南开大学微生物学实验_二

鞭毛
实验材料
• 1. 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis) • 2 . 野油菜黄单胞菌(Xanthomonas
campestris)
• 3. 普通变形杆菌(Proteus vulgaris)
实验方法与步骤：
1．芽孢染色法：
制片 → 孔雀石绿染色 → 徐徐加热 致冒蒸汽，保持2分钟→ 冷却 、水 洗、吸干 → 沙黄复染1分钟 → 水洗、 吸干 → 镜检。 简易方法：制片，结晶紫染色1分钟， 水洗、吸干，镜检。
2、荚膜染色，由于荚膜 与染料间的亲和力弱，不易 着色，通常采用负染色法染 荚膜，即设法使菌体和背景 着色荚膜不着色。因而荚膜 在菌体周围呈一透明圈。
糖被（glycocalyx）
主要成分是多糖、 多肽或蛋白质， 尤以多糖居多。
荚膜
3、 鞭毛是细菌的运动“器官”， 细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生 的位置和数目是细菌的一项重要形 态特征。
（二）细菌的特殊结构染色
Байду номын сангаас（实验4，2）
• 目的要求
1、学习并初步掌握鞭毛染色法；观察细 菌鞭毛的形态特征；观察细菌的运动性。 2、 掌握细菌的芽孢、荚膜染色方法。
3、了解染色的原理及其在细菌分类鉴定 中的重要性。
实验原理
细菌的芽孢、荚膜染色都是利用 细胞不同的构造部分与染料的亲和力 不同，用各种特殊染色法使之显示出 不同的颜色。
• （2） 硝酸银染色：
A染液染色3-5分钟→蒸馏水洗→ 再用B染 液冲洗残水→ 然后使B液充满载片→ 微 热至冒气，30-60秒→水洗、吸干→ 镜检.
美蓝染色法
• A染液染色8分钟，蒸馏水冲洗30秒，吸干 • 美蓝染色6分钟，蒸馏水冲洗20秒 • pH2.0HCl冲洗至洗液变蓝 • 蒸馏水冲洗20秒，吸干、镜检。
普通变形杆菌(Proteus vulgaris)
美蓝染色结果
银染结果
教学内容
1、 细菌的芽孢、荚膜染色法； 2、细菌的鞭毛染色法； 3、细菌运动性的观察(制作悬滴片）。
实验报告及思考题
• 1. 绘图表示芽孢、荚膜和鞭毛的染 色结果。
• 2. 鞭毛的染色与其他染色有何不同， 为什么？
细菌的鞭毛很纤细，所以，除 了很少数能形成鞭毛束的细菌可以 用相差显微镜直接观察到鞭毛束的 存在外，一般细菌的鞭毛均不能用 光学显微镜直接观察到，而只能用 电子显微镜观察。
要用普通光学显微镜观察细 菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。 鞭毛染色方法很多，但其基本原 理类似，即在染色前先用媒染剂 处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭 毛直径加粗，然后再进行染色， 显微镜观察。
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)
2．荚膜染色法：
• 涂片 • 自然风干 • 草酸铵结晶紫染色30秒 , 水洗,吸干, • 镜检。
野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)
3．鞭毛染色法：
• （1） 制片：
菌种斜面的冷凝水处，取一环菌 → 将载 片倾斜→ 从带有菌液的菌环上滴下一滴 无菌水→让水自然流下,切勿涂抹→自然 风干→ 固定。
1、 细菌的芽孢具有厚而致密的 壁不易着色，芽孢染色法就是根据芽 孢既难以染色而一旦染上后又难以脱 色的特点而设计的殊染色法。以便显 微镜观察。
5、特殊的休眠构造——芽孢 2）细菌芽孢的特点
芽孢是细菌的休眠体，适宜的条件下可以重新转变成为营 养态细胞；产芽孢细菌的保藏多用其芽孢。
产芽孢的细菌多为杆菌，也有一些球菌。芽孢的有无、形态、 大小和着生位置是细菌分类和鉴定中的重要指标。