Waters LC MS培训讲义
合集下载
Waters-LC-MS-日常维护参考手册 PPT课件
灵敏度低下
灵敏度低下
LC侧
流动相污染 确认注入量
灵敏度低下
MS侧 离子源污染
确认喷雾 质量轴偏差
真空度 付附加着イ离オ子ン
2020/3/31
43
©2008 Nihon Waters K.K. 43
灵敏度低下（附着离子）：附着质子
2020/3/31
M M
H+
— 进样针的更换 o 进样针的材质不同，吸附度也不同。
2020/3/31
12
©2008 Nihon Waters K.K. 12
MS各部分的功能
MS
— Probe o 样本离子化后喷雾
— 离子源 o 将喷雾样本（离子）导入MS内部（分析器、检测器）
— 分析器 o 依据m/z分离离子
— 检测器 o 检测离子
2020/3/31
故障在MS侧
分析器 真空
检测器
数据系统
34
©2008 Nihon Waters K.K. 34
确认原因分类（I）LC侧的问题
UV检测器
色谱柱
Probe
离子源
UV检测器与MS的结果中均未见峰值
2020/3/31
故障在LC侧 （未注射样本？）
分析器 真空
检测器
数据系统
35
©2008 Nihon Waters K.K. 35
2020/3/31
6
©2008 Nihon Waters K.K. 6
LC/MS系统的日常维护
LC/MS系统
— HPLC o泵 o 自动进校器
— MS o 离子源 o Probe o 分析器
— 附属设备 o 真空泵（回转泵、涡旋泵） o 氮气发生仪器 o 数据系统
LC-MS基础资料
〔3〕母离子扫描
母离子分析可用来鉴定和确认类型的化合物， 尽管它们的母离子的质量可以不同，但在分裂 过程中会生成共同的子离子，这种扫描功能在 药物代谢争论中特殊重要。
(4)中性丧失扫描
中性丧失扫描分析可用来鉴定和确认类型的化 合物，例如新生儿遗传疾病筛查中某些检测工 程。也可以帮助进展未知物构造推断，例如有 中性丧失18Da的意味着-H2O，28-CO，30HCOH，32-CH3OH，44-CO2等等。
Ionic
IonSpray
电喷雾电离源
APCI
大气压化学电离源
Analyte Polarity
GC/MS
Neutral
101
102
103
104
105
Molecular Weight
LC_MS接口的作用
将淋洗剂及样品气化 分别除去大量的淋洗剂分子适应MS的高真空 样品分子的电离
常用的离子源:
279.1591 m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子 m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+,
391.2843 m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+,
413.2668
分子量测定失败的缘由
子离子分析〔 MS/MS 〕 子离子，用于构造推断(得到化合物的二级谱图即碎
片离子)和选择离子对作多种反响监测〔MRM〕。
子离子谱图与锥体电压断裂谱图〔源内CID〕可能特殊 相像，所不同的是子离子质谱图只有一种质量通过MS1， 因此也全部碎片离子都是由我们所选定的母离子所产生 的，所以我们更信任由MS/MS产生的谱图的纯度。
液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材23页文档
养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
WatersLCMS液质联用培训讲义
3. 多反应监控MRM
MS1
Argon gas Collision
Cell
MS2
Precursors
Static m/z 609.1
Product
Static m/z 195.1
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔 （CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行 多反应监控MRM实验准备
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时 按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起 来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新 档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
峰进行准确质量测量 (如在全扫描方式)
• scan speed compensation扫描速度补偿: 当仪器进行
快速扫描时，对系统进行‘延时’补偿校正。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
7. 设定采集参数：
选择适当的校正质量范 围，校正大范围的全质 量从22校正到2000，其 余的参数可以使用预设 参数default即可，设定 完后按OK键。
Cell
MS2
Products
Scanning (m/z M-46Da)
样品：混合氨基酸实验 中性丢失46(甲酸) 中性丢失63(甲酸+NH3)
Waters 四极杆质谱培训
MS1
Argon gas Collision
Cell
MS2
Precursors
Static m/z 609.1
Product
Static m/z 195.1
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔 （CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行 多反应监控MRM实验准备
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时 按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起 来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新 档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
峰进行准确质量测量 (如在全扫描方式)
• scan speed compensation扫描速度补偿: 当仪器进行
快速扫描时，对系统进行‘延时’补偿校正。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
7. 设定采集参数：
选择适当的校正质量范 围，校正大范围的全质 量从22校正到2000，其 余的参数可以使用预设 参数default即可，设定 完后按OK键。
Cell
MS2
Products
Scanning (m/z M-46Da)
样品：混合氨基酸实验 中性丢失46(甲酸) 中性丢失63(甲酸+NH3)
Waters 四极杆质谱培训
液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材
4 6 5 3 6 线 性 范 围 1 0 1 0 1 0 1 0 ~1 1 0 0
流 速 敏 感 是 是 否 否 是
温 度 敏 感 是 是 否 否 是
梯 度 淋 洗 不 可 有 限 制 可 以 可 以 脉 冲 的 可 以
色谱条件的优化
分 离 度
速 度 容 量
开发液相色谱方法
分辨率是色谱分离中主要考虑的因素 在开发色谱方法时，有很多因素是很重要
“制备型液相色谱” 分离及纯化
化合物的稳定性 样品的复杂性 制备量的要求 纯度的要求，及纯度的鉴定 方法的安全性
开发液相色谱方法
问题∶什么样的分离结果是好的?分辨率?
什么是色谱的分辨率？
分辨率的公式：
R
V2 V1 1 (W2 W1 ) 2
影响分辨率的因素：K’，a，N
V 18.70 R
V 16.63 R
16.63 N5 s 25 1.44
2
3334 plates
4.4% height
W 1.03
4.4% height
W 1.44
Good Column
Bad Column
提高柱效的方法
色谱柱本身
减小填料的颗粒度 找到最佳的流速(根据不同内径) 合适的温度 降低溶剂的粘度 增加柱长
感谢您对文章的阅读跟下载，希望本 篇文章能帮助到您，建议您下载后自 己先查看一遍，把用不上的部分页面 删掉哦，当然包括最后一页，最后祝 您生活愉快!
的。除分辨率之外，以下几个因素都要考 虑。
灵敏度 载样量 分析速度 溶剂损耗
成本 容易使用 色谱柱寿命 效率
其实，世上最温暖的语言，“ 不是我爱你，而是在一起。” 所以懂得才是最美的相遇！只有彼此以诚相待，彼此尊重， 相互包容，相互懂得，才能走的更远。 相遇是缘，相守是爱。缘是多么的妙不可言，而懂得又是多么的难能可贵。否则就会错过一时，错过一世！ 择一人深爱，陪一人到老。一路相扶相持，一路心手相牵，一路笑对风雨。在平凡的世界，不求爱的轰轰烈烈；不求誓 言多么美丽；唯愿简单的相处，真心地付出，平淡地相守，才不负最美的人生；不负善良的自己。 人海茫茫，不求人人都能刻骨铭心，但求对人对己问心无愧，无怨无悔足矣。大千世界，与万千人中遇见，只是相识的 开始，只有彼此真心付出，以心交心，以情换情，相知相惜，才能相伴美好的一生，一路同行。 然而，生活不仅是诗和远方，更要面对现实。如果曾经的拥有，不能天长地久，那么就要学会华丽地转身，学会忘记。 忘记该忘记的人，忘记该忘记的事儿，忘记苦乐年华的悲喜交集。 人有悲欢离合，月有阴晴圆缺。对于离开的人，不必折磨自己脆弱的生命，虚度了美好的朝夕；不必让心灵痛苦不堪， 弄丢了快乐的自己。擦汗眼泪，告诉自己，日子还得继续，谁都不是谁的唯一，相信最美的风景一直在路上。 人生，就是一场修行。你路过我，我忘记你；你有情，他无意。谁都希望在正确的时间遇见对的人，然而事与愿违时， 你越渴望的东西，也许越是无情无义地弃你而去。所以美好的愿望，就会像肥皂泡一样破灭，只能在错误的时间遇到错的人。 岁月匆匆像一阵风，有多少故事留下感动。愿曾经的相遇，无论是锦上添花，还是追悔莫及；无论是青涩年华的懵懂赏 识，还是成长岁月无法躲避的经历……愿曾经的过往，依然如花芬芳四溢，永远无悔岁月赐予的美好相遇。 其实，人生之路的每一段相遇，都是一笔财富，尤其亲情、友情和爱情。在漫长的旅途上，他们都会丰富你的生命，使 你的生命更充实，更真实；丰盈你的内心，使你的内心更慈悲，更善良。所以生活的美好，缘于一颗善良的心，愿我们都能 善待自己和他人。 一路走来，愿相亲相爱的人，相濡以沫，同甘共苦，百年好合。愿有情有意的人，不离不弃，相惜相守，共度人生的每 一个朝夕……直到老得哪也去不了，依然是彼此手心里的宝，感恩一路有你！
LC-MS原理详细讲解PPT
组合化学、有机化学的应用等；MALDI-TOF-MS的
特点是对盐和添加物的耐受能力高，且测样速度快，
操作简单。
精选完整ppt课件
8
质谱原理简介：
质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比 分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分 析目的的一种分析方法。以检测器检测到的离 子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标所 作的条状图就是我们常见的质谱图。
精选完整ppt课件
24
离子源
使被分析样品的原子或分子离化为带电粒子(离 子)的装置，并对离子进行加速使其进入分析器， 根据离子化方式的不同，有机质谱中常用的有 如下几种，其中EI，ESI最常用。
精选完整ppt课件
25
EI(Electron Impact Ionization):电子轰击电离—硬电离。
精选完整ppt课件
35
质量分析器的分类：
双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector).
精选完整ppt课件
5
Ionic
IonSpray离子喷雾
APCI大气压化学电离
Analyte Polarity
GC/MS
Neutral
101
102
103
104
105
Molecular Weight
精选完整ppt课件
6
现代有机和生物质谱进展
在20世纪80及90年代，质谱法经历了两次飞跃。 在此之前，质谱法通常只能测定分子量500Da以 下的小分子化合物。20世纪70年代，出现了场解 吸（FD）离子化技术，能够测定分子量高达 1500~2000Da的非挥发性化合物，但重复性差。 20世纪80年代初发明了快原子质谱法（FABMS），能够分析分子量达数千的多肽。
WATERS公司的UPLC-TQD培训资料 MS7校正
appropriate fittings.
©2008 Waters Corporation 5
参考溶液（Reference Solutions）
参考溶液用于在一个宽mass 范围内产生多离子。 质谱仪可以在此范围内被校正。 常用的参考溶液:
— PEG, PPG — NaI/CsI, NaI/RbI — Horse Myoglobin, Poly Alanine
NaI with Cs or Rb
Pegh.ref Pegh1000.ref Pegh2000.ref peghna.ref peghnam.ref peghnh4.ref ppghna.ref ppghnh4.ref
PEG or PPG
— 如同您不愿意在定量曲线之外进行定量计算一样，您也不希望在您的质量 数校正曲线之外工作。
©2008 Waters Corporation 3
仪器的校正曲线（Calibration Curves）
一台三重四极杆的仪器需要有三种校正曲线：对于MS1和 MS2, 有六 条校正曲线
— 静态校正（Static calibration）可以使四极杆质量分析器准确地定位于 感兴趣的特定质量数上。 (例如 调谐，SIR和MRM).
进行仪器校正
©2008 Waters Corporation 8
校正仪器Calibrate Instrument
©2008 Waters Corporation 9
校正窗口
©2008 Waters Corporation 10
校正的参考文件
Calibration Reference Files Are Stored in: C:\MASSLYNX\REF
参考文件中的每一个峰与采集的质谱图中对应的峰相匹配。Each peak in the Reference File is matched to a corresponding peak in the acquired spectrum file.
LC-MS基础原理
名义质量 36+6+16 = 58
准确质量 58.0417
C2H2O2 58.0054
C4H10
24+2+32 = 58
48+10 = 58
58.0780
Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X
质量准确度和准确质量测定
质量准确度：质量分析器测定得到的离子质量与其质量真实值（准确质量） 的接近程度。通常质量准确度用ppm 表示。
API离子源
ESI APCI APPI ESI+APCI组合源
GCM S
AP-MALDI
AP-MALDI （非液质联机用） 没有一种离子化技术可以涵盖所有的应用！
Group/Presentation Title Agilent Restricted Month ##, 200X
电喷雾离子化
电场诱导： 形成带电液滴
三级串联质谱的数据采集方式
• 母离子扫描－Parent Ion Scan • 子离子扫描－Product ion Scan • 中性丢失扫描－Constant Neutral Loss
• 多反应检测－Multiple Reaction Monitoring
• 选择离子检测－Select Ion Recording • 全扫描— Full Scan
母离子扫描
Q1 Scanning Collision Cell Q3 Fixed
381.2 m/z
118 m/z 475.0 m/z
检测可产生相同碎片的母离子。 应用举例：查找中药提取物中具有相同母核的成分； 寻找代谢产物（是否从特定原药转化而来？）
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
碰撞压力 3×10-3mbar
定性实验 调谐仪器
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
定性实验 调谐仪器
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
50
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
2. 在质量分析器页面（Analyzer）设定以下的数值，括 号内的数值即为设定值：
• LM Resolution 1（15.0） HM Resolution 1（15.0） Ion Energy 1（0.5） • Entrance（50） Collision（2） Exit（50） • LM Resolution 2（15.0） HM Resolution 2（15.0） Ion Energy 2（0.5）
:609 (CV=45)
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
定性实验 调谐仪器
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
2．子离子扫描 daughter scan
Argon gas
Collision
MS1
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
5. 从下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯，从 下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯校正质 量范围两千以内可选择 Naics2 。确认后按开始键。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
RF only
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
• 样品： 利血平标样,调谐最佳实验锥孔cone
voltage(CV)、毛细管电压、RF lens、离子能量等参数 ，进行全扫描获最大分子离子峰609。
• 样品：利血平1ppm (乙腈：水=1:1配置) ESI + scan
• 此为第一段和第二段扫描模式参数。这是因为在进行质量
校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静 态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
3. 多反应监控MRM
MS1
Argon gas Collision
Cell
MS2
Precursors
Static m/z 609.1
Product
Static m/z 195.1
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔 （CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行 多反应监控MRM实验准备
Cell
MS2
Precursor
Products
Static (m/z 609.1)
Scanning
利血平标样,根据全扫描获得最佳实验锥孔CV、毛细管电压、RF lens、 离子能量等参数，调谐碰撞能量collision energy (CE)、碰撞压力，进行
子离子扫描实验准备。 Daughter scan：609/195，448，397，174
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
• static calibration静态精确校正:使四极杆质量分析器准
确地‘停’在指定的质荷比上 (如： Tuning， SIR ， MRM)。
• scanning calibration 扫描校正:能确保所采集到的质谱
3. 在质谱调机页面（MS Tune）选择校正仪器以开启 的质量校正页面。
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
4. 开启质量校正页面后，质量校正前请先确定目前仪器处 于未校正的状态，所有六种校正都为未校正（No Calibration），若不然则开启一个未校正（Uncal.cal）的 档案。
6. 按开始键后会跳出自动校正选单 请勾选所有种类（Type） 处理程序部分选择讯号采集和校正
（Acquire & Calibrate），可勾选打 印报告（Print Report） 勾选完成后点压采集参数 （Acquisition Parameters）
！注意，在设定采集参数前请不要按
OK键。
仪器质量校正
M+H+ 134 106 148 76 156 175 120 90 116 121 182 118 150 147 132 132 166
定性实验 调谐仪器
备注： * 碱性氨基酸 易中性丢失63(甲酸+NH3) ▼ 带苯环氨基酸 ● 仲氨酸 易中性丢失46(甲酸)
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
ESI +
MRM :609 /195(CV=45,CE=55)
样品2. 对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲 酸丁酯1ppm实验，调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞 能量（CE）
ESI 对羟基苯甲酸甲酯 MRM :151/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丙酯 MRM :179/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丁酯 MRM :193/136,92 CV 30/ CE 18/ CE 25
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
4．母离子扫描
MS1
定性实验 调谐仪器
Collision Cell
Argon gas MS2
PPrreeccuurrssoorr
PPrroodduuccttss
Scanning
Static m/z 92
样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸丁酯实验 与氨基酸混合液。 调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞能量（CE），对羟基苯甲酸甲 酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲酸丁酯三种化合物有共同碎片92， 可进行母离子扫描将其与氨基酸区别开。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
10. 输入所欲储存之文件名称后按存盘即可，确认所 有的扫描模式都已经被校正。
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
定性实验 调谐仪器
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
Full scan(MS),daughter scan(MS/MS),MRM 实验参数设置建议如下：
Full scan(MS)
daughter scan(MS/MS)
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时 按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起 来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新 档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
MRM(MS /MS)
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
parent scan(MS/MS),neutral loss scan(MS/MMS)
neutral loss scan(MS/MS)
©2005 Waters Corporation
6. 混合扫描
• 样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟
基苯甲酸丁酯与氨基酸混合液。
• 要求：一次实验同时完成多种扫描组合方式 • 羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸
丁酯采用母离子扫描
• 氨基酸采用中性丢失扫描
Waters 四极杆质谱培训
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
定性实验 调谐仪器
Waters 四极杆质谱培训
定性实验 调谐仪器
©2005 Waters Corporation
5. 中性丢失扫描neutral loss：
MS1
Precursor
Scanning (m/z M)
Argon gas Collision
Quattro LC/Micro 液质联用培训讲义
©2005 Waters Corporation
• 仪器质量校正 • 定性实验 调谐仪器 • 定量实验 • 维护及故障排除 • 常用备件号
内容
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
1. 注射泵注入校正溶液，以碘化钠铯（异丙醇/水 = 1：1, NaI 2ug/L , CsI 50ng/L）溶液为例，流速5ul/min
Cell
MS2