植物组织培养技术 植物脱毒快繁技术
植物生物技术7 植物脱毒和快繁

护环境。
二、植物脱毒的原理
(一)热处理脱毒原理 当植物组织处于高于正常温度的环境(35-
40℃)时,组织内部的病毒部分或全部钝化,
但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。
思考:热处理的作用是什么?
1.高温短时处理法 是利用病毒与植物耐热能力的不同,将苗木、 接穗或种子等繁殖材料在一定的高温下处理一段
由于珠心胚是由母本体细胞发育而来,未 经减数分裂,因此除个别体细胞突变外,珠心 胚长出的实生苗遗传上与母株完全相同。因此 由珠心胚获得的珠心苗大多数病毒被脱除而遗 传特征与母株完全相同。选择这种类型的珠心 苗,可应用标记花粉控制授粉,然后选出典型 的实生苗。
例如,枳的花粉可用作标记花粉,因为所有 枳的杂种实生苗都具有三叶特征,很容易辨认和 排除。培育珠心系以获得无病毒苗有以下优点: ①可以肯定植株不带毒; ②花时间少; ③成本低: ④方法便于掌握; ⑤珠心苗长势强。但珠心系童期长,且易出现一 些返祖性状。
(二)热处理方法
1.温汤(浸渍)处理
适用于离体材料(如接穗) 和休眠器官的处理。在50℃左右 的温水中浸渍10min至数小时,使 病毒失活。
2.热风(热空气)处理 (1)恒温处理:
将生长的盆栽植物移入
温热疗室内,一般在35-
40℃。对活跃生长的茎尖效
果较好。 处理时间因植物而异。
(2)变温处理:
对于一些果树要获得与亲本一致的无性系 无病材料,可以从胚囊败育的子房中在胚囊败 育之前获取胚珠或珠心组织进行培养。
花药或花粉培养也可作为一种脱毒方法, 这种方法可结合单倍体育种进行,用花药培养 进行草莓脱毒,脱毒率可达100%。花药培养获 得的无毒材料多为高产优质的类型。
(四)其他脱毒方法
组织培养常见植物脱毒与快繁

为微型薯 不带病毒;增产效果一般在40%以上 1 试管生产 微型薯一般只有1~5g 用组织培养
方法生产微型薯分以下两个步骤: 1单茎段扩大繁殖 2微型薯的诱导
2 温室多层架盘工厂化生产 3 低网畦生产
二 甘薯的脱毒与快繁
一茎尖培养 1 茎尖培养脱毒
取高产 优质母株枝条;切成带1芽小段 自来水 流水冲洗; 70%酒精10s; 0 1%的升汞10min; 无菌水4~5次;或2%次氯酸钠5min;无菌水3~ 4次 2 茎尖剥离和培养 解剖镜下剥去芽上较大幼叶;切取0 3~0 5mm含1~2个叶原基的茎尖分生组织;迅速接 种到制备好的培养基上
原 球 茎 的 增 殖
3 苗的分化培养 兰科植物与其他草本花卉不同;它不易受生
长调节物质的影响;一般是将原球茎转入离子浓 度较低的培养基中;加入一些如椰子汁等天然提 取物质;效果会更好;原球茎很快再生成植株
lcm高的幼苗转移到壮苗培养基上培养3~6 个月;使其长3~4片叶 3~4条根 3~10cm高; 可移栽在泥炭和蛭石中;保湿弱光施肥
所结薯块即为生产用种薯良种
红薯原原种炼苗
第二节 果树脱毒快繁
利用组织培养方法繁殖果树植株具有占地面积 小;繁殖周期短;全年都能进行繁殖;繁殖系数高等特 点 还可以消除果树的某些病毒病;适应果树向品种 更新快 矮化密植以及无病毒栽培方向发展的需要
一 草莓 一草莓离体快繁技术 1 外植体 6~7月份匍匐茎15~20cm长时取材 2 培养基 初代MS+6BA0 5mg/L+GA30 1mg/L+IBA
0 2mg/L 增殖MS+6BA0 5~1 0mg/L 3 生根和驯化 1/2MS+IBA0 2~1 0mg/L 根2~3cm时炼苗;一周后发新根;四周后可移栽
植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用

植物组织培养是一种重要的生物技术,它能够实现植物的快速繁殖、脱毒和基因转化。
在植物学研究和植物育种领域,植物组织培养技术的应用非常广泛。
本文将深入探讨植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用,以帮助读者更深入地理解这一重要领域。
1. 快繁技术在植物组织培养中,快繁技术是指利用植物体的一小部分组织或细胞,通过体外条件培养,实现植物的快速繁殖。
这种技术可以大大提高繁殖速度,缩短繁殖周期,是进行新种质创制、遗传改良和疫病防治的重要手段。
快繁技术的主要方法包括离体培养、愈伤组织培养和微繁殖等。
1.1 离体培养离体培养是将植物体表层(如幼叶、幼茎)或内部组织(如胚乳、子叶)分离出来,移入含有适当营养盐和植物生长调节物的培养基中培养。
通过控制培养条件和添加合适的植物生长激素,可以诱导组织分化和再生形成新植株。
1.2 愈伤组织培养愈伤组织是植物在受到外界刺激或损伤后,经过细胞分裂和组织再生形成的一种未分化的组织。
愈伤组织培养是利用这种特殊组织进行快速繁殖的一种方法,通过控制培养条件和添加植物生长调节物,可以诱导愈伤组织再生形成新植株。
1.3 微繁殖微繁殖是利用植物的微小芽或胚珠进行快速繁殖的方法。
通过培养条件的控制和植物激素的添加,可以诱导微小芽或胚珠快速生长并形成新植株。
2. 脱毒技术在植物组织培养中,由于植物体内可能携带病毒、细菌等病原体,因此会影响到组织培养的效果。
脱毒技术是为了解决这一问题而出现的一种重要技术。
脱毒技术能够有效地清除植物体内的病原体,提高组织培养的成功率和繁殖效率。
2.1 生物脱毒生物脱毒是利用生物制剂对植物体内的病原体进行清除的方法。
通过培养环境中添加含有特定菌株或真菌的生物剂,可以促进植物体内病原体的清除和组织的健康再生。
2.2 生理脱毒生理脱毒是利用植物自身的生理代谢特性进行脱毒的方法。
通过调节培养条件和添加特定的营养物质,可以激活植物的生理代谢活性,加速病原体的清除和组织的再生。
植物组织培养脱毒快繁技术的综述

植物组织培养脱毒快繁技术的综述李西雁(广西职业技术学院农业技术工程系2002级应用生物技术专业)摘要:脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。
本文结合在桂林莱茵生物科技股份有限公司的实践情况,简要介绍植物组织培养的基本原理和方法,综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理、发展史和技术方法,并介绍了几种常用的病毒检测方法。
本文以马铃薯为例,重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法,脱毒率可达100%。
同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。
关键词:茎尖培养,组织培养,快繁脱毒技术,病毒检测,应用前景1 植物组织培养研究概况1.1 研究简史自从1943年怀特(White)提出植物细胞“全能性”(Totipotency)学说及诸多后学者(Steward,1958,Guha和Marteshwari,1964)相继证实后,引发植物组织和细胞培养快繁技术的勃然兴起。
我国的专家学者在20世纪70年代后也在此领域做了大量的研究和开发工作,创造了很多新方法、新技术,提出不少新成果,开拓了植物组织培养快繁技术的新局面[1]。
目前采用组织培养脱病毒快繁及离体快繁生产株苗的技术已发展相当成熟[2]。
脱毒株苗具有无杂菌、适应能力较强、繁育较快、质量优、抗性好、分蘖性强、繁殖系数高、大批量生产、周年供应、便于运输等优点,已得到有关专家的鉴定及高度评价和种植试验区、种植产区果农的认可。
例如脱毒马铃薯、脱毒红薯、脱毒生姜、脱毒大蒜、脱毒草莓、脱毒苗木、脱毒花卉等等,已成为现代农民致富的新宠[2]。
1.2 植物组织培养和脱毒快繁的定义植物组织培养(Plant tissue culture)是指在无菌的条件下,将离体的植物(根、茎、叶、花、果实、种子等)、组织(形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞(体细胞和生殖细胞)以及原生质体,培养在人工配制的培养基上,给予适当的培养条件,使其长成完整的植株。
植物的快繁与脱毒培养PPT课件

第2节 植物快速繁殖的应用
• 1.大量繁殖珍稀或名 贵植物
• 如:佛肚兰,卡特丽亚 兰等工厂化育苗
• 2.茎尖培养脱毒及脱 毒苗的培养
• 无菌苗 • 有毒苗 • 脱毒苗
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二,(茎尖培养)脱毒及其应用
• 1.病毒病及其危害 • 2.茎尖培养脱毒的原理 • 3.茎尖培养脱毒的过程 • 4.脱毒苗的鉴定和保存
– ②坏死,在叶片上常呈现坏死斑、坏死环和脉坏 死,在茎、果实和根的表面常出现坏死条等。
– ③畸形,器官变形,如茎间缩短,植株矮化,生
长点异常分化形成丛枝或丛簇,叶片的局部细胞
变形出现疱斑、卷曲、蕨叶及带化等。201.来自毒病的危害及症状 正常的番茄果
番茄厥叶,卷叶病毒
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番茄病毒病(植株)
俗称虾蕉、葱蕉或蕉公),病株一般 不抽花蕾,因近顶部叶片成束而得名。 是由病毒侵染植株而引起的, 是香蕉 致命病害,
蕉农称之为" 不治之症"。局部地区 蕉园发病率为2%~10%, 产量损失 30%~60%。
香蕉束顶病
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1.病毒病及其危害(续)
• (1)症状:花而不实 • 花叶型马铃薯病毒:退化,叶片卷缩,产量逐年下降,
到PVS,PVA,PVM,PVX
• 卷叶型马铃薯病毒:PLRV • 香蕉束顶病:叶片越来越短小,植株矮缩,叶硬
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1.病毒病及其危害
• 脱毒(virus elimination)培养: • 利用植物组织培养技术,脱除植物细胞中的
病毒,生产健康的无毒繁殖材料的过程。
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1.2.植物病毒病及其危害
• 定义:由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状:
– ①变色,叶片的叶绿素形成受阻或积聚,从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
植物快繁最常用的一种方法

植物快繁最常用的一种方法植物快繁是指通过一定的技术手段,使植物迅速繁殖和繁衍后代的过程。
这种方法在园艺、农业以及科学研究中得到了广泛应用,能够在较短的时间内大量繁殖植物,提高生产效率和遗传资源的保存。
下面将介绍植物快繁最常用的一种方法——组织培养技术。
组织培养技术是植物快繁中的一种常见方法,它通过利用植物组织的不同性质和特点,将组织、细胞、细胞器等在无菌条件下进行培养和繁殖,从而实现快速繁衍。
主要包括组织培养、愈伤组织培养和悬浮细胞培养等。
首先是组织培养。
这种方法是指以植物的组织培养为基础,通过无菌条件下的培养和营养物质的供给,将植物的种子、茎、根等组织转化为一个完整的植株。
这种方法不仅能够繁殖大量的植株,还能保持原植株的遗传特征。
常用的组织培养技术包括离体培养、激素处理、代谢工程等。
其次是愈伤组织培养。
这种方法是在组织培养的基础上,通过外界刺激使植物的细胞产生异常增殖和分化的现象,形成大量的愈伤组织。
愈伤组织具有分化、分裂和形成新的器官的潜能,可以大量繁殖植物,并且对生物技术研究有着重要的应用价值。
常用的愈伤组织培养方法包括切口愈伤组织培养、化学诱导愈伤组织培养、激素诱导愈伤组织培养等。
最后是悬浮细胞培养。
这种方法是在液体培养基中,将植物的细胞转化为悬浮细胞,通过转液培养来繁殖植物。
悬浮细胞培养的优点在于可以快速繁殖大量植物细胞,容器利用率高,也能避免污染的产生。
悬浮细胞培养主要应用于药物、抗体和生物多样性保护等领域。
总结一下,植物快繁最常用的一种方法是组织培养技术。
通过组织培养、愈伤组织培养和悬浮细胞培养等多种技术手段,可以在无菌条件下快速繁殖植物,提高生产效率和遗传资源的保存。
这些方法在园艺、农业以及科学研究中具有重要的应用价值,促进了植物的繁殖和研究。
《植物脱毒快繁技术》课件

05
植物脱毒快繁技术的发展前景与挑 战
技术发展前景
高效快速
植物脱毒快繁技术能够快速繁殖出大量无病 毒的健康植株,提高农业生产效率。
降低成本
无病毒的健康植株能够减少农药使用,降低 环境污染。
保护环境
通过大规模快速繁殖,可以降低生产成本, 提高经济效益。
促进农业现代化
植物脱毒快繁技术是农业现代化的重要组成 部分,能够推动农业技术的进步。
丰富园艺品种
通过该技术可以培育出更多具有优良性状和适应性的园艺品种。
在生态恢复上的应用
植被恢复
在荒山、荒地等生态脆弱地区,利用植物脱毒快繁技术可以快速恢 复植被,提高生态系统的稳定性。
治理水土流失
通过大量繁殖抗逆性强的无病毒植物,有效治理水土流失问题,保 护生态环境。
美化环境
脱毒植物的美观度高,可用于城市绿化、美化环境,提高生态质量 。
01
降低技术难度
通过研究和改进,降低植物脱 毒快繁技术的难度,便于更多 人掌握和应用。
02
应对病毒变异
加强病毒监测和预警,及时发 现和应对病毒变异,保持脱毒 技术的有效性。
03
完善法律法规
完善相关法律法规,为植物脱 毒快繁技术的推广和应用提供 法律保障。
04
提高农民认知度
加强宣传和培训,提高农民对 植物脱毒快繁技术的认知度和 接受度。
详细描述
微茎尖培养脱毒法是切取植物微茎尖组织进行组织培养,通过连续培养和筛选,获得无病毒植株。这 种方法具有更高的脱毒效率和成功率,适用于各种植物,特别是难以通过茎尖培养脱毒的植物。
03
植物快繁技术
植物组织培养技术
定义
植物组织培养技术是一种在实验室条件下,将植物的离体组织或 细胞培养成完整植株的技术。
chapter3 植物组培快繁和脱毒技术

根形成
根的起源有两种: • 一种是起源于苗基部切口处形成的愈伤
组织上,由愈伤组织内部形成; • 另一种是起源于苗基部切口处愈伤组织
的上部,直接起源于中柱鞘细胞,由于 发生与茎的中柱相连,故利于移栽成活。
胚状体形成
• 概念: 离体培养下起源
于非合子细胞,经历 了胚胎发生和胚胎发 育过程所形成的类胚 结构。
细胞分裂素可打破顶端优势对腋芽 的抑制作用,组培中常添加细胞分裂素 促进腋芽的不断分化和生长,逐渐形成 芽丛;
不定芽(除现有的芽之外,在任何 器官上的通过器官发生重新形成的芽) 形成,一般使用细胞分裂素高于生长素 的配比,两者配比接近1的也用得很多;
• 一般在含丰富还原氮的培养基上 诱导胚状体形成,加生长素,特 别是2,4——D能诱导胚状体发 生,然后转移到降低浓度或没有 生长素的培养基上使其成熟 。
增殖方式
腋芽增殖 不定芽增殖 体细胞胚增殖 愈伤组织增殖
腋芽增殖
• 培养方法简单,能高度保持遗传 稳定性,能长期继代增殖。
• 一般不需要添加外源激素,即使 加也要严格控制浓度,防治产生 愈伤组织。
不定芽增殖
• 从现存的芽以外 的任何器官、组 织上通过器官发 生重新形成芽。
• 繁殖系数高 • 遗传稳定性较好 • 继代次数有限
离体快繁的一般技术
•培养材料选择及消毒 •材料的初代培养(无菌母株制备) • 试管苗的增殖与继代培养(不定芽增殖) • 试管苗的生根与移栽(完整植株形成)
• 再生植株鉴定
芦荟的植物组织培养过程
1
2
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1、培养材料选择及消毒 1)、培养材料的选择 • 种和品种选择
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热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊 花等植物。如:葡萄置于38 ℃可去除扇叶病毒。
热处理对葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹 果花叶病毒等球形病毒有作用,而对另一些病毒 不起作用,因此,必须与茎尖培养相结合脱毒效 果更好。
2020/3/24
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葡萄扇叶病毒
2020/3/24
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2、培养基
一般以White、MS为基本培养基,提高钾盐 和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎 尖时,有些离子浓度过高应稀释。
在双子叶植物中,激素可能在第2对叶原基中 合成,所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给,必 须加入生长素与细胞分裂素,浓度要合适。在生长 素中应避免用易促进愈伤组织化的2,4-D,宜用 NAA或IBA;细胞分裂素用KT或BA;GA3对某些 植物茎尖培养有用。
2020/3/24
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀,其数量随植株 部位及年龄而异,越靠近茎顶端区域,病毒感染 的程度越低,生长点即分生组织(约0.1-1mm) 几乎不含或含病毒很少。
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分生组织不带病毒,可能有4方面的原因:
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径:一是通过维管 系统,而分生组织中尚未形成维管系统;二是通过胞间连 丝,但这条途径病毒移动速度非常慢,赶不上茎尖和根尖 细胞不断分裂和活跃的生长速度。
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三、脱毒快繁材料的选择
应注意以下几点: 1)品种要可靠 2)要选择经当地栽培确认的高产优质的品种来作
为脱毒材料 3)名贵的植物良种 4)植物生长旺盛期,再生率高,脱毒效果好
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四、植物病毒的鉴定
1、外观判断法
2、指示植物法 3、抗血清鉴定法 4、电子显微镜检查法 5、酶联免疫鉴定法(ELISA)
在最适培养条件下,外植体的大小决定茎尖的存 活率,外植体越大,产生再生植株的机会也就越多。 除了外植体的大小之外,叶原基的存在与否也影响分 生组织形成植株的能力,一般认为,叶原基能向分生 组织提供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。
2020/3/24
(2)培养条件
在茎尖培养中,光下培养的效果通常比暗培养效果 好,如马铃薯茎尖培养时,当茎已长到1cm高时,光 照强度便增加到4000lx。
2020/3/24
鉴定方法:
抗原的制备 →→抗血清的采收,分离→→把 稀释的抗血清与未知的病毒植物的汁液在小试 管内混合→→根据沉淀反应来鉴定病毒种类。
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植物无病毒苗的培育
3. 特点:
特异性高(这种抗血清是高度专一性 的试剂),测定速度快,一般几小时甚至 几分钟就可以完成。所以抗血清法成为植 物病毒鉴定中最有用的方法之一。
细胞后,随植物细胞DNA一起复制。热 处理并不能杀死细胞,只是钝化病毒的 活性,使病毒在植物体内增殖减缓或增 殖停止,而失去病毒的侵染能力。
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②热处理是一种物理效应,可加速植物细 胞分裂,在激烈分裂的细胞中正常核蛋 白合成占优势,使植物细胞在与病毒繁 殖的竞争中取胜。因此加速分生组织细 胞的分裂,能够获得无病毒植株。
2020/3/24
小麦黄矮病毒病
草莓镶脉病毒
西瓜病毒病
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烟草普通花叶病
目前,对细菌和真菌侵染的病害,可通过药 物处理达到治愈的目的。但还没有治病毒的特效 药。种子一般不带病毒,种子繁殖可得无毒植株。 但对于无性繁殖植物,必须采取一些特殊方法脱 除病毒。2020/3/24 无病毒植株培育的意义0
2020/3/24
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The Apical Meristem
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剥取茎尖过程: 解剖镜下用解剖针将叶片剥掉,解剖针要常消毒。当
一个半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后,用解剖刀 片将带1-2个叶原基的分生组织切下,接到培养基上。
将接种的茎尖置于22℃左右温度下。 2000-3000lx 16h/d 光照下培养。由于在低温和短日照下,茎尖有可能 进入休眠;所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。 微茎尖需数月才能成功。
2020/3/24
植物无病毒苗的培育
4、电子显微镜检查法
病毒有一定的形态( 球状、杆状、线状等)
和大小( 0.01~0.3um )。
采用电子显微镜(分辨率0.0001um)可以直
接观察病毒,检查出有无病毒存在,并鉴定病毒 的种类。
优点:灵敏度高,能在植物粗提取液中定量测
定病毒。
2020/3/24
2、当植物细胞分裂DNA复制时,病毒DNA随着复制。 因此,植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。在旺 盛分裂的分生组织中,代谢活动很高,正常核蛋白合成占 优势,使病毒无法进行复制。
3、茎尖中存在高水平内源激素,可抑制病毒的增殖。 4、在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”,在分生 组织中的活性最高,因而使分生组织不受侵染。
苹果花叶病毒
(二)茎尖培养脱毒
1、茎尖培养脱毒原理 2、培养基 3、茎尖培养方法 4、影响微茎尖培养的因素
①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态
2020/3/24
植物的去病毒技术,实质上就是采取不含 病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1~0.5mm 带1~2个叶原基的茎尖作为外植体,进行微繁 殖,使其培养成完整的无病毒小植株的技术。
2020/3/24
茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器 官的培养相同。
茎尖培养脱毒,由于其脱毒效果好,后代 稳定,所以是目前培育无病毒苗最广泛和最 重要的一个途径。
2020/3/24
4、影响微茎尖成活及脱毒的因素
(1)母体材料病毒侵染程度
被单一病毒感染的植株脱毒较容易,复合感染的较难。
(2)外植体大小
2020/3/24
兰花
2020/3/24
马铃薯
切取茎尖越小脱毒效果越好,但太小不易成 活,过大又不能保证完全出去病毒,所以茎尖 大小要合适。
离体茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响
茎尖长( 叶原基数 小植株数 脱毒植株 脱毒率(
mm)
数
%)
0.12
1
50
24
48
0.27
2
42
18
42.9
0.6
4
64
0
2020/3/24
二、脱毒方法 (一) 热处理脱毒
(一)发现: 1889年印度尼西亚爪畦人发现,患枯萎病的甘蔗(现证
明为病毒病),放在50-52℃的热水中保持30min,甘蔗就可 去病生长良好。以后此方法被广泛用于防治许多植物的病 毒病。
热处理又称温治疗法。
2020/3/24
• 1、热处理脱毒原理: ①病毒是DNA大分子,病毒进入植物
第七章 植物脱毒快繁技术
一、病毒危害
多数栽培植物,尤其无性繁殖植物,都易受 到一种或几种,甚至几十种病毒的侵染。例如, 草莓染60多种病毒。并且随着培养时间的推移, 侵染病毒的种类越来越多。
植物病毒病原体可通过维管束传导。因此, 对无性繁殖的植物来说,一旦感染上病毒之后, 就会代代相传越趋严重。
受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量大 幅度下降,品质变劣,甚至完全丧失商品价值。
2020/3/24
(四)其它途径脱毒
1、愈伤组织培养脱毒 2、茎尖微体嫁接 3、化学疗法脱毒
2020/3/24
1、愈伤组织培养脱毒
愈伤组织细胞带病原菌不均一,部分细胞不带病 毒,由这些细胞再生的植株是无病毒的。多次继代的 愈伤组织中病毒含量下降,甚至检测不出病毒。
2020/3/24
愈伤组织的某些细胞不带病毒原因: 1、病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度; 2、有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。 愈伤组织脱毒的缺陷是植株遗传性不稳定,可 能会产生变异植株。
2020/3/24
3、茎尖的培养方法
需要一台解剖镜(8-40倍)。 剥离茎尖要迅速并尽快接种,或在一个衬有 无菌湿滤纸的培养皿内进行操作,以防茎尖变干。 茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严 密保护,只要仔细解剖,(无须表面消毒)就可得 到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的 污染率。
即:叶片包被严紧的芽,如菊花、兰花,只 须75%酒精中浸蘸一下,而叶片包被松散的芽, 如香石竹、马铃薯等,则要用0.1%次氯酸钠表 面消毒10min。
1. 去除病毒危害,提高作物品质与产量。采用生物、物理 、化学等途径防治病毒病收效甚微,甚至毫无成效。而通 过组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类, 提高产量、质量。因此,到60至70年代在花卉、蔬菜和果 树等得到广泛的应用。 2. 减少环境污染,有利于保护环境 栽培去病毒植物可减 少药剂的使用。
5、酶联免疫吸附测定法(ELISA)
把抗原-抗体的免疫反应于酶的催化反应相结合而发展 起来的一种综合性技术,灵敏度高,特异性强,发展最快 应用最广的方法。
2020/3/24
理由:①病毒的复制速度赶不上细胞的增殖 速度;② 有些细胞通过突变获得了抗病毒 的抗性。
缺点:植株遗传性不稳定,可能会产生变异 植株
2020/3/24
(二)茎尖微体嫁接
1. 概念:将无病毒茎尖( 0.4~1.0mm )嫁接在培养基上 培养的实生砧木上,以获得脱毒苗木的技术。
2. 适宜:茎尖培养难以生根的植物,如桃、柑橘、苹果等 3. 无病毒茎尖来源:成年无病毒植物、温室培养的植物、
(3)外植体的生理状态
茎尖最好要由活跃生长的芽上切取。 取芽的时间也很重要,一般选萌动期较好。否则 采用适当的处理,打破休眠才能进行。
2020/3/24
(三)茎尖与热处理相结合方法
能克服单独茎尖培养时,茎尖过小成活率太低, 茎尖太大又脱除不掉病毒的缺点。 1、热处理后取较大茎尖培养获得脱毒苗。 2、取茎尖(或茎段)培养获得无菌苗。然后将试管 苗热处理,再取茎尖培养获得脱毒苗。