石蜡切片法
石蜡切片的主要步骤
石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。
1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。
固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。
处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。
2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。
首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。
然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。
在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。
3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。
首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。
然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。
接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。
在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。
4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。
首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。
然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。
在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。
5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。
首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。
然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。
在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。
6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。
首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。
然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。
接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。
7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。
实验六 石蜡切片法1
四、实验结果
包埋后的石蜡快应为均匀的半透明状，蜡块中没有 气泡。
包埋材料摆放的位置是否符合要求？
修块效果：每个蜡边与材料平行，蜡边的上下左右摇 平行。
切片效果：得到厚薄均匀的蜡带，蜡带无破损。 展片效果：展片后蜡带或蜡片平整，无气泡、粘附牢 固，蜡带略呈透明状，后续制片不易脱落。
五、作业
实验完毕，每人交包埋块一个，在纸盒上写
上材料名称及自己的姓名和日期；
实验完毕，每人交玻片两张，用铅笔在载玻
片上写上材料名称及自己的姓名和日期；
实验报告（姓名和日期）。
苦味酸液（波茵氏液）
甲液： 1％铬酸 10％醋酸 乙液： 甲醛 苦味酸饱和水溶液 50ml 20ml 25ml 75ml
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
实验六 石蜡切片法
—— 包埋、切片和贴片
石蜡切片法
石蜡切片法是显微制片技术中最常用的一种方法，除了
藻类、菌类、木材和骨骼外一般的材料均可以使用，既 可制成较薄的切片，使材料各部分都清晰可见，同时也
可制成连续切片，观察材料的动态发生及层次，所以，
它在显微制片技术中占有非常重要的地位，必须掌握， 同时也是进行透射电镜观察超薄切片的基础。
石蜡切片法的原理及应用
石蜡切片法的原理及应用1. 石蜡切片法的原理•石蜡切片法，也称为石蜡切片技术，是一种常用于生物组织切片和植物切片的方法。
它是将生物样本或植物材料浸泡在石蜡中，并使用切片机将其切割成薄片的技术。
石蜡切片法的原理基于石蜡的特性和切片机的工作原理。
•石蜡是一种固态蜡状物质，具有良好的可模塑性。
它的熔点较低，在55-60摄氏度范围内熔化，使得将样本浸泡在石蜡中能够快速固化和切割。
切片机通过旋转刀片和样本的移动来切割石蜡固化后的样本，从而得到薄片。
•石蜡切片法的原理包括以下几个步骤：–样本固定：将生物组织或植物材料固定在切片床上，通常通过福尔马林等化学物质进行固定。
–组织处理：将固定后的样本进行去水化和脱脂处理，以去除水分和脂肪等物质，使样本更易于渗透和固化。
–石蜡浸渍：将处理后的样本浸泡在石蜡中，使石蜡渗透到样本组织中，并使其固化。
–切片制备：将石蜡固化的样本放置在切片机上，通过旋转刀片和样本的移动来切割石蜡，得到薄片。
–切片染色：将薄片固定在载玻片上，并进行染色处理，以增强样本的可视化效果和对细胞结构的观察。
2. 石蜡切片法的应用•石蜡切片法在生物医学研究、临床医学和植物学等领域具有广泛的应用价值。
以下是石蜡切片法的一些主要应用：2.1 生物组织切片•生物组织切片是石蜡切片法最常见的应用之一。
通过石蜡切片法可以将生物组织固化并切割成薄片，用于观察和研究组织的结构和功能。
生物组织切片可用于研究疾病的病理学特征、细胞增殖和分化等过程。
2.2 病理分析•石蜡切片法在病理学方面具有重要的应用。
通过切割和染色石蜡切片，可以观察到细胞核、细胞质和细胞间质等组织成分的细微结构，实现对肿瘤、感染和其他疾病的病理分析和诊断。
2.3 细胞学研究•石蜡切片法可用于细胞学研究，通过切割和染色石蜡切片，可以观察细胞的形态、结构和功能等特征，对细胞的增殖、分化和凋亡等过程进行研究。
细胞学研究在癌症和其他疾病的研究中具有重要的意义。
石蜡切片法
石蜡切片法在显微镜下观察植物体内部的细微结构之前,必须根据植物材料的特性,采用不同的方法,对植物材料进行处理,把材料制成透明的玻片标本.根据材料的性质和制作法的不同,常用的植物显微制片技术可以分为切片法与非切片法两大类,前者常用的有徒手切片法,冰冻切片法,火棉胶切片法,石蜡切片法,冷冻切片法等,其中以石蜡切片法最为常用.后者包括整体封藏法,涂布法,压片法等.石蜡切片法石蜡切片法是以石蜡作包埋剂,用旋转切片机将材料切成薄片,经一系列处理制成永久制片的方法.在研究植物的细胞,组织,胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法.石蜡切片法的一般流程为:取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片.取材用锋利的刀片切取新鲜的植物材料,选定适宜的材料,立即固定.取材的注意事项如下:(1)取材料要新鲜.动作要迅速,以免挤压损坏组织;取病理材料时,应设置对照材料.(2)所取材料大小要适当:根和茎一般直径≤5mm,切取成5-10mm小段;叶片一般取过中脉处,切成2-5mm宽,5-8mm长.在切材料时,必须注意刀片与中轴成直角,两切面平行,否则制成的切片细胞是斜的.雌,雄蕊一般不需分割.(3)取材时间可根据切片要求有所区别.如:在进行植物发育的研究过程时,需要找到细胞分裂相,一般在晴天的早晨9:00-10:00时取材,此时植物细胞分裂活动较明显.(4)取材不易过老,否则制片有难度(过老的材料须在滑走切片机上进行);对纵切的材料适当多取材,如根尖,茎尖等,因为切到材料正中的概率较低.(二)固定将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中.借助固定液的作用,使细胞的新陈代谢瞬时停止,并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化.从而达到使组织变硬从而便于切片,增强内含物的折光度,令细胞易于着色的目的,同时具有防腐作用.以新鲜配制固定液效果较好.固定的时间依材料的种类,性质,大小等而定.材料固定完毕,保存于加盖的容器内,贴上标签.良好的固定剂,应是穿透力强,使细胞立刻致死,原生质全部凝固;不发生任何变形,增强折光率,并且不妨碍染色.常用固定液:简单固定液以一种化学药品配制的固定液.⑴乙醇为凝固型固定剂.常用无水乙醇或95%乙醇.⑵甲醛为非凝固性固定剂.具强烈刺激性气味.纯净的甲醛为无色透明液体.固定用的浓度为4%-10%.⑶醋酸为凝固型固定剂.为无色透明的液体,刺激性极强,低温下凝结成冰,故又名冰醋酸.2.混合固定液:由几种试剂,适量配制而成.混合遵循原则:①优缺点互补;②膨胀与收缩相互平衡;③强氧化剂与还原剂应分别配置.常用混合固定液有下列几种:⑴FAA固定液(福尔马林-冰醋酸-乙醇)广泛适用于根,茎,叶,花药,子房的组织切片,所以又称为万能固定液.一般固定时间不低于24h.该固定液优点是在较低温度下(10℃左右)适用于材料的长期保存,可兼作保存液.并且固定的材料,不妨碍染色,但用于细胞学上的固定效果较差.⑵纳瓦兴(Navaschjn's)固定液1912年首创.适用于细胞学与组织学研究的切片观察.但渗透慢,不能长期保存;主要用于显示分裂相.(三)抽气植物材料内部多由于含有空气,导致固定液不能完全深入.材料投入固定液后需要立即抽气.以便让固定液有效透入材料组织中,并排除材料内气泡的干扰.一般抽气时间为20-30min.抽过气的材料在停止抽气,应沉入底部.(四)洗涤固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶,影响观察;有的还会继续作用,使材料变质等.因此,在使用材料时,需根据固定液的种类,用水,缓冲液或70%乙醇洗去渗入细胞内部的固定液.如:用FAA固定的材料在脱水时用70%乙醇反复洗涤数次.如用水洗涤,可将材料自固定液中取出,放入指形管,加入半管水,用纱布将管口扎紧,置于水槽内,进行流水冲洗.流水冲洗时间一般为12-24h.(五)脱水材料经洗涤后含有部分水分,会使材料分解.而且透明剂与水是不相混合的,不利于材料的透明和包埋等后期处理.因此需用脱水剂逐渐除去材料中的水分,以便让石蜡渗透进细胞.所以,脱水是制片的关键环节.脱水剂要求能与水混合,而且能与其他有机溶剂互相替代.脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行,防止吸收空气中的水分;在更换高一级的脱水剂时,最好不要移动材料,以免损坏材料.(六)透明透明剂要具有既能与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质,可以将材料中的脱水剂置换出来,使石蜡能顺利进入材料中.二甲苯是目前应用最广的透明剂,作用迅速,但易使材料变脆..(七)浸蜡是指逐步清除材料中的透明剂,以使石蜡充分渗透于材料内部的过程.这样,材料的各部分都能保持原来的结构与位置,切片不致发生破裂或其他变形.浸蜡是一个渐进的过程,常用的正丁醇.每次浸蜡的时间,视材料大小而调节.(八)包埋材料经过足够时间的浸蜡后,需包入蜡块,以备切片.操作方法:根据切片材料大小,确定所需纸盒的尺寸,用表面光滑的磅纸预先叠好纸盒.(九)切片即将包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带.(十)贴片是用黏贴剂把切片平铺贴在载玻片上,以便于染色和观察.常用的粘片剂有下列二种:(1)明胶黏片剂(2)蛋清黏片剂(十一)染色即根据植物细胞中不同的化学性质,用染料分别进行染色,以利于观察切片中细胞与组织的形态与构造及其内含物等.染色基本程序为脱蜡,染色,分色封片.染色方法可分为下列几类:①单染只用一种染料染色.②双重染色两种染料染色,如番红--固绿;苏木精---曙红.③多重染色多种染料染色,如番红—固绿—桔红G;酸性品红—苯胺蓝—桔红G等.(十二)封藏封藏于中性树胶中,使材料能在显微镜下清晰地显示出来,并能长期保存.方法:将含材料的载玻片放在吸水纸上(切片一面向上),迅速地在切片的中央滴一滴树胶(必须在二甲苯干燥前进行),用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧,稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触,然后再缓慢地放下,避免产生气泡.补充：注意事项：１、制片是一个连续的操作过程，往往要连续几天才能完成，因此，事先一定要制订工作日程计划，应按顺序进行工作。
石蜡切片的具体步骤与做法
石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。
制片时间太长。
石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。
AFA固定液则不需要水洗。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
怎样制作石蜡切片
怎样制作石蜡切片制作石蜡切片需要一系列的步骤和材料。
以下是一种常见的制作石蜡切片的方法：1.准备材料和设备：-石蜡块：石蜡是一种透明且易于切片的材料，可以在化学试剂供应商或实验室设备供应商处购买。
-刀片：使用一把锋利的微创刀片来切割石蜡。
确保刀片是干净的，滴一滴乙醇或其他清洁溶液在刀片上擦拭，然后用干净的纸巾擦干。
-切片盒：选择适合的切片盒来放置切割好的石蜡切片。
-石蜡模具：这是一个用于制作石蜡块的模具，可以在实验室设备供应商处购买。
2.制备石蜡块：-首先，将石蜡块加热至约60-70°C，直到完全融化。
-将石蜡块从加热器中取出，小心地倒入石蜡模具中。
-等待石蜡冷却和凝固。
你可以将石蜡模具放入冷却台上以加快冷却过程。
3.切割石蜡块：-将已冷却和凝固的石蜡块从模具中取出。
-使用清洁干燥的刀片将石蜡块切成适当的大小。
你可以根据实验需求来确定切割的尺寸。
4.制备石蜡切片：-准备一张玻璃载玻片。
-小心地将切割好的石蜡片放在玻璃载玻片上。
5.烘干石蜡切片：-将玻璃载玻片连同石蜡切片放入干燥炉。
-设置炉温为50-60°C，保持1个小时以消除任何残留的水分。
6.染色和封片：-如果需要，可以将石蜡切片进行染色以便更好地观察。
- 使用适当的染色剂，如伊红（Eosin）或伊红-兰红（Eosin-Methylene Blue）来染色石蜡切片。
-染色后，将石蜡切片放入一盒有封盖的容器中，以便保存和保护切片。
制作石蜡切片需要一定的实验室技巧和经验，同时注意安全，避免烫伤和刀片伤害。
在操作过程中，务必佩戴手套和护目镜，确保实验室处于通风良好的环境中进行操作。
石蜡切片法
取材 固定 浸洗（冲洗） 脱水 透明 浸蜡（透蜡） 包埋
八、 切片 九、 展片和贴片（裱片） 十、 烤片 十一、 染色 十二、 封固（封片） 十三、 贴标签
一、取材
1、用锐利刀、剪剪切组织块，不可来回切割和 用力挤、压，以免损伤组织。 2、组织块大小一般为5×5×2mm。 3、切好的组织块经生理盐水清洗后可用牙签
十、 烤片 1、展片时是利用水使切片展平，但载玻片 与蜡片之间尚留有部分水分，烤干便是将水分 通过温箱加热后除去，使组织在脱蜡后依然能 够粘贴在载玻片上。若水分未烤干，则脱蜡时 组织会脱落。 2、烤干时的温度<60℃，一般以50℃较为 适当；也可置37℃温箱内烤干（约12~24hr，烤 干后蜡片在玻片上呈透明状）。烤干的时间， 以底烤去水分为原则。
四、切片发生严重皱纹： （1）蜡太软、室温过高→用冰块冰一下再切； （2）切片刀不锋利→磨刀； （3）刀的切削角过小→切刀片仅能在蜡块切削面上浮切 →改变切削角 五、蜡片裂纹： （1）切片刀口缺口刀纹； （2）刀刃不干净→干布擦； （3）蜡块中具有坚硬杂质或尘埃：石蜡过滤及修块时用
刀削去各个方面的表面蜡（纸屑）。
十三、 贴标签 切片封后，在切片的右侧贴上标签， 平放于无灰尘或放在左右的温箱中烤几天 ，待树胶干固后便可使用。 如制成的切片上，树胶过多而溢出盖 片，则可候其完全干固后，用刀片轻轻刮 去，再用纸蘸二甲苯少许将胶擦净。
七、包埋 1、目的：使组织与石蜡在硬度上适配， 以利于切片。 2、硬蜡包埋温度65℃。 3、包埋操作要快，材料吸、夹入石蜡后 轻吹使蜡表面凝结成薄膜状，即可将 其没入水中使快速、均匀、完全凝固
八、切片 1、单面刀片修整蜡块，长：宽约3：2，长边与 刀刃平行。 2、木块上先熔上一点蜡，再用烫蜡铲将蜡块牢固 地粘在木块上；之后沿蜡块四周用烧热的解剖 针烫几下，使蜡块粘牢。 3、安装，刀口与蜡块的角度<100。 4、切片：5~8m；左手用毛笔托住蜡带， 右手不断摇动切片机，获连续切片。 5、切片前，将蜡块置冰箱冷藏一下； 较硬、难切的材料，可将蜡块在甘油：50%酒 精=1：1液中半浸泡数天再进行切片。
实验八石蜡切片法一
盐酸、蛋清、甘油。 • 3、材料 • 各类你感兴趣的固定标本。
.
4
四、实验步骤
• 1、取材 • 2、固定 • 3、漂洗 • 4、脱水 • 5、透明 • 6、透蜡 • 7、包埋 • 8、修块 • 9、切片 • 10、染色
实验八 石蜡切片法
.
1
一 、实验目的
• 学习石蜡切片法 • 了解组织染色原理
.
2
二、实验原理
• 用石蜡渗透固化组织；
• 用碱性染料如苏木精、碱性品红等，使细 胞核着色；
• 用酸性染料如伊红、酸性品红等，使细胞 中的嗜酸性成分着色，如蛋白质。
.
3
三 、实验用品
• 1、器材： • 切片机、水浴锅、染色缸、玻片、显微镜、试剂瓶、剪刀、
• 未注明时间的一律处理2-3min。
.
8
五、作业
• 简述石蜡切片过程，绘制你所观察到的细 胞形态。
• 提交一张你认为制作较好的玻片。
.
9
.
பைடு நூலகம்
5
取材到切片
• 取材——固定（Cannoy’s），材料厚度 2mm。
• 100%酒精——100%酒精——二甲苯:酒精 （1:1）——二甲苯——二甲苯——二甲苯: 石蜡（65℃ 1:1）——石蜡（65℃）——石 蜡（65℃），以上处理各10-30min，视材 料大小而定，最后一步石蜡20min 。
• 包埋——修块——切片——贴片
.
6
脱蜡与复水
• 二甲苯——二甲苯——二甲苯/无水乙醇 (1/1)——无水乙醇 ——无水乙醇——95% 乙醇——80%乙醇——70%乙醇——50% 乙醇——蒸馏水。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2. 取材取材时，最好用徒手切片等方法，检查一下材料的内部结构是否适合需要，不理想时，再重新取材。
要点：（1）在符合观察要求的情况下，材料越小越好，体积尺寸一般不超过0.5cm。
（2）进行科研用的，材料样本数量要符合统计学的需要，并留有充分的余地。
（3）有特殊需要的材料，如茎尖纵切要看腋芽等结构的，要将材料作好标记——两侧削扁，切片时才有方向性。
（4）材料取下后要设法保持材料的新鲜。
材料取好后要立即固定。
3. 固定（FAA者可免）FAA固定液的配置：（50-70%乙醇90ml+冰醋酸5ml+37-40%甲醛（即福尔马林）5ml），常温下至少24hr或更长（视材料厚薄、大小而定）。
固定后一般的材料都可以在此液中于冰箱长期保存。
要点：①固定液的体积为材料体积的20-50倍；②固定液开始浸泡时，要对材料抽气，5. 脱水材料完成“冲洗”后，将材料上多余的水尽量除去，然后进入第一级脱水剂中。
脱水剂的浓度分为6-7级，从低到高逐级进行，每级脱水约2小时。
材料小和嫩的脱水时间可以缩短，材料大和硬（木质化程度高的）脱水的时间可以长一些，需要多总结经验。
脱水过程长，尤其是在高浓度脱水剂中的时间长，材料会变脆，不利于切片，见下表。
注意：用FAA固定的材料，因不经“冲洗”，可以直接从2级脱水剂开始脱水。
注意：脱水剂用量不少于材料体积的5倍。
叔丁醇脱水所要求的温度，以叔丁醇不凝固材料进入无水的脱水剂中后，若脱水剂变浑浊，说明材料中的水分未脱干净，必须回到7. 浸蜡（透蜡）材料从叔丁醇脱水后进入装有适量融化的叔丁醇（恒温箱最好从36-40度缓慢升到56-60℃，透蜡的效果才好）的蜡管中，在蜡管中逐渐多次加入碎蜡（熔点48-50℃），直至与叔丁醇等体积为止（每次加蜡后都将透明剂瓶盖上，以免透明剂过渡蒸发），然后在56-60℃温箱中4-8小时或过夜。
此时必须盖紧蜡管塞，以免叔丁醇蒸发。
浸蜡用石蜡的熔点应该低于包埋用石蜡的熔点、逐渐增加石蜡的浓度、逐渐增加透蜡的温度，才能使石蜡易于慢慢透入材料。
然后，打开瓶塞让透明剂蒸发干净。
之后，将材料移入装有溶化石蜡（熔点56-58℃）的小杯中（换容器的目的是便于下一步操作）（仍然在58-60度温箱中），2-4小时后换纯蜡一次，再2-4小时后（60℃恒温），即可包埋（时间长短与材料大小等因素有关）。
换蜡时可以在水浴加温情况下进行，以免蜡凝固。
说明：浸蜡（透蜡）的作用——用融化的石蜡代替材料中的透明剂。
最重要的是使融化的石蜡完全浸入到细胞的每个部分，并使石蜡紧密地贴在细胞壁的内外，这样切片时材料才不会切坏。
这是最重要的一步，如果透蜡不彻底，材料中有空洞，切片时会使材料切坏。
浸蜡要从低温至高温，从低浓度到高浓度，使石蜡慢慢渗入组织内，将透明剂替代出来。
操之过急，则石蜡浸入不彻底，影响切片。
注意：材料（如石蜡）、用具和操作，都必须无灰尘。
温箱的温度过高，会使材料变脆。
操作要特别小心，不要把材料弄碎。
切记要回收废蜡，并标明日期、蜡的熔点等内容。
8. 包埋事先用牛皮纸或较硬、光滑的纸折好小纸盒若干（不能用有蜡光的纸，气泡太多，牛皮纸最好）。
包埋时，不同的材料必须放在不同的纸盒中，每个纸盒通常装三个材料。
纸盒的体积约为1×1×6cm。
将小杯中融化的纯石蜡连同材料约3个乘热倒入小纸盒中，迅速用热的解剖针、镊子在材料周围轻轻搅动，以消除气泡等。
小杯中的蜡不够时，再加熔化好的同种蜡液。
视底部稍有凝固，将材料定位（注意材料纵、横切的不同放置要求，以及材料之间的距离），然后将纸盒快速、平稳轻放水面冷却，待面蜡发白，迅速将蜡盒沉入水中（最好在水中加入冰块、或冰铁块等）。
约12小时后（要加速可放入冰箱冷藏室），蜡充分凝固就可以修蜡块。
小纸盒上必须记录好材料的名称、切片的内容、日期等。
已经包埋好的材料如果暂时不能切片，可在包埋状态下长期保存。
注意：下一步修蜡块时通常每个小蜡块中只能有一个材料，特殊需要时可以有2个或更多个材料，这主要由包埋时材料和材料之间的距离来决定。
包埋材料时就要充分考虑到这一点。
否则，修蜡块时就难以弥补。
要点：①迅速冷却能使蜡的结晶颗粒细小，有利于切片。
冷却过慢，石蜡一旦形成结晶就无法切片②冬天切片用熔点较低的蜡（如54℃），夏天切片用溶点较高的蜡（如58-60℃）。
但低熔点的蜡易展平，高熔点的蜡不易展平。
③较硬的材料用熔点较高的蜡包埋。
包埋的蜡过软，切片时蜡片易后翻或卷曲，难以展平；包埋的蜡过硬，蜡片易被切碎。
9. 修蜡块和粘蜡块将包有材料的蜡块的横截面修为矩形，底座可稍大（梯形状），每边包材料一般不少于2-3mm，较小的材料边要留得更厚，使蜡块有较大面积，能牢固地粘在小木块上。
注意：蜡边过少，切片易碎。
而且，展片时由于蜡边少，没有足够的拉力把皱褶的材料展平，这样的制片质量不高或不能用。
要点：①蜡块不能有裂纹和孔隙；②材料要尽量位于蜡块中央；③修出的蜡块的几何形状要标准，粘蜡块时要粘得周正，才能切出理想的蜡带。
10. 切片事前将切片刀磨好，磨刀时要注意刀安置在磨刀机上的方向每次都要保持一样。
使用旋转切片机，切片厚6-12（16）微米（厚度视材料和需要而定，顺、反时针都可以）。
要点：安装切片刀的角度基本为5-8度，过大、过小都无法切片。
影响切片质量的因素：（1）蜡片卷曲：刀不锋利、角度不正确、切片太薄或太厚、材料硬、石蜡太软或太硬、蜡块中的材料不在中央。
（2）材料与蜡片分离：包埋时石蜡温度与材料温度不一致。
（3）蜡片破碎不成蜡带而吸附于切片刀上：材料过脆与刀口摩擦产生静电。
（4）髓部发达的茎段，在浸蜡时，蜡很难浸到中央髓部，因而髓部疏松，导致切片时髓部被切坏，成空心状态。
这种情况，可以重点切材料两端的部位，该部位浸蜡的程度比材料中部好！！！（5）蜡片不成蜡带：有时是因为刀切蜡块的一面的劈面不成平面（系磨刀不善造成），这时，可以将刀片的两面交换后再切。
11. 展片和粘片明胶粘贴剂配制：溶液甲：明胶（粉状）1g + 100ml(36℃)蒸馏水（明胶溶化后）+石炭酸（结晶）2g + 甘油15ml(溶化)，最后用滤纸过滤。
溶液乙：甲醛4ml+100ml 蒸馏水（即4%的福尔马林）将很少的溶液甲（约一小滴）涂抹在载玻片上（事先将洗干净的载玻片用干净的绸缎擦干，以免起毛。
涂抹时手一定要干净，否则会使胶不粘，导致今后材料脱片），待溶液甲基本干后，加大滴溶液乙，再放蜡带(借助于毛笔)，使其浮起，展片台展片(35-45℃)。
以蜡不溶化，充分展开没有皱折为宜。
展片不平时，可将温度调到50℃(55℃)左右，甲醛液多加一点，短时内迅速展平，以免蜡熔化。
注意：如果蜡熔化，将使后续的脱蜡难以进行。
（2004年10月的一组，因为大意，展片时的温度高达80度以上，蜡全融化了，继续做下去的结果，片子似乎还是正常的）然后干燥24小时(30℃温箱中或风干)，进入脱蜡阶段。
要点：①溶液甲不能多，而且要待其基本干透后再放溶液乙；②粘片时蜡带的背面(光亮面)自然朝下，才能粘得牢固。
12. 脱蜡、复水、染色和透明这是一系列不能分开的连续过程。
将材料已经干燥了的载玻片装于载玻片架上，以架为单位进行以下操作（一个载玻片架可以装载玻片20或30片）。
注：①0.5-1g番红+100ml 50%乙醇；②0.5g固绿+50ml丁香油（A液），1ml A液+乙醇25ml+二甲苯25ml][固绿的另一配法：0.5g固绿+50ml丁香油+50ml纯酒精]可以用亮绿代替固绿：配方1 亮绿0.2g + 95％酒精100ml，染20－30分钟配方2 亮绿1g + 丁香油100ml，染1分钟（丁香油价格昂贵）配方3 亮绿1g + 丁香油15ml ＋纯酒精25ml，染1分钟2004.10月（生计02班）年用改良的配方3（亮绿1g + 丁香油100ml ＋纯酒精300ml，染4－8分钟）效果还可以。
要点：①在这一过程中，必须时时知道材料位于载玻片的哪一面！②如番红染色过深，应在染缸中加1-2滴浓盐酸，分色或入酸性酒精中分色（醋酸1ml+70%酒精100ml）；也可在50%酒精中腿色至合适。
如材料木质化程度太低，番红难以染色，要延长染色时间。
③如果固绿染色过深，可延长在1/2二甲苯+1/2乙醇中的时间，腿色至合适，或者用橘红G丁香油饱和液复染，进行分色。
13. 封片从固绿出来，经二甲苯脱水和透明后，就可以用树胶封片。
将洗干净的盖玻片用干净的绸缎擦干，以免起毛。
在桌子上垫上干净的白纸（最好是滤纸）将载玻片从二甲苯中取出，务必使有材料的一面朝上。
（待二甲苯基本挥发时）迅速在材料上加适量封固剂，封固剂最好正正地滴在材料上（不能使二甲苯干很久后才封片）。
如封固剂有气泡，可迅速（！）将载玻片在酒精灯火焰上过几次，除去气泡。
用镊子持住盖片，初学者使盖片一端先与封固剂接触，然后缓缓抽去镊子，让盖片缓缓下降即可，这样便于操作，但是往往胶不均匀，即盖玻片下的胶一端厚、一端薄，甚至漏胶，影响观察。
最好的方法是，用镊子持住盖片，并用手在载玻片两侧挡住盖玻片，注意将盖玻片的中央对准材料及胶滴，然后使盖玻片水平地慢慢下降，这样胶的厚薄就均匀一致，有利于观察。
要点：①二甲苯极易挥发，载玻片从二甲苯中取出后要迅速滴胶，以免材料干燥、开裂或吸收空气中的水分而报废；②注意胶的浓度，太浓时，用适量二甲苯稀释；③胶的数量以刚好不溢出盖玻片为宜（约半滴或一小滴）。
④封片后，材料最好要位于盖玻片的中央，不要偏离太多，不便于观察，而且干固后材料容易漏胶。
14. 清洗和贴标签待制片干固后（约需20天），用毛笔和二甲苯清洗载玻片上多余的封片剂；在载玻片的右侧，贴上标签，注明切片的内容、切片的编号及日期等。
如制片不干固前贴标签，容易碰着盖玻片而移位，使载玻片上的材料变形而报废。
1 取材与固定工具：离心管：清洗后的1.5mL离心管多个，将离心管底剪去，在离心管盖做好样品标记大的塑料瓶：可考虑广口瓶、塑料试剂瓶、蓝盖液相瓶，用来装FAA固定液及样品小的矿泉水瓶330mL：用来装固定液，材料浸泡前赶走气泡用镊子、小刀、刀片、凿子、手套、保鲜膜、标签纸、笔、相机试剂：FAA固定液：50%乙醇或90%乙醇90mL冰醋酸5mL福尔马林（甲醛）5mL番红染料配制2 脱水透明叔丁醇无水乙醇3 浸蜡石蜡（熔点48-50℃）及石蜡（熔点56-58℃）小广口瓶4 包埋纸盒解剖针、镊子5 修整蜡块小木块、打火机、小刀6 切片磨刀机7 展片、粘片粘合剂：新鲜蛋白50mL甘油50mL石炭酸1g用玻璃棒搅匀，用消毒棉或纱布过滤后即可。
盖玻片、载玻片8 脱蜡、复水、染色、透明95%乙醇（100mL）：95mL乙醇+5mL蒸馏水85%乙醇（100mL）：85mL乙醇+15mL蒸馏水70%乙醇（100mL）：70mL乙醇+30mL蒸馏水50%乙醇（100mL）：50mL乙醇+50mL蒸馏水纯乙醇二甲苯9 封片镊子、加拿大树胶标签。