植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用
马铃薯脱毒试管苗快繁技术

马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯是我国重要的经济作物之一,但是也受到各种病毒的威胁,其中普通马铃薯Y 病毒和葡萄叶病毒对产量和品质的影响尤为严重。
因此,马铃薯脱毒试管苗快繁技术应运而生,成为解决马铃薯病毒问题的有效途径。
马铃薯脱毒技术主要应用于普通马铃薯Y病毒、葡萄叶病毒、马铃薯卷叶病毒和马铃薯花叶病毒等病毒的控制。
试管苗快繁技术是指将受病毒侵染的母株去除外在病毒污染,通过组织培养技术培养出无病毒的试管苗,再进行大规模繁殖。
该技术有以下优点:一、保证马铃薯品种的纯度和优质性马铃薯试管苗快繁技术可以去除试管苗体内外病毒,降低病毒对马铃薯产量和品质的影响,保证马铃薯品种的纯度和优质性。
二、促进马铃薯种薯产业的发展和壮大马铃薯试管苗快繁技术可以大规模繁殖马铃薯健康种苗,提高种薯产量和品质,促进马铃薯种薯产业的发展和壮大。
三、降低耕地污染和农业用药量马铃薯试管苗快繁技术可以去除病毒,降低马铃薯的病害发生率,从而减少对土壤和水的污染,降低农业用药量,保护生态环境。
四、提高农民收益马铃薯试管苗快繁技术可以提高马铃薯产量和品质,增加农民的收益,改善农民的生活水平。
一、选择底薯并进行消毒。
选用优质种薯作为材料,切割成小块,进行消毒处理,去除外在污染细菌。
二、组织培养获得试管苗。
采取组织培养技术,将马铃薯底薯比如去除病毒后得到的组织块,放在含有营养物质的试管中,在适宜的温度、光照和湿度下培养,最终获得无病毒的马铃薯试管苗。
三、快速繁殖无病毒试管苗。
将无病毒马铃薯试管苗通过快繁技术进行扩繁,获得大量无病毒的马铃薯试管苗,再进行与土壤直接接触的育苗培育。
四、田间移栽。
无病毒的马铃薯试管苗经过特殊处理后,移栽到田间进行培育,获得无病毒的马铃薯种质资源。
总之,马铃薯脱毒试管苗快繁技术是一项有效的马铃薯病毒控制技术,可以保证马铃薯种质资源的纯度和优质性,为马铃薯种薯产业的发展和壮大提供了有力支撑,也对保护生态环境和提高农民收益具有重要意义。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术

马铃薯脱毒试管苗快繁技术一、引言马铃薯是我国重要的粮食作物之一,也是世界上著名的经济植物之一。
然而由于病毒的不断侵袭和疫病的流行,马铃薯的产量和品质不断下降,给农民带来了巨大的经济损失。
因此,繁殖健康无害的马铃薯脱毒试管苗已成为种植业的重要课题。
本文将就马铃薯脱毒试管苗快繁技术进行详细描述。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术是指利用组织培养技术,从马铃薯营养组织中培养出无菌结果愈伤组织,然后通过激素处理,使其分化成愈伤组织和根发生体,并再次通过激素培养,使其分化成幼苗。
经过快速繁殖和转移,只需数月就可以获得大量无菌试管苗。
1、原种资料筛选首先要去毒源,选择健康、无病毒的马铃薯株作为原种资料。
2、表型鉴定通过观察和检测,鉴定选定的原种资料是否存在病害。
3、进行消毒处理将所选的马铃薯根茎进行消毒处理,保证原种资料无菌。
4、组织培养将原种资料营养组织分离出来,并进行无菌培养,培养至结果愈伤组织。
5、激素处理将结果愈伤组织分裂成愈伤组织和根发生体,经过激素处理,使愈伤组织分化成为幼苗。
6、快速繁殖和转移幼苗经过快速繁殖和转移,可以在数月时间内获得大量的无菌试管苗。
1、高效快捷马铃薯组织培养技术可以在短时间内获得大量无菌马铃薯苗,极大地提高了马铃薯繁殖的效率。
2、无病毒由于是无菌培养,可以避免病毒的传播和侵袭,从根本上解决了马铃薯病害的问题。
3、一致性强试管苗的形态、生长状态、品种、性状和同一生产人群下的分布均一。
4、推广灵活马铃薯组织培养技术可以根据不同地区和不同需求进行灵活推广和应用。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术具有广阔的应用前景,可以成为解决马铃薯病害的重要手段。
同时,随着科技不断发展和创新,马铃薯脱毒试管苗快繁技术将进一步提高繁殖效率和质量,并推动种植业的发展。
马铃薯脱毒种薯高产栽培技术

马铃薯脱毒种薯高产栽培技术马铃薯是世界上重要的食用作物之一,种植面积广泛,产量巨大。
由于病毒和细菌等病害的侵袭,马铃薯的产量和品质经常受到影响。
为了提高马铃薯的产量和质量,脱毒种薯的高产栽培技术被广泛运用。
脱毒种薯是指通过人工手段,将马铃薯繁殖物种中的病毒和细菌等病原体除去,从而得到无病害的种薯。
脱毒种薯具有以下优点:脱毒种薯可避免病毒和细菌等病原体的传播,保持种薯的健康和纯种性;脱毒种薯生长健壮,能够更好地抵御病害的侵袭;脱毒种薯的产量和品质都较高。
1. 组培脱毒法:利用组织培养技术,将马铃薯萌芽末端或芽鳞组织移植到含有适宜培养基的试管中进行培养。
经过一段时间的培养,可获得无病毒的幼苗。
然后,将幼苗移植到合适的土壤中进行生长,最终得到脱毒种薯。
2. 硬毒石灰法:将马铃薯种块浸泡在含有硬毒石灰的水溶液中,浸泡时间为4-6小时。
硬毒石灰的作用是改变土壤的pH值,抑制病毒的生长和传播。
浸泡后,马铃薯种块需要在阳光下晾晒一段时间,以便杀死病毒。
3. 高温水疗法:将马铃薯种块浸泡在温度为50-55摄氏度的热水中,时间为30分钟。
高温水疗的作用是通过高温杀死病毒和细菌等病原体。
热水处理后,种块需要在凉爽的地方晾晒,以便杀死残留的病原体。
值得注意的是,在进行马铃薯脱毒种薯高产栽培技术时,还需要注意以下几点:1. 选择健康的种块:确保选用无病毒和无细菌的种块,以免病害传播。
2. 确保良好的灌溉和排水:马铃薯生长需要适度的水分,但过多的水分会促进病害的生长和传播。
3. 合理施肥:根据土壤质地和马铃薯的生长需求,合理施肥。
过度施肥会导致病害的发生。
4. 定期病害防治:对于常见的马铃薯病害,如马铃薯晚疫病和细菌性褐腐病等,及时采取防治措施,确保马铃薯的健康生长。
马铃薯脱毒种薯高产栽培技术是提高马铃薯产量和质量的重要手段之一。
通过合理选择种块、采用适当的脱毒方法,以及做好灌溉、施肥和病害防治等管理措施,可以有效提高马铃薯的产量和质量,满足人们对于马铃薯的需求。
植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用

植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用摘要:脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。
本文简要介绍植物组织培养的基本原理和方法,综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理和技术方法,介绍了几种常用的病毒检测方法。
本文以马铃薯为例,重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法,脱毒率可达100%。
同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。
关键词:茎尖培养,脱毒快繁技术,病毒检测,应用前景.1.脱毒技术及其原理植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分,在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物,脱除病毒得到无毒苗株,继而在大田快速繁殖的技术。
脱毒及离体快繁,是目前植物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方面。
现在植物的脱毒技术有多种,其中应用最广泛的有三种:热处理法、茎尖培养脱毒法、抗病毒药剂法,将不同的方法相结合起来应用效果更好。
1.1 热处理法1.1.1 概述热处理法是利用病毒和寄主植物对高温的忍耐性的差异,使植物的生长速度超过病毒的扩散速度,得到一小部分不含病毒的植物分生组织,然后进行无毒个体培育。
热处理可通过热水浸泡或湿热空气进行。
热水浸泡对休眠芽效果较好,湿热空气对活跃生长的茎尖效果较好,既能消除病毒又能使寄主植物有较高的存活机会。
热空气处理比较容易进行,把旺盛生长的植物移入到1个热疗室中,在35~40℃下处理一段时间即可,处理时间的长短,可由几分钟到数月不等[3] 。
热处理的方法有恒温处理和变温处理,处理的材料可以是植株,也可以是接穗。
1.12原理热处理脱毒是根据病毒与寄生细胞对高温的忍耐程度不同,选择适当的温度和处理时间,植物组织中的很多病毒被部分地或完全地钝化而可控制其的活动,但很少伤害甚至不伤害寄主组织,从而让植物细胞加快生长,使生长点附近不带病毒,从而达到脱毒的目的。
1.2 茎尖培养脱毒法1.2.1 概述茎尖培养脱毒就是采取茎尖分生组织离体培养的方法获取无病毒试管苗,其方法是在解剖镜下,用解剖刀进行迅速准确地茎尖剥离,因为茎尖分生组织基本不带病毒,利用植物茎尖分生组织进行离体培养,再结合病毒检测,就可以获得无病毒的植株。
马铃薯脱毒种薯高产栽培技术

马铃薯脱毒种薯高产栽培技术马铃薯是我国重要的经济作物之一,不仅可以作为食品和饲料,还可以提取淀粉和生产酒精等工业用途。
然而,马铃薯种薯的病毒问题一直困扰着农民,因此脱毒种薯的生产技术越来越受到农民的关注。
本文将介绍马铃薯脱毒种薯高产栽培技术的相关知识。
一、马铃薯脱毒种薯的优点1.提高马铃薯的产量和质量。
马铃薯种薯常常受到各种病毒的侵害,这些病毒会影响马铃薯的生长发育,降低产量和质量。
而通过使用脱毒种薯,可以有效地避免这些问题,提高马铃薯的产量和质量。
2.增加马铃薯的抗逆性。
脱毒种薯可以有效地提高马铃薯的抗逆性,增加其对干旱、病害等不良环境的适应能力。
这将有助于降低种植风险,提高效益。
3.提高土壤质量。
脱毒种薯在种植的过程中,可以促进土壤团粒结构的形成,从而提高土壤质量,增加土地的肥力。
1.选择适宜地点。
种植马铃薯脱毒种薯前,需要选择适宜的地点。
一般来说,在环境干燥、无污染和适宜温度下的地点更适合种植。
2.选用合适的品种。
在选择马铃薯品种时,应该考虑种植地的环境条件、生产需求和市场需求等因素。
同时,要认真了解品种的生长特性、病害抗性等信息,选择合适的品种。
3.采用合适的种薯管理方法。
种植马铃薯脱毒种薯的一种有效方法是采用组织培养技术。
这种方法可以有效避免病毒污染,同时可以增加马铃薯的株数和生长速度。
在种植过程中,还应注意灌溉、施肥和病虫害防治等问题,保证马铃薯正常的生长和发育。
4.进行脱毒处理。
在种植前,需要对种薯进行脱毒处理以去除病毒污染。
脱毒方法包括热处理、化学药剂处理和组织培养等。
5.进行质量检验。
在种植前,应该通过专业机构进行种薯质量检测,确保马铃薯符合国家标准和质量要求。
马铃薯的种植时间应根据当地气候、土壤条件和种植区域的时间来确定。
一般来说,春季和秋季都是马铃薯的最佳种植时间。
2.进行良好的地面准备。
在种植之前,需要对土地进行适当的施肥和地面准备,以提高土壤肥力和马铃薯的生长环境。
同时,在地面上铺上适量的有机肥料,以提供养分。
马铃薯脱毒试管苗快繁技术

马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯作为我国重要的经济作物之一,是广大农民和经济发展所依靠的重要农业领域。
而随着现代农业发展的不断推进,马铃薯种植也面临着各种各样的困难和问题。
其中,病毒病是马铃薯种植过程中最严重的问题之一。
为了解决这一问题,现在越来越多的科技工作者开始探索马铃薯脱毒试管苗快繁技术。
以下就从马铃薯脱毒试管苗的定义、制备流程、优势及应用等方面进行详细介绍。
马铃薯脱毒试管苗是指利用组织培养和生物学技术手段在无菌条件下,从被病毒污染的母株中取材,经过一系列处理,得到一定数量无菌苗,最终培育成符合生产要求的健康幼苗。
二、制备流程1、材料准备选择健康的马铃薯作为原材料,对其进行外观检查和芽眼筛选。
同时还需准备有较高的生长潜力和再生能力,无菌培养必需的基本培养基、辅助培养基及添加适量激素和营养物质的诱导培养基等。
2、无菌处理将马铃薯进行消毒处理,以确保材料无菌化。
处理方法包括酒精消毒、盐酸消毒、滴定消毒等。
3、切瘤、分化在消毒的基础上,进行切瘤和分化处理,分离出芽鳖、块茎鳖、滋液鳖等预备试管苗材料。
4、根、茎、叶分离通过培养基的诱导,将原始材料中的根、茎、叶进行分离和再生,形成独立的无菌苗,以便进行大规模培养和繁殖。
5、无菌培养得到无菌苗后,进行无菌培养,增殖数量,以期达到无菌苗的快速繁殖和生长。
6、弱化适应繁殖的苗期过长、适应性不足,则会极大地限制试管苗的生长和繁殖。
为此,可以通过加强营养管理、控制温度环境以加强其适应能力。
三、优势及应用1、提高繁殖能力试管苗繁殖效率高,可以在很短时间内繁殖出大量的健康马铃薯苗,提高其生产效益。
2、保证生产质量脱毒试管苗繁殖过程严格按照国家标准执行,每批苗都具有相同的生长特征和品质,可以保证生产质量。
3、有效防控病害通过脱毒试管苗快繁技术,可以有效避免病毒病等病害的传播,提高马铃薯的健康状态,减少生产损失。
4、推动可持续发展脱毒试管苗效益显著,有助于推动现代化农业发展和可持续发展,为农民增收和增加就业构建了良好的平台。
马铃薯脱毒种薯高产栽培技术

马铃薯脱毒种薯高产栽培技术马铃薯是我国重要的粮食和经济作物之一,具有丰富的营养价值和经济价值。
由于多年栽培和疾病的影响,马铃薯种薯中普遍存在着病毒感染的问题,这对薯产业的发展带来了很大的影响。
马铃薯脱毒种薯高产栽培技术的研究和应用非常重要。
一、马铃薯脱毒种薯的选育1. 耐病毒种薯选育材料的选择:选用抗病毒种质资源,包括具有抗病毒基因的马铃薯品种和近交种,以及抗病毒性较强的马铃薯野生种和异源种等。
2. 无病毒种薯的病毒检测方法:通过ELISA、RT-PCR等分子生物学技术对种薯进行病毒检测,确保无病毒种薯的纯度和质量。
3. 病毒分离和纯化:对有病毒的种薯进行病毒分离和纯化,获得纯净的病毒制备物,为后续的病毒诱变和基因工程改良提供材料基础。
4. 病毒诱变和基因工程改良:通过病毒诱变和基因工程技术改良种薯,提高其抗病毒能力和产量。
1. 基地建设:选择土壤肥沃、地势高、水源充足、远离其它病毒源的地块作为脱毒种薯的基地。
2. 种薯繁殖:种薯的繁殖应在无病毒的条件下进行。
利用组培技术和无菌培养技术,从无病毒的母株中获取无菌种薯,进行快速繁殖。
3. 分株繁殖:将无菌种薯进行分株,每个分株要带有足够的养分和缓慢释放肥料,以确保分株的生存和生长。
4. 植株管理:控制植株数量,适时修剪、控制植株生长势,保证光照和通风,避免病虫害的侵染。
5. 病毒检测:在种植过程中,定期进行病毒检测,排除受病毒侵染的植株,确保种薯的纯度和质量。
1. 地力准备:在田间栽培前要进行充分的地力准备工作,包括施肥、翻地、松土等,提供适宜的土壤环境。
2. 耐病优质种薯的选择:选择抗病毒、良种、高产的耐病优质种薯进行栽培。
3. 肥料和水分管理:合理施肥,根据土壤肥力和作物需求合理施用肥料,保证作物正常生长和发育。
合理管理灌溉,保持适宜的土壤湿度,避免水分过多或过少对作物的影响。
4. 病虫害防治:定期进行病虫害的监测和防治,采取综合措施,包括合理轮作、间作、防治措施等,减少病虫害的发生。
马铃薯组织培养简化脱毒技术

马铃薯组织培养简化脱毒技术
马铃薯是我国重要的蔬菜作物之一,具有高蛋白、高淀粉、高营养价值,是人们必不
可少的食品之一。
然而,在种植和生产过程中,马铃薯会遭受各种病害和虫害的侵害,如
果不进行科学有效的防治,将会严重影响马铃薯的生产和收成。
其中,病毒病是马铃薯种
植中主要的一种病害,如果不及时控制,将对马铃薯产生较大的危害。
为了解决这个问题,科学家们开发了一种名为“组织培养简化脱毒技术”的方法,该
技术可以有效地使马铃薯保持无病毒状态,同时提高其种植质量和产量。
组织培养简化脱毒技术是一种采用组织培养和简化脱毒技术相结合的马铃薯繁殖方法。
该方法要先从健康的母株中取出组织,再将其在营养剂和生长抑制剂的作用下进行培养,
使其形成小植株,再进行脱毒处理,最后将其移栽到田间进行种植,达到规模化繁殖的目的。
这种技术的主要优点在于其快速、高效、节约的特点。
与传统的马铃薯种植方法相比,组织培养简化脱毒技术可以迅速获得种植质量稳定、无病毒、高产的马铃薯,并且可以大
大降低种植成本。
但是,组织培养简化脱毒技术也具有一定的局限性。
首先,它需要高水平的技术人员
操作,普通农民应用难度较大;其次,它的操作过程需要比较严格的环境和设备控制,对
研究条件提出了较高的要求;再者,该技术的成功率也与所选用的材料有关,在选材上也
需要有比较严格的要求。
总之,组织培养简化脱毒技术是一种非常有效的马铃薯繁殖方法。
它可以为农民提供
更为优质的马铃薯种苗,并且可以大大提高马铃薯的种植效益,但是该技术在操作和选材
上都存在一定的难度,需要科学家们进一步研究和优化。
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植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用摘要:脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。
本文简要介绍植物组织培养的基本原理和方法,综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理和技术方法,介绍了几种常用的病毒检测方法。
本文以马铃薯为例,重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法,脱毒率可达100%。
同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。
关键词:茎尖培养,脱毒快繁技术,病毒检测,应用前景.1.脱毒技术及其原理植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分,在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物,脱除病毒得到无毒苗株,继而在大田快速繁殖的技术。
脱毒及离体快繁,是目前植物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方面。
现在植物的脱毒技术有多种,其中应用最广泛的有三种:热处理法、茎尖培养脱毒法、抗病毒药剂法,将不同的方法相结合起来应用效果更好。
1.1 热处理法1.1.1 概述热处理法是利用病毒和寄主植物对高温的忍耐性的差异,使植物的生长速度超过病毒的扩散速度,得到一小部分不含病毒的植物分生组织,然后进行无毒个体培育。
热处理可通过热水浸泡或湿热空气进行。
热水浸泡对休眠芽效果较好,湿热空气对活跃生长的茎尖效果较好,既能消除病毒又能使寄主植物有较高的存活机会。
热空气处理比较容易进行,把旺盛生长的植物移入到1个热疗室中,在35~40℃下处理一段时间即可,处理时间的长短,可由几分钟到数月不等[3] 。
热处理的方法有恒温处理和变温处理,处理的材料可以是植株,也可以是接穗。
1.12原理热处理脱毒是根据病毒与寄生细胞对高温的忍耐程度不同,选择适当的温度和处理时间,植物组织中的很多病毒被部分地或完全地钝化而可控制其的活动,但很少伤害甚至不伤害寄主组织,从而让植物细胞加快生长,使生长点附近不带病毒,从而达到脱毒的目的。
1.2 茎尖培养脱毒法1.2.1 概述茎尖培养脱毒就是采取茎尖分生组织离体培养的方法获取无病毒试管苗,其方法是在解剖镜下,用解剖刀进行迅速准确地茎尖剥离,因为茎尖分生组织基本不带病毒,利用植物茎尖分生组织进行离体培养,再结合病毒检测,就可以获得无病毒的植株。
茎尖培养脱毒法脱毒率高,脱毒速度快,能在较短的时间内得到较多的原种繁殖材料,但这种方法存在的缺点是植物的存活率低。
为了克服这一缺点,现在经常是将茎尖培养与热处理相结合来使用。
茎尖培养与热处理相结合之所以能够提高脱毒效果,是由于热处理可使植物生长本身所具有的顶端免疫区得以扩大,有利于切取较大的茎尖(1mm左右),从而能够提高培养或嫁接的成活率。
1.2.2 原理茎尖培养脱毒的原理是植物体内病毒靠维管束系统移动,分生组织中没有维管束存在,病毒只靠胞间连丝移动,速度很慢,难以追上生长活跃的分生组织,所以旺盛生长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒分布。
据研究,植物体内某一部分组织器官不带病毒的原因是:分生组织的细胞生长速度快,病毒在植物体内繁殖的速度相对较慢,而且病毒的传播是靠筛管组织进行转移或通过细胞间连丝传递给其他细胞,因此病毒的传递扩散也受到一定限制,这样便造成植物体的部分组织细胞没有病毒。
根据这个原理,可以利用茎尖培养来培育无病毒苗木。
1.3 抗病毒药剂法1.3.1 概述抗病毒药剂法,这是一种新的脱毒方法,运用一些抗病药剂的作用影响病毒RNA的复制形成,干扰病毒的正常生长,从而达到除去病毒的目的。
常用的抗病毒化学药物有三氮唑核苷(病毒唑)5-二氢尿嘧啶,(DHT)和双乙酰-二氢-5-氮尿嘧啶(DA-DHT)。
这些药物常常通过直接注射到带病毒的植株上,或者加到植株生长的培养基上。
这种方法一般要与茎尖培养相结合应用。
经过抗病毒药剂处理的嫩茎,切取茎尖,再进行组织培养,就会提高脱毒率和成活率。
1.3.2 原理抗病毒药剂法的作用原理是抗病毒药剂在三磷酸状态下会阻止病毒RNA 帽子结构形成而达到除去病毒的效果。
2.脱毒效果的检测方法经过脱毒处理的植株是否还存在病毒,必须经过病毒学检测才能确定。
传统上一直沿用的检测方法是目测法,但是这种方法无法剔除潜隐性病毒。
后来出现的指示植物法,扩大了检测范围。
近年来随着生物科学的迅猛发展,免疫学方法,分子生物学方法等许多先进的理化技术的应用,促进了病毒检测技术的改进与发展。
下面简要介绍几种检测脱毒苗的方法。
2.1 植株直接测定法直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状,是最简单的测定方法。
不过,由于某些寄主植物感染病毒后需要较长的时间才出现症状,有的并不能使寄主植物出现可见的症状,因而无法快速检验。
2.2 指示植物法此法利用病毒在其他植物上出现症状的特征,作为鉴别种类的标准。
当原始寄主的症状不明显时,就可用指示植物法,这是因为指示植物比原始寄主更容易表现症状。
具体做法是将病叶研磨,把汁液接种到寄主植物上,对于木本植物,是将原始寄主嫁接到指示植物上。
指示植物法简便易行,成本低,但它灵敏性差,所需时间长,难以区分病毒种类。
2.3血清学方法抗血清鉴定法要进行抗原的制备(包括病毒的繁殖,病叶研磨和粗汁液澄清等),抗血清的采收、分离等。
血清可分装到小玻璃瓶中,贮存在– 15~– 25℃的冰冻条件下。
测定时,把稀释的抗血清与未知的病毒植物在小试管内混合,这一反应导致形成可见的沉淀,后根据沉淀反应来鉴定病毒。
此法灵敏度高,然此获得检测结果迅速,是目前检测病毒的一种最好方法。
此外,PCR 微量板杂交法[4]、电子显微镜检定法、病毒症状学诊断法等也可用来检测植物病毒。
3.马铃薯组织培养脱毒快繁技术鉴于当前农业经济作物生产上苗木(主要是无性繁殖作物)存在着严重病毒累积、品种退化、产量和品质大幅度的下降等问题,探索一种脱毒效果好、繁殖系数高、简易且经济的繁育良种及健苗技术,是当前农业经济作物种苗木生产中急需研究和探讨的课题。
下面以马铃薯为例,进行热处理加茎尖培养结合病毒检测法获得脱毒苗的方法,简述植物组织培养脱毒快繁技术在马铃薯育种中的应用。
3.1 研究简史马铃薯在种植过程中易感染病毒,当条件适合时,就会在植株体内增殖,转运和积累于所结薯块中,并且世代传递,逐年加重[3] 。
病毒的增殖与植物正常代谢极为密切,目前尚没有发现既能杀死病毒又不损伤植物的药剂,病毒危害一度成为马铃薯的不治之症。
1953 年Nirris 将孔雀石绿(Malachite green)加入培养基中抑制病毒繁殖,并通过茎尖组织培养,获得青山(Green mountain)品种无 PVX(马铃薯 X 病毒)的马铃薯植株。
此后,通过茎尖组织培养获得无病毒植株的技术迅速发展,为解决马铃薯病毒危害提供了有效途径,为生产提供优良种薯。
目前,国际上用茎尖培养产生的马铃薯品种已达150个左右[1] 。
科学研究结果证明,侵染马铃薯的病毒有20多种。
这些病毒一旦侵入马铃薯植株和块茎,就会引起马铃薯退化,出现各种各样的病态,造成不同程度的减产。
研究的结果还证明,病毒在植物组织中分布是不均匀的,并且受一定环境条件影响,在靠近马铃薯茎的顶端病毒浓度很低或不含病毒。
根据这一特点,通过茎尖培养可以获得马铃薯无病毒苗[2] 。
另外,马铃薯病毒,有的对温度比较敏感,有的不敏感,但对植株或发芽的块茎进行高温处理后再作茎尖培养,一般脱毒率都比较高。
因此,在茎尖培养前,对植株和发芽块茎进行30~35℃,28天的高温预处理,能收到良好的效果。
3.2 马铃薯茎尖培养脱毒方法利用茎尖组织培养结合病毒检测,对马铃薯进行脱毒,进而生产脱毒种薯用于生产,可有效地防止种薯退化,大幅度提高马铃薯产量。
3.2.1 取材和消毒将欲脱毒地品种块茎催芽,芽长4~5cm 时,剪芽并剥去外叶,自来水下冲洗40min,于无菌室内用漂白粉溶液消毒后,无菌水冲洗2~3次。
3.2.2 剥离茎尖和接种在无菌室内,于40倍地解剖镜下,剥取带1个叶原基地茎尖,接种于MS茎尖培养基地试管中。
试管中的MS茎尖培养基包括大量元素、微量元素、有机成分和生长素、细胞分裂素、蔗糖和琼脂,pH值为5.8,经过高压蒸汽灭菌后使用,每试管接种1个茎尖。
3.2.3 培养基和培养条件茎尖培养的关键是将脱毒后的茎尖透导生成带有完整根、茎、的植株,因此选择适合的培养基十分重要。
对于马铃薯的茎尖培养来说,需要较多的NO3ˉ和NH4 营养,MS和Miller 基本培养基都是较好的培养基,而且附加少量(01.mol/l~0.5mol/l)的生长素或细胞分裂素或二者都加,培养的效果更好。
接种的茎尖培养于25℃、1500~3000LX 光照条件下培养室内,3个月则长成3~4 片叶的小植株在无菌条件下,进行切段扩繁[2] 。
3.2.4 病毒检测 [5] 。
病毒检测是茎尖脱毒不可缺少的步骤。
经过脱毒技术得到的脱毒植物必须经过严格的病毒检测,证实确实无毒又具备优良性状后才能作为种苗。
常用鉴别寄主即指示植物法或血清学方法进行检测,及时淘汰血清学阳性反应或在指示植物上有症状的茎尖苗,无任何反应的茎尖苗即脱毒苗用作大田快速繁殖。
3.2.5 结果通过利用茎尖组织培养结合病毒检测法获得马铃薯脱毒苗,经病毒检测,除去了马铃薯中的病毒病,脱毒率可达100%。
4.植物组织培养脱毒快繁技术应用前景的简述植物组织培养技术在作物上主要用于育种和良种繁殖,其次用于无性繁殖作物的脱毒和快繁以及种质的保存等,可见植物组织培养脱毒快繁技术对于农作物苗木的生产具有极其重要的地位 [1] 。
一些农作物或是花卉植物等因长期的栽培和种植,植物体内被侵染携带病毒、种性退化现在能利用组织培养及快繁脱毒方法开发出的植物脱毒新品种有马铃薯、甘薯、生姜、大蒜、草莓、罗汉果、棕榈、剑麻、香蕉、甘蔗以及花卉植物等几百种再生植株。
目前这种技术已得到了广泛应用,前景及范围非常广阔。
参考文献 [1].曹孜义刘国民.《实用植物组织培养技术教程》修订本.甘肃科学技术出版社,2001.1.[2].蒲育林高占彪.马铃薯微型种薯生产及应用前景.甘肃农业科技,1994.4:39.[3].朱德蔚.植物组织培养与脱毒快繁技术[M].北京:中国科学技术出版社,2001.[4].王明霞.应用 PCR 微量板杂交法检测植物病毒和类病毒[J].植物保护, 1996, 22: 34~35.[5].扬艾茹暴成光.对马铃薯脱毒种薯生产的浅见.马铃薯杂志,1988.1 42。