链球菌、肠球菌
链球菌属
生物学性状
生物学性状
抗原结构
（1）荚膜多糖抗原
具有型特异性，可将肺炎链球菌分为85个型别。
（2）其他抗原
肺炎链球菌含有M蛋白和C多糖。
C反应蛋白（C reactive protein，CRP）：CRP 不是抗体，但在炎症的活动期（如风湿热） 含量增多。
致病性和免疫性
致病性 条件致病。
致病物质：主要是荚膜的抗吞噬作用。
3．核蛋白抗原
生物学性状
抵抗力
本菌抵抗力不强，加热60℃30min即被杀死。 对一般消毒剂、抗生素如红霉素、霉素、氯霉素、
磺胺等均敏感。
致病物质
致病性与免疫性
②M蛋白（M protein）；
(1)细胞壁成分 ①脂磷壁酸（lipoteichoic acid,LTA）；
③肽聚糖； ④细胞壁受体。
第 一 节 化脓溶血性链球菌
化脓性链球菌（S.pyogenes)： 肺炎链球菌（S.pneumoniae)
化脓性链球菌
化脓性链球菌（S.pyogenes）按传统分类属于A族
溶血性链球菌，是本属细菌的代表种，致病性强，对 人致病的链球菌有90%属此种。
生物学性状
形态与染色
生物学性状
培养和生化反应
第 二 节
（一）甲型溶血性链球菌
其他链球菌
也称草绿色链球菌（Streptococcus viridans）。
因无多糖抗原，故不属于Lancefield血清学分类的任何族。包括 多个种，条件致病性，引起下列两种疾病:
1．龋齿（dental caries） 常由变形链球菌引起。 2 . 亚 急 性 细 菌 性 心 内 膜 炎 ( subacute bacterial endocarditis) 由此菌引起的亚急性心内膜炎占全部病例50%。
链球菌
1.A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。
2.B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。
3.C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：CAMP试验、马尿酸钠试验、6.5%NaCl耐盐试验阴性。
4.D群链球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%NaCl耐盐试验阳性，45度生长。
现归属于肠球菌属。
5.牛链球菌群（马肠链球菌、牛链球菌和马链球菌等）: 胆汁七叶苷试验阳性、6.5%NaCl耐盐试验阴性Lancefield抗原群杆菌肽敏感CAMP试验PYR试验七叶苷A群+———B群—+——C群————D群———+菌属杆菌肽PYR试验 6.5%NaCl生长45度生长链球菌属S/R+——肠球菌属R—++无乳链球菌特性阳球菌，在血琼脂平板上形成灰白色、表面光滑、有乳光、圆形、β溶血的菌落。
部分菌株无β溶血环。
临床意义会造成孕妇产褥期脓毒血症和新生儿脑膜炎的一个重要原因。
它寄生在产妇生殖道，可致婴儿感染发生。
也可引起产后感染、菌血症、心内膜炎、皮肤和软组织感染及脊髓炎。
药敏试验的选药原则：首选青霉素，其次可选择红霉素、氯霉素、克林霉素、氧氟沙星、万古霉素等抗生素。
肺炎链球菌阳球菌，呈矛头状，坦面相对，成双排列，有荚膜，在陈旧培养基或被吞噬细胞吞噬后常呈革兰阴性。
在5-10%环境中生长良好。
在血琼脂平板上形成细小、圆形、中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平、直径0.5-1.5毫米的菌落，周围有草绿色溶血环。
部分菌株与典型菌落不同，不是中央凹陷，而是湿润、透明的黏液型菌落。
在液体培养基中呈浑浊生长，培养时间过长，可因产生自溶酶而使培养基变澄清，管底沉淀。
触媒阴性，分解葡萄糖、乳糖和麦芽糖等多种糖（多数菌株分解菊糖），不分解甘露醇、山梨醇，十二烷基磺酸钠、胆盐溶菌和荚膜肿胀试验阳性，明胶、吲哚试验阴性，对Optochin试验敏感。
为口腔和鼻咽部正常菌群，一般不致病。
肠球菌奈瑟菌卡他莫拉菌
吞饮入胞
逸至
部分
1
男性--急性淋菌性尿道炎
2
女性--淋菌性宫颈炎、尿道炎
3
初生婴儿--淋菌性结膜炎 发展：
4
男性--后尿道炎、前列腺炎、精囊炎、 附睾炎等
5
女性--子宫内膜炎、输卵管炎等
所致疾病
淋病奈瑟菌
淋病奈瑟菌形态特征
菌体：肾形或咖啡豆状。
排列：凹面相对、成对排列
脓液中位于中性粒细胞内。
淋病奈瑟菌
人类是淋病奈瑟菌的唯一天然宿主
传播方式： 成人---性接触 初生婴儿---患病母亲产道感染
致病物质： 菌毛、外膜蛋白、脂多糖、IgA 蛋白酶
致病性
发病机理
淋球菌 ———— 柱状上皮细胞表面 ——— 大量繁殖 —— 细胞裂解 ——— 粘膜下层— 中性粒细胞聚集吞噬 —— 急性炎症反应 — 局部充血水肿 —— 粘膜糜烂、脱落 —— 尿 道脓性分泌物 —— 入尿道腺体和隐窝潜伏。
3
涂片 分离培养（45℃可生长）
4
可疑菌落 药敏试验
5
PYR(+)、6.5%NaCL生长（+） G+C 触酶－
6
胆汁七叶苷试验（+） 血清学鉴定为D群
7
肠球菌属细菌
8
各种生化代谢鉴定到种
9
微生物学检查
氨基糖苷类抗生素高水平耐药肠球菌的检测： （high-level aminoglycoside resistance，HLAR） 培养基：MH琼脂 菌液浓度：0.5麦氏单位 孵育时间：16—18h 药敏纸片：庆大霉素（120ug/片）链霉素（300 ug/片） 结 果：6mm=HLAR，7-9mm不确定，≥10mm敏感 意 义：不可用常规青霉素＋氨基糖苷类抗生素联合治疗
肠球菌、溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基
葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养匹克氏肉汤基础APick’s Broth BaseA用途：用于溶血性链球菌的增菌培养肉浸液肉汤培养基Meat Infusion Broth用途：用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养（GB标准）叠氮钠葡萄糖肉汤Azide Dextrose Broth 用途：用于链球菌的增菌培养乙基紫叠氮钠肉汤用途：用于链球菌的增菌培养KF链球菌琼脂KF Streptococcus Agar 用途：用于链球菌的选择性分离及计数（GB、SN标准）肠球菌琼脂(胆盐－七叶苷－叠氮钠琼脂)Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 用途：用于食品和水中肠球菌的计数CATC琼脂CATC Agar 用途：用于食品和饮料肠球菌的分离培养胆盐七叶苷琼脂Bile Esculin Agar用途：用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养哥伦比亚血琼脂基础Columbia Blood Agar Base 用途：营养非常丰富，用于各种细菌的基础培养基LIM培养基LIM Medium 用途：用于链球菌的分离培养（Japan方法）BETA-SSA琼脂BETA-SSA Agar用途：用于链球菌的选择性分离培养粪肠球菌琼脂Enterococcus faecalis Agar 用途：用于粪肠球菌的选择性分离缓冲蛋白胨水Buffered Peptone Water 用途：用于阪崎杆菌前增菌培养（GB2008标准）胆汁液态培养基Bile broth用途：用于粪链球菌的胆汁耐受试验。
M-肠道菌琼脂M-Enterococcus Agar用途：用于水中或其它物质中肠球菌分离培养和计数（滤膜法或划线法）THB培养基THB Medium 用途：用于链球菌增菌培养PS琼脂PS Agar 用途：用于消化球菌的培养肠球菌肉汤Enterococcus Broth 用途：用于肠球菌增菌培养脑心浸液肉汤（BHI）Brain Heart Infusion Broth 用途：用于细菌的增菌培养脑心浸萃液肉汤Brain Heart Infusion Broth 用途：用于营养苛求细菌的增菌培养脑心浸液琼脂（BHIA）Brain Heart infusion Agar 用途：用于营养苛求细菌的增菌培养Pfizer肠球菌选择性琼脂（PSE琼脂）Pfizer Enterococcus Selective Agar 用途：用于粪链球菌的选择性分离和计数（SN标准）MEI培养基MEI Medium 用途：用于一步滤膜法显色检测或计数水中的肠球菌。
人体正常菌群及常见细菌的分类
人体正常菌群及常见细菌的分类变形杆菌假单胞菌八叠球菌葡萄球菌链球菌韦荣氏球菌革兰氏阴性杆菌（G一杆菌）肠杆菌科弧菌科非发酵菌群罕见发酵型其它一、肠杆菌科：1、埃希菌属（埃希氏一志贺氏菌属）：大肠埃希菌弗格森氏埃希菌赫尔曼埃希菌伤口埃希菌蟑螂埃希菌2、志贺菌属:痢疾志贺菌福氏志贺菌鲍氏志贺菌宋内氏志贺菌3、爱德华氏菌属：迟钝爱德华氏菌保科爱德华氏菌鲶鱼爱德华氏菌4、沙门氏菌属：伤寒沙门氏菌猪霍乱沙门氏菌肠炎沙门氏菌5、枸掾酸杆菌属：弗劳地枸橼酸杆菌异型枸橼酸杆菌无丙二酸盐枸橼酸杆菌丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌生物I群6、肠杆菌属：阴沟肠杆菌产气肠杆菌中间肠杆菌坂崎肠杆菌聚团肠杆菌日勾肠杆菌河生肠杆菌溶解肠杆菌超压肠杆菌泰洛肠杆菌阿氏肠杆菌何氏肠杆菌致癌肠杆菌7、克雷伯菌属：肺炎克雷伯菌臭鼻克雷伯菌鼻硬结克雷伯菌产酸克雷伯菌解乌氨酸克雷伯菌植生克雷伯菌土生克雷伯菌8、变形杆菌属：普通变形杆菌奇异变形杆菌产粘变形杆菌潘氏变形杆菌9、普罗威登斯菌属：产碱普罗威登斯菌斯氏普罗威登斯菌雷氏普罗威登斯菌海氏普罗威登斯菌拉氏普罗威登斯菌10、摩根菌属：$摩氏摩根菌摩氏摩根菌生物I群11、沙雷菌属：粘质沙雷菌液化沙雷菌深红沙雷菌普城沙雷菌芳香沙雷菌无花果沙雷菌居泉沙雷菌嗜昆虫沙雷菌12、耶尔森菌属：小肠结肠炎耶氏菌弗氏耶氏菌中间型耶氏菌克氏耶氏菌假结膜耶氏菌鼠疫耶氏菌 拉氏耶氏菌 毛氏耶氏菌 白氏耶氏菌 罗氏耶氏菌 奥氏耶氏菌 13、其它： 哈夫尼亚菌属 西地西菌属 爱文氏菌属勒克氏菌属勒米诺氏菌属 兰恩氏菌属 塔特姆氏菌属 致病杆菌属 克卢瓦氏菌属 克泽氏菌属二、弧菌科：$1、弧菌属：霍乱弧菌麦氏弧菌拟态弧菌霍氏弧菌海鱼弧菌河弧菌弗氏弧菌创伤弧菌 溶藻性弧菌副溶血性弧菌2、气单胞菌属：嗜水气单胞菌 温和气单胞菌 豚鼠气单胞菌 脆弱气单胞菌 杀鲑气单胞菌 3、邻单胞菌：类志贺单胞菌4、发光杆菌属：对人无致病性)三、非发酵菌群：指不发酵糖类、专性需氧、不产生芽胞的革兰氏阴性杆菌荧光假单胞菌恶臭假单胞菌产碱假单胞菌假产碱假单胞菌 曼多辛假假单胞菌鼻疽假单胞菌 假鼻疽假单胞菌 皮氏假单胞菌 睾丸酮假单胞菌 泡囊假单胞菌#V 群：嗜麦芽假单胞菌未定：嗜中温假单胞菌 少动假单胞菌 腐败假单胞菌 Ve 群假单胞菌 2、不动杆菌属：醋酸钙不动杆菌鲍曼不动杆菌溶血不动杆菌琼氏不动杆菌洛菲氏不动杆菌 约翰逊氏不动杆菌 3、产碱杆菌属：粪产碱杆菌 脱硝产碱杆菌 芳香产碱杆菌 4、无色杆菌属：木糖氧化无色杆菌 无色杆菌Vd 群 5、黄杆菌及相关菌：脑膜炎败血性黄杆菌黄杆菌Ilb 群短小黄杆菌芳香黄杆菌多食黄杆菌类黄杆菌6、莫拉菌属及相关菌：腔隙莫拉菌非液化莫拉菌奥斯陆莫拉菌苯丙酮酸莫拉菌亚特兰大莫拉菌1、假单胞菌属：I 群：铜绿假单胞菌 斯氏假单胞菌 II 群：洋葱假单胞菌 III 群：食酸假单胞菌 IV 群：微小假单胞菌尿道莫拉菌7、金氏杆菌属：金氏金氏杆菌脱硝金氏杆菌产吲哚金氏杆菌[8、未命名的非发酵菌：IVe 一群IVc — 2 群EF—4b 群EO — 2 群9、侵蚀艾肯氏菌：10、土壤杆菌属：¥四、其它革兰氏阴性杆菌1、嗜血杆菌属：流感杆菌副流感杆菌埃及嗜血杆菌杜克嗜血杆菌胸膜肺炎嗜血杆菌溶血杆菌副溶血嗜血杆菌嗜沫嗜血杆菌副嗜沫嗜血杆菌副嗜沫溶血嗜血杆菌2、鲍特氏菌属:百日咳杆菌副百日咳杆菌支气管败血杆菌3.布鲁氏菌属：|4、弯曲菌属：胎儿弯曲菌空肠弯曲菌大肠弯曲菌痰液弯曲菌粪弯曲菌简洁弯曲菌幽门弯曲菌同性恋弯曲菌耐氧弯曲菌芬奈尔弯曲菌猪弯曲菌5、军团菌属：6、阴道加德纳尔氏菌7、链杆菌属8、士拉热弗朗西氏菌2五、罕见发酵型革兰氏阴性杆菌放线杆菌属碳酸噬胞菌属心杆菌属紫色色杆菌巴斯德氏菌属EF—4群和HB—5群革兰氏阳性杆菌（G+杆菌）________________________________________________________________________ II I I , I ,白喉棒状杆菌~~ 产单核李斯特菌》溃疡棒状杆菌其它假结核棒状杆菌干燥棒状杆菌——化脓棒状杆菌溶血棒状杆菌其它厌氧菌G+厌氧球菌消化球菌属消化链球菌属瘤胃球菌属八叠球菌属粪球菌属G一厌氧球菌1 ,G一厌氧杆菌G+无芽胞厌氧杆菌,1 ,梭菌属1韦荣氏球菌属| 拟杆菌属|双岐杆菌属| 艰难梭菌氨基酸球菌属梭杆菌属真杆菌属肉毒梭菌巨大球菌属| 纤毛菌属丙酸杆菌属破伤风梭菌|放线菌属 | 其它革兰氏阳性球菌（G+球菌）葡萄球菌属微球菌属凝固酶金黄色葡萄球菌中间葡萄球菌西氏葡萄球菌产色葡萄球菌模仿葡萄球菌肉葡萄球菌！木糖葡萄球菌孔氏葡萄球菌阿米塔葡萄球菌马葡萄球菌柯氏葡萄球菌藤黄微球菌莱拉微球菌易变微球菌玫瑰微球菌活动微球菌克氏微球菌西宫微球菌不动微球菌盐生微球菌链球菌属肺炎球菌肠球菌属耳葡萄球菌松鼠葡萄球菌缓慢葡萄球菌表皮葡萄球菌头状葡萄球菌人型葡萄球菌溶血葡萄球菌华纳氏葡萄球菌解酪葡萄球菌解糖葡萄球菌腐生葡萄球菌革兰氏阴性球菌（G一球菌）奈瑟菌属布兰汉菌属脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌其它。
球菌
SPA抗吞噬的原理
吞噬细胞 Fc 受体 SPA IgG 细菌
体外作用：
协同凝集试验（coagglutination） 广泛应用于多种微生物抗原检测。
(2)荚膜多糖： 有利于细菌粘附
(3)多糖抗原： 存在于细胞壁，有群特异性。
4.分类
金黄色葡萄球菌（S. aureus） 腐生葡萄球菌（S. saprophyticus）
为毒素性食物中毒，随着毒素的消失1-2天痊愈。
(5)表皮剥脱毒素（exfoliative toxin）
—引起金黄色烫伤样皮肤综合征,又称剥脱性皮炎 （staphylococcal scalded skin syndrome, SSSS）
(6)毒性休克综合征毒素-1（TSST-1）
—引起多器官系统功能紊乱或毒性休克综合征 （TSS）
第9章
球菌（coccus）
对人类有致病性的球菌包括以下四个菌属中 的一些球菌： ① ② ③ ④ 葡萄球菌属 链球菌属 肠球菌属 奈瑟菌属
G＋球菌: 葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、肠球菌 G－球菌: 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌
化脓性球菌（pyogenic coccus）： 引起机体化脓性炎症的球菌。
第二节 链球菌属
（Streptococcus）
链球肺炎链球菌 主要引起人类的化脓性炎症
1)据色素、生化反应 表皮葡萄球菌（S. epidermidis）
三种葡萄球菌的主要性状比较
性状 菌落色素 金黄色葡萄球菌 金黄色 表皮葡萄球菌 白色 腐生葡萄球菌 白色或柠檬色
发酵甘露醇
血浆凝固酶 α溶血素 耐热核酸酶 SPA 致病性
+
+ + +
+
—
人体正常菌群表 (1)
念珠菌属
鼻和鼻咽
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、类白喉杆菌、链球菌属、莫拉菌属、奈瑟菌属、嗜血杆菌属
普雷沃菌属、厌氧球菌、梭菌属
结膜
凝固酶阴性葡萄球菌（表皮葡萄球菌）、草绿色链球菌（少量）、奈瑟菌属（少量）、类白喉杆菌、嗜血杆菌属（少量）
念珠菌属（少量）
参考文献
1.Mathon CR,LehmanDC, Manuselis G .Textbook of Diagnostic Microbiology.5thed.2014.
2.Tille PM . Bailey&Scott’s Diagnostic Microbiology. 13thed .2013.
3.BrooksGF, Carroll KC, Butel JS,et al.Jawetz, Melnick, & Adelberg's Medical Microbiology. 26thed.2012.
4.Murray PR, Rosenthal KS, Pfaller MA.Medical microbiology. 7th ed .2012.
人体各部位常见正常菌群表
解剖部位
微生物需氧菌Biblioteka 厌氧菌真菌皮肤
微球菌属、凝固酶阴性葡萄球菌（表皮葡萄球菌）、金黄色葡萄球菌（少量）、草绿色链球菌、气球菌属、类白喉杆菌、芽孢杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属
梭菌属、丙酸杆菌属（痤疮丙酸杆菌）、消化链球菌属、拟杆菌属
念珠菌属、马拉色霉菌属
口腔和口咽
凝固酶阴性葡萄球菌（表皮葡萄球菌）、金黄色葡萄球菌、链球菌属、肠球菌属、口腔球菌、非致病性奈瑟菌、卡他莫拉菌、类白喉杆菌、艾肯菌属、嗜血杆菌属、肠杆菌科、假单菌属、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌、二氧化碳嗜纤维菌属、弯曲杆菌属、分枝杆菌属、支原体属、密螺旋体属、
肠球菌介绍
肠球菌-病菌简介肠球菌肠球菌为院内感染的重要病原菌，不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心骨膜炎和脑膜炎，由于其固有耐药性，所致感染治疗困难。
本文就肠球菌的生物学特性、所致感染的临床表现、肠球菌在院内感染中的地位、致病性、耐药性及所致感染的治疗作一综述。
肠球菌（Enterococcus）属链球菌科，是人类和动物肠道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分离的混合菌丝中发现，既往认为肠球菌是对人类无害的共栖菌，但近年研究已证实了肠球菌的致菌力。
在需氧革兰阳性球菌中，它是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌[1]，肠球菌亦可引起院外感染。
肠球菌不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等[2]。
肠球菌-生物学特性及分类肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。
本菌对营养要求肠球菌较高，在含有血清的培养基上生长良好。
在血平板上经37℃培养18小时后，可形成灰白色、不透明、表面光滑、直径0.5～1mm大小的圆形菌落，不同的菌株表现为不同的溶血现象。
与同科链球菌的显著不同在于本菌在生化反应上能耐受高盐和胆汁培养基，并对许多抗菌药物表现为固有耐药。
根据其利用糖类的特征可将肠球菌分为3组[3，4]：第一组以鸟肠球菌（E.avium）为代表；第二组以粪肠球菌(E.faecalis)等；包括尿肠球菌(E.faecium)等；第三组以坚韧肠球菌(E.durans)为代表。
其中对人类致病者主要为粪肠球菌和尿肠球菌[3，5]。
在临床分离菌中粪肠球菌占85%～95%、尿肠球菌占5%～10%，其余少数为坚韧肠球菌和其他肠球菌。
肠球菌-临床表现尿路感染为粪肠球菌所致感染中最为常见的，绝大部分为院内感染。
据报道16%的院内尿路感染由肠球菌引起，肠球菌仅次于大肠杆菌居第2位[1]。
其发生多与留置导尿管、其他器械操作和尿路结构异常有关[3]。
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链球菌及肠球菌的鉴定
目的要求：
1.掌握链球菌属及肠球菌属的分离培 养与鉴定方法。
2.掌握链球菌及链球菌的菌落特点、 菌体形态及染色性。
步骤与方法
1、观察菌落 将菌株接种于血琼脂平板上，35℃孵育
18-24h后观察菌落，记录菌落大小、形态、 表面、边缘、透明及颜色、有无溶血及特 点。将肺炎链球菌继续孵育2-3天看菌落中 心有无凹陷呈“脐状”。
培养特性：营养要
求高，兼性厌氧。初 次分离需提供5%-10% 的CO2。 18-24h后血平板上形 成灰白色、圆形、针 尖样的菌落。菌落周 围有草绿色溶血环。
肺炎链球菌 S. pneumoniae
培养特性：培养48h
后，菌落有自溶现象， 菌落的中心会出现凹 陷，像“肚脐”称脐 状凹陷。
肺炎链球菌 S. pneumoniae
链球菌的溶血性
β溶血性链球菌
2、形态观察 涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下
细菌染色性、大小、形态、排列及荚 膜。
肺炎链球菌 S. pneumoniae
形态与染色：G+球菌,矛头
状 ,成双排列，宽端相对 ，尖端向外,有荚膜
肺炎链球菌革兰染色有荚膜
肺炎链球菌荚膜染色特点
肺炎链球菌 S. pneumoniae
方法：先将病人血清56℃30min灭活， 然后用生理盐水做1：15稀释。在反应板个
空内分别滴加稀释血清、阳性和阴性对照 血清1滴（50ul），再于各孔内滴加1滴溶血 素“O”溶液，轻摇1min混匀，最后在各孔 内分别滴加1滴ASO胶乳试剂，轻摇3min后 观察结果。
结果判断：出现凝集为阳性、不凝集为阴
CAMP试验
原理：B群溶血性链球菌能产生CAMP因子， 该物质可促进金黄色葡萄球菌β溶血素的活性，故 在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成 箭头状透明溶血区。
方法：在羊血琼脂平板上，用金黄色葡萄球菌 划种一条横线，在将被检菌距金葡菌接种线3mm 处直角接种一短线，35℃培养18-24h观察结果。同 时设阳性对照和阴性对照。
杆菌肽敏感试验
原理：A群化脓性链球菌对杆菌肽几乎 100%敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐 药。
方法：挑取被检菌落，密涂于血琼脂平 板上，将杆菌肽纸片（0.04U/片）贴于平板 上，35℃孵育18-24h观察。
结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为A 群化脓性链球菌。
B
化脓性链球菌杆菌肽阳性
B群无乳链球菌
B、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌血 清肉汤培养液1ml分别加入2支试管，再于各 管中加入去氧胆酸钠溶液0.1ml，摇匀后置 于37℃水浴30min后观察结果。
结果判断：平板法若菌落消失为阳性，
不消失为阴性，试管法若液体由浑浊变透 明为阳性，不透明为阴性，此试验是鉴别 甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重要试 验，后者阳性。
原理：Lancefield根据链球菌细胞壁中多 糖抗原的不同，将链球菌分为20多个群，对 人类治病的多数为A群，偶见B、C、D、F、 G群。用这6群抗原的兔免疫血清分别致敏 的乳胶颗粒，与具有相应群特异性抗原的 链球菌发生间接乳胶凝集反应，可在10min 内对链球菌作出主要的分群鉴定。
方法：挑取菌落2-3个转种于含有提取酶的 试管中，使其成为乳化均匀的菌悬液，置 37℃水浴15min。在卡片的相应区域滴加一 滴A、B、C、D、F、G致敏胶乳，再加入 处理后的菌悬液一滴分别与胶乳混匀，同
方法：取待检菌纯培养物接种于马尿酸
钠培养基， 35℃培养48h，3000r/min离心 30min,吸取上清液0.8ml于另一试管，加入 FeCl30.2ml，立即混匀，10-15min观察结果。
结果：出现恒定沉淀物为阳性。
3、生化反应 1）触酶试验： 链球菌属为阴性。
（6）血清学试验（链球菌快速分群乳胶凝集 试验）
痰标本肺炎链球菌革兰染色
A群(化脓性)链球菌
生物学性状
1. 形态与染色 球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性(G＋)， 无芽胞，无鞭毛，透明质酸的荚膜。
化脓性链球菌
A群(化脓性)链球菌
生物学性状
2. 培养特性
营养要求高：血平板或含血清培养基； 液体培养为沉淀生长； 血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同 菌株溶血不一， 多数有透明溶血环(b溶血现象)。
主要生化反应
optochin试验: 含 5μg optochin 纸片 贴于 涂布有待测菌 的平板上35℃孵育过
夜，抑菌圈大于 14mm即为敏感。
甲型溶血链球菌(R)
肺炎链球菌(S)
胆汁溶菌试验
原理：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自 溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解而 自溶。
方法：A、平板法：在血琼脂平板上选择 出待检的草绿色溶血的菌落，观察记录菌 落特点，然后于菌落上加一滴去氧胆酸钠 溶液，35℃孵育15-30min观察结果。
时在卡片相应区域加一滴控制液与任意一
滴致敏乳胶混匀，作为阳性对照，轻摇卡 片，观察结果。
结果判断：在2-10min内发生胶乳凝集，为 阳性。待检菌与哪群致敏胶乳凝集就表明 该菌为相应血清群的链球菌。
Lancefield血清凝集分型
（7）胶乳凝集试验：
原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）高 滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和 后，失去了正常水平量的抗体，多余抗“O” 抗体与ASO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀 的凝集颗粒。
结果报告：
在两种细菌划线的交接处出现箭头型透 明溶血区为阳性，否则为阴性，此试验为B 群链球菌与其他链球菌鉴别的重要试验， 无乳链球菌为阳性，其他为阴性。
无乳链球菌CAMP试验阳性
CAMP阳性
马尿酸水解试验
原理：B群链球菌有马尿酸水解酶，可 水解马尿酸为苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可 与FeCl3，结合形成苯甲酸铁沉淀。
性。ASO阳性可认为患者近期受溶血性链球 菌感染过，可辅助诊断风湿热、肾小球肾 炎等疾病。
肠球菌属
步骤和方法
1、菌落观察: 将菌株接种于血琼
脂平板上，35℃孵育 18-24h后观察菌落， 肠球菌在血琼脂平板 上呈灰白色、不透明、 表面光滑的小菌落， 菌落周围可出现α溶 血环，也可无溶血环。
2、形态观察 涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细