三）、葡萄无病毒苗的培养
1、热处理脱毒： （1）葡萄无性系处理：材料置于38℃，CO21200×10-6的 人工空气侯箱内。经30min处理，较易从枝条尖端或休眠 芽中除去扇叶病毒。 （2）将感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓中，然 后在38℃的环境中保持2个月，以后取出枝条和接种芽继 续生长。 （3） 直接将葡萄蔓浸泡在50℃的 温水中10～20min，可 以治疗皮尔斯病，但不能治疗黄点病及卷叶病。
第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
第二节 果树的脱毒与快繁
葡萄
苹果
草莓
第二节果树脱毒与快繁
一、苹果的脱毒与快繁
（一）、苹果的形态特性和生物学特性
苹果（Malus pumila）属落叶乔木，树木高大。果实为 假果。 苹果喜凉；喜光；适合在微酸性到中性土壤中栽种。
第二节果树脱毒与快繁
（二）、脱毒技术
第二节果树脱毒与快繁
（三）、葡萄无病毒苗的培养
2、组织培养脱毒技术 （1）、茎尖接种后变绿、增大期的培养：在25℃，相对 湿度80%，16h的长日照条件下水培生成的嫩茎取0.2～ 0.3mm 茎尖接种于 1/2MS，添加NAA0.1，BA1.0，Kt0.5， 腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L，琼脂6.0，pH5.8培养基上。 （2） 从畸形叶和茎叶伸长期：采用1/2MS，添加IAA0.2， BA0.1，KT0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L的培养基。 （3）地上部和地下部的伸长期：Galzy（1964）培养基， 添加NAA0.1。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
2、 生物学习性
马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻。 发芽适温为12~18℃。 地上茎叶生长温度为17~21℃。 块茎形成要求昼温14~24℃，夜温12~14℃。 结薯期要求12h左右的短日照和疏松、湿润、肥 沃以及通气良好的土壤条件。土壤板结繁
1、热处理脱毒 将草莓植株在40～41℃温度下处理4～6周。
2、微茎尖脱毒 （1）、初代培养 ：取草莓顶芽，用自来水流水
冲洗2～4h，然后剥去外层叶片，消毒， 切取 0.2mm的茎尖。接入MS + BA0.25 + NAA0.25 培养基中。培养条件为22～25℃，日照16～ 18h光强3000lx。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
培养条件：
温度：21~25℃ 光照度：2000-3000 lx 光照时间：12h/d
2-3周长愈伤，4-5周长绿点，3--6月 长成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽 很快的扔掉。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
（2） 继代和生根
培养成功的马铃薯脱毒苗，经ELISA（试剂盒） 鉴定后（试管苗应每3月检测一次，每年4次） 采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。
1、病毒种类：苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒和 苹果茎沟病毒等 。
2、微尖嫁接脱毒：砧木：去顶的离体培养幼苗， 接穗：试管培养的无毒新稍；嫁接后培养生叶， 移栽即可。
3、热处理脱毒：把植株置于38 ℃下25-50天。 4、茎尖培养脱毒：把0.1-0.3mm的茎尖离体培养。 5、脱毒苗的鉴定：抗血清法，电子 显微镜法，
第一节蔬菜脱毒与快繁
（四）、马铃薯无病毒株的繁殖
（１） 直接块茎繁殖 （２） 扦插繁殖 （３） 组织培养切段繁殖
A：继代培养 B：低温保存
第一节蔬菜脱毒与快繁
二、番茄的组织培养
（一）、形态特征和生物学习性
番茄的叶片为长羽状， 在叶轴上生有裂片，顶生 裂片，小裂片，间裂片， 这些裂片是叶的深裂，缺 刻的变化。两性花，聚伞 花序，浆果。 蕃茄耐低温，喜光照，对 水分需求量极大，喜肥，
叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱 布滤出汁液，再用蒸馏水稀释１０倍作为接种物 (混入６００目的金刚砂)。
用左手心紧靠在鉴定寄主植物的背面，以右 手指蘸取接种液，均匀的在叶背面擦过，以不造 成叶片产生伤痕为度，最后把叶面上多余的接种 物用清水洗净，放置在１５～２４的防虫室中， 一般５－１０天可发病。
3、分化增殖：移植到加有BA0.5～1.0和CH300 的1/2MS培养基上 ，在光下培养条件同上。
4、生根培养：同茎尖培养。
第二节果树脱毒与快繁
二、葡萄的脱毒与快繁
（一）、形态特征和生物学习性 葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄 地上部分的茎细。节上具有卷须， 可向上攀援。叶近圆型或卵型， 3～5裂。 葡萄原产于温带地区，不太抗寒。 葡萄的根系抗寒力很弱，在－5～ －7℃时即受冻。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯试管苗
第一节 蔬菜脱毒与快繁
(3) 驯化
炼苗室温度：白天23~27℃，夜间不低于14℃。 炼苗具体方法：移植前7d左右，将长有3~5片叶、 高2~3cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从培 养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管 苗，在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
3、胚状体诱导：接种到MS+2,4-D0.4 + KT0.2 + IAA4 + 3～8%蔗糖培养基上，25～30℃下 培养。
4、生根：同茎尖脱毒中所用方法。
第二节果树脱毒与快繁
（五）胚培养
1、取材消毒：取授粉30～50d内的幼果，用 70%酒精擦拭。取出种子，剥出幼胚或成熟 胚。
2、启动培养：接种在BA0.25+IAA0.5的1/2MS 培养基上。培养条件为25～30℃和1500～ 2000lx光照14h。
（二）、马铃薯脱毒技术
通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体 内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、 PVM、PSW等病毒。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
我国马铃薯栽培现状
全国现有马铃薯播种面积300多万公顷， 每年需合格种薯45亿公斤，脱毒原种4亿 公斤，脱毒小薯或微型薯45亿粒。
我国的马铃薯平均单产仅为13.60吨/公顷， 是世界单产最高国这瑞士（48.80吨/公顷） 的1/4。最主要的因素就是种薯质量差，品 种布局不合理。
第二节果树脱毒与快繁
三、草莓的脱毒与快繁
（一）、形态特征和生物习性 草莓（Fragaria）属多年生草本
植物，植株矮小，呈半平卧丛 状生长，基生三出复叶。果实 为聚合瘦果生于花托上。 草莓喜光但又较耐阴，要求肥沃、 疏松、透水、通气的中性微酸 性或微碱性土壤。
第二节果树脱毒与快繁
（二）、草莓脱毒苗的培养
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯病毒的种类
危害有17种之多，如X病毒、S病毒、 Y病毒、M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤 形块茎病毒等。
马铃薯病毒可使块茎产量减少 50%~80%。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
（一）、马铃薯特性和生物学习性
1、形态特性 (1)根 根系由出生根和匍匐根组成。 (2)茎 分地上部分和地下部分。 (3)叶 全缘，心脏形。 (4)花 为聚伞花序。 (5)果实 浆果。
（三）、马铃薯无病毒苗的鉴定材料
1、指示植物鉴定 •在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常 用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒 很容易通过汁液来接种。 2、鉴定寄主的准备 •马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日 红，茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物 应在无虫网室中培养。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
３.接种液制备及接种
第一节 蔬菜脱毒与快繁
2．茎尖培养脱毒
（1）茎尖消毒
一般在室内发芽，芽经热处理（38℃）2 周。然后取1厘米的茎尖，水洗干净，无菌 条件下先用70％的酒精浸组织15-20秒，再 用2％次氯酸钠溶液浸泡4--5min，然后用 无菌水冲洗3次。
第一节 蔬菜脱毒与快繁
取材和接种
把消毒芽在解剖镜下逐层剥去幼叶，露 出圆滑的生长点，留1-2个叶原基，0.2— 0.3毫米，随即接种于MS液体培养基上， 每升加0.1mgNAA 、 0.2mgGA3、0.5BA， 2%蔗糖，p H值5.8。
植物组织培养
第9章 常见植物的脱毒与快 速繁殖技术
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第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术
第一节 蔬菜的脱毒与快繁
蕃茄
马铃薯
第一节 蔬菜脱毒与快繁
一、马铃薯的组织培养
第一节 蔬菜脱毒与快繁
微型薯
第一节 蔬菜脱毒与快繁
马铃薯是一种全球性的重要经济作物。 适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输， 既是一种重要的粮食作物也是一种调节市 场供应的重要蔬菜。马铃薯原产于拉丁美 洲，当被发现可以食用后，很快传到世界 各地，成为栽培很广的一种作物。
4、生根培养：1/2MS或 White，Nitsh附加IAA1、 IBA0.2和GA33 等。
第二节果树脱毒与快繁
（四）苹果花粉培养
1、选材与预处理：选取中心花蕾吐红，周围花 蕾明显增大，但花序尚未分离的花蕾，置于冰 箱中1-3℃预处理。
2、消毒：70%的酒精浸约0.5min，再在10%漂 白粉上清夜中浸15～20min。
ELISA法、指示植物法。
第二节果树脱毒与快繁
（三）、苹果茎尖脱毒快繁技术
1、材料与消毒：带芽或茎尖的茎段；常规消毒， 用无菌水洗3～5次 ；切茎尖约0.1～0.5mm。
2、芽的诱导：MS或LS+BA2+300～500CH或 LH+3%蔗糖的培养基上，诱导芽的分化。
3、继代增殖培养：MS+BA0.5～1+CH300 培养 基上增殖。
第二节果树脱毒与快繁
（二）、葡萄的组织培养
1、选材接种：从生长旺盛的葡萄新梢顶端取1～2㎝的茎 尖。消毒。分离出约2㎜长的茎尖，接种到培养基上。
2、培养基：MS培养基（无机盐减半为好），再添加 BA1～2，NAA0.01，LH100，蔗糖2%，琼脂0.6%， 而B5培养基愈伤组织化严重，茎尖生长不好。
3、苗分化：BA0.5，同时添加GA30.2，黑暗处理可促 进幼茎的伸成，提高成苗率。