最新植物组织培养之草莓的脱毒与快速繁殖教案资料
植物组织培养之草莓的脱毒与快速繁殖
一、草莓简介草莓是对蔷薇科草莓属植物的通称，属多年生草本植物。
草莓的外观呈心形，鲜美红嫩，果肉多汁，含有特殊的浓郁水果芳香。
草莓具有极其丰富的营养价值。
1、（丰富的胡萝卜素）草莓中所含的胡萝卜素是合成维生素A的重要物质，具有明目养肝作用;2、（滋补调理）草莓对胃肠道和贫血均有一定的滋补调理作用;3、（治病）草莓除可以预防坏血病外，对防治动脉硬化，冠心病也有较好的疗效;4、（防癌）草莓是鞣酸含量丰富的植物，在体内可吸附和阻止致癌化学物质的吸收，具有防癌作用;（回主页）草莓营养价值高，口味好，深受消费者喜爱，特别是近几年种植面积大幅提高。
但由于病毒病的传播感染，导致草莓品种种性退化，产量、品质下降，商品率降低，严重影响了草莓的发展。
下面就简单介绍几种草莓易得的病：二、草莓易得的病1、叶斑病：又称蛇眼病，主要为害叶片、叶柄、果梗、嫩茎和种子。
在叶片上形成暗紫色小斑点，扩大后形成近圆形或椭圆形病斑，边缘紫红褐色，中央灰白色，略有细轮，使整个病斑呈蛇眼状，病斑上不形成小黑粒。
2、白粉病：主要为害叶片，也侵害花、果、果梗和叶柄。
叶片上卷呈汤匙状。
花蕾、花瓣受害呈紫红色，不能开花或开完全花，果实不膨大，呈瘦长形；幼果失去光泽、硬化。
近熟期草莓受到为害会失去商品价值。
3、灰霉病：是开花后的主要病害，在花朵、花瓣、果实、叶上均可发病。
在膨大时期的果实上，生成褐色斑点，并逐渐扩大，密生灰霉使果实软化、腐败，严重影响产量。
4、根腐病：从下部叶开始，叶缘变成红褐色，逐渐向上凋萎，以至枯死。
支柱在中间开始变成黑褐色而腐败，根的中心柱呈红色。
5、黄萎病：该病是土壤病害，主要症状是幼叶畸形，叶变黄、叶表面粗糙无比。
随后叶缘变褐色向内凋萎，直到枯死。
6、除此之外，草莓还容易有一些病虫危害，例如：线虫危害：寄生在草莓组织中，危害叶柄、芽、根等，使被害器官变成红色，严重时植株枯死。
蛴螬危害：在草莓收获期和八九月份咬食根、茎，使植株枯死。
草莓组织培养
草莓的组织培养一、茎尖1．概述通过对草莓茎尖离体培养的试验研究表明：取草莓茎尖为外植体，以0．35 mm大小为宜；用MS+0.5 mg/L 6-BA+O.2 mg/L NAA培养基．不定芽再生率高；以1/2 MS+O.1 mg/L IBA 生根效果最好。
2.结论（1）再生途径：草莓刚抽出的匍匐茎的茎尖（2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理，最后用无菌水冲洗5～8次，接种于诱导培养基中。
诱导培养基为MS+0．5 mg／L6一BA+0．2mg／L NAA+3 蔗糖(w／v)+0．5﹪卡拉胶，pH值为5.6～5.8。
每个灭菌处理接种2O枚外植体，l5d后观察记录外植体的污染、死亡、无菌成活生长等情况。
（3）培养基：①芽诱导试验，于MS培养基附加0．2 mg／L NAA、IAA、IBA不同种类生长素的培养基中，20d后调查记录幼芽分化情况。
②继代培养与扩大繁殖，MS培养基附加0.5 mg/L6-BA、0.01 mg/L NAA。
③根诱导试验, 用1/2 MS附加不同浓度(mg/I )IBA 有0．05、0．1、0．2、0．5及不加IBA的5个处理.（3）条件：培养基均在1～ 1.1大气压下热压灭菌20min。
培养温度(25±2)℃。
每日光照12h，光强2 000Lux。
（1）再生途径：用其花药、花蕾、叶、叶柄、子叶、下胚轴等作外植体进行离体培养。
（2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理.（3）培养基：①MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L(浓度单位,下同)；②MS+6一 BA0.5+KT 0.5；③MS+BA2.0+IAA 1.0；④MS+BA2.0+NAA0.5+2,4-D0.1；⑤MS+BA2.0+IBA0.1。
以上培养基各加CH 100 mg/L，蔗糖20g/ L(①为30g/ L)。
草莓栽培技术(十一)草莓脱毒苗繁育
草莓栽培技术（十一）草莓脱毒苗繁育草莓组培苗在植物学性状、果实性状、丰产性及抗病性等方面均优于自繁苗，可比自繁苗增产30%以上。
目前，草莓茎尖组培脱毒技术已经较为成熟，在草莓生产上应推广采用工序简单、易掌握、生产成本低的组织培养手段进行草莓组培脱毒苗的规模化生产。
现将该技术总结如下。
01、匍匐茎的选择与消毒3－5月从生长健壮、无病虫害、具有品种典型性状的植株上采集处于抽生盛期的草莓匍匐茎，将匍匐茎用纱布包好，用流水冲洗30min以上，然后用70%酒精消毒30s，再用0.1%升汞消毒6～8min，最后用无菌水漂洗干净并用灭菌滤纸吸干水分，包好后放置于超净工作台上待用。
02、茎尖脱毒在超净工作台解剖镜下剥取0.2mm大小的茎尖生长点，切下后立即放置于诱导培养基上（MS培养基＋0.3～0.5mg/L 6-BA＋0.05mg/L GA＋0.01mg/L IBA＋3%蔗糖30g，pH值5.8）。
将接好的苗放置于培养室中进行培养（温度为25±1℃，每天光照14h，光照强度2000lx），经过2～3个月即可长成。
03、病毒检测待组培瓶苗长至2～4cm高时，切取叶片提取RNA或DNA，利用PCR法检测病毒。
去除带病毒的幼苗，将无病毒幼苗继续利用诱导培养基进行培养或扩繁，在定植前15～20d用3/4MS培养基进行生根培养，当幼苗长出3～5条根时进行驯化移栽。
04、定植苗床的准备使用无土育苗基质，要求基质理化性质稳定，具有良好的保水保肥能力，透气性好，pH值5.5～6.5。
多次使用过的基质必须灭菌。
一般将2～3种基质混合后使用，如将草炭、蛭石按体积比2∶1或将草炭、珍珠岩按体积比3∶1混合后使用，并用普力克1000倍液浇透，以杀死基质中残存的病原菌。
在苗床上铺设加温线，然后将基质铺为10cm厚。
用竹竿或钢管做好小拱棚，除用于保温保湿外，还可搭设遮阳网用于遮阳。
在小拱棚外的塑料大棚或温室两边加上防虫网，以防止蚜虫和叶蝉等病毒介体传毒。
草莓组培脱毒技术的分析与应用研究
草莓组培脱毒技术的分析与应用研究作者：庄莹来源：《农民致富之友》2018年第04期福建由于受季风环流和地形的影响，地处亚热带海洋性季风气候，热量丰富，而且全年雨水量充沛，日照时间长，是草莓种植的理想区域。
因此，福建的草莓种植范围广、种类多。
但由于受到病毒的影响，果农生产中的草莓有可能出现滞销的情况。
为解决这一问题，本文将通过详细的介绍草莓的组培脱毒技术，并对草莓的育苗过程进行分析，以促进果农快速繁殖并培育出大量的优质草莓品种，满足市场的需求，增加收益。
1 草莓组培脱毒技术的具体操作过程1.1 材料准备与实验过程1.1.1 组织培养基的准备草莓是多年生草本植物，可利用其匍匐茎分株繁殖，所以采用草莓茎芽作为培养材料。
用于草莓组培脱毒技术的材料选择福建的主要栽培品种的法兰地等作为供试材料，并在初夏时节的晴天午后选出生长茂盛、匍匐茎粗实，且经检验没有病虫害侵蚀的长势良好的草莓株苗作为外植体，保留6厘米左右的长度，置于塑料袋中冷藏后备用。
用草莓茎培养株苗进行诱导分化的基本的组织培养基为MS，并在此基础上加入6-BA0.5mg/l、NAA0.2mg/l、蔗糖30g/l、琼脂粉6.5g/l，PH值保持在5.8～6.0之间，让草莓茎在灭菌后有一个适宜的生长环境。
1.1.2 外植体材料的消毒处理草莓株苗选好后，为防止日后的病毒感染，要对叶苗进行严格的清洗，先用流动的自来水反复清洗茎芽，沥干水分，进行消毒灭菌。
首先要将匍匐茎顶部的大叶子去掉，在浓度为75%的酒精中浸泡30秒后，再放入5～10%次氯酸钠溶液中15～30秒，做消毒处理，最后用无菌水（装几瓶清水置于高压锅内在120℃、100 132.5pa的温度条件下进行灭菌15分钟左右，可生成无菌水）进行反复冲洗5次以上即可。
1.1.3 草莓幼苗的诱导、分化及繁殖运用专业的双筒解剖镜先将被消毒过的草莓株苗的叶子从外面一层一层的进行剥掉，直至露出全部的顶部半圆组织为止。
草莓脱毒苗
1、意义与范围丹东市是全国最大的草莓生产基地，草莓生产技术总体水平在国内处于领先地位，但总体单位生产效益还远不如发达国家高，最突出的瓶颈问题是种苗普遍感染病毒，与全国一样属带毒生产。
感染病毒的草莓比未感染病毒的草莓长势弱、抗性差、产量明显下降，果品品质与商品性状变劣，严重影响了这一名特优种植业的稳步发展。
草莓脱毒组培技术是目前国际上仍普遍应用的高新实用技术，即通过花药组织培养、微茎尖组织培养等技术脱去病毒病原，使草莓种苗恢复品种原种优良种性，以达到优质、高产之目的。
本技术报告以项目单位正在实施应用的微茎尖组织培养技术规定了草莓茎尖脱毒组培种苗繁育技术规范的选择优良品种、生产脱毒组培瓶苗、培育原原种苗、培育原种苗、繁育良种苗规程。
应用范围适用于丹东地区。
2、草莓茎尖脱毒组培种苗繁育技术工艺过程品种定向→选取田间健壮株匍匐茎尖或单株→清洗杀菌消毒→超净工作台解剖镜下剥离茎尖→接入接种培养基培养→继代增殖培养→瓶内生根→营养钵培育原原种苗→田间扩繁原种苗→田间扩繁良种苗→生产利用。
3、选择优良品种生产脱毒组培瓶苗3.1 选择优良品种3.1.1 日光温室：目前适宜品种为杜克拉、图德拉、章姬、枥乙女、丰香、幸香、鬼怒甘、宝交早生、安娜等。
3.1.2 早春大棚：目前适宜品种为卡尔特一号、艾尔桑塔等。
3.1.3 露地生产（加工型）：目前适宜品种为哈尼、森嘎那、达善卡等。
3.2 生产脱毒组培瓶苗3.2.1 试验室要求3.2.1.1 无菌室无菌室应设有隔离室，面积不小于10m2，墙壁光滑平整，地面平坦无缝，室内安装紫外线灯和超净工作台。
3.2.1.2 试验室试验室面积应不小于30m2，并应具备各种生产用化学药品、玻璃器皿、冰箱、恒温箱、普通天平、分析天平及实验平台等设施。
3.2.1.3 培养室培养室面积应不小于20m2，放置多层钢制培养架，采用日光灯补充光照，室内常年保持20-27℃，相对湿度保持在50-60%，每天光照12-14h。
草莓组培脱毒技术及其在生产上的应用
草莓组培脱毒技术及其在生产上的应用摘要草莓在生产中极容易退化，累积大量病毒，从而影响产量和品质。
详细介绍了草莓的组培脱毒技术以及草莓从瓶苗到生产用苗的炼苗驯化过程，以期为广大农户提供优质高产的草莓原原种种苗。
关键词草莓；组培脱毒；生产应用近些年，我们进行了大量的研究，以期能快速繁殖并培育出优良草莓品种。
经过大量的科学试验，总结出草莓的组培苗生产、驯化和移栽等一系列技术，不仅能快速培养出大量脱毒苗，而且能取得较好的社会和经济效益。
1试验准备（1）材料。
以江苏省盱眙三河农场主要栽培的丰香、溢香、幸香等品种为试验材料，进行组织培养繁殖育苗试验。
（2）取材。
5~6月晴天下午选取生长健壮、匍匐茎充实、尖端生长良好、无病虫害的优良植株，取其匍匐茎前端部分6cm左右，置于黑色塑料袋中，放入冰箱冷藏备用。
（3）培养基配置。
用于草莓茎尖培养诱导分化的基本培养基为MS，附加6-BA 0.5mg/L、NAA 0.2mg/L、蔗糖30g/L、琼脂粉6.5g/L、pH值5.8～6.0。
在草莓茎尖的扩大繁殖阶段，采用MS培养基附加6-BA 0.5mg/L、NAA 0.01mg/L。
扩大繁殖主要是将丛生苗分块即每5～7株切成1块，转入继代培养基。
在转苗过程中，去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中随时清除愈伤组织，有利于新苗增值和生长。
诱导生根培养基用1/2MS附加不同浓度IBA。
试验表明：以IBA 0.1mg/L的浓度处理的生根率最高，为100%，平均根条数为2.4条；不加IBA及IBA浓度超过0.2mg/L，多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织，随后在愈伤组织上分化生根，致使成活率大大降低。
（4）无菌水准备。
烧制培养基的同时，装几瓶清水置于高压锅内于120℃、10 132.5Pa下灭菌15min左右。
2组培脱毒关键技术（1）消毒。
将匍匐茎切至2cm大小，置于流动的清水中冲洗4~6h，接着放在75%酒精中浸泡30s左右，不宜过长；否则会杀死茎尖组织，大大降低成活率。
草莓脱毒快繁技术的推介
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第三部分
草莓脱毒苗的生产表现及优势
PART 03
草莓脱毒苗的生产表现及优势
增强长势面
叶片增大、叶色浓绿 有光泽,生长整齐一致, 长势明显增强
提早成熟
提早花芽分化,果实成熟 快,相对提早上市
增产增量
花序数、花果数及 单果重显著增加
繁殖数量增加
大田繁殖数量显著增加,脱 毒苗繁殖比例1 : 100-200, 常规苗为1 : 40-50
创建高效的草莓 茎尖脱毒培养体 系，选育一批具 有自主品种权的 高产优质抗病草 莓品种。
对草莓脱毒苗推广应用到生产 中，每亩可使种植户增产20% 以上，提高对病毒病等病害的 抗性，降低发病率，减少农药 用量，符合草莓绿色、环保生 产标准，提高草莓产品质量， 增加农民收入，节约成本。
草莓脱毒技术解 决的主要问题
草莓脱毒快繁技术的推介
目录
0 1 建立草莓脱毒技术的目的 草莓脱毒技术体系的介绍 0 2 0 3 草莓脱毒苗的生产表现及优势 草莓脱毒快繁技术的应用 0 4
PART 01
第一部分
建立草莓脱毒技术的目的
建立草莓脱毒技术的背景
在草莓的生产过程中, 为了发展和保持其优良品种的 经济性状, 人们一直采用匍匐茎埋压及分株等营养繁 殖技术繁育种苗, 这导致了病毒病不断地传播和积累, 病害也日趋严重。由于病毒的危害, 植株生长衰弱、 结果期推迟、产量减少、果品质量明显降低。
背景
现状
目前，江苏草莓栽培面积发展迅速,栽培区域逐渐扩大。江 苏省草莓生产已开始进入转型期:一是由露地栽培为主逐步 转入以大棚等设施栽培为主,二是由数量型扩面增产向数量 质量型(扩面与追求单位面积优质高产同时进行)转变。江 苏地区草莓生产特点与市场随着草莓新品种的选育成功,草 莓栽培形式的改变而有所改变。
植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用
植物组织培养是一种重要的生物技术，它能够实现植物的快速繁殖、脱毒和基因转化。
在植物学研究和植物育种领域，植物组织培养技术的应用非常广泛。
本文将深入探讨植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用，以帮助读者更深入地理解这一重要领域。
1. 快繁技术在植物组织培养中，快繁技术是指利用植物体的一小部分组织或细胞，通过体外条件培养，实现植物的快速繁殖。
这种技术可以大大提高繁殖速度，缩短繁殖周期，是进行新种质创制、遗传改良和疫病防治的重要手段。
快繁技术的主要方法包括离体培养、愈伤组织培养和微繁殖等。
1.1 离体培养离体培养是将植物体表层（如幼叶、幼茎）或内部组织（如胚乳、子叶）分离出来，移入含有适当营养盐和植物生长调节物的培养基中培养。
通过控制培养条件和添加合适的植物生长激素，可以诱导组织分化和再生形成新植株。
1.2 愈伤组织培养愈伤组织是植物在受到外界刺激或损伤后，经过细胞分裂和组织再生形成的一种未分化的组织。
愈伤组织培养是利用这种特殊组织进行快速繁殖的一种方法，通过控制培养条件和添加植物生长调节物，可以诱导愈伤组织再生形成新植株。
1.3 微繁殖微繁殖是利用植物的微小芽或胚珠进行快速繁殖的方法。
通过培养条件的控制和植物激素的添加，可以诱导微小芽或胚珠快速生长并形成新植株。
2. 脱毒技术在植物组织培养中，由于植物体内可能携带病毒、细菌等病原体，因此会影响到组织培养的效果。
脱毒技术是为了解决这一问题而出现的一种重要技术。
脱毒技术能够有效地清除植物体内的病原体，提高组织培养的成功率和繁殖效率。
2.1 生物脱毒生物脱毒是利用生物制剂对植物体内的病原体进行清除的方法。
通过培养环境中添加含有特定菌株或真菌的生物剂，可以促进植物体内病原体的清除和组织的健康再生。
2.2 生理脱毒生理脱毒是利用植物自身的生理代谢特性进行脱毒的方法。
通过调节培养条件和添加特定的营养物质，可以激活植物的生理代谢活性，加速病原体的清除和组织的再生。
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一、草莓简介
草莓是对蔷薇科草莓属植物的通称，属多年生草本植物。
草莓的外观呈心形，鲜美红嫩，果肉多汁，含有特殊的浓郁水果芳香。
草莓具有极其丰富的营养价值。
1、（丰富的胡萝卜素）草莓中所含的胡萝卜素是合成维生素A的重要物质，具有明目养肝作用;
2、（滋补调理）草莓对胃肠道和贫血均有一定的滋补调理作用;
3、（治病）草莓除可以预防坏血病外，对防治动脉硬化，冠心病也有较好的疗效;
4、（防癌）草莓是鞣酸含量丰富的植物，在体内可吸附和阻止致癌化学物质的吸收，具
有防癌作用;
（回主页）
草莓营养价值高，口味好，深受消费者喜爱，特别是近几年种植面积大幅提高。
但由于病毒
病的传播感染，导致草莓品种种性退化，产量、品质下降，商品率降低，严重影响了草莓的
发展。
下面就简单介绍几种草莓易得的病：
二、草莓易得的病
1、叶斑病：又称蛇眼病，主要为害叶片、叶柄、果梗、嫩茎和种子。
在叶片上形成暗紫色
小斑点，扩大后形成近圆形或椭圆形病斑，边缘紫红褐色，中央灰白色，略有细轮，使整个
病斑呈蛇眼状，病斑上不形成小黑粒。
2、白粉病：主要为害叶片，也侵害花、果、果梗和叶柄。
叶片上卷呈汤匙状。
花蕾、花瓣
受害呈紫红色，不能开花或开完全花，果实不膨大，呈瘦长形；幼果失去光泽、硬化。
近熟
期草莓受到为害会失去商品价值。
3、灰霉病：是开花后的主要病害，在花朵、花瓣、果实、叶上均可发病。
在膨大时期的果
实上，生成褐色斑点，并逐渐扩大，密生灰霉使果实软化、腐败，严重影响产量。
4、根腐病：从下部叶开始，叶缘变成红褐色，逐渐向上凋萎，以至枯死。
支柱在中间开始
变成黑褐色而腐败，根的中心柱呈红色。
5、黄萎病：该病是土壤病害，主要症状是幼叶畸形，叶变黄、叶表面粗糙无比。
随后叶缘
变褐色向内凋萎，直到枯死。
6、除此之外，草莓还容易有一些病虫危害，例如：
线虫危害：寄生在草莓组织中，危害叶柄、芽、根等，使被害器官变成红色，严重时植株枯
死。
蛴螬危害：在草莓收获期和八九月份咬食根、茎，使植株枯死。
（回主页）
根据报道，侵染草莓的病毒多达二十多种。
长期大田分株繁殖容易使草莓植株中病毒积累，
导致草莓品种退化,，严重影响经济收益。
所以利用先进的技术使草莓脱毒，以及后期的快
速繁殖已成为草莓业发展的必要环节。
下面就来详细介绍草莓的脱毒与快繁。
二、草莓脱毒与快繁
第一步：芽的诱导
选择草莓匍匐茎顶部3～4 cm的芽段，剪去较大叶片，在自来水下冲洗干净，在超净工作台中，用75%酒精浸泡30 s，0.1%升汞浸泡5～8 min，无菌水冲洗4～5 次。
在解剖镜下剥离，剥离茎尖长度为0.3 mm，带1～2 个叶原基，接种在初代培养基中。
接种后放在温度为26～32 ℃，每日光照12～16 h，光强为1600～3000 Lx的条件下培养，待60天左右培养出诱导芽，转入下一个阶段的培养。
第二步：茎尖苗的病毒检测
茎尖苗的病毒检测很重要。
目前有三种方法进行草莓茎尖苗的病毒检测：目测法、指示植物嫁接检测法、血清检测法。
1.（目测法），即选择生长快、叶色浓、叶平展、生长健壮的茎尖苗，除去长势弱、叶色淡、
叶片上出现花叶褪绿的茎尖苗；
2.（指示植物检测法），是将症状可疑的植株作接穗，然后用指示植物野草莓嫁接，1～2 个月后，若在展开的叶片上、匍匐茎或老叶上出现病斑，应将对应的茎尖苗除去；
3.在目测和指示植物检测的基础上，再按株系挂牌到省农科院进行血清检测，最后根据检测
结果选择茎尖苗，进行室内室外的快速繁殖。
第三步：腋芽繁殖
将茎尖培养一段时间之后而分化的植株移入新的培养基中进行培养，促进其营养生长，使其长成幼苗，幼苗新形成的芽又不断繁殖，形成新的芽，新芽可再分割成小植株或小碎块进行
转接继续繁殖，较大的繁殖苗转入发根培养基中长成完整的植株。
第四步：扎根培养繁殖
将较大的长成苗转移到扎根培养基中使其诱导生根。
在生根培养基中可适当加一些浓度在
0.1mg/L以内的生长素，可使根粗大，幼苗长势好，易成活。
草莓 5 天左右达到生根高峰，15～20 天可进行移栽。
第五步：幼苗的温室移栽
生根后的幼苗经6～7 天自然散射光下炼苗，就可进行温室移栽。
移栽前清除温室中的杂草
并喷施乐果灭蚜，同时，将移栽基质如蛭石用0.1%的高锰酸钾喷施灭菌；然后，在洗刷间
用镊子把草莓幼苗拔出，洗掉根部的培养基，以防霉菌寄生后烂根。
按15 cm×10 cm的行株距移栽，用1000倍的多菌灵喷洒小苗，再用塑料薄膜覆盖，保持湿度，7～10天苗成活后去掉薄膜进行正常管理。
结语：
这是草莓脱毒与未脱毒的田间比较，我们从中不难看出脱毒草莓生产性状明显优于未脱毒的
草莓，单果明显加大，产量显著增加，商品性大大提高。