温度对酶活性的影响PPT课件
合集下载
温度对酶活性的影响enzyme activity
Put 2 ml of amylase inhibitor solution into tube 2
Keep the tube 3 as before
31
Step 3
Into each of three more boiling tubes put 2 ml amylase solution.
32
21
Step 6
Replace the tubes in the water bath at 370 C and measure the time taken for the blue/black colour to disappear.
22
Step 7
Test for sugar: add 1ml Benedict’s solution to each boiling tube and heat for 5 minutes.
Dr. A. K. M. Arif Uddin Ahmed.
Lecturer, Department of Pharmacology & Biochemistry.
Medical College of Xiamen University, China Next
28
Materials required
2
Prodedure Step 1
28°C
37°C
Set up five water baths at different temperatures, e.g. 0°C, 28°C, 37°C, 55°C, 80°C.
3
Step 2
Into each of five boiling tubes put 5 ml starch solution and 3 drops potassium iodide (I2-KI) solution.
高考生物大一轮复习 第五章 影响酶活性的条件探究课件 新人教版必修1
探究 影响(yǐngxiǎng)酶活性的条件
第一页，共48页。
考纲 考情
三年5考 高考指数：★★★☆☆ 探究影响酶活性的因素
第二页，共48页。
【实验原理】
1.温度对酶活性的影响(yǐngxiǎng)：
(1)反应原理：淀粉 淀粉酶 麦芽糖
碘液 碘液
无蓝色出现
_____ _蓝__色________(chūxiàn)
第二十九页，共48页。
二、实验(Leabharlann híyàn)步骤：步骤加入 试剂
设置反 应条件
剂量 观察气 泡产生
试管编号
a
b
c
d
3%H2O2 2 mL
第十一页，共48页。
2.在“比较过氧化氢(ɡuò yǎnɡ huà qīnɡ)在不同条件下的分解”实验 中，对实验的处理如表所示：
试管 组别
试管1 试管2 试管3 试管4
加入3%H2O2(mL) 2 2 2 2
实验处理
温度
加入试剂
常温
/
90℃
/
常温 常温
2滴3.5%FeCl3溶液 2滴20%肝脏研磨液
淀粉(diànfěn)的
(2)鉴定原理：温度影响(yǐngxiǎng)酶的活性，从而影响
水解
(yǐngxiǎng)___________，
滴加碘液，根据是否出现____蓝_及色_____蓝__色__的__深来浅判断酶的
活性。
第三页，共48页。
2.pH对酶活性的影响：
(1)反应原理：2H2O2 过氧化氢酶2H_2_O_+_O_2__。
第十二页，共48页。
对该实验的有关分析不正确的是( ) A.在上表的实验处理中，研究了温度和催化剂两个自变量 B.试管2中因为(yīn wèi)没有加入任何试剂，所以应为空白对照组 C.若试管4和试管1组成对照实验，可说明酶具有催化作用 D.若要研究酶的高效性，可选用的实验组合是试管4和试管3
第一页，共48页。
考纲 考情
三年5考 高考指数：★★★☆☆ 探究影响酶活性的因素
第二页，共48页。
【实验原理】
1.温度对酶活性的影响(yǐngxiǎng)：
(1)反应原理：淀粉 淀粉酶 麦芽糖
碘液 碘液
无蓝色出现
_____ _蓝__色________(chūxiàn)
第二十九页，共48页。
二、实验(Leabharlann híyàn)步骤：步骤加入 试剂
设置反 应条件
剂量 观察气 泡产生
试管编号
a
b
c
d
3%H2O2 2 mL
第十一页，共48页。
2.在“比较过氧化氢(ɡuò yǎnɡ huà qīnɡ)在不同条件下的分解”实验 中，对实验的处理如表所示：
试管 组别
试管1 试管2 试管3 试管4
加入3%H2O2(mL) 2 2 2 2
实验处理
温度
加入试剂
常温
/
90℃
/
常温 常温
2滴3.5%FeCl3溶液 2滴20%肝脏研磨液
淀粉(diànfěn)的
(2)鉴定原理：温度影响(yǐngxiǎng)酶的活性，从而影响
水解
(yǐngxiǎng)___________，
滴加碘液，根据是否出现____蓝_及色_____蓝__色__的__深来浅判断酶的
活性。
第三页，共48页。
2.pH对酶活性的影响：
(1)反应原理：2H2O2 过氧化氢酶2H_2_O_+_O_2__。
第十二页，共48页。
对该实验的有关分析不正确的是( ) A.在上表的实验处理中，研究了温度和催化剂两个自变量 B.试管2中因为(yīn wèi)没有加入任何试剂，所以应为空白对照组 C.若试管4和试管1组成对照实验，可说明酶具有催化作用 D.若要研究酶的高效性，可选用的实验组合是试管4和试管3
探究温度、PH对酶活性的影响
• 材料与试剂
2% 新鲜淀粉酶溶液，3% 可溶性淀粉溶液，碘液，水，冰 块。
试管，试管架，烧杯，滴管，酒精灯，温度计，试管夹， 石棉网。
温度对淀粉酶活性的影响
2 mL淀粉溶液 2 mL淀粉溶液 2 mL淀粉溶液
A
B
C
1 mL淀粉酶溶液 1 mL淀粉酶溶液 1 mL淀粉酶溶液
A’
B’
C’
A和A’温试管度放对入淀冰块粉中酶，B活和性B’的试管影放响入温水（约
探究影响酶活性的因素
影响作酶出的假活设性的因素有
• 温度 • pH • 重金属 • 某些盐或有机溶剂
1.探究温温度度对对淀酶粉活酶性活的性影的响影响
淀粉+淀粉的温度
温度对淀粉酶活性的影响
• 原理
淀粉酶能催化淀粉分解。碘液检测剩余的淀粉的含量来反 映淀粉酶的活性。颜色越深，剩余的淀粉越多，酶活性越小。
60℃），C和C’试管放入沸水中，维持各自的温度5 min。
A
A’ B
B’
C
C’
0℃ 冰块
60℃
100℃ 沸水
分别将温A度和A对’试淀管粉，酶B和活B’性试的管，影C和响C’试管
混合，振荡，置于原来水浴中保温5 min。
A’
B’
C’
A
B
C
0℃
60℃
100℃ 沸水
目的：使反应终止
取出3支试管，放入冰块中，使温度都为0℃，分别 滴入3滴碘液，摇匀，观察记录颜色变化。
火柴。
pH对H2O2酶活性的影响
步骤：
1. 取6支试管，标号1、2、3、4、5、6，向1、2、3试 管分别加入3 mL 30% H2O2 溶液；4、5、6试管分别 加入1mL肝脏研磨液。
2% 新鲜淀粉酶溶液，3% 可溶性淀粉溶液，碘液，水，冰 块。
试管，试管架，烧杯，滴管，酒精灯，温度计，试管夹， 石棉网。
温度对淀粉酶活性的影响
2 mL淀粉溶液 2 mL淀粉溶液 2 mL淀粉溶液
A
B
C
1 mL淀粉酶溶液 1 mL淀粉酶溶液 1 mL淀粉酶溶液
A’
B’
C’
A和A’温试管度放对入淀冰块粉中酶，B活和性B’的试管影放响入温水（约
探究影响酶活性的因素
影响作酶出的假活设性的因素有
• 温度 • pH • 重金属 • 某些盐或有机溶剂
1.探究温温度度对对淀酶粉活酶性活的性影的响影响
淀粉+淀粉的温度
温度对淀粉酶活性的影响
• 原理
淀粉酶能催化淀粉分解。碘液检测剩余的淀粉的含量来反 映淀粉酶的活性。颜色越深，剩余的淀粉越多，酶活性越小。
60℃），C和C’试管放入沸水中，维持各自的温度5 min。
A
A’ B
B’
C
C’
0℃ 冰块
60℃
100℃ 沸水
分别将温A度和A对’试淀管粉，酶B和活B’性试的管，影C和响C’试管
混合，振荡，置于原来水浴中保温5 min。
A’
B’
C’
A
B
C
0℃
60℃
100℃ 沸水
目的：使反应终止
取出3支试管，放入冰块中，使温度都为0℃，分别 滴入3滴碘液，摇匀，观察记录颜色变化。
火柴。
pH对H2O2酶活性的影响
步骤：
1. 取6支试管，标号1、2、3、4、5、6，向1、2、3试 管分别加入3 mL 30% H2O2 溶液；4、5、6试管分别 加入1mL肝脏研磨液。
探究温度pH激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响说课课件
1ml
唾液淀粉酶
2滴
2滴
2滴
碘液
1滴
1滴
1滴
现象
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
五、教学过程分析 记得要给试管、烧
（三）准备实验器材
杯贴标签哦！
实验器材：试管（若干）、试管夹、试管架、胶头滴管、量筒、玻 璃棒、温度计、托盘天平、烧杯（若干）、恒温水浴锅等。
五、教学过程分析
（三）配置实验试剂
1.唾液淀粉酶应用液的制备 每人取一个干净的饮水杯，装上蒸馏水。然后用蒸馏水漱口，将口腔内的食物残渣去除
干净，口含约20ml蒸馏水，做咀嚼动作1～2min，以分泌较多的唾液，然后将口腔中的唾液吐 入贴有唾液淀粉酶标签的小烧杯中。 2.1%淀粉溶液
称取1g可溶性淀粉，加少量预冷的蒸馏水，在小烧杯中调成糊状，再徐徐倒入约90ml沸 水，同时不断搅拌，最后加水定容为100ml即可。 3.1%NaCl溶液
五、教学过程分析
（二）实验设计
酶的活性通常是通过测定酶所作用的底物在作用前后的变 化来研究的。本实验唾液淀粉酶作用的底物淀粉，被唾液淀粉 酶水解后会变为麦芽糖等产物。
淀粉被酶水解的变化，可以借遇碘呈不同颜色来观察，淀 粉遇碘呈蓝色；淀粉被唾液淀粉酶水解之后变为麦芽糖，麦芽 糖遇碘不呈现颜色反应。
五、教学过程分析文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
3
在探究激活剂和抑制剂对酶活性影响的实验中，应再增
加一组关于Na2SO4的对照，这样实验结果更有说服力。
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
六、拓展与创新。
影响酶活性的因素28页PPT
实验报告的书写
1.实验目的 2.实验原理 3.实验步骤 4.实验结果 5.实验分析
影响酶作用的因素
一、实验目的
通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证 温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性 的影响。
二、实验原理
唾液淀粉酶存在于唾液中，其作用 的底物是淀粉。
淀粉酶
淀粉
I2：蓝色
淀粉酶
糊精（大分子，小分子）
2. 器材
恒温水浴锅 电炉
比色板
四、实验操作
1.唾液淀粉酶的制备
取干净的纸杯，盛上蒸馏水。 用蒸馏水漱口。 口含约20ml蒸馏水，2-3分钟后，吐入一干净试 管中，棉花过滤。
管别
对照组 实验组
淀粉管
3ml 3ml
稀释唾液
——
蒸馏水
2ml
同时放于 2分钟后 30-40oC 水浴中
2ml
——
2分钟后做碘液检查：在比色板上滴上碘液，于
二管各取一滴加入，看是否开始水解，以后每隔
2分钟再取一滴加以检查，约6-10分钟后实验管
水解过程由蓝紫
红棕
无色，此
时水解完成。但对照管仍蓝色。
观察两管淀粉在水解后的乳样光泽
分别取两管溶液5滴，加入班氏试剂0.5ml，加热 煮沸，观察有何现象发生。
2.pH对唾液淀粉酶活性的影响
一、实验目的 了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。
3. 温度对唾液淀粉酶活力 的影响
一、实验目的 了解温度对酶活性的影响并了解最适温度的定义。
二、原理 对温度敏感是酶的一个重要特性，酶作为生物催化剂，和
一般催化剂一样呈现出温度效应，提高温度可以提高酶促反应 速度，但另一方面又会加速酶蛋白的变性速度，所以在较低的 温度范围内，酶反应速度随温度升高而增大，但是超过一定温 度后，反应速度反而下降。酶反应速度达到最大时的温度称为 酶的最适温度。酶的最适温度不是一个常数，它与作用时间的 长短有关系。
【全版】影响酶促反应速率的曲线解读推荐PPT
(1)在分析温度和pH对酶活性影响的曲线时，
都会使酶变性失活
示的是酶促反应速率，还是生成物的量 图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
。
图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
在底物充足、其他条件适宜的情况下，酶促反应速率与酶浓度呈正相关。
述，即以最适温度(pH)为界限进行表述。 要借助数学中分段函数的思想，分段描
图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
图2 底物浓度和酶浓度对酶促反应速率的影响
【影响酶促反应速率的曲线解读】
(2)在解答此类问题时，要特别关注纵坐标表 图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
解 述，即以最适温度(pH)为界限进行表述。
在一定温度(pH)范围内，随温度(pH)的升高，酶的催化作用增强，超过这一范围，酶的催化作用逐渐减弱。
读 图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
要借助数学中分段函数的思想，分段描
都会使酶变性失活
(2)在解答此类问题时，要特别关注纵坐标表 当底物达到一定浓度后，受酶数量和酶活性限制，酶促反应速率不再增加
【影响酶促反应速率的曲线解读】
[典型图示1]
在一定温度(pH)范围内，随温度(pH)的升高，酶的催 化作用增强，超过这一范围，酶的催化作用逐渐减弱。
低温只
是抑制酶
的活性，
信
酶分子结
息
构未被破
解
坏，温度 升高可恢
读
复活性。
图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
温度和pH是通过影响酶活性 来影响酶促反应速度的
图2 底物浓度和酶浓度对酶促反应速率的影响
图(1)1在分温析度温和度pH和对pH酶对促酶反活应性图速影率2响的的影曲底响线物时，浓度和酶浓度对酶促反应速率的影响
都会使酶变性失活
示的是酶促反应速率，还是生成物的量 图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
。
图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
在底物充足、其他条件适宜的情况下，酶促反应速率与酶浓度呈正相关。
述，即以最适温度(pH)为界限进行表述。 要借助数学中分段函数的思想，分段描
图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
图2 底物浓度和酶浓度对酶促反应速率的影响
【影响酶促反应速率的曲线解读】
(2)在解答此类问题时，要特别关注纵坐标表 图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
解 述，即以最适温度(pH)为界限进行表述。
在一定温度(pH)范围内，随温度(pH)的升高，酶的催化作用增强，超过这一范围，酶的催化作用逐渐减弱。
读 图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
要借助数学中分段函数的思想，分段描
都会使酶变性失活
(2)在解答此类问题时，要特别关注纵坐标表 当底物达到一定浓度后，受酶数量和酶活性限制，酶促反应速率不再增加
【影响酶促反应速率的曲线解读】
[典型图示1]
在一定温度(pH)范围内，随温度(pH)的升高，酶的催 化作用增强，超过这一范围，酶的催化作用逐渐减弱。
低温只
是抑制酶
的活性，
信
酶分子结
息
构未被破
解
坏，温度 升高可恢
读
复活性。
图1 温度和pH对酶促反应速率的影响
温度和pH是通过影响酶活性 来影响酶促反应速度的
图2 底物浓度和酶浓度对酶促反应速率的影响
图(1)1在分温析度温和度pH和对pH酶对促酶反活应性图速影率2响的的影曲底响线物时，浓度和酶浓度对酶促反应速率的影响
温度对酶活力影响PPT课件
结论2
0℃
1
2
2 低温抑制酶活力
0℃后 40℃水浴
结论3 90℃水浴
4
5
3 高温使酶失活
90℃水浴后 40℃水浴
结论4 37- 40℃
结论
1 温度对酶活力有影响
2
低温抑制酶活力
3
高温杀死酶
温度对酶活性的影响
温度对酶活性是否有影响
任务
低温对酶活性影响 高温对酶活性影响
温度对酶活性的影响-设计实验
❖ 取5支试管按下表编号
管号
1%淀粉 淀粉酶溶 水温℃ 颜色 溶液mL 液mL
1
3
1
0
2
3
1
0
3
3
1
37-40
4
3
1
90
5
3
1
90
1
2
3
4
5
0℃
0℃
40℃ 90℃ 90℃
实验步骤
❖ 取比色板，每隔1—2min用滴管从3号管中取出反应 液1滴，取碘液1滴，滴入比色板同一个孔内，观察 颜色变化。直到3号试管中液体与碘液反应颜色不变 为止
❖ 此时取出1号和4号试管，同时各加入碘液1滴，观察 颜色变化。
❖ 取出2号、5号试管置于37—40℃水浴，10min后，加 入碘液1滴，将其颜色与1号、4号管比较，有何变化。
结论
❖ 酶最适反应温度—淀粉酶最适温度为 ❖ 根据反应现象绘制曲线并解释 ❖ 低温对酶的影响：抑制酶活性 ❖ 高温对酶的影响：杀死酶
酶是生物催化剂ppt课件
5.底物浓度
酶量一定的条件下，在一定范
反
应
围内随着底物浓度的增加，反 速 率
应速率也增加，但达到一定浓
底物浓度[s]
度后不再增加，原因是受到酶数量和酶活性的
限制。
6.酶浓度
反
应
在底物充足、其他条件适宜且 速
率
固定的条件下，酶促反应速率
与酶浓度成正比。
酶浓度[E]
7.影响酶活性的曲线(多因素)
支 应 物 乘 剩 余 量 ( 相对 量 )
④在各自所控制的温度下保温一段时间
⑤滴加 碘 液 ，观察颜色变化
步骤顺 序
3%淀粉 液
2%淀粉 酶液
温度预 处理
混合后 摇匀
控制温 度
试管1 试管1’ 2ml
1ml 0℃保温5min
混合 0℃保温5min
试管2 试管2 ’ 试管3 试 管 3 ’
2ml
2ml
1ml
1ml
60℃保温5min 100℃保温5min
3、在上述实验中，自变量是什么?无关变量是 什么?
自变量是不同的温度；无关变量是可溶性淀粉溶 液、新鲜淀粉酶溶液、碘液的量
酶活性受许多因素的影响
(1)本实验不宜选用过氧化氢酶催化H₂O₂分解，因为 过氧化氢酶催化的底物过氧化氢在加热的条件下分解 也会加快。
(2)本实验不宜选用斐林试剂鉴定，温度是干扰
淀粉(非还原糖)淀粉酶 麦芽糖(还原糖) ① 淀粉(非还原糖)蔗糖酶淀粉
②再用本尼迪特试剂鉴定，从而探究酶的专一性。
1、探究淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用
第一步：1ml 水 水 水 淀粉酶淀粉酶 第二步：3ml 淀粉 蔗糖 淀粉酶淀粉蔗糖
第三步：各试管充分摇匀后，37℃保温15分钟
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验十一 温度对酶活性的影响
Exp. 11 Effect of Changes in Temperature on Enzyme Activity
.
1
一、实验原理
升高温度能使一切化学反应加速进行，对酶 的催化反应也不例外。
在低温时，酶的催化反应速度一般很低；温 度升高，催化反应速度也随之升高，但酶是蛋白 质，升高温度引起蛋白变性，使酶的活性降低。
3、于上述3管内，各加钠氏试剂2滴，混匀后，观察 各管颜色的深浅。
.
8
四、实验结果
指出哪一温度对酶的活性最适合。
注意事项
奈斯勒试剂是含有大量汞盐的强碱性溶液， 所以，它是具有腐蚀的剧毒试剂。实验时必须严 格遵守操作规程，谨防中毒。此外，作酶学实验 时所用的玻璃仪器等一切器皿必须洁净，以除去 能抑制酶活性的杂质。因此，用奈斯勒试剂作完 实验后，必须将它所沾污的试管等一切器皿充分 洗涤干净。
.
9
五、思考题
1.什么是酶反应的最适温度？ 2.如何测定一个酶的最适温度?它是否是酶的特征性
常数? 3.哪些因素对酶的最适温度有影响?
.
10
NH2 C=O + H2O
脲→酶
NH2
2NH3 + CO2
Hg NH3 + 2(HgI2.2KI) + NaOH →O<Hg>NH2 I+ 4KI + 2H2O + 3NaI
奈氏试剂
碘化双汞铵
（橙黄色）
.
4
二、实验用品
1、材料 脲酶提取液：取黄豆粉6克，加30%乙醇250毫升，振
荡10分钟，过滤，可保存1-2星期。 2、试剂 （1）pH6.6缓冲液 （2）0.1%尿素液 （3）奈斯勒（Nessler）试剂：称取5克碘化钾，溶于5毫升
蒸馏水中，加入饱和氯化汞溶液（100毫升约溶解5.7克氯 化汞），并不断搅拌。直至产生的朱红沉淀不再溶解时， 再加40毫升50%氢氧化钠溶液，稀释至100毫升，混匀，静 置过夜，倾出清液存于棕色瓶中。 3、仪器设备 小试管及试管架、滴管、水浴、温度计
.
5
三、方法和步骤
1、取小试管3支，编号，按下表加入各种试剂并将 各管在指定的温度下预先保温5分钟。
植物或微生物体内 存在的酶，其最适温度 在 50℃ 左 右 ， 如 温 度 高 至 80℃ 时 ， 除 极 少 数 酶 外，酶的活性几乎完全 丧失。
.
3
脲酶(urease )的最适温度约在45℃左右，此时 很容易将尿素分解成氨，后者能与奈氏（Nessler） 试剂作用生成橙黄色物质。生成的氨愈多，颜色 亦愈深，表示酶的活性愈大。由颜色深浅，可判 断反应进行的程度。
.
6
表1.温度对脲酶活性的影响
试剂 管号
1
0.1%尿素液 5滴
pH6.6缓冲液 5滴
温度 0~5℃(水浴)
2
5滴
5滴
40~50℃(水浴)
3
5滴
5滴
90~100℃(水浴)
.
7
2、每管各加入脲酶1滴，立即混匀并继续在各指定 温度下保温10分钟，然后将第2管及第3管用流动 的自来水冷却至室温，再放入冰水中泠却。
所以温度对酶的活性有两种相反的影响，一 方面遵从温度升高可加速化学反应的普遍规律， 一方面又随着温度的升高而使酶蛋白变性的程度 逐渐加大，前者使酶的活性增加，后者可使酶的 活性降低甚至丧失。
.
Байду номын сангаас
2
一般在比较低温的范围内（例如0～40℃），温度对酶 蛋白变性的影响不大，故酶的活性随温度的上升而增加， 若超过此温度范围，则由于酶蛋白加速变性，可使酶的活 性急剧下降甚至完全不可逆的丧失其活性（见图）。因此， 每种酶都有它的最适温度(optimum temperature)，在这个 温度下，酶表现出最高的活力。
Exp. 11 Effect of Changes in Temperature on Enzyme Activity
.
1
一、实验原理
升高温度能使一切化学反应加速进行，对酶 的催化反应也不例外。
在低温时，酶的催化反应速度一般很低；温 度升高，催化反应速度也随之升高，但酶是蛋白 质，升高温度引起蛋白变性，使酶的活性降低。
3、于上述3管内，各加钠氏试剂2滴，混匀后，观察 各管颜色的深浅。
.
8
四、实验结果
指出哪一温度对酶的活性最适合。
注意事项
奈斯勒试剂是含有大量汞盐的强碱性溶液， 所以，它是具有腐蚀的剧毒试剂。实验时必须严 格遵守操作规程，谨防中毒。此外，作酶学实验 时所用的玻璃仪器等一切器皿必须洁净，以除去 能抑制酶活性的杂质。因此，用奈斯勒试剂作完 实验后，必须将它所沾污的试管等一切器皿充分 洗涤干净。
.
9
五、思考题
1.什么是酶反应的最适温度？ 2.如何测定一个酶的最适温度?它是否是酶的特征性
常数? 3.哪些因素对酶的最适温度有影响?
.
10
NH2 C=O + H2O
脲→酶
NH2
2NH3 + CO2
Hg NH3 + 2(HgI2.2KI) + NaOH →O<Hg>NH2 I+ 4KI + 2H2O + 3NaI
奈氏试剂
碘化双汞铵
（橙黄色）
.
4
二、实验用品
1、材料 脲酶提取液：取黄豆粉6克，加30%乙醇250毫升，振
荡10分钟，过滤，可保存1-2星期。 2、试剂 （1）pH6.6缓冲液 （2）0.1%尿素液 （3）奈斯勒（Nessler）试剂：称取5克碘化钾，溶于5毫升
蒸馏水中，加入饱和氯化汞溶液（100毫升约溶解5.7克氯 化汞），并不断搅拌。直至产生的朱红沉淀不再溶解时， 再加40毫升50%氢氧化钠溶液，稀释至100毫升，混匀，静 置过夜，倾出清液存于棕色瓶中。 3、仪器设备 小试管及试管架、滴管、水浴、温度计
.
5
三、方法和步骤
1、取小试管3支，编号，按下表加入各种试剂并将 各管在指定的温度下预先保温5分钟。
植物或微生物体内 存在的酶，其最适温度 在 50℃ 左 右 ， 如 温 度 高 至 80℃ 时 ， 除 极 少 数 酶 外，酶的活性几乎完全 丧失。
.
3
脲酶(urease )的最适温度约在45℃左右，此时 很容易将尿素分解成氨，后者能与奈氏（Nessler） 试剂作用生成橙黄色物质。生成的氨愈多，颜色 亦愈深，表示酶的活性愈大。由颜色深浅，可判 断反应进行的程度。
.
6
表1.温度对脲酶活性的影响
试剂 管号
1
0.1%尿素液 5滴
pH6.6缓冲液 5滴
温度 0~5℃(水浴)
2
5滴
5滴
40~50℃(水浴)
3
5滴
5滴
90~100℃(水浴)
.
7
2、每管各加入脲酶1滴，立即混匀并继续在各指定 温度下保温10分钟，然后将第2管及第3管用流动 的自来水冷却至室温，再放入冰水中泠却。
所以温度对酶的活性有两种相反的影响，一 方面遵从温度升高可加速化学反应的普遍规律， 一方面又随着温度的升高而使酶蛋白变性的程度 逐渐加大，前者使酶的活性增加，后者可使酶的 活性降低甚至丧失。
.
Байду номын сангаас
2
一般在比较低温的范围内（例如0～40℃），温度对酶 蛋白变性的影响不大，故酶的活性随温度的上升而增加， 若超过此温度范围，则由于酶蛋白加速变性，可使酶的活 性急剧下降甚至完全不可逆的丧失其活性（见图）。因此， 每种酶都有它的最适温度(optimum temperature)，在这个 温度下，酶表现出最高的活力。