植物组织培养技术第七章 植物脱毒快繁技术
植物生物技术7 植物脱毒和快繁
护环境。
二、植物脱毒的原理
（一）热处理脱毒原理 当植物组织处于高于正常温度的环境（35-
40℃）时，组织内部的病毒部分或全部钝化，
但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。
思考：热处理的作用是什么？
1．高温短时处理法 是利用病毒与植物耐热能力的不同，将苗木、 接穗或种子等繁殖材料在一定的高温下处理一段
由于珠心胚是由母本体细胞发育而来，未 经减数分裂，因此除个别体细胞突变外，珠心 胚长出的实生苗遗传上与母株完全相同。因此 由珠心胚获得的珠心苗大多数病毒被脱除而遗 传特征与母株完全相同。选择这种类型的珠心 苗，可应用标记花粉控制授粉，然后选出典型 的实生苗。
例如，枳的花粉可用作标记花粉，因为所有 枳的杂种实生苗都具有三叶特征，很容易辨认和 排除。培育珠心系以获得无病毒苗有以下优点： ①可以肯定植株不带毒； ②花时间少； ③成本低： ④方法便于掌握； ⑤珠心苗长势强。但珠心系童期长，且易出现一 些返祖性状。
（二）热处理方法
1.温汤（浸渍）处理
适用于离体材料（如接穗） 和休眠器官的处理。在50℃左右 的温水中浸渍10min至数小时，使 病毒失活。
2.热风（热空气）处理 (1)恒温处理：
将生长的盆栽植物移入
温热疗室内，一般在35-
40℃。对活跃生长的茎尖效
果较好。 处理时间因植物而异。
(2)变温处理：
对于一些果树要获得与亲本一致的无性系 无病材料，可以从胚囊败育的子房中在胚囊败 育之前获取胚珠或珠心组织进行培养。
花药或花粉培养也可作为一种脱毒方法， 这种方法可结合单倍体育种进行，用花药培养 进行草莓脱毒，脱毒率可达100％。花药培养获 得的无毒材料多为高产优质的类型。
（四）其他脱毒方法
植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用
植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用摘要：脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。
本文简要介绍植物组织培养的基本原理和方法，综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理和技术方法，介绍了几种常用的病毒检测方法。
本文以马铃薯为例，重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法，脱毒率可达100%。
同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。
关键词：茎尖培养，脱毒快繁技术，病毒检测，应用前景.1．脱毒技术及其原理植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分，在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物，脱除病毒得到无毒苗株，继而在大田快速繁殖的技术。
脱毒及离体快繁，是目前植物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方面。
现在植物的脱毒技术有多种，其中应用最广泛的有三种：热处理法、茎尖培养脱毒法、抗病毒药剂法，将不同的方法相结合起来应用效果更好。
1.1 热处理法1.1.1 概述热处理法是利用病毒和寄主植物对高温的忍耐性的差异，使植物的生长速度超过病毒的扩散速度，得到一小部分不含病毒的植物分生组织，然后进行无毒个体培育。
热处理可通过热水浸泡或湿热空气进行。
热水浸泡对休眠芽效果较好，湿热空气对活跃生长的茎尖效果较好，既能消除病毒又能使寄主植物有较高的存活机会。
热空气处理比较容易进行，把旺盛生长的植物移入到1个热疗室中，在35~40℃下处理一段时间即可，处理时间的长短，可由几分钟到数月不等[3] 。
热处理的方法有恒温处理和变温处理，处理的材料可以是植株，也可以是接穗。
1.12原理热处理脱毒是根据病毒与寄生细胞对高温的忍耐程度不同，选择适当的温度和处理时间，植物组织中的很多病毒被部分地或完全地钝化而可控制其的活动，但很少伤害甚至不伤害寄主组织，从而让植物细胞加快生长，使生长点附近不带病毒，从而达到脱毒的目的。
1.2 茎尖培养脱毒法1.2.1 概述茎尖培养脱毒就是采取茎尖分生组织离体培养的方法获取无病毒试管苗，其方法是在解剖镜下，用解剖刀进行迅速准确地茎尖剥离，因为茎尖分生组织基本不带病毒，利用植物茎尖分生组织进行离体培养，再结合病毒检测，就可以获得无病毒的植株。
植物组织培养之草莓的脱毒与快速繁殖
一、草莓简介草莓是对蔷薇科草莓属植物的通称，属多年生草本植物。
草莓的外观呈心形，鲜美红嫩，果肉多汁，含有特殊的浓郁水果芳香。
草莓具有极其丰富的营养价值。
1、（丰富的胡萝卜素）草莓中所含的胡萝卜素是合成维生素A的重要物质，具有明目养肝作用;2、（滋补调理）草莓对胃肠道和贫血均有一定的滋补调理作用;3、（治病）草莓除可以预防坏血病外，对防治动脉硬化，冠心病也有较好的疗效;4、（防癌）草莓是鞣酸含量丰富的植物，在体内可吸附和阻止致癌化学物质的吸收，具有防癌作用;（回主页）草莓营养价值高，口味好，深受消费者喜爱，特别是近几年种植面积大幅提高。
但由于病毒病的传播感染，导致草莓品种种性退化，产量、品质下降，商品率降低，严重影响了草莓的发展。
下面就简单介绍几种草莓易得的病：二、草莓易得的病1、叶斑病：又称蛇眼病，主要为害叶片、叶柄、果梗、嫩茎和种子。
在叶片上形成暗紫色小斑点，扩大后形成近圆形或椭圆形病斑，边缘紫红褐色，中央灰白色，略有细轮，使整个病斑呈蛇眼状，病斑上不形成小黑粒。
2、白粉病：主要为害叶片，也侵害花、果、果梗和叶柄。
叶片上卷呈汤匙状。
花蕾、花瓣受害呈紫红色，不能开花或开完全花，果实不膨大，呈瘦长形；幼果失去光泽、硬化。
近熟期草莓受到为害会失去商品价值。
3、灰霉病：是开花后的主要病害，在花朵、花瓣、果实、叶上均可发病。
在膨大时期的果实上，生成褐色斑点，并逐渐扩大，密生灰霉使果实软化、腐败，严重影响产量。
4、根腐病：从下部叶开始，叶缘变成红褐色，逐渐向上凋萎，以至枯死。
支柱在中间开始变成黑褐色而腐败，根的中心柱呈红色。
5、黄萎病：该病是土壤病害，主要症状是幼叶畸形，叶变黄、叶表面粗糙无比。
随后叶缘变褐色向内凋萎，直到枯死。
6、除此之外，草莓还容易有一些病虫危害，例如：线虫危害：寄生在草莓组织中，危害叶柄、芽、根等，使被害器官变成红色，严重时植株枯死。
蛴螬危害：在草莓收获期和八九月份咬食根、茎，使植株枯死。
常见植物的脱毒与快速繁殖技术
《常见植物的脱毒与快速繁殖技术》一、常见植物培养方式：1、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。
2、马铃薯病毒鉴定的方法主要有指示植物法、症状鉴定法。
3、通过组织培养获得微型薯的技术关键有两个：单茎节扩大繁殖；微型薯诱导。
4、在葡萄栽培架式，棚架是应用最广泛的类型。
5、草莓脱毒苗的培养方式主要有微茎尖培养和花粉培养两种。
6、菊花生根能力比较强，有两种方法：嫩茎试管生根；无根嫩茎的扦插。
7、菊花的继代增殖有多种技术，多数是诱导愈伤组织产生丛生芽而获得大量的试管苗。
8、百合经茎尖培养脱毒、鉴定合格后，可通过两种继代增殖方式：①经愈伤组织增殖；②诱导分化不定芽。
二、提问：对马铃薯脱毒苗的培养大致分几个阶段？各阶段是怎样操作的？马铃薯茎尖培养脱毒程序：①取材；②消毒；③接种；④培养基；⑤病毒鉴定。
影响脱毒效果的因素：外植体大小；茎尖所处部位；病毒种类及复合感染。
简述苹果花粉培养的过程。
①选取适期花蕾；②花蕾预处理和消毒；③诱导胚状体形成；④诱导生根；⑤移栽。
苹果的栽培管理过程中应注意哪几个问题？①育苗技术；②土壤改良；③施肥方法；④灌溉时期；⑤整形和修剪技术。
草莓无毒苗的繁殖程序分哪几步？草莓无毒苗的繁殖程序可以发为五步，即鉴定出无毒苗、原种种苗培养、原种种苗繁殖、良种种苗繁殖和生产用苗繁殖。
蝴蝶兰怎样用花梗组织培养方法繁殖?蝴蝶兰脱毒：花梗侧芽的消毒与培养——茎尖培养——原球茎诱导——继代培养——原球茎增殖——生根炼苗。
通过原球茎增殖的方法，可大大提高繁殖速度，实现蝴蝶兰生产的工厂化育苗。
香石竹的茎尖脱毒培养操作技术。
香石竹的茎尖脱毒培养操作技术：一般结合热处理：将带毒植株进行盆栽，放入人工控制箱内，采用38-40℃高温处理6-8周，再切1mm 大小的茎尖培养。
说明甘薯脱毒快繁技术的工艺流程。
（1）脱毒：优良品种母株选择；材料消毒；茎尖剥离；茎尖培养；茎尖苗的初级快繁；脱毒鉴定。
（2）快繁：脱毒苗的快繁；原原种的繁育；原种的繁育；种薯的繁育三、甘薯脱毒试管苗栽培管理注意哪些问题？培育壮苗；适当炼苗；精心移栽；控制湿、温、光等条件；适时定植；严防病虫害。
植物脱毒和快速繁殖技术 ppt课件
力，而保持其本身的生活力，从而达到脱毒的目的。
该法尤其适用于类菌原体、类细菌的脱毒，而对于
类病毒的脱毒效果较差，因为类病毒通常有较强的
热稳定性。这种处理方法与1921年首先用于甘蔗的
脱毒，国内用这种方法处理柑橘，可脱除柑橘材料
内的黄龙病类细菌。 PPT课件
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2 低热长时处理法
低热长时处理一般不能使整株植株脱毒，而只能 使个别器官脱毒，大多是使在热处理过程中长出的 茎尖无病毒。因此，处理的最后步骤是要取新产生 的茎尖嫁接到无毒实生碊木上或将新产生的茎尖进 行扦插繁殖，以获得脱病毒植株。但对不同病毒及 不同植物种类的脱毒率差异很大。
明显药害。据分析，抗病毒醚不是直接作用于病毒，而是作 用于寄主的代谢，从而阻止病毒的增殖，使新梢逐渐脱除病 毒。因此，认为在果树植株生长期间定期喷布抗病毒醚，有 可能在苗木顶端部分扩大无病毒区域，进而可增加茎尖培养 的脱毒效率。除抗病毒醚以外，还有报道证明一些其他药剂 也具有同样的作用。
4、合并使用药剂
在应用组织培养方法以获得无病原菌植株时，所用的外植体可以是茎 尖，也可以是茎的顶端分生组织。在这里，顶端分生组织是指最幼龄叶原基 上方的一部分，最大直径约为100，最长长度为250.茎尖则是由顶端分生组 织及下方的1~3个幼叶原基一起构成的。虽然通过顶端分生培养基消除病毒 的机会较高，但在大多数研究中，无病毒植物都是通过培养100~1000长的 外植体得到的，即通过茎尖培养得到。
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二、组织培养脱毒
1.茎尖培养脱毒
Morel等（1952）首先从感染有花叶病毒的大丽花上分离 出茎尖分生组织（0.25mm）培养得到植株，嫁接在大丽花 实生砧木上检验未无病毒植株。从此，茎尖培养就成为脱去 病毒的一个有效途径，并相继在马铃薯、菊花、兰花等茎尖 培养脱毒的研究中获得成功。茎尖培养脱毒可脱除多种病毒、 类病毒、类菌原体和类立克次体，很多不能通过热处理脱除 的病毒可以通过茎尖培养而脱掉。茎尖培养脱毒直接从茎尖 生长获得植株，很少有变异，能很好地保持品种的特性。
植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用
植物组织培养是一种重要的生物技术，它能够实现植物的快速繁殖、脱毒和基因转化。
在植物学研究和植物育种领域，植物组织培养技术的应用非常广泛。
本文将深入探讨植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用，以帮助读者更深入地理解这一重要领域。
1. 快繁技术在植物组织培养中，快繁技术是指利用植物体的一小部分组织或细胞，通过体外条件培养，实现植物的快速繁殖。
这种技术可以大大提高繁殖速度，缩短繁殖周期，是进行新种质创制、遗传改良和疫病防治的重要手段。
快繁技术的主要方法包括离体培养、愈伤组织培养和微繁殖等。
1.1 离体培养离体培养是将植物体表层（如幼叶、幼茎）或内部组织（如胚乳、子叶）分离出来，移入含有适当营养盐和植物生长调节物的培养基中培养。
通过控制培养条件和添加合适的植物生长激素，可以诱导组织分化和再生形成新植株。
1.2 愈伤组织培养愈伤组织是植物在受到外界刺激或损伤后，经过细胞分裂和组织再生形成的一种未分化的组织。
愈伤组织培养是利用这种特殊组织进行快速繁殖的一种方法，通过控制培养条件和添加植物生长调节物，可以诱导愈伤组织再生形成新植株。
1.3 微繁殖微繁殖是利用植物的微小芽或胚珠进行快速繁殖的方法。
通过培养条件的控制和植物激素的添加，可以诱导微小芽或胚珠快速生长并形成新植株。
2. 脱毒技术在植物组织培养中，由于植物体内可能携带病毒、细菌等病原体，因此会影响到组织培养的效果。
脱毒技术是为了解决这一问题而出现的一种重要技术。
脱毒技术能够有效地清除植物体内的病原体，提高组织培养的成功率和繁殖效率。
2.1 生物脱毒生物脱毒是利用生物制剂对植物体内的病原体进行清除的方法。
通过培养环境中添加含有特定菌株或真菌的生物剂，可以促进植物体内病原体的清除和组织的健康再生。
2.2 生理脱毒生理脱毒是利用植物自身的生理代谢特性进行脱毒的方法。
通过调节培养条件和添加特定的营养物质，可以激活植物的生理代谢活性，加速病原体的清除和组织的再生。
植物组织培养脱毒快繁技术的综述
植物组织培养脱毒快繁技术的综述李西雁（广西职业技术学院农业技术工程系2002级应用生物技术专业）摘要：脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。
本文结合在桂林莱茵生物科技股份有限公司的实践情况，简要介绍植物组织培养的基本原理和方法，综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理、发展史和技术方法，并介绍了几种常用的病毒检测方法。
本文以马铃薯为例，重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法，脱毒率可达100%。
同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。
关键词：茎尖培养，组织培养，快繁脱毒技术，病毒检测，应用前景1 植物组织培养研究概况1.1 研究简史自从1943年怀特（White）提出植物细胞“全能性”（Totipotency）学说及诸多后学者（Steward，1958，Guha和Marteshwari，1964）相继证实后，引发植物组织和细胞培养快繁技术的勃然兴起。
我国的专家学者在20世纪70年代后也在此领域做了大量的研究和开发工作，创造了很多新方法、新技术，提出不少新成果，开拓了植物组织培养快繁技术的新局面[1]。
目前采用组织培养脱病毒快繁及离体快繁生产株苗的技术已发展相当成熟[2]。
脱毒株苗具有无杂菌、适应能力较强、繁育较快、质量优、抗性好、分蘖性强、繁殖系数高、大批量生产、周年供应、便于运输等优点，已得到有关专家的鉴定及高度评价和种植试验区、种植产区果农的认可。
例如脱毒马铃薯、脱毒红薯、脱毒生姜、脱毒大蒜、脱毒草莓、脱毒苗木、脱毒花卉等等，已成为现代农民致富的新宠[2]。
1.2 植物组织培养和脱毒快繁的定义植物组织培养（Plant tissue culture）是指在无菌的条件下，将离体的植物（根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。
第7章 茎尖培养和脱毒、快繁技术
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
③ 试管苗的壮苗与生根：
• 一般要分成单苗 ， 转移到盐浓度较低 、 不含细 一般要分成单苗， 转移到盐浓度较低、 胞分裂素， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基， 胞分裂素 ， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基 ， 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 • 问题：不易生根 （ 延长时间、 继代 ） ；易生根： 问题：不易生根（ 延长时间 、 继代） 壮苗阶段不加生长素， 壮苗阶段不加生长素 ， 试管外生根可减少费用； • 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
4. 提高试管苗繁殖速度的措施：
① 选择合适的繁殖途径 ② 改良培养基： 激素 （腋芽 、 不定芽 、 胚状体 ） 等； 激素（ 腋芽、 不定芽、 胚状体） ③ 改良培养条件 ： 温 、光 、 湿度、 气体（有利气体、 湿度 、 气体 （ 有利气体、
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 培养方法：固体培养、液体纸 桥培养（易愈伤化时）
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 对培养基和培养条件的要求： • 一般可用MS培养基，加少量的生长素（不 用2,4-D）和细胞分裂素；GA3有时对抑制 愈伤等有一定的效果。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
3. 茎尖培养技术： • 材料消毒：在温室种植或田间种植的健康植 株上取枝条，必要时母株可用杀菌剂处理； 在实验室切取2-3cm长的芽，去掉较大的叶 片，进行常规的表面灭菌；
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 茎尖分离：将灭菌的芽置放有湿滤纸的无菌 培养皿中，置体视显微镜下，依次用镊子或 解剖刀剥去叶片直至露出生长点，用锋利的 解剖刀片把带或不带叶原基的分生组织切下 来，直接接种到培养基上；