动物细胞培养和核移植技术用
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2.2.1动物细胞培养和核移植技术
动物细胞特点 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的 提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄， 这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含 有保持物种遗传性所需的全套基因， 而且并没有因细胞分化而丢失基因， 因此高度分化细胞的细胞核仍具有全 能性
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一 个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组 并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终 发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物
9.回答下列有关动物细胞培养的问题： ⑷检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目， 最好选用细胞分裂到 中 期的细胞用显微镜进行 观察。 ⑸在细胞培养过程中，通常在 冷冻 条件下保存 细胞，因为在这种条件下，细胞中 酶 的活性 降低，细胞的 新陈代谢 速率降低。 ⑹给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发 生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织 当作 抗原 进行攻击。
动物克隆过程的实际是细胞核移植
思考题
１、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之 前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用 价值的动物提供的细胞。
２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10 代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型， 未发生突变
思考题
5、对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，找 出操作过程的不同点？ 多莉克隆过程的受体细胞是去核卵细胞，而高 产奶牛的克隆过程的受体细胞是去核卵母细胞； 多莉克隆过程是将供体细胞核注入受体细胞， 而高产奶牛的克隆过程是将供体细胞注入受体 细胞。 6、讨论分析上述哪一种措施更科学？并说明 理由？ 卵母细胞当中的细胞周期蛋白含量、 活性比卵细胞高，用它作受体更容易成功 将供体细胞注入受体细胞，使克隆动物更像 供体动物，操作也方便
动物细胞培养和核移植技术
◆体细胞核移植方法生产 的克隆动物是对体◆胚细胎胞移供 体动物进行了100植%的至复代制孕
吗？为什么？受体内
妊娠、分娩 ◆遗传物质 基本相同
体细体胞细核胞移核植移的植原的理过：程动
物细胞核具有全能性 受精
供体细胞 （供核）
细胞
体细胞
卵
培养
注入
细胞 重组
卵巢卵母细 胞（MⅡ中期：
供质）
去
去核卵 融合 细胞
2.原理：动物细胞核具有全能性
胚胎细胞分化程 度低，恢复其全 能性相对容易
动物体细胞分化 程度高，恢复其 全能性十分困难
3.分类：胚胎细胞核移植、体细胞核移植
4.体细胞核移植的过程
供体：优质高产奶牛
◆为何取供体细 胞传代培养10代
以内的细胞？
10代以内的细胞 一般保持正常二 倍体的核型，未
发生突变。
治疗人类疾病，作为组织器官移植的供体
主要的优 点是？
不发生免疫 排斥反应
◆研究克隆动物和克隆细胞更了解 胚胎发育及细胞衰老过程；克隆动 物做疾病模型，更好追踪研究疾病
的发展过程和治疗疾病。
6.体细胞核移植技术存在的问题
（1）成功率仍然非常低，产下的活 克隆动物比率平均不到10%。
（2）绝大多数克隆动物还存在健康 问题，许多克隆动物表现出遗传和生 理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发
因为在这个时候去核的话对 卵细胞损伤最小，距离很近，
便于去核。
◆为什么不是取供体 细胞核进行核移植操 作，而是直接将供体 细胞整个注入去核卵
母细胞中？
保证供核不被破坏， 使所得个体的性状
更符合供体。
◆激活 方法：
◆激活 目的：
◆促融方法： 电刺激
吗？为什么？受体内
妊娠、分娩 ◆遗传物质 基本相同
体细体胞细核胞移核植移的植原的理过：程动
物细胞核具有全能性 受精
供体细胞 （供核）
细胞
体细胞
卵
培养
注入
细胞 重组
卵巢卵母细 胞（MⅡ中期：
供质）
去
去核卵 融合 细胞
2.原理：动物细胞核具有全能性
胚胎细胞分化程 度低，恢复其全 能性相对容易
动物体细胞分化 程度高，恢复其 全能性十分困难
3.分类：胚胎细胞核移植、体细胞核移植
4.体细胞核移植的过程
供体：优质高产奶牛
◆为何取供体细 胞传代培养10代
以内的细胞？
10代以内的细胞 一般保持正常二 倍体的核型，未
发生突变。
治疗人类疾病，作为组织器官移植的供体
主要的优 点是？
不发生免疫 排斥反应
◆研究克隆动物和克隆细胞更了解 胚胎发育及细胞衰老过程；克隆动 物做疾病模型，更好追踪研究疾病
的发展过程和治疗疾病。
6.体细胞核移植技术存在的问题
（1）成功率仍然非常低，产下的活 克隆动物比率平均不到10%。
（2）绝大多数克隆动物还存在健康 问题，许多克隆动物表现出遗传和生 理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发
因为在这个时候去核的话对 卵细胞损伤最小，距离很近，
便于去核。
◆为什么不是取供体 细胞核进行核移植操 作，而是直接将供体 细胞整个注入去核卵
母细胞中？
保证供核不被破坏， 使所得个体的性状
更符合供体。
◆激活 方法：
◆激活 目的：
◆促融方法： 电刺激
动物细胞培养和核移植技术课件
过程
脱分化、再分化
原代培养、传代培养
项目
植物组织培养
动物细胞培养
结果 获得新个体或细胞产物
大量产生细胞或细胞 产物
用途
①快速繁殖名贵花卉和果 树；②培养无病毒植株、 转基因植物；③大规模生 产细胞产物，如药物、食 品添加剂、香料、色素等
①生产蛋白质制品， 如病毒疫苗、干扰素、 单克隆抗体等；②检 测有毒物质；
(3)温度和
温度：哺乳动物多以 pHpH： 7.2～7.4
36.5±0.5℃
为宜
(4)气体环境COO2 ：2：细维胞持代培谢养所液必的需p的H
4．应用[连线]
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1．动物核移植的概念和类型 (1)概念： ①供体：动物一个细胞的细胞核； ②受体：去掉细胞核的 卵母细胞 ； ③结果：形成重组胚胎，发育成 动物个体 。 (2)类型：哺乳动物核移植可分为胚胎细胞核移植和体细 胞核移植。
2.如图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答： (1)容器 A 中放置的是动物器官或组织，它一般 取自________________。 (2)容器 A 中的动物器官或组织首先要进行的处 理是________，然后用__________酶处理，这 是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 _________________________________________________。
胞质内的遗传物质来自受体卵母细胞，其次生物的性状还
受环境的影响，因此，克隆动物并不是对提供体细胞的动
物进行完全复制。
4.右图为哺乳动物(羊)的生殖过程，下列叙述
不．正确的是
(D )
A．个体 2 为克隆动物，c 为高度分化的
体细胞
B．个体 2 的遗传性状与提供 c 细胞的羊
动物细胞培养和核移植技术-刁金山
3.温度和 ：36.5+0.5度；PH为7.2-7.4 温度和pH：36.5+0.5度 PH为7.2温度和 4.气体环境： 气体环境： 气体环境
培养皿或松盖培养瓶，置于 空气和5% CO2 ） 培养皿或松盖培养瓶，置于O2和CO2（95%空气和 空气和
学案p2相关问题 学案 相关问题
1.3 动物细胞培养技术的应用
6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物 既然胰蛋白酶能将细胞消化掉， 胰蛋白酶能将细胞消化掉 组织分散成单个细胞要注意什么问题呢 注意什么问题呢？ 组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？ 注意时间的控制 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？ 不能，因为两者的最适PH不同， 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织 PH不同 细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH PH较接近 细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近
（三）、过程： ）、过程： 过程
1
2
3
4
（三）、体细胞的核移植过程 ）、体细胞的核移植过程
高产奶牛A 高产奶牛 供体细胞培养 供体细胞
？
卵母细胞培养 去核卵母细胞 供卵奶牛B 供卵奶牛
？
无性生殖
电刺激使两细胞融合 重组细胞
激活 重组胚胎
？
胚胎移植
代孕母牛C 代孕母牛 新个体
为什么用去核卵母细胞作为体细胞核的受体？ 为什么用去核卵母细胞作为体细胞核的受体？
通过核移植方法得到的动物叫克隆动物。 通过核移植方法得到的动物叫克隆动物。 克隆动物
（二）、分类： ）、分类： 分类
胚胎细胞核移植： 胚胎细胞核移植 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度低， 细胞分化程度高， 体细胞核移植： 体细胞核移植 细胞分化程度高，恢复全能性困难
动物细胞工程动物细胞培养和核移植技术
核移植操作
显微操作
在显微镜下，将供体细胞核移植到受体细胞中。
融合与激活
通过电刺激或化学方法诱导受体细胞与供体细胞 融合，并激活新形成的细胞。
筛选与鉴定
对新形成的细胞进行筛选和鉴定，确保核移植成 功。
重组胚胎的培养与移植
胚胎培养 在适宜的培养条件下，对重组胚胎进行培养，促进其发育。
胚胎移植 将培养成熟的胚胎移植到代孕动物体内，以产生后代。
融合后的细胞开始分裂和发育，最终 形成与供体具有相同遗传物质的克隆 个体。
核移植技术流程
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供体细胞的选择与准备
选择适当的供体细胞
01
根据实验需求选择具有所需特性的供体细胞，如特定组织或器
官来源的细胞。
细胞培养准备
02
确保供体细胞处于适宜的培养环境中，包括适当的培养基、温
度、气体条件等。
细胞传代与扩增
03
对供体细胞进行传代和扩增，以获得足够的细胞数量用于核移
植。
受体细胞的选择与准备
选择适当的受体细胞
根据实验需求选择具有良好接受性的受体细胞，如去核的卵母细 胞。
去核处理
使用显微操作技术去除受体细胞的细胞核，为核移植做好准备。
受体细胞激活
通过化学或电刺激方法激活受体细胞，使其恢复分裂活性。
细胞分离
通过离心、过滤等方法将细胞从酶液
3
中分离出来。
培养环境控制
提供适宜的温度、湿度、气体环境，
5
保持培养基的营养成分和pH值。
组织消化
2
使用适当的酶液将组织分解成单个细
胞。
细胞接种
4
将分离出的细胞接种到培养容器中。
传代细胞培养
创设问题情境 提高教学效率——“动物细胞培养和核移植技术”的教学设计
激发其想象 。 复朗读法 、 反 描绘渲染法 、 点拨 启发法都能引起学
生丰富的联想和想象 。 ３自由表达 ， ． 加深体验 。审美体 验能给人带来 欢乐 、 愉悦 、 兴奋 等积极的心理感受 ，这是人们憧憬和追求 美的 内因所在 。 在学生真 切地感受 美 ， 确地鉴赏美 的基础上 ， 而乐于 和同 正 进
２ １ ２月 ０ ２年
总第 ２６ ３ 期
经典 案例
创设问题情境
— —
提高教学效率
“ 动物 细胞培 养和核移植技 术” 的教 学设计
戴 国金
（ 宜兴市 官林 中学 ， 江苏 无锡 ２４ ５ ） １２ １
【 教材分析 】
１ 学 内容 ． 教
大 面积烧伤病人 来讲 ， 健康皮肤很有 限 ， 同学们想 一想如何 请
２ 材地 位及 作 用 ． 教
“ 动物细胞 培养和核移 植技术 ” 一节在 动物细胞工 程 以及
整个细胞工程 中具有十分重要的意义。 细胞 工程是建立 在对 细
重难点处是课堂教学 的拦路虎 ， 在这里学生会对所学 的内 容感到迷茫 、 不知所措 、 思维受阻 。教师巧妙 、 精心地设计 问题 串， 把一 个 比较难懂 的大问题生解决问题 串后 ， 由学生归纳动物细胞培养 再 的过程 ， 培养 学生归纳 知识 的能力 ， 并请两位 学生上 黑板演示 他们的归纳 内容 。这样一来 ， 本节课 的第一个难点就很顺利地
突破 了。（ 下转第 １２页） ６
・
１ ９・ ５
新 校
沦
Ｘｎ ｉＹ】 ｌ． ｉ ａ ｌ ＿１ Ｘ ０ １ ｎ ｉｌ Ｉ
生的想像力 ， 充当一 回作者， 设计一下故事接下来会怎样 。尽管 这是 比较高 的要求 ， 只要能用 心对待 ， 但 还是 能受到一 定效果
动物细胞培养和核移植技术上课用
胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
一、动物细胞培养过程
为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺盛，容易培养。
壹
贰
一、动ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ细胞培养过程
相互接触
单层
胰蛋白酶
衰老甚至死亡
接触抑制
不死性
降低
减少
⑷检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到 期的细胞用显微镜进行观察。 ⑸在细胞培养过程中，通常在 条件下保存细胞，因为在这种条件下，细胞中 的活性降低，细胞的 速率降低。 ⑹给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作 进行攻击。
02
要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。
03
细胞的接触抑制：
04
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
05
动物细胞生长特点：
细胞贴壁过程
那么什么是接触抑制？
动物细胞生长特性
接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。
C
外界条件适宜，植物细胞不需要。动物细胞培养一般需要培养箱。
A D 愈伤组织条件适宜可以传代培养不分化。
01
02
C D
用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 容易产生各种变异 具有更强的全能性 取材十分方便 分裂增殖的能力强
一、动物细胞培养过程
为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺盛，容易培养。
壹
贰
一、动ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ细胞培养过程
相互接触
单层
胰蛋白酶
衰老甚至死亡
接触抑制
不死性
降低
减少
⑷检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到 期的细胞用显微镜进行观察。 ⑸在细胞培养过程中，通常在 条件下保存细胞，因为在这种条件下，细胞中 的活性降低，细胞的 速率降低。 ⑹给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作 进行攻击。
02
要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。
03
细胞的接触抑制：
04
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
05
动物细胞生长特点：
细胞贴壁过程
那么什么是接触抑制？
动物细胞生长特性
接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。
C
外界条件适宜，植物细胞不需要。动物细胞培养一般需要培养箱。
A D 愈伤组织条件适宜可以传代培养不分化。
01
02
C D
用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 容易产生各种变异 具有更强的全能性 取材十分方便 分裂增殖的能力强
动物细胞培养和核移植技术
代10代以内的细胞， 既保证了重组细胞的完整性，又能刺激体细胞 的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的 生突变，而10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体 这是为什么？ 核表达其全能性，发展成为一个新的个体。 核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞 遗传物质去掉或将其破坏。
正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。
核移植
体细胞核移植 细胞分化程度高，恢复全能性不容易
核移植的受体 2、体细胞核移植的过程 （以克隆高产奶牛为例）
阅读课本P48的流程图
细胞是什么？ 处在什么时期？ 为什么选用该
细胞？ 在体细胞的细胞核移植到受
体卵母细胞之前，为什么必 须先去掉受体卵母细胞的核？ MII期的卵母细胞做受体细胞 ，卵细胞体积大，
式完成细胞培
养的流程图
较，分化程度低的与分化
放入二氧化 碳培养箱中 培养 什么是传 代培养？ 转入培养液 中进行传代 培养
目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内,以保持细
剪碎 胞正常的二倍体核型. 胰蛋白酶 二倍体核型:二倍体生物体细胞染色体组在有丝分裂中期的表 细胞悬液
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
动物胚胎或幼龄动物器官组织
克隆动物绝大部分DNA 你认为用上述体细胞
目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显 微操作去核法。还有人采用其他方法，如梯度离 心、紫外光短时间照射、化学物质处理等。这些 方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况 下,去除细胞核或使卵细胞核DNA变性，从而达到 去核目的。
2、体细胞核移植的技术流程
易于操作，含有促使细胞核表达全能性的物质 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分 用于核移植的供体 和营养条件。将体细胞核移植入去核卵细胞内， 重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞 细胞一般都选用传 细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发
正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。
核移植
体细胞核移植 细胞分化程度高，恢复全能性不容易
核移植的受体 2、体细胞核移植的过程 （以克隆高产奶牛为例）
阅读课本P48的流程图
细胞是什么？ 处在什么时期？ 为什么选用该
细胞？ 在体细胞的细胞核移植到受
体卵母细胞之前，为什么必 须先去掉受体卵母细胞的核？ MII期的卵母细胞做受体细胞 ，卵细胞体积大，
式完成细胞培
养的流程图
较，分化程度低的与分化
放入二氧化 碳培养箱中 培养 什么是传 代培养？ 转入培养液 中进行传代 培养
目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内,以保持细
剪碎 胞正常的二倍体核型. 胰蛋白酶 二倍体核型:二倍体生物体细胞染色体组在有丝分裂中期的表 细胞悬液
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
动物胚胎或幼龄动物器官组织
克隆动物绝大部分DNA 你认为用上述体细胞
目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显 微操作去核法。还有人采用其他方法，如梯度离 心、紫外光短时间照射、化学物质处理等。这些 方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况 下,去除细胞核或使卵细胞核DNA变性，从而达到 去核目的。
2、体细胞核移植的技术流程
易于操作，含有促使细胞核表达全能性的物质 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分 用于核移植的供体 和营养条件。将体细胞核移植入去核卵细胞内， 重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞 细胞一般都选用传 细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发
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（3）用于检测有毒物质
（4）用于生理、病理、药理等方面的研究
如何使动物细胞的全能性表达出来?
利用动物细胞核移植技术
动物核移植：
将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已 经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并 发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终 发育为动物个体。分为胚胎细胞核移植和 体细胞核移植（难度高）
原理：细胞增殖
动物细胞培养的过程（见课本）
动物胚胎或幼龄动物的组 织、器官（取材）
剪碎
（分解细胞间的蛋白） 动物组织细胞间隙中含 单个细胞 有一定量蛋白质 加培养液 细胞悬液 原代培养
遗传物质 未改变
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
10代细胞 细胞株
50代细胞
遗传物质 已改变
传代培养
细胞系 无限传代
细胞株和细胞系的区别：
动物细胞培养和核移植技术
问题探讨
植物细胞工程常用的技术手段有哪些？
植物组织培养 植物体细胞杂交
那么动物细胞常用的技 术手段呢？
动物细胞工程的技术手段
动物细胞培养、动物细胞核移植、 动物细胞融合、生产单克隆抗体等
动物细胞工程技术的基础
动物细胞培养
从动物机体中取出相关的组织， 将它分散成单个细胞，然后，放在 适宜的培养基中，让这些细胞生 长和增殖。
1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过 大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。
2.成功率非常低 3、克隆动物食品的安全性问题。
教学反馈
1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细 胞（ ） A．细胞系 B．细胞株 C．原代细胞 D．传代细 胞 2、动物细胞工程技术的基础是
A
A.动物细胞融合 C.胚胎移植
B.单克隆抗体 D.动物细胞培养
D
3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 A.培养基不同 B.动物细胞培养不需要在无菌条 件下进行 C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞 不能D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。
A
4、一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件（
）
①无毒的环境 ②无菌的环境 ③培养基 需要加入血清 ④温度与动物体温相似 ⑤需要O2，不需要CO2 ⑥CO2能调节培养 液PH
A
B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进 行；
C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞 不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞 只能培养成植株。
8.关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是( A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过 渡过程中
)
B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、 无机盐、生长素和动物血清等 C.动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分 泌蛋白 D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白 酶处理
A、①②③④⑤⑥
C、①③④⑤⑥
D
B、 ①②③④
D、 ①②③④⑥
5、动物细胞培养的特点
（
）
①细胞贴壁 ②有丝分裂 ③细胞 分化 ④接触抑制 ⑤减数分裂 ⑥原代培养一般传1－10代
A、①②④⑥ C、①③④⑥
A
B、②③④⑤ D、③④⑤⑥
7.动物细胞培养与植物细胞培养的重要 区别在于---（ ） A.培养基不同；
1、遗传物质 2、培养代数
原代培养与传代培养的区别
原代培养：
分装之前，10代以前
传代培养：
分装后继续培养，10代以后
动物细胞培养的条件
1、无菌、无毒的环境
添加一定量的抗生素 定期更换培养液 培养液和培养器具无菌处 理
动物细胞培养的条件
1、无菌、无毒的环境 2、营养
葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长
出来的物质
3、克隆过程运用的技术手段？ 动物体细胞核移植、动物细胞培养和胚胎移植 4、多利的大部分性状与谁一样？
白面绵羊
高度分化的体细胞核具有全能性 5、结论？
克隆动物的研究意义
1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.改良动物品种 3.作为异种移植的供体 4.保护濒危动物
体细胞核移植技术存在的问题
4、动物细胞培养能否像绿色植物组织 培养那样最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞 数目增多，而不能发育成个体
5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？
能
6、动物细胞培养过程中特别要注意什么？
注意时间的控制
7、能够用胃蛋白酶代替胰 蛋白酶吗？为什么？
不能，因为两者的最适PH不同， 而正常组织细胞的生存环境与胰蛋 白酶的最适PH较接近
（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中 的培养基成分有 动物血清 ________________ 等。在此瓶中培养一段时间后，有许 多细胞衰老死亡，这是培养到第 10 原代培养 代，到这时的培养称为__ 。 （4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶 中，用 胰蛋白酶 处理，然后配置 成 细胞悬液 ，再分装。 `
因子、动物血清、血浆等
补充合成培养基中 缺乏的物质
培养基的不同 是动物细胞培 养和植物组织 培养最重要的 区别
动物细胞培养的条件
1、无菌、无毒的环境 2、营养 3、温度和PH
36.5 +0.5度 PH为7.2-7.4
动物细胞培养的条件
1、无菌、无毒的环境 2、营养 3、温度和PH 4、气体环境：
O2和CO2 （95%空气和5% CO2 ）
1、较植物组培培养基有何独特之处？
独特之处有：1、液体培养基 2、 成分中有动物血清等
2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织 做动物细胞培养材料？
这些组织或器官上的细胞生 命力旺盛，分裂能力强
3、为什么培养前要将组织细胞 分散成单个细胞？
防止细胞间接触抑制现象，使细胞 与培养液更充分接触
植物组织培养 动物细胞培养 原理
培养基性质 培养基特有 成分
植物细胞的全能性
细胞增殖
液体培养基
葡萄糖、动物血清 细胞株、细胞系
固体培养基
蔗糖、植物激素
培养结果
培养目的
植物体或组织
快速繁殖、培育无 病毒植株等
获得细胞 或细胞分泌蛋白
动物细胞培养的应用
（1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体等。 （2）培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植
克隆动物：
用核移植的方法得到的动物。
动物体细胞核移植技术
黑面绵羊去核卵母细胞
白面绵羊乳腺细胞核
细胞核移植
重组细胞
动物细胞培养
早期胚胎
（或早期胚胎培养）
胚胎移植
另一头绵羊的子宫
妊娠、出生
克隆羊多利
1、卵母细胞为减数第二次分裂中期的次级卵 母细胞 细胞比较大，易操作 2、原因？ 细胞质中含有使体细胞核全能性表达
D
9.下列哪项不属于体细胞核移植技术的 应用（
D A.加速家畜遗传改良进程，促进优良
B.保护濒危物种）畜群 Nhomakorabea育C.获得组织器官异体移植的供体
D.大量产生紫杉醇
10、下图是动物细胞培养的基本过程 示意图。请据此回答：
1）容器A中放置的是动物器官或组 织。它一般取自 动物胚胎或幼龄动物 ______________________ 。 （2）容器A中的动物器官或组织首 先要进行的处理是 ，然 剪碎 胰蛋白 后用 酶处理，这是为了 使细胞分散开来，这样做的目的 使细胞与培养液充分接触，便于培养 是 。