非洲猪瘟病毒ASFV基因组主要编码蛋白ppt课件
猪瘟病毒PPT课件

二、非洲猪瘟
(African swine fever,ASF)
• 由非洲猪瘟病毒引起的猪的急性烈性传染病。 • 主要特征:高热、皮肤发绀、全身内脏器官广泛出血、呼吸障
碍和神经症状。 • 临诊上非洲猪瘟与猪的很多出血性疾病相似,尤其与猪瘟很难
区分。
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病原
• 非 洲 猪 瘟 病 毒 (ASFV) 属 非 洲 猪 瘟 病 毒 科
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急性型病猪临床症状
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急性型病猪-皮肤出血斑
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• 2.慢性型猪瘟 • 早期有食欲不振、精神委顿、体温升高和白
细胞减少等临诊症状。 • 后期病猪重现食欲不振、精神委顿临诊症状,
体温再次升高,直至临死前不久才下降。 • 慢性猪瘟的突出表现:病情时轻时重,食欲
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PRRS病猪产死胎、木乃伊胎
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PRRS病猪产头部呈水牛样头
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组织学变化
• 鼻黏膜上皮细胞变性,纤毛上皮消失。 • 支气管上皮细胞变性。 • 肺泡壁增厚,膈有巨噬细胞和淋巴细胞浸润。 • 动脉周围淋巴鞘的淋巴细胞减少,细胞核破裂和空
泡化。接毒后60h可见单个肝细胞变性和坏死。 • 母猪可见脑内灶性血管炎,脑髓质可见单核淋巴细
病原
• PRRSV属于动脉炎病毒科(Arteriviridae) 动脉炎病毒属(Arterivirus) 。
• 有囊膜,单股正链RNA,病毒粒子呈卵圆形, 直径50~65nm。
• -70℃可保存18个月,4℃保存1个月;37℃ 48h,56℃45min完全失去感染力。
• pH依赖性强,在pH6.5~7.5间相对稳定,高 于7或低于5时,感染力很快消失。
2018-11-16--ASFV培训课件

3.3样品处理
组织样本 用磷酸盐缓冲液制备成 10%(w/v) 的均质组织悬液 分别从组织的三个不同位置取样,手术剪剪取样品约0.2~0.5g,加入含有1mL无菌PBS (0.01mol/L,pH7.2~7.4)的离心管中(已添加灭菌钢珠),使用高通量组织研磨仪进行研 磨处理(70Hz,120s); 组织样品的处理需在二级生物安全柜中进行; 勿使液体溅到生物安全柜中。如不慎溅出,立即 使用2%NaOH喷洒覆盖溅出处一段时间消除污染
• pH 4~11.5 无血清 4~13.4 有血清
未熟肉品、腌肉、泔水中可长期存活
乙醚、氯仿等脂溶剂可破坏囊膜使其失活
在污染的猪圈中,1个月保持感染性 带血木板中可存活70d 在腐败的血中可存活15周 4℃条件下,感染猪血液中病毒感染力可以稳定保持18个月以上 骨髓和未煮熟的香肠、肉片和干火腿中存活3~6个月 冷冻病死猪尸体中15年保持存活
3.3样品处理
饲料样本 处理方法与组织样本相同。
全血(抗凝血)或血清 直接吸取,无需进行处理。
拭子 含液体拭子:直接吸取,无需进行处理。 无液体拭子:添加PBS液,浸泡20min,捻干拭子,即可。
3.4 样品灭活
60 ℃作用30min可彻底灭活病毒。
3.5 核酸提取
核酸提取方法选择: 抽提法-步骤繁琐、成本低 柱式提取-方便操作、成本高 自动提取-方便、自动
反应体系和循环条件:
PCR步骤
激活Taq酶
温度
95℃
时间
30s
循环次数
1ห้องสมุดไป่ตู้
DNA变性
95℃
5s
引物退火/延 伸
60℃
30s
非洲猪瘟流行病学ppt课件

—被污染的饲料、泔水、栏舍、车辆、器具和
衣物也能够使健康猪感染; —感染的猪肉和肉制品是ASFV重要的传染源; —野猪和软蜱是ASFV的储存宿主。
流行病学
传染源-我国钝缘蜱的分布
28个省存在117个种的蜱,其中软蜱包括锐缘蜱属7个种,钝缘
蜱属2个种(特突钝缘蜱(O. tartakovskyi)和乳突钝缘蜱(O.
二、流行病学
特点一宿主:家猪、野猪、软蜱
非洲的野猪: 疣猪(Warthogs) 丛林猪(Bush pigs) 大森林猪(Giant forest hogs)
欧洲的野猪:
野猪(Wild pigs)
欧洲野公猪
流行病学 传染源
—发病猪和带毒猪是ASFV的主要传染源, 发病
猪组织和体液中含有高滴度的病毒;
流行病学 易感动物
—猪与野猪对ASFV自然易感,各品种及个不同年龄的猪
群同样是易感的。
—野猪可自然感染ASFV,非洲猪瘟的自然宿主为非洲的 野猪,尤其是疣猪(phacochoerus africanus)、薮猪 (Potamochoerus porcus)、巨林猪(Giant Forest hog, Hylochoerus meinertzhangeni),而广泛分布于
一、病原学
非洲猪瘟病毒科中唯一成员 ASFV只有1个血清型,是唯一一种节肢动物——蜱作为传播媒介
的核酸为DNA病毒。
一、病原学
ASFV是一种在胞浆内复制的有囊膜的双股DNA病
毒,分类上属非洲猪瘟病毒科
(Asfarviridae),非洲猪瘟病毒属
(Asfivirus)成员,而且是其中的唯一成员。
概述
2007年 东欧——格鲁吉亚、亚美尼亚、俄罗斯
非洲猪瘟(ASF)

• DIF诊断亚急性和慢性ASF时只有40%敏感性,是由感染 组织中抗原抗体复合物阻断ASFV抗原与标记的抗ASFV免 疫球蛋白的结合引起的
• 血细胞吸附实验是指红细胞能吸附在体外培养的 感染ASFV的巨嗜细胞膜表面
• 在ASFV诱导的细胞病变出现前,红细胞能在巨嗜 细胞周围形成典型的玫瑰花环 • ASFV-DNA检测:PCR技术 • 抗体检测:感染ASFV后的6-8天能从血液中检测 到特异性的免疫球蛋白G,IFA、ELISA和免疫印 迹技术(IB)最常用
• 自然感染的潜伏期从4天到19天不等,实验室感 染潜伏期较短,一般2-5天
耳、背部严重瘀血
病猪精神沉郁,皮肤发绀,腹泻,粪便带血
鼻孔出血
发病机理
• 一般情况下,ASFV在家猪经口或鼻腔传播
• 也可通过蜱叮咬、皮肤划痕和注射感染ASFV • ASFV的感染从扁桃体和下颌淋巴结的单核巨嗜细 胞开始,随淋巴液和血液达到靶器官 • 感染ASFV后6-8天开始出现病毒血症,病毒血症 将存在很长时间
非洲猪瘟(ASF)
病原学
• ASFV基因组为双股、线形DNA分子,大小为 170-190kb • 在细胞中病毒粒子至少有28种结构蛋白和100种 以上的病毒诱导蛋白 • P73、P54、P30和P12有很好的抗原性
• ASFV主要在感染猪的单核巨嗜细胞中复制,未见 ASFV感染淋巴细胞 • ASFV能在软蜱中复制,ASFV能适应大量稳定的 细胞系,如VERO、MS和CV细胞
• ASF大体病变出现于脾、淋巴结、肾和心脏
• 脾脏呈红黑色,肿大,梗死,变脆 • 淋巴结水肿,出血,变脆,有时像黑红色的血肿, 切面呈现大理石样外观 • 肾脏皮质切面有点状出血,肾盂切面呈点状出血
• 心内膜或心外膜有出血点或出血斑
畜牧兽医专业《动物微生物学》PPT课件 非洲猪瘟病毒科

侵入细胞过程
• 在细胞核内转录、复制、核内装配 • 通过细胞裂解释放 • 腺病毒通过其纤突球部与敏感细胞膜上的特 异性受体结合后,即开始了感染过程 • 结合后的病毒,或依靠细胞的吞饮作用,或 直接侵入细胞
• 进入细胞浆内的病毒立即脱衣壳,五邻粒发 生解离,进而降低了衣壳的稳定性,其它六 邻粒及其相关蛋白也发生分离。 • 裸露的病毒核心体通过核膜上的空隙进入核 内,或释放出DNA进入核内,这个过程可在1 ~2个小时内完成。
减蛋综合症畸形蛋
• (2)人工感染1日龄雏鸡,到7日龄前后出现 精神萎顿和腹泻,并有少数幼雏鸡发生死亡
• 4、病毒培养 • (1)在鸭胚和鹅胚上复制的滴度高于鸡胚 • (2)能在鸭及鹅胚的肾细胞、肝细胞、成纤 维细胞上复制,并产生CPE(细胞肿胀、变圆 聚集成葡萄串状)。
• 5、生物特性 • (1)能凝集鸡及其他禽类的红细胞; (2)对热、酸和外界环境抵抗力较强。 • 6、诊断 • (1)病毒分离:病料采集和处理;鸭胚接种 • (2)病毒鉴定:血凝和血凝抑制试验。
• 2、腺病毒没有囊膜,核衣壳的直径为70~ 80nm,呈二十面体立体对称。 • 内为线状的双股DNA。 • DNA被包于蛋白外壳即衣壳内。 • 衣壳由252个壳粒组成,其中240个是六邻粒 构成二十面体的20个面以及棱的大部分。
• 3、纤突直径为2nm,长约10~31nm——随 腺病毒型而不同。 • 纤突顶端为一个4nm直径的球形物,这是病 毒感染细胞时结合于细胞受体的部分。 • 血凝素也在球部,可凝集大白鼠、恒河猴或禽 类红细胞,为型特异性抗原所在部位。
腺病毒科
一、分类
• 哺乳动物腺病毒属 • 禽类腺病毒属
二、一般特性
• • • • 各种动物的腺病毒形态基本相同 衣壳结构清晰 易在电子显微镜下仔细观察 在感染细胞核内的病毒粒子经常排列成结晶 状。 • 腺病毒的核酸和蛋白质又易分离提取,故是 目前动物病毒中在形态和化学结构上研究得 最为详细的病毒之一。
非洲猪瘟ASFPPT课件

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2019/4/21
• 急性病例的出血机理是病毒在血管内皮细胞中复 制,使内皮ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ胞的吞噬活性加强引起的
• 亚急性病例的出血机理是血管的通透性引起的 • 急性病例中淋巴细胞减少的机理与淋巴器官的T淋 巴细胞凋亡有关 • 急性和亚急性病例后期可引起肺水肿,是肺血管 内巨嗜细胞随后作用的结果,肺水肿是病猪死亡 的主要原因
• DIF诊断亚急性和慢性ASF时只有40%敏感性,是由感染组 织中抗原抗体复合物阻断ASFV抗原与标记的抗ASFV免疫球 蛋白的结合引起的
• 血细胞吸附实验是指红细胞能吸附在体外培养的 感染ASFV的巨嗜细胞膜表面
• 在ASFV诱导的细胞病变出现前,红细胞能在巨嗜 细胞周围形成典型的玫瑰花环 • ASFV-DNA检测:PCR技术 • 抗体检测:感染ASFV后的6-8天能从血液中检测到 特异性的免疫球蛋白G,IFA、ELISA和免疫印迹技 术(IB)最常用
• 自然感染的潜伏期从4天到19天不等,实验室感染 潜伏期较短,一般2-5天
耳、背部严重瘀血
病猪精神沉郁,皮肤发绀,腹泻,粪便带血
鼻孔出血
发病机理
• 一般情况下,ASFV在家猪经口或鼻腔传播
• 也可通过蜱叮咬、皮肤划痕和注射感染ASFV • ASFV的感染从扁桃体和下颌淋巴结的单核巨嗜细 胞开始,随淋巴液和血液达到靶器官 • 感染ASFV后6-8天开始出现病毒血症,病毒血症将 存在很长时间
• ASFV能抵抗温度和酸性pH等环境因素的改变,能 从室温放置18个月的血液和血清中分离到病毒 • ASFV能在冰冻或未煮熟的肉中存活几周或几个月
• 病毒经60℃30分钟可被灭活 • 许多脂溶剂能使ASFV灭活
非洲猪瘟防控知识ppt课件.ppt

非洲猪瘟防控知识ppt课件.ppt1、非洲猪瘟防控学问主要内容01.非洲猪瘟病原02·起源和危害03·传播路径和途径04·国内外疫情05·猪源血粉传播分析一、非洲猪瘟病原非洲猪瘟〔AfricanSwineFever,ASF〕是由非洲猪瘟病毒感染引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病,可影响全部年龄的猪,主要引起出血热。
是世界动物卫生组织〔OIE〕法定报告的动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。
是我国重点防范的外来动物疫病之一,不是人畜共患病,只感染猪和钝缘软蜱,是家猪、疣猪、欧洲野猪和美洲野猪的一种传染性极强的出血性疾病。
〔一〕非洲猪瘟的生物学特点非洲猪瘟病毒科〔Asfarviridae〕非洲猪瘟病毒属〔Asfarvirus〕的唯一成员2、兼具虹彩病毒和痘病毒的某些特性–唯一核酸为DNA的虫媒病毒–23个基因型9个血清型特点之一:基因组大而冗杂蓝耳病病毒15kb12倍猪瘟病毒12kb15倍口蹄疫病毒8kb24倍特点之二:基因多变基因型多达23个基因组两端各有一个高变区特点之三:对环境抵抗力较强非洲猪瘟病毒〔ASFV〕口蹄疫病毒〔FMDV〕☆56℃70分钟,60℃20分钟灭活56℃30分钟灭活☆25-37℃数周22℃时存活8~10周;37℃时存活10天☆4℃1年4℃可存活1年☆pH:无血清4-11.5,有血清4—13.4☆pH低于6或高于9时很快失活☆粪便中至少存活11d,在环境中存活数天在干粪中病毒可存活14天,在粪浆中可存活63、个月,在尿水中存活39天在地外表,夏季存活3天,冬季存活28天☆在死亡野猪尸体中可以存活长达1年室温放置15周的腐败血清☆4℃保存肉150天,骨髓188天,血液18个月至6年;冷藏〔4℃〕胴体产酸能在3天内杀死病毒☆冷冻〔-20℃〕肉中可存活数年冷冻〔-20℃〕在脾、肺、肾、肠内至少存活210天☆未熟肉品、腌肉、泔水中可长时间存活在腌制干火腿中可存活5个月在未经烧煮或高温烟熏的火腿和香肠中能存活3-6个月食盐对其无杀灭作用,在腌肉中可以存活,但受PH值影响,肉品自然发酵产生乳酸PH下降到5.3-5.7时就将其杀灭〔二〕非洲猪瘟流行病学特点特点之一:宿主涉及家猪、野猪和软蜱1、贮存宿主:〔1〕非洲的野猪4、:疣猪、丛林猪、大森林猪〔2〕钝缘〔软〕蜱〔3〕疫区的其他吸血昆虫,如血虱、蚊子和苍蝇等2、终末宿主:〔1〕欧洲的野猪:野猪〔2〕美洲的野猪:后颈野猪、白唇野猪等〔3〕家猪:即猪科猪属家猪种的成员 A.家养猪/SusscrofadomesticusB.欧洲野猪/SusscrofaferusC.非洲灌丛野猪/PotamochoerusporcusD.疣猪/PotamochoerusporcusE.巨型森林猪/HylochoerusmeinertzhageniF.钝缘软蜱〔雄性和雌性〕特点之二:感染途径和传播方式多种多样传播方式:直接接触传播、间接接触传播和媒介蜱传播3种方式直接接触--亲密接触间接接触--5、污染物媒介传播--软蜱等叮咬感染途径:消化道呼吸道血液非洲猪瘟病毒的循环模式ASFV主要定值循环:森林〔丛林〕传播循环、家猪(家猪-家猪)循环、野猪循环〔野猪-野猪〕、野家循环〔野猪-家猪〕、蜱-猪循环森林〔丛林〕传播循环在非洲,软蜱感染ASFV后通过叮咬传染给野猪,野猪感染后不表现临床症状但可以形成病毒血症并持续2-3周,未感染ASFV的软蜱通过叮咬获得病毒,病毒可长期在软蜱体内存活和繁殖,通过叮咬再感染其它野猪,从而形成“野猪-软蜱-野猪”之间的循环,称为“森林循环”,ASFV通过森林循环可长期存在于自然界中。
非洲猪瘟下的生物安全ppt课件

病猪倒地抽搐
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病猪不愿运动、扎堆
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18
剖检病理变化
• 皮肤发绀,皮下有出血点,血液凝固不良; • 病死猪脾脏肿大,大小约为正常脾脏的4-5倍,呈紫褐色 • 肺部支气管有大量淡黄色渗出液 • 腹腔大量积液呈血红色 • 肾脏肿大,肾乳头肿大,见淡黄色胶冻样渗出 • 肠系膜淋巴结\下颌淋巴结肿胀、出血 • 腹股沟淋巴结肿大、出血,呈紫褐色 • 淋巴结切面潮红,指压时有血液渗出
不得进入生产区;
• 来访人员离开后立即进行生活区消毒;
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外部生物安全--人
• 人员安全流程 • 1、所有人员进入进入消毒间:洗澡--更衣--消毒
(10分钟) • 所有衣服、鞋子及其他个人用品严禁进入厂内。 • 进入办公区穿工作服。 • 进入生产区员工要隔离--洗澡--更衣--消毒
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入场人员消毒间
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合作伙伴与散养户生物安全
合作伙伴
添加标题
散养户
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合作伙伴生物安全
1 店面 2 饲料库房 3 送料车
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合作伙伴店面生物安全
• 1:店面门口设立消毒地毯(>1.6m*同门 宽);洗手池
• 2:店面每天早晚消毒液拖地面 • 3:每天消毒1--2次 • 4:安装紫外线灯(有条件)夜晚消毒
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合作伙伴店面生物安全
• 能在多种饲料原料中存活超过30天,并且 能够通过饲料传染给猪
• 在自然环境中同样能够存活
6
非洲猪瘟病毒
有效消毒剂
2%~3%次氯酸钠 3%--5%戊二醛
1%~2%氢氧化钠 3%邻苯基酚
卫可(过硫酸氢钾)
用途
饮用水、污水
车辆用具
猪舍、场地、 车辆
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4. p49 (B438L)1317nt,438aa 非结构蛋白p49也是病毒衣壳的组成成分之一,p49的缺
4
主要编码蛋白
5. p72 (B646L)1941nt,646aa p72蛋白是非洲猪瘟病毒的主要结构蛋白,也是组成病毒 粒子20面 体衣壳的主要部分,也称为VP72/p73蛋白。通常产生于病 毒感染的 后期,约占非洲猪瘟病毒粒子总蛋白的32%。有研究表明, 不同来 源的ASFV毒株的p72蛋白所具有的抗原决定簇都相当保守, 具有的
非洲猪瘟的分子病毒学
1
外 p12 (O61R) 囊 p24 膜 CD2v (EP402R)
病 毒 衣 壳
p12 (O61R) p150 p17 ( D117L ) p14(E120R) 内 p37 p22 p49 (B438L) 囊 p34 p54 ( E183L ) p72 (B646L) 膜 p14 pE248R (E248R) 核 p5 pH108R 壳 p35 pE199L p15 p8
7
主要编码蛋白
9.p32(CP204L)615nt,204aa p32蛋白分子量约为30ku。在病毒感染早期表达,能够引 起机体 产生免疫反应,因此该蛋白具有比较好的抗原性。研究 表明,针 对p32蛋白的抗体能够抑制病毒内化,说明p32蛋白也参 与病毒进 入细胞的过程。
8
6
主要编码蛋白
7.p17(D117L)354nt,117aa 若缺失p17,组装后的病毒将变得不稳定,失去感染作用。 蛋白 p17同时还具有抑制蛋白水解的作用,使多聚蛋白pp220 和pp62不 能进一步水解。
8. pE248R (E248R)747nt,248aa 位于成熟病毒粒子内囊膜的pE248R蛋白在病毒感染细胞
RNA修饰酶
与DNA结合的主要结构蛋白 碱基切除修复
2
p10 pA104R
DNA pol X DNA ligase AP endonuclease
主要编码蛋白
1. p12 (O61R)186nt,61aa 病毒蛋白 p12位于外囊膜上,也是内囊膜的组成成分之 一。在病 毒侵染细胞时,可吸附细胞膜,使病毒进入细胞内。
5
主要编码蛋白
6. p54(E183L)552nt,183aa p54蛋白同样是非洲猪瘟病毒的重要结构蛋白,蛋白分 子中含有 一段跨膜区域,主要集中于衍生的内质网膜处。p54蛋 白的跨膜 结构区域对病毒蛋白经过内质网膜转化成病毒囊膜前体 的过程十 分重要。p54蛋白与细胞质动力蛋白DLC8可发生特殊的 交叉反应
RP1 RP2 RP3 RP5 RP6 RP7
pp220 (CP2475L)
pp62 (C9530R)
Protease (S273R)
DNA
RNA聚合酶亚基 pQ706L pB962L
类 核
pD1133L pG1340L
转录因子
Poly(A) pol Capping enzyme Methyltransferase
2.CD2v(EP402R)1209nt,402aa CD2v蛋白位于病毒粒子的外囊膜上,由信号肤序列和一 个跨膜区组成,因为它拥有两个免疫球蛋白样的结构域, 其氨基酸序列与CD2分子非常相似,可以与猪红细胞表面 的CD2受体发生特异性结合,因此ASFV可以吸附在猪的
3
主要编码蛋白
3. p14 (E120R)363nt,120aa p14蛋白在细胞内表达的分子量大小不均一,为12-25ku, 体外试 验表明该蛋白有着与DNA结合的特性,同时也能和p72 蛋白相互 作用并结合,共同组成衣壳。