实验动物给药剂量计算方法0001
丙磺舒钠增效实验
氨节西林钠/丙磺舒钠相关试验研究一、氨节西林钠/丙磺舒钠急性毒性试验1、摘要本试验采用小鼠单次静脉及腹腔注射给药途径，观察氨节西林钠/丙磺舒钠对小鼠的急性毒性反应，测得静脉注射小鼠LD50及95%的可信区限分别为2594mg/kg及(2380～2858) mg/kg;测得腹腔注射小鼠LD50及95%的可信区限分别为3113mg/kg及(2880～3383) mg/kg。
2、目的通过给小鼠单次静脉及腹腔注射氨节西林钠/丙磺舒钠后，观察其毒性反应及测定LD50，为临床应用提供急性毒性试验资料。
3、试验材料(1)药品:氨节西林钠/丙磺舒钠(3: 1)，试验前用生理盐水溶解后使用(2)动物:ICR清洁级小白鼠，体重18～20g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供，合格证号:SCXK(吉)2003-000104、方法与结果(1)氨节西林钠/丙磺舒钠小鼠静脉注射LD50的测定根据预试结果计算出组间距为1: ，分为5个剂量组。
取小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别以lOg体重静脉注射，给药后即刻观察记录动物反应症状及死亡时间，连续观察14天，结果表明，高剂量组给药后，小鼠出现抽搐死亡，其它剂量组给药后活动减少，对死亡小鼠立即剖检，肉眼未见各脏器异常改变，随着药物剂量减少，小鼠死亡数减少，根据各剂量组死亡率，用SPSS处理软件计算其LD50及95%可信区限，结果见表1。
(2)氨节西林钠/丙磺舒钠小鼠腹腔注射LD50的测定根据预试结果计算出组间距为1: ，分为5个剂量组。
取小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别以10g体重腹腔注射，给药后即刻观察记录动物反应症状及死亡时间，连续观察14天，结果表明，高剂量组给药后，小鼠出现抽搐死亡，其它剂量组给药后活动减少，对死亡小鼠立即剖检，肉眼未见各脏器异常改变，随着药物剂量减少，小鼠死亡数减少，根据各剂量组死亡率，用SPSS处理软件计算其LD50及95%可信区限，结果见表2。
药效评价原则
抗肿瘤药物药效学指导原则一、基本原则1. 抗肿瘤药物分类(1) 细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等；(2) 生物反应调节剂(biological response modifier)；(3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent)；(4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)；(5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor)；(6) 分化诱导剂(differentiation inducing agent)；(7) 生长因子抑制剂(growth factor inhibitor)；(8) 反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 。
2. 抗肿瘤药物药效学需研究内容2.1 包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验。
2.2 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。
2.3 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。
二、体外抗肿瘤活性试验1. 试验目的1.1 对候选化合物进行初步筛选；1.2 了解候选化合物的抗瘤谱；1.3 为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等。
2. 试验方法选用10-15株人癌细胞株，根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，按常规细胞培养法进行培养；推荐使用四氮唑盐MTT还原法、XTT 还原法、磺酰罗丹明B染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。
药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时，贴壁细胞需先贴壁24 小时后再给药。
试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。
3. 评价标准以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线，然后采用Logit法计算半数有效浓度(IC50值或EC50值)。
《实验药理学》期末理论习题集
《实验药理学》理论与综合习题选一、名词解释1．对照 2.实验动物 3 ．近交系动物 4 ．SPF 动物 5 ．F1 动物6．急性毒性实验7.特殊毒性实验8. 生理盐液9. 前负荷10. 换能器二、A 型题1. 下列哪种动物便于进行胆汁引流，适用于胆汁药物浓度测定？A. 大鼠B. 小鼠C. 豚鼠D. 家兔E. 猫2. 鉴别未知药是否为阿片受体激动药，可选用以下何种标本进行实验？A. 兔离体血管条B. 豚鼠回肠纵行肌C. 大鼠膈神经－膈肌标本D. 蛙腹直肌E. 大鼠心乳头肌3. 为了得到可靠的实验结论，应选择足够的样本数。
下列有关描述错误的是A．药效强者样本数应大B．两组样本数相同时，实验效率最高C．同体实验比分组实验效率高。
D．小动物的例数应多于大动物E．变异系数大则样本数应大4. 临床疗程1－2 周的药物，长期毒性实验周期至少A. 2 个月B. 4 个月C. 半年D. 9 个月E. 1 年5．下列哪一种剂型不需做面部用药的毒性实验？A. 粘膜外用药B. 滴眼剂C. 口服片剂D. 滴鼻剂E. 腔道洗剂6. 对作用于N-型胆碱受体的药物进行药效学实验，应选用以下何种标本？A. 蛙腹直肌B. 小鼠输精管C.血管平滑肌D.支气管平滑肌E. 豚鼠回肠肌标本7．兔离体血管平滑肌实验，血管标本最好稳定多长时间？A. 15minB.30minC.10minD.5minE.60min 以上8.离体标本实验中浴槽内通入O2 的主要目的是A. 增加离体标本的O2 供应，保持其反应性B. 混匀加入的药液C.减少营养液成分的分解，维持溶液稳定性D. 以上都对E. 以上都不对三、X 型题1．下列哪一个实验属于特殊毒性实验？A. 微生物回复突变实验B. 哺乳动物培养细胞染色体畸变实验C. 致畸胎实验D. 眼刺激实验E. 致癌实验2．按统计学原理进行实验设计，可用较小的样本量获得可靠的实验结论。
下列有关描述错误的是A．两组样本数相同时，实验效率最高B．质反应指标比量反应指标效率高C．同体实验比分组实验效率高D．量反应资料的样本例数可用t 检验的逆运算来估算多少例数方能达到90％可信度E．质反应资料的样本例数可根据预实验或以往资料已知阳性率，测算达到90％可信度所需的样本数3．作用于阿片受体的药物进行生物检定，可选用以下哪些标本？.A. 蛙腹直肌B. 小鼠输精管C. 豚鼠回肠纵行肌D. 兔输精管E. 大鼠膈肌标本四、问答题1．实验设计应遵循哪些原则？2．放射性配体结合法有何实际应用价值？3．生殖毒性实验包括哪几种？4．实验动物按微生物学控制可分为哪几类？分别有何特点？5．实验动物按遗传学控制可分为哪几类？分别有何特点？6．对离体标本进行电刺激有哪几种方式？7．我国新药安全性评价中, 毒理实验基本要求包括哪四个部分?8．实验研究中设立对照的目的是什么？对照可分为哪些？9．检测下列药物：（1）α受体激动药；（2 ）M 受体激动药；（3）δ阿片受体激动药；（4 ）μ阿片受体激动药，应该分别选用何种组织器官实验标本？请简述选用理由。
Wistar大鼠30天喂养试验体重及食物利用率参考值的研究
Wistar大鼠30天喂养试验体重及食物利用率参考值的研究目的：探讨Wistar大鼠30 d喂养实验中体重及食物利用率的正常值范围。
方法：选用本实验室正常喂养的wistar大鼠200只，雌雄各半，喂养30 d。
每周称一次体重，记录摄食量、食物利用率，将数据进行统计分析。
结果：雌、雄鼠在各周龄的体重变异度不大，变异系数5.2%～10.0%；雄鼠体重增加量、摄食量及食物利用率均高于雌鼠（P＜0.01），雄鼠发育速度要快于雌鼠。
结论：本实验的结果资料与其他实验室报道的结果相近，但也有差异。
标签：Wistar大鼠；体重；食物利用率；摄食量随着社会经济的发展，人们对物质需求不断提高的同时，对食品及保健食品的安全问题也越来越重视。
根据1994年颁布的《食品安全性毒理评价程序和方法》，在了解受试物的纯度、溶解特性、稳定性等理化性质和有关毒性的初步资料后，可进行30 d或者90 d喂养实验。
而30 d喂养实验作为第二阶段毒性实验的主要内容之一，应用十分广泛[1-2]。
在毒理学安全性评价中，动物体重和食物利用率是判断受试物是否导致某项指标异常的重要指标，虽有一些正常值范围的参考标准，但由于所收集的动物来源、级别和品系、饲养环境等多种因素不同致使在实际工作中的指导意义不大，进而有必要建立本实验室的Wistar大鼠正常参考值的数据库[3-4]。
所以本文就近年来本实验室进行的10个批次的Wistar大鼠30 d喂养实验中正常对照组资料加以整理，对其体重增长、食物利用率指标进行了分析比较，建立本实验室Wistar大鼠体重和食物利用率指标的参考值范围，并为制订统一的标准参考值提供依据。
1 材料与方法1.1 实验动物SPF级Wistar大鼠，初始体重65～85 g，共200只，雌雄各半，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供，动物生产合格证SCXK（吉）2010-0001。
1.2 饲养条件清洁级实验室，温度20～22 ℃，相对湿度55%～65%。
白花丹醌对血瘀证肝纤维化大鼠
白花丹醌对血瘀证肝纤维化大鼠摘要】目的：探讨白花丹醌对实验性血瘀证肝纤维化大鼠血清学改变及证侯动态变化。
方法：将SD大鼠40只在进行腹腔注射二甲基亚硝胺、第二周大鼠尾静脉注射去甲肾上腺素及每八天大鼠尾静脉注射小牛血清白蛋白的基础上供给加入酒精的饮用水，并喂以高脂低蛋白饲料建立血瘀证肝纤维化大鼠模型，第九周处死动物，检测血清谷丙氨酸转换酶（ALT）、谷草氨基酸转换酶（AST）活性、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、总胆红素(TBIL)的含量改变及在整个实验过程中观察动物行为、体征、排便等改变。
结果：检测表明血清中ALT、AST、TBIL、HA、LN、CIV的含量及证侯变化与空白对照组存在显著性差异。
结论：实验过程中血清学改变及证侯动态变化反应了与血瘀证肝纤维化动物模型的建立成正性关系。
【关键词】血瘀证肝纤维化模型；血清学；证侯【中图分类号】R453【文献标识码】B【文章编号】1003-5028(2013)05-0013-01本实验以喂高脂低蛋白饲料、含有酒精的饮用水为主建立大鼠实验性血瘀证肝纤维化模型，通过尾静脉注射甲肾上腺素、小牛血清白蛋白为干预，探讨实验性血瘀证肝纤维化过程中不同阶段证侯及血清学变化的意义。
1实验材料及方法11实验动物：购自广西中医学院动物实验中心，SPF级SD大鼠40只(生产许可证号：SYXK桂2003-0001)，雄雌各半，体重150～180g，2月龄。
12实验试剂：二甲基亚硝胺、去甲肾上腺素、小牛血清白蛋白、酒精、生理盐水配置、蒸馏水（均由南宁恒因试剂公司提供）13主要实验仪器及试剂：752分光光度计（上海精密科学仪器厂）、IRIS IntrepidⅡ xsp型全谱直读等离子体光谱仪（美国热电公司）、BS110S电子分析天平（德国Sartorius公司）HM355S型全自动切片机（德国美康公司）、SYNCHRON Lx20全自动生化分析仪(Beck — man Coulter生产)，SN-697计数仪上海核所日环光电仪器有限公司。
恩诺沙星在人工感染溶藻弧菌的三疣梭子蟹体内的代谢动力学
余 开 ，陈寅 儿 ， 青 松 ，金 珊 ，陆彤 霞 赵
（ 波 大 学 生 命科 学 与 生 物 工 程 学 院 、 宁 宁波 大 学 应 用 海 洋 生 物 技 术 教育 部 重 点 实 验 室 ， 江 宁 波 ３５ １ ） 浙 １２ １
摘要： 用反 相 高效 液相 色谱 法 ， ｉ 了人 工 感 染溶 藻弧 菌的三 疣梭 子 蟹 口灌 恩诺 沙星 （ 药 剂量 应 ｚ￣ ｏ － 给 为 １ ｇ ｋ ） ， ０ｍ ／ ｇ 后 其血 淋 巴、 肉、 胰腺 等组 织 的 药代 动 力学规 律 ． 果表 明 ， 诺 沙星 在 感 染溶 肌 肝 结 恩 藻弧 菌的三 疣梭子 蟹体 内 ３种组 织 中的 药物 时 量 曲线 关 系均符 合 一 级吸 收 二 室模 型 ． 诺 沙 星在 恩 血淋 巴、 肉和肝 胰 腺 中的 主 要 药代 动 力 学参 数 ： 药后 出现 最 高血 药质 量 浓度 的 时 间 （ ） 肌 给 为
恩诺 沙 星 标 准 品 （ 号 为 Ｈ ０ ０ ０ ） 环 丙 沙 批 ０８８ ７ 、
星标 准 品 （ 号 为 Ｈ １ １５ 均 由 中 国兽 医药 品监 批 ００ ０ ）
５０ ０ｒｍｉ ０ ／ ｎ下离 心 １ ｉ ， ０ｒ ｎ 将上 清 液转 移 至旋 转蒸 ａ 发 瓶 中． 残 渣 中再 加 入 ５ Ｃ Ｉ乙腈 ， 复 上 述 操 往 ｌ。 Ｔ 重 作 ． 旋 转 蒸 干 后 ， 入 Ｉｃ 动相 溶 解 残 留物 ， 待 加 ｍ 流
枣仁安神胶囊对小鼠睡眠作用及其机制的实验研究
基金项目:辽宁省教育厅基金项目,项目编号:L2013332㊂ 作者简介:陈巍巍(1988),男,辽宁岫岩人,主管护师,学士学位,主要研究方向为失眠症的基础和临床研究㊂ 通讯作者:单伟(1979),男,辽宁大连人,副教授,博士学位,主要研究方向为干细胞生物学特性研究㊂枣仁安神胶囊对小鼠睡眠作用及其机制的实验研究陈巍巍1,单伟2(1.锦州医科大学附属第一医院重症医学科一病区;2.锦州医科大学基础医学院解剖学教研室,辽宁锦州121000) 摘要:目的 探讨枣仁安神胶囊对小鼠睡眠的作用及机制㊂方法 昆明雄性小鼠,随机分为54组:空白对照组㊁枣仁安神胶囊低㊁中㊁高剂量组(0.19㊁0.38㊁0.76g /kg ),康斯顿阳性组(0.45g /kg ),连续30d ,灌胃给药㊂实验开始与结束,记录体重㊂采用协同戊巴比妥钠㊁巴比妥钠睡眠实验观察其对小鼠的催眠作用;小鼠脑组织中腺苷受体采用流式细胞仪和Western Blot 检测㊂结果 枣仁安神胶囊对小鼠体重增加没有影响,能延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间,提高戊巴比妥钠阈下剂量小鼠入睡发生率,能减少巴比妥钠睡眠潜伏期㊂使小鼠脑组织中腺苷A1受体(A1receptor ,A1R )和A2A 受体(A2A receptor ,A2AR )含量增加㊂结论 枣仁安神胶囊具有催眠作用,可能与增加A1R 和A2AR 的表达有关㊂关键词:枣仁安神胶囊;催眠;失眠症;A1R ;A2AR中图分类号:R285.5 文献标志码:A 文章编号:2096-305X (2020)06-0020-05Effect of Zaoren Anshen Capsule on Sleep in Mice and Its MechanismChen Weiwei 1,Shan Wei 2(1.Ward 1,Department of Intensive Care Unit,the First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University;2.Department of Anatomy,School of Basic Medicine,Jinzhou Medical University,Jinzhou 121000China)Abstract :Objective To investigate the effect of Zaoren Anshen Capsule on the sleep in mice and its mechanism.Methods Male mice in Kunming were randomly divided into 54groups:blank control group,Zaoren Anshen Capsule groups of low,medium and high dose (0.19,0.38,0.76g /kg),and Conston positive group (0.45g /kg).The mice received intragastric administration for 30consecutive days.At the beginning and end of the experiment,their weight was recorded.The hypnotic effect on the mice was observed by the sleep experiment of synergetic pentobarbital sodium and barbiturate sodium.The adenosine receptor in brain tissue of the mice was detected by flow cytometry and Western Blot.Results Zaoren Anshen Capsule had no effect on the weight gain in the mice.It could prolong the sleep time of the mice induced by pentobarbital sodium,increase the incidence of sleep induced by sub⁃threshold dose of pentobarbital sodium,and reduce the sleep latency of barbitol sodium,which led to the increase of adenosine A1re⁃ceptor (A1R)and A2A receptor (A2AR)in brain tissue of the mice.Conclusion Zaoren Anshen Capsule has hypnotic effect,which may be related to the increased expression of A1R and A2AR.Key words :Zaoren Anshen Capsule;hypnosis;insomnia;A1R;A2AR 近年来,随着经济发展的快速增加,物质的日渐丰富,人们生活节奏也前所未有的加快㊂因此,不同程度的焦虑等神经或精神症状也日渐增多㊂报道显示,10%~15%的成年人符合失眠症临床标准[1]㊂另外,失眠症造成的间接后果性损害(如工伤㊁病假等)明显大于直接损害(如失眠症治疗所需费用等)[2]㊂因此,安全有效的镇静催眠药物一直是临床和基础研究者的研发热点之一㊂我国传统经典药物枣仁安神胶囊单独应用或者联合其他药物使用对失眠症患者㊁冠心病伴焦虑抑郁患者的临床效果较好[3-6],但对该药的相关机制研究尚少见㊂基于此,本组资料枣仁安神胶囊对小鼠镇静催眠作用和机制进行探讨,为该药的应用和机制提供理论依据,以期为失眠症治疗提供新思路㊂1 实验材料1.1 药物枣仁安神胶囊(贵州同济堂制药有限公司批号131202),阳性对照药(康斯顿广州万康保健品有限公司,20180311;巴比妥钠(EXP:20190221)㊁戊巴比妥钠(EXP:20190311),sig⁃ma 公司㊂A1R 和A2AR 抗体,cy3标记二抗㊂02锦州医科大学学报J Jinzhou Medical University2020Dec.41(6)1.2 动物昆明种小鼠,雄性,体重18~22g㊂许可证号:SCXK(辽)2010-0001㊂1.3 仪器石蜡切片机(德国莱卡LEICA-RM2135)㊁流式细胞仪(美国BD公司FACS Calibur)㊁荧光化学发光凝胶成像系统(以色列MF-ChemiBIS3.2)㊁光学显微镜(OLYMPUS,bx60日本)等㊂2 实验方法2.1 分组与给药实验分4组:空白对照组㊁枣仁安神胶囊低㊁中㊁高剂量组(0.19㊁0.38㊁0.76g/kg),康斯顿阳性组(0.45g/kg),连续30d,灌胃给药,每10 g用药0.2mL㊂实验开始与结束,记录并分析体重㊂给药30d后,取肝脏㊁肾脏,常规石蜡切片,苏木素-伊红染色(HE)㊂2.2 直接睡眠实验空白对照组给予同体积溶剂后,是否出现睡眠现象㊂睡眠以翻正反射消失为指标,当小鼠置于背卧位时,能立即翻正身位㊂如超过30~60s不能翻正者,即认为翻正反射消失,进入睡眠㊂翻正反射恢复即为动物觉醒,翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间,记录入睡动物数及睡眠时间㊂2.3 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验[7]正式实验前先进行预实验,确定使动物100%入睡,但又不使睡眠时间过长的戊巴比妥钠剂量,用此剂量正式试验㊂在末次灌胃15min后,给各组动物按90mg/kg(依据预实验结果)ip戊巴比妥钠(10mL/kg),以小鼠翻正反射消失为睡眠指标,记录睡眠时间㊂2.4 戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验确定戊巴比妥钠阈下催眠剂量40mg/kg,即80%~90%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥钠最大阈下剂量㊂用此剂量进行正式实验㊂在末次给药15min后,给各组动物按40mg/kg(依据预实验结果)ip戊巴比妥钠(10mL/kg),以小鼠翻正反射消失达1min以上作为入睡判断标准,记录30 min内各组入睡动物数和睡眠发生率㊂2.5 巴比妥钠睡眠潜伏期[8]确定使动物100%入睡,但又不使睡眠时间过长的巴比妥钠剂量230mg/kg,用此剂量正式试验㊂实验在末次灌胃15min后,给各组动物按230 mg/kg ip巴比妥钠(10mL/kg),以小鼠翻正反射消失为指标,观察睡眠潜伏期㊂2.6 流式细胞仪检测小鼠脑组织中A1R和A2AR末次给药30min后,取空白对照组㊁枣仁安神胶囊高剂量组小鼠脑组织,一半用于流式细胞仪检测,一半用于蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测㊂研磨为匀浆,用移液器反复吹散,过滤,离心,去除上清㊂按照说明书,按1∶100的比例稀释A1R和A2AR抗体,加入脑组织,洗涤,加入二抗,再次洗涤㊂上样流式细胞仪进行检测㊂Western Blot参考[9],常规裂解㊁离心㊁变性㊁转模㊁孵育,β-actin为内参㊂2.7 统计学方法数据分析使用SPSS19.0统计软件包㊂计量资料均以均数±标准差(⎺x±s)表示,F检验及两两比较的SNK检验㊂P<0.05表示差异具有统计学意义㊂3 结 果3.1 形态学检测和体重的结果枣仁安神胶囊及对照组动物在给予枣仁安神胶囊60min内,均未发生直接睡眠现象㊂给药期间小鼠腹泻㊁自主活动㊁皮毛等方面未见异常,肝脏㊁肾脏病理切片与空白组比较无异常,见图1㊂实验前,根据小鼠体重随机分组,实验结束时,各组小鼠的体重比较,差异不显著,即药物对小鼠的体重增长无影响,见表1㊂表1摇枣仁安神胶囊对小鼠体重的影响(⎺x±s)组别剂量(g/kg)n初始体重(g)实验结束时体重(g)空白对照组1220.975±1.49933.175±2.074枣仁安神胶囊组0.191221.642±1.05432.650±2.341枣仁安神胶囊组0.381221.592±1.24431.842±3.041枣仁安神胶囊组0.761221.733±1.20031.925±2.744 F值0.8660.621P值0.4900.649 注:P<0.01与空白对照组相比12陈巍巍,等:枣仁安神胶囊对小鼠睡眠作用及其机制的实验研究图1 肝脏和肾脏组织病理图(HE染色)3.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间的影响与空白对照组比较,枣仁安神胶囊高剂量组睡眠发生率明显增加,差异显著㊂枣仁安神胶囊低㊁中剂量组㊁阳性组延长睡眠时间,但无统计学差异㊂表明枣仁安神胶囊能延长戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间,见表2㊂3.3 巴比妥钠睡眠潜伏期的影响与空白对照组比较,枣仁安神胶囊高剂量组睡眠潜伏期明显减少㊂低㊁中剂量组降低睡眠潜伏期,但无统计学差异㊂表明枣仁安神胶囊能减少巴比妥钠睡眠潜伏期,见表3㊂3.4 小鼠脑组织中A1R和A2AR表达流式和Western Blot检测显示:枣仁安神胶囊高剂量组与对照组比较,A1R和A2AR表达明显22锦州医科大学学报 2020年12月,41(6)增高,见图2㊂表2 枣仁安神胶囊对戊巴比妥钠诱导小鼠体重睡眠时间的影响(⎺x±s)组别剂量(g/kg)n睡眠时间(min)空白对照组1239.97±7.40枣仁安神胶囊组0.191245.89±7.77枣仁安神胶囊组0.381249.09±8.28枣仁安神胶囊组0.761253.38±17.10* F值2.287P值0.072 注:*P<0.01与空白对照组相比表3 枣仁安神胶囊对小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期的影响(⎺x±s)组别剂量(g/kg)n睡眠潜伏时间(min)空白对照组1223.167±4.668枣仁安神胶囊组0.191221.417±7.922枣仁安神胶囊组0.381219.333±7.596枣仁安神胶囊组0.761214.183±5.488* F值3.164P值0.210 注:*P<0.05与空白对照组相比AIR/β-actin和A2AR/β-acitin 蛋拍打上对表达量A:流式细胞仪检测结果图;B㊁C:Western Blot的方法检测结果(*P<0.05与空白对照组相比)图2 脑组织A1R和A2AR蛋白的表达4 讨 论失眠症指的是由于多种原因所引起的经常性睡眠减少,或者睡而易醒,醒后无法再次入睡,或者这不容易入睡,睡眠时间缩短,甚至彻夜难眠的一种病证㊂枣仁安神胶囊由酸枣仁(炒)㊁丹参㊁五味子(醋炙)组成,功效重点在补阴㊁敛阴,即滋补肾水,收敛肝阴,调节肝肾功能,达到体内阴32陈巍巍,等:枣仁安神胶囊对小鼠睡眠作用及其机制的实验研究阳平衡,养心安神的目的,可有效治疗失眠症㊂本研究首先考察了枣仁安神胶囊对实验小鼠体重的影响㊂结果提示,受试药物对小鼠体重无影响,从体重增长角度和病理实验证实该药物对生长情况没有影响㊂给药期间,实验动物腹泻㊁自主活动㊁皮毛等方面未见异常㊂实验结果初步表明了中药枣仁安神胶囊对生长情况及器官脏器安全性㊂目前,很多报道显示枣仁安神胶囊对失眠症患者临床效果良好㊂本实验从入睡情况和睡眠时间上分别考察了枣仁安神对睡眠的影响,结果显示枣仁安神胶囊具有改善睡眠的作用㊂与临床实验结果一致[3]167-168㊂本文采用阳性药康斯顿牌改善睡眠胶囊作为对照,主要成分酸枣仁提取物㊁远志提取物㊁牡蛎粉㊁茯苓提取物㊁百合提取物㊁硬脂酸镁;保健功能:改善睡眠;适宜人群:睡眠状况不佳者㊂该药物主要成分与我们受试药物相似,都含有酸枣仁,与受试药物都属于中成药,故选作阳性药物㊂关于睡眠实验结果显示,该阳性药物在推荐剂量下对小鼠有作用趋势,无显著性差异㊂可能的原因,我们推测可能由于实验中采用的阳性药剂量对戊巴比妥钠㊁巴比妥钠干预下的睡眠作用影响不明显㊂临床研究和基础实验对于枣仁安神的药效学研究并不少见,但是对其作用机制研究尚不多见㊂本研究采用流式细胞术和Western Blot检测脑内蛋白的表达,对其改善睡眠的作用进一步探讨㊂腺苷是一种内源性的促进睡眠的物质[10]㊂据报道,在长时间的觉醒过程中,大脑特定区域中腺苷酸的分泌增加,这对增加睡眠内稳态起着非常重要的作用[11]㊂文献报道显示腺苷和稳定的腺苷类似物证明可以诱导实验动物入睡[12]㊂腺苷在生理浓度,通过膜受体结合级联调节细胞功能㊂在中枢神经系统中表达的腺苷受体有四种亚型:A1R㊁A2AR㊁A2BR和A3R㊂其中,A1R和A2AR与睡眠调节相关[13]㊂近年来,对有关腺苷与镇静催眠关系以及与腺苷和腺苷受体相关的药物研究日渐深入,研制腺苷受体相关镇静安眠药物[14-16]㊂本实验结果显示枣仁安神胶囊高剂量组脑内A1R和A2AR表达增加,提示枣仁安神胶囊可能通过提高A1R和A2AR而发挥作用㊂关于枣仁安神胶囊通过何种信号通路对腺苷受体发挥的调节作用有待进一步研究㊂综上所述,本研究通过动物实验探讨枣仁安神胶囊的催眠作用及可能机制㊂结果显示,枣仁安神胶囊无论在增加睡眠时间还是缩短入睡时间方面均具有改善作用,并且可能与提高A1R和A2AR有关㊂参考文献:[1] Zhang B,Wing YK.Sex differences in insomnia:a meta-anal⁃ysis[J].Sleep,2006,29:85-93.[2] Yang Y,Luo X,Paudel D.Effects of e-aid cognitive behav⁃ioural therapy for insomnia(eCBTI)to prevent the transitionfrom episodic insomnia to persistent insomnia:study protocol fora randomised controlled trial[J].BMJ Open,2019,9(11):e033457.[3] 张幼文.枣仁安神胶囊治疗失眠症的效果观察[J].当代医药论丛,2019,17(16):167-168.[4] 严文琼,刘治,李永珍,等.枣仁安神胶囊联合艾司唑仑治疗失眠症的效果[J].中国当代医药,2018,25(36):79-82.[5] 亓国锋,李刚刚,李予春.枣仁安神胶囊对冠心病伴焦虑抑郁患者疗效及血清5-HT㊁MPO水平的影响[J].中华中医药学刊,2018,36(3):681-684.[6] 张娟.枣仁安神胶囊和艾司唑仑治疗失眠症患者的临床效果[J].医疗装备,2016,29(13):113.[7] 王春梅,孙卉,刘歌明,等.复方北五味子促睡眠口服液镇静催眠作用及机制研究[J].北华大学学报(自然科学版),2016,17(1):43-46.[8] 白丽婷,王莹,高卓林,等.五味子酸枣仁软胶囊改善动物睡眠功能的研究[J].特产研究,2019,41(3):44-47,96.[9] 关云霞,张秋华,王丹,等.豆茶决明冲剂对高脂饮食诱导的肥胖C57BL/6J小鼠的相关炎症因子及炎症通路的影响[J].中国现代医生,2019,57(7):33-38. 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非奈利酮通过抑制小胶质细胞炎症反应减轻大鼠糖尿病视网膜病变
非奈利酮通过抑制小胶质细胞炎症反应减轻大鼠糖尿病视网膜病变*周婧1，韩梅2△（1天津医科大学眼科临床学院，天津 300278；2天津市眼科医院，天津 300020）［摘要］目的：探究非奈利酮（finerenone， FIN）对糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy， DR）大鼠的治疗作用及其可能的作用机制。
方法：（1）取30只清洁级雄性SD大鼠，随机选取10只作为对照（control）组，其余大鼠构建DR模型，建模成功后随机分为DR组和DR+FIN组，每组10只。
DR+FIN组大鼠每天灌胃给予10 mg/kg的FIN，DR组大鼠灌胃给予等体积的生理盐水，连续干预3个月。
采用双免疫荧光细胞化学法检测视网膜深层小胶质细胞的激活情况；采用CellF系统分析视网膜周细胞和无细胞型毛细血管（acellular capillaries， AC）数量；使用多焦视网膜成像系统检测大鼠神经视网膜功能；采用RT-qPCR和Western blot法检测各组大鼠视网膜组织中相关因子的mRNA和蛋白表达水平。
（2）体外培养HAPI大鼠小胶质细胞，并随机分为正常葡萄糖（normal glucose， NG）组、高葡萄糖（high glucose， HG）组和HG+FIN组。
NG组细胞在NG培养液（含1 g/L葡萄糖）中培养，HG组细胞在HG培养液（含4.5 g/L葡萄糖）中培养，HG+FIN组细胞在HG培养液中培养24 h后使用10 mmol/L的FIN处理。
采用划痕实验检测各组细胞迁移能力。
结果：（1）与control组比较，DR组大鼠视网膜周细胞数量显著减少（P<0.05），a波和b波振幅均显著降低（P<0.05），AC数量和深血管层的离子钙结合衔接分子1（ionized calcium-binding adaptor molecule 1， Iba1）表达显著增加（P<0.05），空腹血糖（fasting blood glucose， FBG）水平显著升高（P<0.05），视网膜组织中白细胞介素1β（interleukin-1β， IL-1β）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、IL-8、血管细胞黏附分子1（vas‑cular cell adhesion molecule 1， Vcam1）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1， TGF-β1）、C-C基序趋化因子配体2（C-C motif chemokine ligand 2， Ccl-2）和盐皮质激素受体（mineralocorticoid receptor， MR）表达水平均显著升高（P<0.05）；与DR组比较，DR+FIN组大鼠视网膜周细胞数量显著增加（P<0.05），a波和b波振幅均显著升高（P<0.05），AC数量和深血管层的Iba1表达均显著减少（P<0.05），FBG水平显著降低（P<0.05），视网膜组织中IL-1β、TNF-α、IL-8、Vcam1、TGF-β1、Ccl-2和MR表达水平均显著降低（P<0.05）。
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七、实验动物用药量的确定及计算方法（—）动物给药量的确定在观察一个药物的作用时,应该给动物多在的剂量是实验开始时应确定的一个重要问题0剂量太小，作用不明显，剂量太大，又可能引起动物中毒致死，可以按下述方法确定剂量：1 •先用小鼠粗略地探索中毒剂量或致死剂量，然后用小于中毒量的剂量，或取致死量的若干分之一为应用剂量，一般可取1/10-1/5。
2 •植物药粗制剂的剂量多按生药折算。
3 •化学药品可参考化学结构相似的已知药物，特别是化学结构和作用都相似的药物的剂量。
4 •确定剂量后，如第一次实验的作用不明显，动物也没有中毒的表现（体重下降、精神不振、活动减少或其他症状），可以加大剂量再次实验。
如岀现中毒现象，作用也明显，则应降低剂量再次实验。
在一般情况下，在适宜的剂量范围内，药物的作用常随剂量的加大而增强。
所以有条件时，最好同时用几个剂量作实验，以便迅速获得关于药物作用的较完整的资料。
如实验结果岀现剂量与作用强度之间毫无规律时，则更应慎重分析。
5 •用大动物进行实验时，开始的剂量可采用给鼠类剂量的十五分之一〜二分之一，以后可根据动物的反应调整剂量。
6 •确定动物给药剂量时，要考虑给药动物的年龄大小和体质强弱。
一般说确定的给药剂量是指成年动物的，如是幼小动物，剂量应减少。
如以狗为例：6个月以上的狗给药量为1份时，3-6个月的给1/2份，45-89日1/4份，20-44日的给1/8份，10-19日的给1/16份。
7 •确定动物给药剂量时，要考虑因给药途径不同，所用剂量也不同，以口服量为100时，灌肠量应为100-200，皮下注射量30-50，肌肉注射量为25-30，静脉注射量为25。
（二）实验动物用药量的计算方法动物实验所用的药物剂量，一般按mg/kg体重或g/kg体重计算，应用时须从已知药液的浓度换算岀相当于每kg体重应注射的药液量（ml数），以便给药。
例1:计算给体重1.8kg的家兔，静脉注射20%氨基甲酸乙酯溶液麻醉，按每kg体重1g的剂量注射，应注射多少ml ?计算方法：兔每kg体重需注射1g，注射液为20 %，则氨基甲酸乙酯溶液的注射量应为5ml/kg 体重，现在兔体重为1.8kg，应注射20%氨基甲酸乙酯溶液用量=5X1.8=9ml。
例2:计算给体重23g的小白鼠，注射盐酸吗啡15mg/kg重，溶液浓度为0.1%，应注射多少m l ？计算方法：小白鼠每kg体重需吗啡的量为15mg，贝9 0.1%盐酸吗啡溶液的注射量应为15ml/kg 体重，现小白鼠体重为23g，应注射0.1%盐酸吗啡溶液的用量=15X0.023=0.345ml。
（三）人与动物及各类动物间药物剂量的换算方法1 •人与动物用药量换算人与动物对同一药物的耐受性是相差很大的。
一般说来，动物的耐受性要比人大，也就是单位体重的用药理动物比人要大。
人的各不申药物的用量在很多书上可以查得，但动物用药量可查的书较少，而且动物用的药物种类远不如人用的那么多。
因此，必须将人的用药量换算成动物的用药量。
一般可按下列比例换算：人用药量为1，小白鼠、大白鼠为25-50，兔、豚鼠为15-20，狗、猫为5-10。
此外，可以采用人与动物的体表面积计算法来换算:（1）人体体表面积计算法计算我国人的体表面积，一般认为许文生氏公式（中国生理学杂志12:327,1937 ）尚较适用，即:体表面积（m2）=0.0061 X身高（cm）+0.0128 X体重（kg）-0.1529例：某人身高168cm，体重55kg，试计算其体表面积。
解：0.061 X168+0.0128 X 55.0.1529=1.576m2（2 ）动物的体表面积计算法有许多种，在需要由体重推算体表面积时，一般认为Meeh-Rubner氏公式尚较适用，即：体无且口计n）2/3AC体衣而虫，klm。
计鸽:>=K K--------- ]QQQ° ---------式中的K为一常数，随动物种类而不同：小白鼠和大白鼠9.1、豚鼠9.8、家兔10.1、猫9.8、狗11.2、猴11.8、人10.6（上列K值各家报导略有岀入）。
应当指岀，这样计算岀来的表面积还是一种粗略的估计值，不一定完全符合于每个动物的实测数值。
例：试计算体重1.50kg家兔的体表面积。
15Q0：^侧2°宀ICWGlog A 二lOglOJ + ；lOglSOO - lOglOCOO = I□2 .人及不同种类动物之间药物剂量的换算（1）直接计算法即按:例：某利尿药大白鼠灌给药时的剂量为250mg/kg，试粗略估计狗灌胃给药时可以试用的剂量。
解：实验用大白鼠的体重一般在200g左右，其体表面积（A）为:2/3A s a T x . = o 0311m'* 10QQO 1250mg/kg的剂量如改以mg/m2表示，即为:250 x 0<20.C3U实验用狗的体重一般在10kg左右，其体表面积（A）为:100002J 3A = Il.ZX = tl. 5193in10000于是J輕彳器坦8 k伽呂/昨（狗的适当试用剂址》（2 ）按mg/kg折算mg/m2转换因子计算例：同上解：按剤瑟cmgxkg ）址甲动舸柚仏| 了- ▼'—乙动物转彩浦子 一计算岀狗的适当试用剂量。
mg/kg 的相应转移因子可由表11-3查得。
（即为按mg/m2计算的剂量）。
（3）按每kg 体重占有体重表面积相对比值计算各种动物的 每kg 体重占有体表面积相对比值（简称体表面积比例比值） "见表11-3。
（4）按人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表计算见表11-4，12kg 狗的体表面积为200g 大白鼠的17.8倍。
该药大白鼠的剂量为 250mg/kg ，200g 的大白鼠需给药250 X0.2=50mg 。
于是（狗的适当试用剂量）。
表11-3进行不同种类动物间剂量换算时的常用数据全屏显示 表格动物 种类Meeh-Rubner 公式的K 值体重（kg ）体表面积（m 2） Mg/kg-mg/m 2转移因子每kg 体重占有体面积相对比值小白鼠9.10.0180.0066 2.9粗略值30.020.0067 3.0 1.00.0220.00713.1(0.02kg)0.024 0.0076 3.2大白鼠 9.10.10 0.0196 5.125«x fr （大口鼠的转善阿子亠治咋19「旳的转內囤子）（狗的休表而积比值》颐厂跖陀/叱120.15 0.20 0.250.02570.03110.07615.86.46.9粗略值60.47(0.20kg)豚鼠9.80.3010.0439 6.80.400.05325粗略值80.400.500.06178.1(0.40kg)0.600.06978.6家兔10.1 1.500.132311.30.242.000.160812.4粗略值12(2.0kg)2.500.186013.4猫9.0 2.000.157112.70.222.500.132413.7粗略值14(2.5kg)3.000.205914.6狗11.2 5.000.327515.30.1610.000.519919.2粗略值19(10.0kg)15.000.681222.0猴11.8 2.000.187810.70.243.000.245512.2粗略值12(3.0kg)4.000.297313.5人10.640.00 1.239832.20.0850.00 1.438634.8粗略值35(50.0kg)60.00 1.624636.9表11-4 人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表全屏显示表格小白鼠(20g)大白鼠(200g)豚鼠(400g)家兔(1.5kg)猫(2.0kg)猴(4.0kg)狗(12kg)人(70kg)小白鼠(20g) 1.07.012.2527.829.764.1124.2378.9大白鼠(200g)0.141.01.74 3.9 4.29.217.856.0豚鼠(400g)0.080.57 1.0 2.25 2.4 5.2 4.231.5家兔(1.5kg)0.040.250.44 1.0 1.08 2.4 4.514.2猫(2.0kg)0.030.230.410.92 1.0 2.2 4.113.0猴(4.0kg)0.0160.110.190.420.45 1.0 1.9 6.1狗(12kg)0.0080.060.100.220.230.52 1.08.1人(70kg)0.00260.0180.0310.070.0780.160.82 1.0(5) 按人与各种动物以及各种动物之间用药剂量换算已知A种动物每kg体重用药量，欲估算B种动物每kg体重用药剂量时，可先查第422页表11 -5,找岀折算系数(W)，再按下式计算：B种动物的剂量(mg/kg)=W x A种动物的剂量(mg/kg)例如，已知某药对小鼠的最大耐受量为20mg/kg (20g小鼠用0.4mg )，需折算为家兔量。
查A 种动物为小鼠，B种动物为兔，交叉点为折算系数W=0.37，故家兔用药量为0.37左0mg/kg=7.4mg/kg，1.5kg家兔用药量为11.1mg。
表11-5动物与人体的每公斤体重剂量折算系数表全屏显示表格A组动物或成人折算系数W。