抗生素微生物检定管碟法在中国药典中的应用及操作要点
抗生素效价测定操作规程
抗生素效价测定操作规程1. 主题内容和适用范围本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2. 引用标准《中国药典》2010年版二部。
3. 术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法采用的是管碟法。
4. 操作技术（仪器与用具）4.1 操作室：光线明亮，操作间分 a.一般操作间b 半无菌操作间。
室温控制20-25℃。
注意抗生素的污染。
4.2 双蝶：内径90mm 高16-17mm.用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min,备用。
4.3 陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4.4 钢管：内径 6.0±0.1mm 高7.8±0.1mm 或8.0±0.1mm,10.0±0.1mm.重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h 以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min 或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗,淋干,PW 冲洗3次150-160℃干热灭菌2小时备用. 4.5 钢管放置器4.6 恒温培养箱:隔水式为宜35-37℃4.7 灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml 、20ml ），用后立即置5%石碳酸或QCA/QC-SOP-006山东良福制药有限公司起草人 日 期 抗生素效价测定操作规程审核人 日 期 批准人 日 期 第五版实施日期总页数共5页1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150-160℃干热灭菌2小时备用.4.8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡,水洗、PW冲3次4.9称量瓶:具塞,重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW冲3次,置洁净的大平皿中.120℃干热3h,待冷到70-60℃时,取出置干燥器中备用.4.10毛细滴管: 清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次.120℃干燥3h4.11天平:分析天平,感量0.1mg4.12抑菌圈测量仪(多功能微生物自动测量分析仪)4.13超净工作台5.菌悬液制备取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水1~2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35~37℃培养7天。
120抗生素微生物检定法简介及在药品申报中应关注的一些问题
发布日期20060609栏目化药药物评价>>化药质量控制标题抗生素微生物检定法简介及在药品申报中应关注的一些问题作者张敏蒋煜部门正文内容审评三部张敏蒋煜摘要：本文结合中国药典要求，初步探讨了抗生素微生物检定法在抗生素含量测定中的应用、不同的测定方法及其特点，测定过程中的注意事项等内容。
旨在提请申请人注意在对该部分进行研究时，一方面需要根据不同目的选择合适的检测方法，另一方面需要注意影响各方法测定结果的因素，重视方法学验证。
关键词：抗生素微生物检定法，方法验证。
一、概述抗生素微生物检定法是利用抗生素在低微浓度下选择性地抑制或杀死微生物的特点，以抗生素的抗菌活性为指标，来衡量抗生素中的有效成份效力的方法。
是国际上通用的、经典的抗生素效价测定方法，在各国药典中被普遍采用。
多用于结构十分复杂和多组分的抗生素的含量测定。
抗生素微生物检定法根据试验方法的不同可分为：稀释法、比浊法、扩散法。
（1）稀释法将等量的试验菌菌液加入到含有不同浓度的抗生素的液体培养基中，观察液体培养基中有无细菌生长，所得的结果是一种范围而不是绝对值。
主要用于MIC测定及临床药敏试验。
（2）比浊法是将一定量的抗生素加至接种有试验微生物的澄清的营养丰富的液体培养基中，混匀后，在一定的温度下，短期培养（约3～4小时），培养基变浑浊，其浑浊程度与细菌数的增加、细菌群体质量的增加和细菌群体细胞容积的增加之间存在直接关系，当一定光束照射培养基时，通过测定其透过率就可知道细菌生长的情况，其吸光度与抗生素浓度关系符合比尔定律，即在一定的抗生素浓度范围内，剂量反应为一直线。
因此，在剂量反应响应曲线的直线范围内，即可设计用比浊法测定抗生素含量。
（3）扩散法扩散法中又有纸片法、管碟法等，纸片法主要用于药敏试验，我国药典收载的抗生素效价测定方法主要是管碟法，也是国际通用的方法。
其基本原理是利用抗生素在摊布特定试验菌的琼脂培养基内的扩散作用，形成一定浓度的含抗生素的球型区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈，将已知效价的标准溶液和未知效价的供试品溶液在同样条件下进行培养，比较两者抑菌圈大小，在一定的抗生素浓度范围内，对数浓度与抑菌圈直径成正比。
抗生素微生物检定操作规程
[转载]抗生素微生物检定法（上）(2010-07-30 16:00:26)转载原文标签：转载原文地址：抗生素微生物检定法（上）作者：yingying本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验（标准曲线法除外）。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。
管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
（一）基本设备、用具、试验材料及标准品1. 基本设备（1）抗生素效价测定实验室：室内应为半无菌，装有紫外线灯，有固定的效价测定台，台面要求水平、防震。
该室应与稀释抗生素溶液的工作室隔离，以防止空气、地面污染抗生素。
（2）超净工作台：超净工作台应放置在洁净工作室或半无菌室内。
（3）抑菌圈面积测量分析仪：该仪器装有微处理机，可自动测量抑菌圈面积，并打印出统计分析的各种数据。
2. 用具（1）玻璃双碟：为硬质玻璃制品，碟底内径约90mm，碟高16~17mm，碟底面应平，厚薄均匀无凹凸现象。
新购的双碟应按上述要求进行检查。
检查时可将双碟底平放在水平台上，每碟内加入2ml染料液，仔细观察碟底反映的颜色深浅是否一致，挑选底部平的双碟，洗净晾干，置高温烘箱内140~160 ℃干热灭菌2小时后备用。
（2）陶瓦圆盖：应平，无凹凸现象。
（3）不锈钢小管：外径7.8±0.1mm，内径6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，重量差异不超过±25mg，钢管内外壁要求光洁，管壁厚薄要一致，两端面要平坦光洁。
（4）小钢管放置器：四孔和六孔各一台。
（5）游标卡尺：精密度0.02mm。
（6）滴管：管口应细长平滑，不得有缺口。
《中华人民共和国药典》2005年版附录-抗生素微生物检定法
Ⅱ-ⅪA抗生素微生物检定法本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。
第一法：管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液的制备枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液：取枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85%以上。
用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）悬液：取短小芽孢杆菌［CMCC（B）63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液：取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液：取藤黄微球菌［CMCC（B）28001］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，或采用适当方法制备的菌斜面，用培养基Ⅲ或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
大肠杆菌（Escherichia coli）悬液：取大肠杆菌［CMCC（B）44103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。
啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液：取啤酒酵母菌（ATCC 9763）的V号培养基琼脂斜面培养物，接种于Ⅳ号培养基琼脂斜面上。
抗生素微生物检定标准操作规程
山西振东制药目的：建立抗生素微生物检定标准操作规程范围：抗生素类药依据：《中国药品检验标准操作规程》2010年版责任：化验员严格按操作规程操作班组长对检验人员的操作进行监督和指导中心化验室主任对检验人员进行培训考核，并对检验人员操作进行监督和指导内容：1 术语或定义本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
2 程序2.1 操作前准备2.1.1 抗生素管碟测定法2.1.1.1 仪器与用具操作室光线明亮，操作室应分为两部分，彼此分开，其中一部分为一般操作室，一部分为半无菌操作室。
半无菌操作室应设有紫外线灭菌灯，并附设空气净化（空气净化级别为100～10000级）及空调设备，控制室温度在20~25℃之间，达到无菌或半无菌状态。
操作台应稳固，台面用玻璃板，并用水平仪调节至水平。
注意操作，避免室内抗生素污染。
双碟内径约90mm高16～17mm硬质玻璃或塑料培养平皿，碟底厚薄均匀，水平透明，无色斑气泡。
碟底平度检查，可将双碟放在水平台上，下垫一张白纸碟内加水2～3ml，再滴加蓝墨水，观察蓝色深浅是否一致。
陶瓦盖内径约203mm，外径108mm，平坦，吸水性强，应定期清洗、干燥或干热灭菌。
钢管内径（6.0±0.1）mm，高（10.0±0.1）mm，外径（8.0±0.1）mm或（7.8±0.1）mm，每套钢管重量差异不超过±0.05g，内外壁及两端平坦，管壁厚薄一致。
每次使用后应置1:1000新洁尔灭溶液内，浸泡2h以上，灭菌后再洗涤，先用水洗涤，超声波超声30min 后用沾有去污粉的纱布条串擦内外壁，水冲洗，沥干，再用蒸馏水冲洗3次后，置带盖的容器内，在150～160℃干热灭菌2h，备用。
钢管放置器有6孔和4孔两种。
放置于无菌或半无菌的操作平台上，钢管下落时应垂直平稳、位置正确。
中国药品检验标准操作规范2010年版95抗生素微生物检定法
抗生素微生物检定法1 简述生素微生物检定法系在适宜条件下，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。
依试验设计原理不同，可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法。
后二者被列为抗生素微生物检定的国际通用方法。
《中国药典》也采用这两种方法。
抗生素微生物检定管碟测定法系琼脂扩散法，是利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。
此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。
抗生素微生物比浊法是将一定量的抗生素加至接种有试验菌的液体培养基内，混匀后，经培养，测量培养基的浊度。
此法系根据抗生素在一定的浓度范围内，其浓度或浓度的数学转换值与试验菌生长产生的浊度（浊度与细菌数量、细菌群体质量及细菌细胞容积的增加之间存在直接关系）之间存在线性关系而设计，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准晶与供试品对试验菌生长抑制的程度，计算出供试品的效价。
抗生素效价以“单位（U）”或“微克（μg）”表示。
抗生素管碟测定法2 仪器与用具2.1 操作室光线明亮，操作室应分为两部分，彼此分开，其中一部分为一般操作室，一部分为半无菌操作室。
半无菌操作室应设有紫外线灭菌灯，并附设空气净化（空气净化级别为100~10000级）及空调设备，控制室温在20~25℃之间，达到无菌或半无菌状态。
操作台应稳固，台面用玻璃板，并用水平仪调节至水平。
注意操作，避免室内抗生素污染。
2.2 双碟内径约90mm，高16~17mm硬质玻璃或塑料培养平皿，碟底厚薄均匀，水平透明，无色斑气泡。
碟底平度检查，可将双碟放在水平台上，下垫一张白纸，碟内加水2~3ml，再滴加蓝墨水，观察蓝色深浅是否一致。
用过的双碟经高压灭菌倒出培养基后，置清洗液中浸泡过夜，冲洗，沥干，置150~160℃干热灭菌2h或高压121℃蒸气灭菌30min，备用。
浅谈抗生素微生物检定———管碟法操作注意要点
◇药品检验◇浅谈抗生素微生物检定———管碟法操作注意要点任董春(安徽金蟾生化股份有限公司中心化验室,淮北 235000) 抗生素管碟测定法是利用抗生素在摊布特定实验菌的固体培养基内呈球面形扩散,形成含一定浓度抗生素球形区,抑制了实验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。
根据抗生素在一定浓度范围内,对数剂量与抑菌圈直径(面积)呈线性关系,比较标准品与供试品两者对接种的实验菌产生抑菌圈的大小,计算出供试品的效价。
本文根据实践工作经验,对抗生素效价检定操作过程中应注意的要点作一总结简述。
1 称量1.1 标准品与供试品的称量最好一次称取,不得将已取出的标准品或供试品倒回原容器内,标准品称量不可少于20mg ,一般为50mg 以下。
取样后立即将称量瓶或适宜的容器及被称物盖好,以免吸水。
1.2 吸湿性较强的样品,在称量前1～2h ,更换天平内干燥剂。
1.3 称量样品的容器重量最大不超过10g 。
称量标准品与供试品应用同一天平及砝码。
称量前被称的样品应放在干燥器内至少30min ,从冰箱取出的样品必须先在室温放置,使其温度与室温平衡后,才可称量。
2 稀释2.1 粉末状或结晶的供试品,第一步稀释应用容量瓶以消除体积上的误差。
稀释至5×102～1×103U ・L -1的溶液,以后的逐步稀释,也要用容量瓶稀释,并不超过3步。
2.2 每次吸取溶液用密刻度玻璃吸管,量取溶液前要用被量液流洗吸管2～3次。
吸取溶液后,用滤纸将外壁多余液体擦去,然后再从起始刻度开始放溶液。
注意放溶液时,吸管不要倾斜。
2.3 稀释供试品与标准品用的缓冲液,应用同一瓶内的缓冲液,以免因p H 或浓度不同而影响抑菌圈的生长与圆整。
2.4 与标准品所用的溶剂量及溶解时间等应尽量一致。
稀释时每次加液至容量瓶近刻度前,稍放置片刻,待瓶壁的液体完全流下,再准确补加至刻度。
2.5 用于稀释的刻度吸管和容量瓶,必须经过标定。
3 双碟的制备3.1 用水平仪检查效价测定操作台面是否水平,设法调整使其达到水平。
管碟法测定抗生素
管碟法测定抗生素
总结与展望
管碟法是一种经典的抗生素效价测定方法，具有操作简 便、直观等优点，广泛应用于药物研发、生产和质量控 制等领域。然而，随着科学技术的不断进步和新药的不 断涌现，管碟法也面临着一些挑战和改进的空间。未来 ，可以通过改进实验条件、优化操作流程和提高数据分 析能力等方式，进一步提高管碟法的准确性和可靠性， 为抗生素的研究和应用提供更加准确可靠的依据
操作规范：实验过程中应严格遵守无菌操作规范， 避免杂菌污染干扰 数据分析：在数据分析过程中，应采用适当的统计 方法对实验数据进行处理和分析，以获得准确可靠 的实验结果
管碟法测定抗生素
管碟法测定抗生素的优缺点
优点：(1)操作简便、直观，可快速获得实验结果； (2)适用于多种抗生素的效价测定，具有较好的通用 性；(3)可同时比较不同抗生素的ຫໍສະໝຸດ 菌效果，方便进 行药物筛选和质量控制
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管碟法测定抗生素
A
管碟法是一种常用的抗生素效价测
定方法，其原理是将抗生素溶液置
于含有敏感菌的培养基中，通过测
定抗生素的抑菌圈大小来确定其效
价
B
下面将对管碟法测定抗生素的步骤 、注意事项和优缺点进行详细介绍
管碟法测定抗生素
管碟法测定抗生素的步骤
培养基制备：将基础培养基加热溶解，灭菌后冷却至50℃左右，加入适量敏感菌悬液 ，摇匀后倒入无菌培养皿中，待凝固后备用 抗生素溶液制备：将待测抗生素溶解于适宜溶剂中，制备成不同浓度的溶液 放置管碟：在培养皿上放置无菌管碟，轻轻按压使管底与培养基紧密接触 滴加抗生素溶液：用微量移液器将不同浓度的抗生素溶液滴加到管碟上，每个浓度至 少做3个平行试验 培养：将培养皿放入恒温培养箱中培养一定时间(一般为16-24小时)，使敏感菌在培养 基上生长
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抗生素微生物检定管碟法在中国药典中的应用及操作要点
录入时间:2010-11-18 10:29:10 来源：青岛海博
抗生素微生物检定法可分为：（1）稀释法；（2）比浊法；（3）琼脂扩散法（管碟法和打孔法）。
各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。
管碟法：利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。
此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。
原理：利用抗生素在固体培养基中的平面扩散作用，依据量反应平行线原理并采用交叉实验设计方法，在相同实验条件下通过比较标准品（已知效价）和供试品两者对所接种试验菌产生的抑菌圈（直径或面积）大小，来测定供试品效价的一种方法。
管碟法的操作步骤：
1、预试验：确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：一剂量法中心点的抑菌圈直径应在16～17.5mm，二剂量法高剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm，三剂量法中间剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在15～18mm。
2、试验准备：双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、缓冲液的准备、半无菌间的紫外消毒等。
3、双碟的制备：每只双碟加底层培养基约20ml，待培养基凝固后，将双碟放入35～37℃培养箱中，待用。
4、供试品、标准品溶液的制备：估计供试品的效价，根据试验要求设计供试品、标准品溶液稀释步骤，平行制备供试品、标准品相关剂量的溶液。
5、菌层的制备：注意菌层培养基温度；根据预试验确定加入菌层培养基的菌液量，注意制备菌层的速度和平整度。
6、滴加抗生素溶液：注意标准品、供试品高、低剂量溶液滴加顺序，保证滴加速度和加量的均匀一致。
7、双碟的培养：根据培养温度的要求在培养箱中进行培养，培养箱中水平碟放的双碟数以不超过三层
为宜。
8、抑菌圈的测量：抑菌圈测量仪的使用，每组试验双碟应在相同的测量参数下进行测量。
手工测量：游标卡尺
9、结果的可靠性检验及效价测定：抑菌圈测量仪提供计算结果或手工计算结果。
操作要点
第一步一般应制成500或1000单位/毫升的溶液，以后逐步稀释至供试浓度的溶液，稀释步骤应为3～4步。
溶解：对于需用乙醇溶解的样品，由于溶解样品时所用乙醇量较大，加灭菌水后溶液放热，因此需充分摇匀后加灭菌水至接近容量瓶刻度，待冷至室温后再稀释至刻度。
标准品溶液与供试品溶液浓度的比值D应控制在±5%以内，以保证两者浓度的偏差在一定范围内。
试验菌的菌龄对抑菌圈有一定影响。
故检定时应保持菌种及菌液的新鲜。
一般菌种一月转种一次，冰箱冷藏保存。
对易变异的菌株，如藤黄微球菌等在制备菌悬液前进行单菌分离；其他菌株可半年分离一次。
试验菌传代最好不超过5次，以防止菌种老化变异。
芽孢杆菌培养物用灭菌水洗下后，应在65℃加热30分钟，使菌体的菌龄一致，用革兰氏染色，应有芽孢85%以上。
加入菌悬液的体积，一般不少于0.3ml，并且不大于上层培养基体积的2%。
如果加入菌悬液的体积过小，则在同次实验中，不同次加入菌悬液的体积相差较大，造成实验误差；如果加入菌悬液的体积过大，则会使上层培养基变稀，并且因菌悬液的温度较低，加至培养基中可能造成培养基结块，影响测定结果。
对于加入菌悬液体积的控制，可通过调节菌悬液的浓度来实现。
在制备菌层培养基时，将菌液加入菌层培养基后，立即充分摇匀，但应避免产生气泡。
加入芽孢悬液时，菌层培养基的温度为65℃，对非芽孢悬液时，菌层培养基的温度一般为48～50℃。
放置孵箱培养时排放应不得超过三层，避免因培养温度不均匀而导致各双碟中抑菌圈大小不一。
抗生素原料药：不含辅料的药物制剂原料，一般其效价以纯度（u/mg或?g/mg）表示。
检验时，可参考该品种的药品标准纯度限度规定或厂方提供的纯度估计效价，取样试验，如估计效价与实际效价相差较远时，即测定所得效价超出估计效价的±10%时，则重新估计效价，再做准确测定。
粉针剂：指注射用无菌粉末或冻干品，用西林瓶橡胶塞铝盖封装或熔封在安瓶内，一般测定其纯度（u/mg 或?g/mg）或整瓶效价。
取装量差异项下的内容物，称取适量（50mg以上，根据标示量及平均装量折算估计效价，并按估计效价及量瓶体积计算取样量），置量瓶中，加标准中规定的溶剂溶解，稀释，测定，计算出1mg的效价单位数，再根据平均装量及标示量计算平均每瓶的百分含量。
水针剂（注射液）：即抗生素的灭菌水溶液，标示量一般按每毫升含效价单位计。
效价测定时，量取平均装量项下的内容物或5～10支的内容物，混匀，用干燥的刻度吸管吸取一定量的供试品，将吸管外壁用滤纸拭净，再弃去多余的溶液，使供试品至吸管刻度，沿量瓶颈部内壁缓缓流入已盛有一定量溶剂（以免抗生素结晶析出）的量瓶内，混匀，继续加溶剂至刻度，摇匀，再量取适量稀释至规定的浓度。
素片、薄膜衣片：称取20片的总量，求出平均片重，研细混匀后，精密称取适量（约相当于1片的重量或根据标示量按平均片重及所用量瓶体积折算取样量），置量瓶中，用标准中规定的溶剂溶解，并稀释至刻度，摇匀。
再量取适量稀释至规定浓度。
注意点：研磨时应注意环境干燥，可在干燥操作柜内操作，研磨要迅速，避免吸湿，因片剂内含辅料较多，辅料可能漂浮于溶液表面，稀释时量取供试溶液应读取辅料下层的溶液切面；如沉淀较多，须待其下沉后再量取上层液；有些辅料吸附抗生素，应加以注意。
为节约供试品，可与重量差异检查结合进行。
糖衣片、肠溶片：取标准中规定的片数，置于乳钵中，研细，分次加入规定的溶剂，研磨使其溶解，将研磨液转移至瓶口放有小漏斗的量瓶中，量瓶体积根据供试品标示量、所取片数及抗生素储备液浓度（一般为1000单位/ml）选定，用规定溶剂稀释至刻度，摇匀，静置，使辅料下沉而抗生素已溶解在溶液内，精密吸取量瓶中的上层液适量，作进一步稀释。
个别品种标准如同时收载了糖衣片和薄膜衣片，可能规定薄膜衣片也取整片制备供试溶液。
胶囊剂：取装量差异项下的内容物，混合均匀，研细，根据平均装量，精密称取约相当于1粒胶囊的量或按标示量、量瓶体积及抗生素储备液浓度等计算的取样量，置于量瓶中，加规定的溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，如供试品含有较多的辅料，则照片剂项下的方法进行。
颗粒剂、干混悬剂：取装量差异项下的内容物，混匀，根据平均装量，精密称取约相当于1袋（包）的量或按标示量、量瓶体积及抗生素储备液浓度等计算的取样量，置于量瓶中，加规定的溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
量取适量稀释制成供试品溶液。
测得效价后，再根据装量差异项下的平均装量，计算出平
均每袋（包）的效价，根据标示量即可算出含量。
软膏剂、眼膏剂：擦净软膏剂或眼膏剂软管的外壁，切开封口，置于干燥器内约1小时，取干燥的洁净分液漏斗，带手套操作，将膏剂软管连同内容物在天平上称重，取出，将内容物挤入分液漏斗，量约2g，再称取膏剂软管的重量，按减重法以前后称量之差计算分液漏斗内膏剂供试品的量，以不含过氧化物的乙醚或石油醚等作溶剂溶解基质，但基质中的抗生素则应不溶于或几乎不溶于该有机溶剂中，以避免提取过程中抗生素的损失。
按标准中的规定加提取溶剂至分液漏斗中，振摇，使基质溶解，用规定的缓冲溶液提取抗生素至水相中，用缓冲溶液提取3次，合并3次的提取液，置量瓶中，加缓冲溶液至刻度，依法操作，计算效价。
实验要点
磷霉素钠，磷霉素钙，磷霉素氨丁三醇
主要问题：抑菌圈偏小
解决：
1. pH9.0抗Ⅱ号培养基（pH7.8～8.0）
2. 滴加药液后，室温放置1小时后，放入孵箱内培养。
3. 培养时间以24小时为宜，培养时间短，抑菌圈清晰度不好，培养24h后如抑菌圈仍不清晰，应室温放置一段时间待清晰后再测量。
啤酒酵母菌的培养
主要问题：生长不良
CP2005：抗Ⅴ号琼脂斜面及抗Ⅳ琼脂斜面
解决：1. 采用沙氏或YPD酵母菌培养基；2. 32～35℃培养24小时
沙氏培养基
蛋白胨10g 葡萄糖40g
琼脂13g 水1000ml
调节灭菌后pH5.4～5.8
YPD培养基
蛋白胨10g 葡萄糖40g
酵母粉5g 琼脂13g
水1000ml
管碟法特点：
优点：基本操作和设计适用于各种抗生素，试验结果较稳定；样品用量少，灵敏度高；适合于大批样品的测定。
缺点:凡具有抗菌活性的物质都会干扰测定结果；试验过程长，需第二天才有结果；操作手工化，需熟练人员才能得到较正确的结果；受扩散因素的影响，如培养基原材料的质量，一般琼脂中的杂质可能影响扩散速度及效价强度
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