细菌鉴定的基本思路(全)
细菌鉴定的总体思路59页PPT
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
1、不要轻言放弃，否则对不起自己。
2、要冒一次险!整个生命就是一场冒险。走得最远的人，常是愿意 去做，并愿意去冒险的人。“稳妥”之船，从未能从岸边走远。-戴尔．卡耐基。
梦 境பைடு நூலகம்
3、人生就像一杯没有加糖的咖啡，喝起来是苦涩的，回味起来却有 久久不会退去的余香。
细菌鉴定的总体思路4、守业的最好办法就是不断的发展。 5、当爱不能完美，我宁愿选择无悔，不管来生多么美丽，我不愿失 去今生对你的记忆，我不求天长地久的美景，我只要生生世世的轮 回里有你。
细菌鉴定的总体思路
脲酶
-
*伤寒沙门菌不产气
**鸡沙门菌和雏沙门菌无动力
吲哚 甲基红 VP 枸橼酸盐 丙二酸盐 KCN 明胶酶 赖氨酸 动力
+ +/+*** +**
***甲型副伤寒沙门菌赖氨酸、硫化氢均为阴性。
枸橼酸杆菌属的鉴别
菌种
硫化氢 吲哚 侧金盏花醇 丙二酸盐
弗劳地枸橼杆菌
+
-
-
-/+
异型枸橼酸杆菌
-
+
+
+
丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌
➢ 生化反应：触酶+，氧化酶-，硝还+，靛基质-，枸盐-， 明胶酶-，脲酶不定，不分解糖类，可形成类CAMP样 反应。
革兰阴性双球菌
氧化酶+
葡萄糖 麦芽糖 硝还 DNA酶
脑膜炎 双球菌
+ + -
卡他布 兰汉菌
+ +
淋病 奈瑟菌
+ -
革兰阴性杆菌之—嗜血杆菌
嗜血杆菌为G-小杆菌，在巧克力平板上生长灰色、透 明的小菌落，似露滴状，有时呈球杆菌，有时呈丝状， 一般情况下在血平板上不生长。
灰黄色菌落 可能为嗜麦芽窄食假单胞菌 同氧化酶+ 生化试验。
革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验
2、氧化酶+
全套生化 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼 酸盐、硝酸盐、七叶苷、乙酰胺。
可疑气单胞菌 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、 枸 橼 酸 盐 、 硝 酸 盐 、 七 叶 苷 、 赖 氨 酸 、 蔗 糖 、 VP （25℃）。
鸟氨酸脱羧酶 + -
3种普罗威登斯菌的生化鉴别
细菌的鉴定方法
细菌的鉴定方法细菌是一类微小的单细胞生物，广泛存在于自然界中的各种环境中，对人类和其他生物有着重要的影响。
鉴定细菌的方法对于研究细菌的特性、功能和致病机制至关重要。
本文将介绍几种常用的细菌鉴定方法。
一、形态学鉴定法形态学鉴定法是最常用的细菌鉴定方法之一。
通过观察细菌的形态、大小、颜色、聚集方式等特征，可以初步判断细菌的属种。
典型的形态学鉴定方法包括显微镜观察、染色技术和培养基选择等。
显微镜观察可以帮助观察细菌的形态结构，染色技术如革兰氏染色、抗酸染色则可以帮助区分细菌的革兰氏阴性和阳性。
此外，不同的培养基选择也可以提供有关菌落形态、颜色和营养要求等信息。
二、生理生化鉴定法生理生化鉴定法是通过检测细菌的代谢功能和生化特性来进行鉴定。
常用的生理生化鉴定方法包括氧需求性试验、酶活性检测、代谢产物检测等。
氧需求性试验可以判断细菌的需氧性，酶活性检测则可以通过检测细菌是否产生特定的酶来鉴定其种属。
代谢产物检测可以通过检测细菌的代谢产物如产气、产酸和产色等来进行鉴定。
三、分子生物学鉴定法分子生物学鉴定法是近年来发展起来的一种高效、准确的细菌鉴定方法。
通过提取细菌的DNA，利用PCR、序列分析等技术进行鉴定。
例如，16S rDNA序列分析能够提供细菌的高度保守的序列信息，通过与数据库比对可以确定细菌的种属和亲缘关系。
此外，还有基于DNA指纹图谱的方法如RAPD、AFLP等可以用于快速鉴定细菌。
四、免疫学鉴定法免疫学鉴定法是通过检测细菌与抗原或抗体的特异性反应来进行鉴定。
常用的免疫学鉴定方法包括血清学试验、免疫电泳等。
血清学试验可以通过检测细菌与抗体的凝集、沉淀或荧光反应来进行鉴定。
免疫电泳则可以通过检测细菌的特异性抗原蛋白质条带模式来进行鉴定。
细菌的鉴定方法包括形态学鉴定法、生理生化鉴定法、分子生物学鉴定法和免疫学鉴定法等。
不同的鉴定方法可以相互印证，提高鉴定结果的准确性。
在实际应用中，可以根据需要选择合适的鉴定方法，结合多种方法进行细菌的鉴定，以得到准确可靠的结果。
鉴定细菌的方法是
鉴定细菌的方法是
有许多方法可以鉴定细菌，下面列举了几种常见的方法：
1. 形态学观察：通过显微镜观察细菌的形状、大小、结构等特征，例如革兰氏染色法可以帮助区分细菌的细胞壁结构。
2. 生理生化特性：通过观察细菌在特定条件下的代谢活性、酶活性、产生的代谢产物等来鉴定细菌种类。
例如碳源利用试验、酸碱生成试验和氧耗试验等。
3. 分子生物学方法：利用PCR（聚合酶链式反应）和DNA测序技术，通过检测细菌的特定基因序列来鉴定细菌种类，例如16S rRNA基因测序。
4. 免疫学方法：利用抗体与细菌抗原的特异性结合来确定细菌的种属或血清型。
例如免疫荧光染色和酶联免疫吸附试验等。
5. 质谱法：利用质谱仪来分析细菌代谢产物或特定蛋白质的质量-电荷比，从而鉴定细菌种类。
需要指出的是，不同的鉴定方法在操作上有所差异，选择适合的鉴定方法要根据实验室设备和技术条件、需鉴定的细菌种类等因素综合考虑。
细菌的培养及鉴定思路
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
固定的目的：
? 使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固；
? 可改变菌体对染料的通透性； ? 加热固定可杀死细菌，比较安全。
革兰染色程序
初染
媒染
脱色
复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1' 碘液 1' 95%乙醇 30”复红1'
冲洗 滤纸干燥 油镜观察
龄、门诊号 /住院号、病床号、标本类型、容器、 标识、检验目的等。
? 所有拒收或退回标本均应在登记本上登 记，登记内容包括：病人姓名、病区、床号
送检医师、送检项目、拒收 (退回 )原因、拒收 时间、经手人等
痰标本涂片染色低倍镜下分类
分级 白细胞（个） 上皮细胞（个）
A
>25
<10
B
>25
<25
C
<10
显微镜下的杆菌
革兰染色注意事项
? 标本涂片不宜太厚 ? 固定不宜过热 ? 脱色不宜过度 ? 选用培养18--24小时菌龄的细菌为宜
抗酸染色
? 原理：分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中
主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染 色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性 乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红 的颜色,达到染色目的。
>25
A、B两种情况的痰适合做培养，C不合格，应重新留标 本
常用的培养基种类和用途
? 哥伦比亚血平板 —营养要求高的细菌 ? 巧克力平板 —含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、
脑膜炎球菌和淋球菌用 ? 中国蓝/麦康凯平板 —G-杆菌用 ? SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用 ? M-H 平板—细菌药敏用 ? TCBS 平板—弧菌科细菌用
(完整word版)细菌的生理生化鉴定方法
方法2.3。
5 细菌的生理生化鉴定１、形态学观察采用插片法、埋片法, 对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观察。
用革兰氏染色进行油镜观察。
① 革兰氏染色溶液和试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95％乙醇，番红复染液等.试验步骤：（1) 涂片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不易过厚）、干燥和固定。
(2) 初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位1～２min，用水冲洗至流出水无色。
（3）媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖１min，倾去碘液，水洗至流出水无色。
(4）脱色：在上述涂片上流加95％乙醇溶液（一般20~30s）,当脱色至流出液无色时立即用水洗去乙醇。
（5）复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min,水洗,用吸水纸吸去残水晾干。
(6）镜检：用油镜观察。
②芽孢染色（1）制片:按常规方法涂片、干燥及固定。
（2）加热染色：向载玻片滴加数滴5％孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持５min,加热时应注意补充染液，切勿让涂片干涸.脱色：待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色.(3）复染：用0.5％番红水溶液复染2min。
(4) 水洗:用缓流自来水冲洗至无色。
(5) 镜检：晾干载玻片后油镜镜检。
③鞭毛染色(硝酸银染色法）(1) 载玻片准备:将载玻片置于含洗衣粉或洗涤剂的水中煮沸 20min，然后用清水充分洗净,再置于 95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。
(2) 菌液制备：用接种环挑取菌落边缘菌体，悬浮于1～2mL无菌水中制成菌悬液，不能剧烈震荡。
（3) 制片:取一滴菌悬液滴到载玻片一侧，倾斜玻片,使菌悬液流向另一边,用吸水纸吸取多余的菌悬液,自然干燥。
（4）染色：滴加硝酸银染色A液覆盖3～5min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，期间可用微火加热，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。
三基考试问答题
1 ．计算： (3)2 ．计算： (3)3 ．请简述实验室生物安全管理措施。
(4)第二章一般检验 (4)1 ．手工显微镜计数红细胞已不常用，但为什么仍不能被淘汰？ (4)2 ．血沉测定的方法有： (4)3 ．白细胞分类计数质量控制中应注意哪些影响因素？ (4)4 ．嗜酸性粒细胞升高的临床意义是什么？ (4)5 ．电阻抗法血液分析仪进行血细胞计数的检测原理是什么？ (5)6 ．血红蛋白测定的主要方法及其方法学评价。
(5)7 ．网织红细胞检测的临床意义是什么？ (5)8 ．血沉变化的临床意义： (6)9 ．试述中性粒细胞病理变化的临床意义。
(6)10 ，为什么血细胞分析仪对白细胞的分类结果只能作为筛检试验？ (6)11 ．尿液常规分析的临床价值是： (7)12 ．粪便隐血检查对消化道出血的诊断有重要价值。
(7)13 ．试述尿HCG金标法测试原理。
(7)第三章血液学检验 (8)1 简述血细胞发育过程中的形态演变规律 (8)2 简述再障的骨髓病理学特点。
(8)3 ．再障的诊断标准是什么？ (8)4 ．简述溶血性贫血的共性改变． (8)5 ，慢性粒细胞白血病与骨髓纤维化的鉴别是： (8)6 简述凝血过程的三个阶段。
(9)7 如何早期诊断DIC 。
(9)8 ．简述骨髓检查的适应证。
(10)9 ．红白血病与巨幼细胞贫血的鉴别如下： (10)10 ．血小板在止血过程中的作用： (10)11 . 何为急性白血病M4型？其亚型如何划分？ (10)12 何为造血干细胞？它具备哪些特征？ (11)13 试举例说明急性自血病的MICM 分型。
(11)14 ．血栓形成的机制是： (11)15 ．原发性纤溶亢进与DIC 继发性纤溶的鉴别如下： (11)16 ．试举例说明为什么分析骨髓象必须常规分析血常规。
(12)17 ．类白血病反应与白血病鉴别如下： (12)18列举5 例引起外周血全血细胞减少的血液病及主要的鉴别指征？ (13)19 ，传染性单核细胞增多症、传染性淋巴细胞增多症和急性淋巴细胞自血病有何不同？ (13)20 请分别描述病态造血时粒、红、巨气系细胞有何变化？ (13)第四章输血 (14)1 输注全血有哪些缺点？ (14)2 ABO 定型实验的注意事项： (14)3 ．抗球蛋白配血法的操作步骤是： (14)1 ．简述血糖的来源与去路。
细菌鉴定的方法范文
细菌鉴定的方法范文细菌鉴定是一种通过对细菌进行分析和检测，确定其种类和性质的方法。
这项工作对于疾病的防治、环境监测和食品安全具有重要意义。
下面将介绍一些常用的细菌鉴定方法。
1.宏观形态观察：这是最简单的一种方法，通过肉眼观察细菌的形态和特征，如颜色、形状、大小等等。
例如，大肠杆菌是革兰氏阴性杆菌，形状为短杆状。
2.静态染色法：常用的染色方法有革兰氏染色和抗酸染色。
革兰氏染色可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性。
抗酸染色主要用于鉴定结核杆菌等抗酸菌。
3.内容染色法：包括草绿病毒染色、亚甲蓝抗体染色等。
草绿病毒染色主要用于发现弓形虫等内寄生单细胞病毒。
亚甲蓝抗体染色主要用于鉴定豌豆疫霉菌。
4.结构染色法：主要是通过染色剂染色来鉴定细菌细胞的结构，如纤毛、鞭毛、芽孢、囊壳等。
例如，芽孢染色可以用来鉴定芽孢细菌。
5.生理生化特性检测：通过研究细菌的生理生化特性来鉴定细菌。
包括对菌落形态、产生酶类和代谢产物的检测。
例如，通过测定氧化/发酵代谢特点、生长适宜温度和环境pH值等特性，可以鉴定一些肠道细菌。
6.免疫学方法：免疫学方法主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫电泳等，通过检测细菌产生的特异抗原或细菌抗原抗体的存在与否，来鉴定细菌种类。
7.分子生物学方法：这是近年来发展起来的一种新的细菌鉴定方法。
它利用PCR技术、DNA测序等分子生物学方法，可以准确快速地鉴定细菌种类。
例如，16SrRNA基因测序可以精确鉴定不同细菌的亲缘关系。
8.生物学方法：生物学方法主要包括生长特性、营养要求等的检测。
例如，黄曲霉菌需要45℃温度下才能生长，这一特征可以用来鉴定黄曲霉菌。
以上所述的方法只是细菌鉴定中的一部分，随着科学技术的不断发展，细菌鉴定方法也在不断更新和完善。
细菌鉴定的准确与否对于相关研究和应用都有着重要的意义，因此，进行鉴定时需要综合利用多种方法，以提高鉴定的准确性。
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细菌鉴定
一、标本的处理：
1、先按标准操作规程（SOP）对标本进行接种（一般种普
通血平板和选择性麦康凯平板；真菌-沙保弱；链球菌-巧克
力平板，CO2温箱；结核菌-罗氏;粪-SS）。
一般细菌置于35℃培养24h；真菌置于30℃培养
2、后将标本涂片，进行革兰染色，判断是革兰阴性或阳性，杆状，球状，短杆，球杆及弧状。
二、根据菌落形态，颜色，光滑与否，边缘，大小，是否有溶血环等初步判断所属菌属。
三、生化鉴定（最主要的依据）
定向实验(最重要两实验)
API微生物鉴定系统
生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温度、pH、氧气、渗透压）、生化指标（唯一碳氮源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应进行分析，并将结果转化成软件可以识别的数据，进
行聚类分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最终对未知
菌进行鉴定的一种技术。
生物梅里埃API试剂类型
•API 20E革兰氏阴性杆菌鉴定
•API 20NE非发酵菌鉴定
•API STAPH葡萄球菌及微球菌常用5种
•API STREP链球菌鉴定
•API CORYNE棒状杆菌
•API 20C AUX酵母菌
•API 20A厌氧菌
•API LISTERIA李斯特菌•API CAMPY弯曲菌属
•API CH芽胞杆菌/乳酸杆菌
三、药敏试验（辅助鉴定及指导临床用药）
最常用的纸片扩散法即K-B法。
原理：该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试
菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的
菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑
菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测
试菌的MIC呈负相关。
结果分为敏感S、耐药R及中介I。
利用某些菌对某些药物天然耐药进而辅助鉴定结果正确与否,如
嗜麦芽窄食单胞菌对亚胺培南(碳青霉烯类)天然耐药。