梅毒实验室检测技术

问题： 为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方法？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理
梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂质作 出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异性抗体）。
未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存在。 经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐减少滴度至转为阴 性。
病原学检查的临床意义
螺旋体检查是诊断早期梅毒 的最佳方法，对于患者的早 期诊断、及时治疗、预后和 尽早切断传染源都有十分重 要的意义。
如未见到梅毒螺旋体，并不 能排除患梅毒的可能性。
梅毒血清学检测方法
(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）
(2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。
1:16
1:32
1:64
1:128 1:256 1:512
RPR 1:256
1:1
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
1:64
1:128 1:256 1:512
TRUST 1:16
非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义
早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后 一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约
抗原抗体凝集
TPPA试验结果判读
敏感性
4+： 粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 病期
一二隐 期期性
3+： 粒子光滑覆盖大部分底
临床试验a 100 100
特异性 100
2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环 美国CDC 88 100 100 95
1+： 粒子光滑集聚覆概孔底，周围有一明显细胞环
IgM抗体检测其特异性较高，IgM抗体反映近期 感染，可帮助鉴别婴儿先天梅毒。但敏感性较低，因
此，IgM抗体检测阴性，不能排除先天梅毒感染。
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再感染的指征。
非梅
毒
98(95-100)
（一般滴度>1:8， 但不排除<1:8）
73
-
98(93-99)
非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点
假阳性反应
技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反 应，经过重复试验即可排除。
生物学假阳性反应(一般滴度小于1:8），应采用梅毒螺旋 体抗原血清学试验如TPPA等进行排除。
a:均为RPR阳性标本
±： 粒子沉集孔底，中央形成一小点
–： 粒子紧密沉积孔底中央
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ELISA/ CLIA
ELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相 板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物， 形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联 检测仪判定试验阳性反应。
本法可用于大样本血清检测。
梅毒免疫层析快速检测方法（全血法）
假阴性反应：前带现象、后带现象 血清固定：临床问题
梅毒螺旋体抗原血清学试验原理
抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重 组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗 梅毒螺旋体抗原的抗体。
感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试 验呈阳性，则患者终身阳性。
问题：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验 在梅毒诊疗中有意义吗？
TPPA
TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒人血清中的抗梅 毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高 的敏感性和特异性。
TPPA是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的“ 金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准。
TPPA试验原理示意图
+
明胶颗粒
梅毒抗原
+
抗原致敏颗粒
抗原致敏颗粒 血液中抗体
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梅毒免疫层析快速检测方法（血清、血浆法）
梅毒快速检测新进展
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梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义
作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛 阳性标本的确证试验，排除RPR 假阳性。
不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺 旋体抗原血清试验结果进行诊断。
不能作为疗效观察的指标。
亮光下观察结果
60滴/mL，1滴=17ul
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
3、定量试验
稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开
加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。
下同定性试验。 问题：定量试验血清稀释需要使用试管吗？
50%病人血清反应仍为阳性。
非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义
非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简 梅毒 敏感性
病期
(%)
单、快速、敏感性和特异性较好。 一期 86（77-99）
适用于大量人群的筛查。
二期 100
特异性 (%)
-
因治疗后血清滴度可下降并阴性， 隐性
故可作为疗效观察、判愈、复发或 晚期
？滴/mL，1滴=？ul
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
1、仪器：水平旋转仪，转速、转幅
100r/min 约18mm
2、定性试验
加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中， 并均匀地涂布在整个圈内
加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原 反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 ℃ -29 ℃） ，
治疗
的消灭》
（此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心陈祥生教授）
梅毒是一个可以临床治愈的传染病
病例诊断依据 病史 症状 实验室检查
实验室检查结果对梅毒诊断及判愈有决定性意义
主要内容
问题及概述
实验室检测注意事项及临床意义
常用梅毒实验室检测方法
病原学检测 血清学检测
？ 1:2
1:4
1:8
1:16
1:32 1:64 1:128 1:256 1:512
定量试验结果判断
血清稀释度
结果
？ 1:2 1:4 1:8 1:16
+- - - -？ ++ - - -？ ++++ - ？
问题：定量试验原倍血清滴度是多少？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
3、定量试验
稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性试验。
眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
1、仪器：水平旋转仪，转速？转幅？
2、定性试验
加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，
并均匀地涂布在整个圈内
加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原
反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 ℃ -29 ℃） ， 亮光下观察结果
问题： 临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么需
要做定性和定量两种检测方法？
非梅毒螺旋体抗原血清学原理
方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） （3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。
基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉
病原学检查
原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部
位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线 从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根 据其特殊形态和运动方式进行检测。
方法： （1）暗视显微镜检查
（2）镀银染色法

（3）核酸检测
注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，仅能通过接种兔睾 丸等部位进行有限增殖。
1:1 1:2
1:4
1:8
1:16
1:32 1:64 1:128 1:256 1:512
定量试验结果判断
血清稀释度
结果
1:1 1:2 1:4 1:8 1:16
+ - - - - 1:1 + + - - - 1:2 + + + + - 1:8
非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断
1:1
1:21:4Fra bibliotek1:8
我国梅毒基本消灭(1950-1964年)
通过三大措施，梅毒在我国实 现基本消灭
作为重大防治成就、学术成就， 赢得国际上的广泛认可。
健康教育和宣传运动
1978年获得全国科学大会奖
免费梅毒筛查（梅毒血清制动试验、 荧光抗体试验）
发表论文《我国对梅毒的控制和 消灭》、《梅毒的传播及在中国
梅毒实验室检测技术
主要内容
概述
实验室检测注意事项及临床意义
梅毒概述
3
我国梅毒流行的历史-经济繁荣的附带品
梅毒起源于美洲，然后从美洲到西班牙，从欧洲到亚洲印
度，1505年从印度传入广东岭南（“广东疮”），后传到全
国各地。
少数民族地区居民梅毒感染率 = 10% 牧区人群梅毒感染率 = 48% 部分城市地区人群梅毒感染率 = 5% 部分农村地区人群梅毒感染率 = 2-3% （此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心陈祥生教授）
梅毒血清学试验结果解释（梅毒临床诊断参考依据）
试验结果
梅毒螺旋体抗原 非梅毒螺旋体抗原
参考结果解释*
血清试验
血清试验
阳性
阳性
可能为现症梅毒
阴性
阳性
非梅毒螺旋体血清试验假阳性
阳性
阴性
临床治愈的早期梅毒（既往感染
者）
或极早期梅毒
阴性
阴性
排除梅毒感染
或极早期梅毒
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