肿瘤研究的分子生物学数据库资源PPT课件
their Expression）协议来源的序列链接 –全长MGC（Mammalian Gene Collection）克隆链接 – Gene Ontology功能分类
Genes工具列表
– Gene finder：按照特定标准查找单个或多个基因的工具
– Gene Ontology Browser：通过分子功能、生物学过程和细 胞组分对人和小鼠的基因分类
– 酶切位点3'端的序列出现的拷贝数就代表了基因表达活 性的高低
选择细胞
流程图
磁珠分离RNA并合成cDNA 锚定内切酶（NlaIII）酶切 NlaIII3’端序列为标签，再用BsmF1酶切后释放标签 将标签相互连接并连入质粒载体 测序并计算标签的拷贝数
计算机分析
查询方式
– ...by tag – ...by sequence – ...by library – ...by gene name
方法
– RNA反转录为cDNA，同时用生物素标记cDNA末端 – 随后用一种限制性内切酶（NlaIII (CATG)）切割cDNA
分离酶切位点3‘端的序列 – 另一种酶再切割cDNA片段，去除带生物素的3’端 – 用PCR扩增每一个标签片段，将30-50个不同的标签片
段连成一个单一的DNA分子 – 最后克隆并测序这些分子
–cDNArential Gene Expression Displa SAGEmap xProfiler：xProfil disease
单基因遗传病的站点
– 介绍多个系统的遗传病，可下载PDF文件。 – 图示遗传病相关基因在染色体的定位 – 与相关数据库相互链接
Genes and disease 页面
染色体的图谱
SKY—Spectral Karyotyping
– 多色标记的探针与染色体杂交
– Nucleotide BLAST：通过CGAP界面，查找给定核苷酸序 列的代表基因
– Lists of Candidate, Validated, and Confirmed SNPs：包含单 核苷酸多态性的基因信息
– CGAP SNP Index：通过基因名称、符号和GenBank序列 号查找代表SNPs
– SNP Gene Viewer：将人类SNPs定位于参考序列和MGC序 列，预测蛋白编码的变化
Gene info
Chromosomes
Mitelman Database of Chromosome Aberrations in Cancer （肿瘤染色体畸变数据库）
– Recurrent Chromosome Aberrations Searcher用来查 找重复出现的染色体畸变
肿瘤研究的分子生物学数据库资源
一篇论文的题目
Zhu F, Zykova TA, Kang BS, Wang Z, Ebeling MC, Abe Y, Ma WY, Bode AM, Dong Z.
Bidirectional signals transduced by TOPKERK interaction increase tumorigenesis of HCT116 colorectal cancer cells.
CGH比较工具
– 输入染色体片段和得失，如：7[gain]或 3p[loss].
比较工具
比较结果
CGH图示
大规模分析基因表达的方法
–对某一组mRNA中基因表达定量检测 –一群mRNA中的每一个mRNA的同一位置取9-10bp
的一段序列，（从统计学上说这样的序列可以代表 95%的人类基因），每一种9-10bp的序列的拷贝数 则代表基因表达的拷贝数，也就可以说明基因表达 活性的高低。
Gastroenterology. 2007; 133(1):219-31.
主要内容
NCBI的相关数据库资源 肿瘤学和血液学的细胞遗传学 ExPASy的数据库资源和工具
NCBI的相关资源
National Center for Biotechnology Information
输入序列 先查询序查询结果
Cancer Genome Anatomy Project (/)
由National Cancer Institute（NCI）管理 目的是研究肿瘤细胞的分子改变
CGAP主页
Genes
每个基因————一个Gene info页面
– UniGene、LocusLink、OMIM、DTP search、cDNA Libraries、Cluster Assemblies、和SNPs等数据库的链接
–细胞遗传学定位和Mitelman断裂点信息
–蛋白相似性
–人类和小鼠的同源组 – IMAGE（Integrated Molecular Analysis of Genomes and
SNP500 Cancer Database
– 用于查找SNP的工具 – 可以通过基因名称、SNP号、染色体和基因功能
查询
查找肿瘤重复出现的染色体畸变
Tissues
来源于组织的基因表达信息
– Library ummarizer（GLS）：在特定的cDNA文 库中查找所有基因。
M-FISH—Multiplex Fluorescence In Situ Hybridization
CGH—Comparative Genomic Hybridization
– 肿瘤和对照细胞的基因组DNA标记不同颜色荧光 探针等量混合后分别与肿瘤和对照细胞的染色体 杂交。
SKY的 原理
CGH的 原理
Genes工具列表
– Gene finder：按照特定标准查找单个或多个基因的工具
– Gene Ontology Browser：通过分子功能、生物学过程和细 胞组分对人和小鼠的基因分类
– 酶切位点3'端的序列出现的拷贝数就代表了基因表达活 性的高低
选择细胞
流程图
磁珠分离RNA并合成cDNA 锚定内切酶（NlaIII）酶切 NlaIII3’端序列为标签，再用BsmF1酶切后释放标签 将标签相互连接并连入质粒载体 测序并计算标签的拷贝数
计算机分析
查询方式
– ...by tag – ...by sequence – ...by library – ...by gene name
方法
– RNA反转录为cDNA，同时用生物素标记cDNA末端 – 随后用一种限制性内切酶（NlaIII (CATG)）切割cDNA
分离酶切位点3‘端的序列 – 另一种酶再切割cDNA片段，去除带生物素的3’端 – 用PCR扩增每一个标签片段，将30-50个不同的标签片
段连成一个单一的DNA分子 – 最后克隆并测序这些分子
–cDNArential Gene Expression Displa SAGEmap xProfiler：xProfil disease
单基因遗传病的站点
– 介绍多个系统的遗传病，可下载PDF文件。 – 图示遗传病相关基因在染色体的定位 – 与相关数据库相互链接
Genes and disease 页面
染色体的图谱
SKY—Spectral Karyotyping
– 多色标记的探针与染色体杂交
– Nucleotide BLAST：通过CGAP界面，查找给定核苷酸序 列的代表基因
– Lists of Candidate, Validated, and Confirmed SNPs：包含单 核苷酸多态性的基因信息
– CGAP SNP Index：通过基因名称、符号和GenBank序列 号查找代表SNPs
– SNP Gene Viewer：将人类SNPs定位于参考序列和MGC序 列，预测蛋白编码的变化
Gene info
Chromosomes
Mitelman Database of Chromosome Aberrations in Cancer （肿瘤染色体畸变数据库）
– Recurrent Chromosome Aberrations Searcher用来查 找重复出现的染色体畸变
肿瘤研究的分子生物学数据库资源
一篇论文的题目
Zhu F, Zykova TA, Kang BS, Wang Z, Ebeling MC, Abe Y, Ma WY, Bode AM, Dong Z.
Bidirectional signals transduced by TOPKERK interaction increase tumorigenesis of HCT116 colorectal cancer cells.
CGH比较工具
– 输入染色体片段和得失，如：7[gain]或 3p[loss].
比较工具
比较结果
CGH图示
大规模分析基因表达的方法
–对某一组mRNA中基因表达定量检测 –一群mRNA中的每一个mRNA的同一位置取9-10bp
的一段序列，（从统计学上说这样的序列可以代表 95%的人类基因），每一种9-10bp的序列的拷贝数 则代表基因表达的拷贝数，也就可以说明基因表达 活性的高低。
Gastroenterology. 2007; 133(1):219-31.
主要内容
NCBI的相关数据库资源 肿瘤学和血液学的细胞遗传学 ExPASy的数据库资源和工具
NCBI的相关资源
National Center for Biotechnology Information
输入序列 先查询序查询结果
Cancer Genome Anatomy Project (/)
由National Cancer Institute（NCI）管理 目的是研究肿瘤细胞的分子改变
CGAP主页
Genes
每个基因————一个Gene info页面
– UniGene、LocusLink、OMIM、DTP search、cDNA Libraries、Cluster Assemblies、和SNPs等数据库的链接
–细胞遗传学定位和Mitelman断裂点信息
–蛋白相似性
–人类和小鼠的同源组 – IMAGE（Integrated Molecular Analysis of Genomes and
SNP500 Cancer Database
– 用于查找SNP的工具 – 可以通过基因名称、SNP号、染色体和基因功能
查询
查找肿瘤重复出现的染色体畸变
Tissues
来源于组织的基因表达信息
– Library ummarizer（GLS）：在特定的cDNA文 库中查找所有基因。
M-FISH—Multiplex Fluorescence In Situ Hybridization
CGH—Comparative Genomic Hybridization
– 肿瘤和对照细胞的基因组DNA标记不同颜色荧光 探针等量混合后分别与肿瘤和对照细胞的染色体 杂交。
SKY的 原理
CGH的 原理
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肿瘤生化与分子生物学
16
（2） 通过插入激活而致癌 小鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）原本不含癌基因。 MMTV的癌基因（V-src）序列的两端含有重复
调控序列（LTR）,具有增强子样功能。 当其插入宿主细胞DNA分子中后，可促进宿主细
胞基因（ int ）过表达。
MMTV的插入→生长因子int基因过表达 →促进细胞过度增殖。
DNA分子中的鸟嘌呤是最易遭受致癌剂攻击的部位 ：
在N1、N3、N OH 6、3N7、C8 位上发生加N 合反应，使DN NA
O HN1 6
CH
3
分子发生损伤N 突变。N H2 N N
H
N 7 HN C 8 H N H
编辑版ppt
6
（2）癌基因被异常激活和抑癌基因失活
癌基因受化学致癌物异常激活： 类型：点突变：
体内因素（遗传性/先天性）： 是指遗传性缺陷DNA修复机制或细胞周期调控缺陷。
体外因素（后天性）： 是指外界的一些理化因素和生物致癌因素。
※在肿瘤发生过程中，体外的环境因素往往是启动 因素，而个人的遗传特性决定肿瘤的易感性。
编辑版ppt
19
肿瘤易感个体：
1）可能通过遗传，获得了突变的、易致癌的关键基因 2）这种突变基因对环境变化很敏感 3）这种突变基因易发生癌变生长
由于上述原因，使这类个体发生癌变的机率增高。
基因，称为Proto-onc，对细胞无害。
当原癌基因在理化因素刺激下发生基因 突变而被过度激活，引起细胞过度增殖、转 化为癌细胞，此时称为癌基因。
编辑版ppt
14
已发现有多种病毒与人类肿瘤有关，例如：
C型KNA病毒：与白血病有关 人类疤疹病毒Ⅱ型（HSV-2）：与子宫颈癌有关 EB病毒：是一种人群感染率较高的致癌性疱疹病毒, 与儿童 的Burkitt淋巴瘤、成人的鼻咽癌有关， 乙型肝炎病毒（HBV）与原发性肝癌有关， 艾滋病病毒的感染：与淋巴瘤、卡波奇肉瘤的发生也有关.
肿瘤分子生物学ppt课件
肿瘤分子生物学ppt 课件篇一：肿瘤分子生物学肿瘤（tumor）是一类疾病的总称，它们的基本特征是细胞增殖与凋亡失控，扩张性增生形成新生物。
肿瘤可分为良性肿瘤（benign tumor）和恶性肿瘤（malignant tumor ）。
良性肿瘤生长缓慢，虽可增长至相当大的体积，但仍保留正常细胞的某些特性，通常在瘤体外有完整的包膜，手术切除后患者预后良好。
绝大多数良性肿瘤基本上是无害的，不引起或很少引起宿主损伤。
恶性肿瘤统称为癌症（cancer）,它不同于良性肿瘤的最重要的特性是能侵袭周围组织，疾病晚期癌细胞发生远端转移，破坏受侵袭的脏器，最终使机体衰亡，但如能在侵袭转移前切除癌瘤，一般预后明显改善。
2、癌细胞的恶性生物学特征（1）失去了对中止细胞增殖信号和细胞分化信号的反应，并可传出自主的细胞生长、增殖信号。
（2）逃避了细胞凋亡和衰老，是细胞永生。
当正常细胞受到严重损伤和营养缺乏时，就发生凋亡并自动解体；而癌细胞并不一定会发生凋亡。
体外培养的正常细胞，即使没有受到损伤，约分裂50 后也会自动停止分裂，最终细胞死亡（细胞衰老）；而癌细胞能无限制地增殖，获得了永生化。
这可能与调控细胞凋亡基因的缺陷和端粒酶恢复活性相关。
（3）失去细胞的区域性限制，具有了侵袭和转移能力。
例如在体外培养的正常细胞中增殖至彼此接触时，就停止生长和分裂（结出抑制），故细胞呈单层生长，而癌细胞失去了接触抑制，继续分裂而呈多层重叠生长；同时癌细胞表面的识别能力和黏着性发生了改变，使癌细胞不能像不同的正常组织细胞那样保持彼此分开，而能侵入临近组织。
（4）自主的血管生成能力，这保证了肿瘤体积增大后和新形成转移肿瘤的血液供应，以维持癌细胞生长和增殖之所需。
上述这些癌细胞的恶性特性，使它们能在没有增殖信号的情况下，自主地无限制增殖，当达到一定的体积时就可能侵袭邻近组织，癌细胞还可能脱落进入血液和淋巴液，发生远端转移并扩增，最终导致宿主死亡。
分子生物学恶性肿瘤发生的分子机制ppt课件
ppt课件.
33
①P53基因
❖与人类肿瘤相关性研究得最多的一个基因，
约50%以上的肿瘤P53均突变。
❖有称p53是G1/S检查站的分子警察（正常
p53,称野生型p53）
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34
P53是G1期能否进入
S期的分子警察
DNA损伤
p53
修复
复制
无法修复 诱导 凋亡
p21 （P21 ） WAF1/CIP1
ppt课件.
26
ppt课件.
27
④原癌基因的激活机理 1、病毒启动子的插入。 2、基因突变。 3、基因扩增。 4、基因重排。 5、基因间的相互作用。 6、甲基化改变。
c-onc只有在异常表达时才有致癌作用。原癌基因变 为癌基因，癌基因为显性正调控基因
ppt课件.
28
ppt课件.
29
ppt课件.
反义治疗：人工合成针对癌基因的特异寡核苷酸， 转导入肿瘤细胞，如 myc、myb、fos等转入白血 病细胞进行治疗，已取得一定的效果 抑癌基因治疗：有报道将RB、p53和APC等基因 分别导入肿瘤细胞，代替已失活的抑癌基因，以恢 复和增强抑癌功能
ppt课件.
42
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分
组织转化
Ras
子
Met
Ras
结
构
异型增生
模
型
癌
erbB2 Qkt2
P53 扩增
erB2 EGFR
缺失
APC P53
Mdm2
P16
转移
Met akt2
Nm23 Rb
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40
（2）抑癌基因的普查价值
2024年《分子生物学》全册配套完整教学课件pptx
2024/2/29
运输功能
如载体蛋白，血红蛋白等 ，在生物体内运输各种物 质。
免疫功能
如抗体蛋白，参与生物体 的免疫应答。
18
蛋白质的功能与调控
调节功能
如激素，生长因子等，调节生物 体的生长发育和代谢过程。
2024/2/29
储存功能
如植物种子中的贮藏蛋白，动物体 内的肌红蛋白等，储存能量和营养 物质。
个性化医疗
根据患者的基因信息，制定个 性化的治疗方案。
药物基因组学
预测患者对药物的反应和副作 用，指导合理用药。
30
基因治疗的原理与应用
基因治疗的原理
通过导入正常基因或修复缺陷基因， 从而治疗由基因突变引起的疾病。
遗传性疾病的治疗
如视网膜色素变性、腺苷脱氨酶缺乏 症等。
2024/2/29
癌症治疗
利用基因编辑技术，修复或敲除癌症 相关基因，抑制肿瘤生长。
基因表达调控的层次
基因表达调控可分为转录前调控、转录水平调控、转录后调控和翻 译水平调控等多个层次。
基因表达调控的意义
基因表达调控对于生物体的生长发育、代谢、免疫应答等生理过程具 有重要意义，同时也是疾病发生发展的重要因素。
2024/2/29
22
原核生物的基因表达调控
1 2 3
原核生物基因表达调控的特点
26
DNA损伤的修复机制
直接修复
针对某些简单的DNA损伤，如碱 基错配，可通过特定的酶直接进行 修复。
碱基切除修复
通过识别并切除受损碱基，再合成 新的DNA片段进行修复。
2024/2/29
核苷酸切除修复
针对较严重的DNA损伤，如嘧啶 二聚体，通过切除一段包含受损部
运输功能
如载体蛋白，血红蛋白等 ，在生物体内运输各种物 质。
免疫功能
如抗体蛋白，参与生物体 的免疫应答。
18
蛋白质的功能与调控
调节功能
如激素，生长因子等，调节生物 体的生长发育和代谢过程。
2024/2/29
储存功能
如植物种子中的贮藏蛋白，动物体 内的肌红蛋白等，储存能量和营养 物质。
个性化医疗
根据患者的基因信息，制定个 性化的治疗方案。
药物基因组学
预测患者对药物的反应和副作 用，指导合理用药。
30
基因治疗的原理与应用
基因治疗的原理
通过导入正常基因或修复缺陷基因， 从而治疗由基因突变引起的疾病。
遗传性疾病的治疗
如视网膜色素变性、腺苷脱氨酶缺乏 症等。
2024/2/29
癌症治疗
利用基因编辑技术，修复或敲除癌症 相关基因，抑制肿瘤生长。
基因表达调控的层次
基因表达调控可分为转录前调控、转录水平调控、转录后调控和翻 译水平调控等多个层次。
基因表达调控的意义
基因表达调控对于生物体的生长发育、代谢、免疫应答等生理过程具 有重要意义，同时也是疾病发生发展的重要因素。
2024/2/29
22
原核生物的基因表达调控
1 2 3
原核生物基因表达调控的特点
26
DNA损伤的修复机制
直接修复
针对某些简单的DNA损伤，如碱 基错配，可通过特定的酶直接进行 修复。
碱基切除修复
通过识别并切除受损碱基，再合成 新的DNA片段进行修复。
2024/2/29
核苷酸切除修复
针对较严重的DNA损伤，如嘧啶 二聚体，通过切除一段包含受损部
分子生物学技术在肿瘤检测及治疗中的应用ppt课件
• 肿瘤基因表达研究
实时荧光定量RT-PCR方法能检测各种组 织细胞中基因的表达丰度，从而分析基因的 表达调控、监控mRNA的表达模式、检测组 织中少量存在的基因、跟踪细胞群体中的克 隆型、定量分析基因在不同组织中的转录水 平。
eg：检测黑色素瘤中的细胞因子白细胞 介素-10（IL-10）、转化生长因子β1、β2 （TGF-β1、β2）和γ干扰素（IFN-γ）的基因 表达情况。
5%BC%8F%E5%8F%8D%E5%BA%94 • 4.Application of Real-time Fluorescene Quantitative RT-PCR Technology to Cancer
Research 1671-170X(2013)01-0069-03
11
谢谢观看~
12
C目录 ONTENTS
肿瘤的防治历史
01
P3
PCR技术简介及其衍
02 生技术
P4~6
反转录·聚合酶链式扩
03 增 RT-PCR
P7
单管荧光定量PCR技
04 术
P8
实时荧光定量PCR技
05 术的优越性
P9
实时荧光定量PCR技
06 术应用于肿瘤
P10
2
肿瘤防治历史
• 半个世纪多以来，随着医学技术的发展，人类已经基本上控制了以往主要威胁人类健康的传 染病，而肿瘤、心血管等疾病逐渐成为人类健康的主要疾病，其中肿瘤的治疗尤为困难。传 统的肿瘤治疗主要以外科手术为主，后期发展的化疗、放疗成为治疗肿瘤的主要方法。但在 临床的实际应用上这些方法均有其局限性，疗效也不尽如人意。
6
单管荧光定量PCR技术
• 单管荧光定量PCR（Fluorogenic Quantitative PCR, FQ-PCR）技术是融合 了PCR技术与DNA探针杂交技术的优点， 实验的整个过程只在加样时打开1次反应管， 在PCR的每个循环中可以直接监测到荧光 信号的变化，根据PCR反应酶动力学特点 分析软件会自动对DNA进行定量，因此也 有人称FQ-PCR为实时荧光定量PCR （Real-time Fluorogenic Quantitative PCR）。
肿瘤的分子生物学PPT精品医学课件
正调控作用； ②在遗传方式上，原癌基因是显性的，而抑癌基因在
细胞水平上是隐性的， ③在突变发生的细胞类型上，抑癌基因突变可以发生
在体细胞中，也可能发生在生殖细胞中并通过生殖 细胞得到遗传。原癌基因突变只发生在体细胞中。
p53直接作用于细胞周期
p53通过DNA修复酶进行DNA修复 或凋亡，维持基因组可塑性和基 因组稳定性。
形成致癌性的细胞转化基因。
原癌基因的分类：
根据原癌基因产物在细胞中的位置，可分为： ●与膜结合的蛋白，如src基因产物； ●可溶性蛋白，如mos基因产物； ●核蛋白，如myc基因产物。
根据原癌基因表达产物的功能，可分为： ●蛋白激酶类，如Src家族（酪氨酸蛋白激酶类） ●生长因子类 ●生长因子受体类 ● GTP结合蛋白类，如Ras家族 ●核蛋白类（DNA结合蛋白），如Myc家族 ●未知功能类
1966年，85岁的劳斯获得诺贝尔奖。
1、反转录病毒颗粒结构
2、反转录病毒的复制
3、反转录病毒基因组结构
长末端 重复序列
正常的病毒基因
癌基因
LTR gag
pol
env src LTR
调节和 产生病毒 产生逆转录 产生病毒 产生p60src蛋白质，
启动转录
表面糖蛋白 酶和整合酶
垮膜蛋白
磷酸化蛋白。靶蛋 白磷酸化
癌细胞的特点:
1） 无限繁殖，癌细胞不受海弗利克界限 （Hayflick limit）的影响。 2） 接触抑制现象丧失 3） 癌细胞间粘着性减弱 4） 易被凝集素凝集 5） 粘壁性下降 6） 细胞骨架结构紊乱 7） 产生新的膜抗原 8） 对生长因子需要量降低
癌的多种类型
图 1997年美国不同癌症的发病率和死亡率 （引自 S.Simmons,2003）
细胞水平上是隐性的， ③在突变发生的细胞类型上，抑癌基因突变可以发生
在体细胞中，也可能发生在生殖细胞中并通过生殖 细胞得到遗传。原癌基因突变只发生在体细胞中。
p53直接作用于细胞周期
p53通过DNA修复酶进行DNA修复 或凋亡，维持基因组可塑性和基 因组稳定性。
形成致癌性的细胞转化基因。
原癌基因的分类：
根据原癌基因产物在细胞中的位置，可分为： ●与膜结合的蛋白，如src基因产物； ●可溶性蛋白，如mos基因产物； ●核蛋白，如myc基因产物。
根据原癌基因表达产物的功能，可分为： ●蛋白激酶类，如Src家族（酪氨酸蛋白激酶类） ●生长因子类 ●生长因子受体类 ● GTP结合蛋白类，如Ras家族 ●核蛋白类（DNA结合蛋白），如Myc家族 ●未知功能类
1966年，85岁的劳斯获得诺贝尔奖。
1、反转录病毒颗粒结构
2、反转录病毒的复制
3、反转录病毒基因组结构
长末端 重复序列
正常的病毒基因
癌基因
LTR gag
pol
env src LTR
调节和 产生病毒 产生逆转录 产生病毒 产生p60src蛋白质，
启动转录
表面糖蛋白 酶和整合酶
垮膜蛋白
磷酸化蛋白。靶蛋 白磷酸化
癌细胞的特点:
1） 无限繁殖，癌细胞不受海弗利克界限 （Hayflick limit）的影响。 2） 接触抑制现象丧失 3） 癌细胞间粘着性减弱 4） 易被凝集素凝集 5） 粘壁性下降 6） 细胞骨架结构紊乱 7） 产生新的膜抗原 8） 对生长因子需要量降低
癌的多种类型
图 1997年美国不同癌症的发病率和死亡率 （引自 S.Simmons,2003）
肿瘤的分子生物学检验技术 ppt课件
ppt课件
10
3、rRNA基因
1、mtRNA 编码 两种rRNA,即 12SrRNA16SrR NA 2、位P于heH链 Leu tRNA tRNAVal 之间以tRNA 相 隔 3、变异常发生在 二级结构茎环上 。
ppt课件
11
4、非编码区
D-loop（约1120bp）
位于tRNAPro
和tRNAPhe基因之间， 约1120bp,是mtDNA中 变异最多的区域，参与 并调控mtDNA的复制和 转录。
（4）结果分析：根据酶解片段选择不同浓度的琼脂 糖或聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离，染色后观察扩增 基因的变异情况。
ppt课件
35
二、线粒体病的分子生物学检验技术
（二）变性高效液相色谱法
在部分变性的条件下，通过杂合与纯合二倍体 在柱中保留时间的差异，发现DNA突变。异源 双链DNA与同源双链DNA的解链特性不同，在 部分变性条件下，异源双链因有错配区的存在
三、线粒体病的分子生物学检验应用
（一）MELAS综合征
11月23日，读初三的晓炎从学校回家后，顾春娜就感觉女儿脸色 不好，以为晓炎在学校吃的没有营养，就赶紧给女儿做了顿好饭。 可晓炎吃过饭后不久，就开始呕吐。
当晚凌晨2点钟，晓炎出现了全身抽搐的症状，看到女儿四肢
颤抖，嘴眼歪斜，顾春娜赶紧拨打120，急救车将女儿送到医院救
（3）DHPLC检测上样前要验证PCR产物质量，以保 证结果准确性。
（4）结果分析：在部分变性条件下出现异源双链峰， 表明异质性突变位点，反之则为同源单峰。建议购买 阳性质控品。
ppt课件
39
二、线粒体病的分子生物学检验技术
（三）DNA芯片技术略 （四）DNA测序技术略
肿瘤分子生物学(共46张PPT)
③染色体易位和基因重排
Ⅲ体外不能使培养的细胞发生转化。
C-myb：白血病，淋巴瘤，卵巢癌
易位是指某一段基因从染色体正常位置转移到另 若等为基因中一个基因突变与腺瘤形成有关，另一个也突变，则发生结肠癌。
主要通过阻止细胞生长繁殖，抑制瘤细胞进入S期，是细胞周期固有的抑制成分，一旦异常，引发多种肿瘤。 ⑥表达调控细胞凋亡的Bcl-2癌蛋白
中，C-sis的活性蛋白PDGF对C-myc表达起协同作用。
，重排后形成bcr-abl融合基因，使P145变为P210 ⑴与肿瘤细胞锚定黏附能力有关的分子机制
通过GTP到GDP的转换释放磷酸和能量，可将细胞表面的刺激信号（生长因子、激酶或神经递质）传到细胞内效应器上。
，表达酪氨酸激酶，从而异常激活。（ ⒊细胞寿命长，有的在体外可长期培养、传代建系
④GTP酶类的癌蛋白
H-rab、K-rab、N-ras、C-gip2、C-gsp的表达产物 为GTP酶、信号传递蛋白。通过GTP到GDP的转换 释放磷酸和能量，可将细胞表面的刺激信号（生 长因子、激酶或神经递质）传到细胞内效应器上 。
GTP转换成GDP需与GAP结合，上述原癌基因点突 变后的产物p21含改变GAP与GTP结合，影响GTP向 GDP转换，使细胞刺激信号传递到效应器的时间大 为延长而致癌。
⑤表达核内转录调控的癌蛋白
C-enbA、C-ets-1、C-ets-2、C-fos、C-jun 、C-mgc等这些基因有一些区域具有与蛋 白质结合的功能结构域，其基因产物可 与DNA结合，也可先与蛋白质结合形成 二聚体后，再与DNA结合，然后调控下 游靶基因转录。如C-myc产物在核内与 DNA结合后，可调控DNA复制，使细胞 持续增生，不能进入终末分化，呈幼稚 类型，即癌。
分子生物学课件：第十八章-肿瘤细胞
一、化学致癌物
①亚硝胺类，能引起消化系统肿瘤； ②多环芳香烃类，如苯并芘。 ③芳香胺类，如乙萘胺、诱发泌尿系统的癌症； ④烷化剂类，如芥子气、环磷酰胺等； ⑤氨基偶氮类，如人工奶油黄色染料，可引起肝
癌； ⑥碱基类似物，如5-溴尿嘧啶、5-氟尿嘧啶； ⑦氯乙烯，与塑料工人的肝血管肉瘤有关。 ⑧元素，如铬、镍、砷。
细胞周期失控，无限分裂 具有迁移性 接触抑制丧失 细胞黏着性减弱，贴壁性下降 去分化现象 对生长因子需要量降低 代谢旺盛 线粒体功能障碍 可移植性，如人的癌细胞可移植到鼠体，形成移
植瘤。
Metastasis.
第二节 肿瘤形成的内因
恶性肿瘤的形成往往涉及多个基因的改变。
一、原癌基因(oncogene)
1970s H. Varmus和J. M. Bishop发现 RSV中的致瘤基因是src，编码一种胞质酪 氨酸激酶，参与细胞增殖相关的信号转导。
原癌基因的类型
原癌基因 sis erb-B
fms ras src Abl-1 raf vav myc myb fos jun erb-A bcl-1
功能 生长因子 受体酪氨酸激酶，EGF 受体
类杂环化合物，其中黄曲霉毒素B1是已知 最强的化学致癌物之一，可引起肝癌。
三、物理因素
（一）、电离辐射 辐射致癌的机制：①染色体或基因的突变；
②基因表达改变；③激活潜伏的致癌病毒。 （二）、紫外线 可引起细胞DNA断裂、交联和染色体畸变，
抑制皮肤的免疫功能，诱发皮肤癌、基底细 胞癌和黑色素瘤。
细胞内与细胞增殖相关的基因，在进化上高等保守。 当原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多 或活性增强时，使细胞过度增殖，从而形成肿瘤。
原癌基因的产物主要包括： ①生长因子，如sis； ②生长因子受体，如fms、erbB； ③信号转导组分，如src、ras、raf； ④细胞周期蛋白，如cyclin D； ⑤细胞凋亡调控因子，如bcl-2； ⑥转录因子，如myc、fos、jun。
肿瘤的分子生物学ppt课件
基因转录
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血管生成 的诱导因子
血管内皮生长因子 VEGF
成纤维细胞生长因子 FGF
转化生长因子- β TGF- β
肿瘤坏子因子- α TNF- α
血小板源性内皮生长因子 PDGF
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myc基因家族
• Myc是具有螺旋-环-螺旋结构 的亮氨酸拉链超家族中的一员
– C-myc来源于细胞 – N-myc成神经细胞瘤中来源 – L-myc小细胞性肺癌细胞来源
动物品种
小鼠
小鼠
小鼠
鸡
鸡
鸡
鸡
猫
猫
猫
小鼠
鸡
鸡
猫
鸡
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v-onc mos mpl myb myc qin raf rasH rasK rel ras sea sis ski src yes
逆转录病毒癌基因
病毒名称 Moloney肉瘤 骨髓增生性白血病 禽类随母细胞增生症 禽类髓细胞瘤病 禽类肉瘤31 3611小鼠肉瘤 Harvey肉瘤 Kirsten肉瘤 网状内皮增生症 UR2肉瘤 禽类成红血细胞增生症S13 猿猴肉瘤 禽类SK Rous肉瘤 Y73肉瘤
myc家族 c-myc,l-myc,m-myc,fas,myb
DNA结合蛋白
sis家族 sis
p28，与PDGF－β同源
erb家族 erb-A,erb-B,fms,mas,trk等
细胞骨架蛋白类
myb家族 myb,myb-et等
核内转录调节因子
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细胞癌基因的特点
① c-onc 是V-onc的同源物 ② c-onc在进化上高度保守 ③ 正常情况下无害 ④ 单拷贝基因，都有编码的蛋白产物 ⑤ 没有严格的种属特征和组织特异性