(完整版)液相色谱使用注意事项
液相色谱使用注意事项及操作流程
液相色谱使用注意事项及操作流程英文回答：Precautions for HPLC Use.1. Ensure instrument stability: The HPLC system should be equilibrated to the desired operating temperature before use. Avoid sudden temperature changes, as these can damage the column and other components.2. Use high-quality solvents: HPLC solvents should be of analytical grade or higher to minimize impurities that can interfere with the analysis. Degassing solvents before use is recommended to remove dissolved gases that can cause bubbles in the system.3. Choose the appropriate column: The column should be selected based on the analytes of interest, the sample matrix, and the desired separation. Consider factors such as column length, particle size, and stationary phasechemistry.4. Optimize the mobile phase: The mobile phase composition and flow rate should be optimized to achieve the desired separation. Factors to consider include the solvent strength, pH, and ionic strength.5. Use appropriate sample preparation: Samples should be properly prepared to minimize matrix effects and ensure accurate quantification. This may involve filtration, dilution, or extraction.HPLC Operation Procedure.1. Prepare the HPLC system: Equilibrate the system to the desired temperature, degas the solvents, and install the appropriate column.2. Prepare the sample: Prepare the sample according to the established protocol, ensuring proper dilution and filtration if necessary.3. Inject the sample: Inject the sample into the HPLC system using an autosampler or manual injection.4. Run the analysis: Start the HPLC analysis andmonitor the chromatogram. Adjust the mobile phase composition or flow rate if necessary to optimize the separation.5. Collect and analyze data: Collect the chromatogram data and perform data analysis to identify and quantify the analytes of interest.中文回答：液相色谱使用注意事项。
高效液相色谱仪使用注意事项
岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
液相色谱使用注意事项及操作流程
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1. 样品前处理，样品应进行适当的前处理，以除去杂质和干扰物质，确保分析结果的准确性。
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项一，高效液相色谱仪操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
冲洗过程中关闭D灯、W灯；7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。
（续）1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
液相实验室操作要点及注意事项
液相实验室操作要点及注意事项液相实验室操作要点及注意事项1.液相色谱仪应臵于稳定的工作台上，避免震动、阳光直射和气流。
环境温度为10-30℃(应恒定)，相对湿度25%-75%。
电源电压220±20V。
应保持仪器放臵房间的清洁、卫生，每天打扫房间、擦洗操作台和仪器外壁。
2.流动相使用前必须经过0.45μm的滤膜，有机相的流动相必须为色谱纯，水相必须为新鲜制备的纯化水，并规定使用有效期，以防止长菌或长藻类。
3. Agilent HPLC色谱仪用于清洗用的10%异丙醇每15天更换一次，Waters HPLC色谱仪用于清洗密封垫和进样针的10%甲醇每15天更换一次。
4.色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（如ACN适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。
5.对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。
6.AgilentHPLC色谱仪每3个月或当玻璃滤头发黑时，用30%硝酸浸泡玻璃滤头30min(禁止超声) ， WatersHPLC色谱仪每3个月用纯化水超声金属滤头30min。
7.Agilent HPLC色谱仪使用5ml/min的流速排气时，如果压力大于10bar，更换过滤用白色滤头; Waters HPLC色谱仪应定期（说明）清洗在线过滤器。
8.紫外检测器的氘灯有一定的寿命，进样前一小时左右打开即可。
实验完成冲洗柱子时即关闭以延长使用时间。
每3个月用色谱纯的异丙醇（或甲醇）冲洗检测池。
9.仪器如较长时间不用应使高效液相色谱仪处于所有电源开启、检测器紫外灯关闭的待机状态，不能频繁的开启/关闭电源。
10.发现泵漏液、紫外灯能量不足或损坏、仪器无法启动等等较严重的情况，应报告室主任，室主任安排进行检查，维修，并做好记录。
11.进入计算机上的色谱工作站应设臵密码。
如工作站上不能设臵密码，则应在装有该色谱工作站的计算机上设臵密码，防止未经许可授权的人员进入该工作站系统。
高效液相色谱仪使用注意事
高效液相色谱仪使用注意事项
（1）流动相放置时间超过三天的不要继续使用，应重新配制，需要调PH的千万不能遗忘！！！
（2）配制好的流动相应过滤，并超声15分钟！
（3）换流动相时候，应停泵，换好流动相后，先将流速调为0.8，运行10分钟后将流速重新调回标准要求的
流速。
（4）实验过程中，注意观察压力的变化，并注意流动相是否充足，否则应该及时补充。
（5）实验前和实验后都应清洗进样阀，定量环，并将基线走平，用滤纸把进样口擦干！
（6）进样的时候，应该将进样针完全插入进样口，若进样针还有部分留在外面，说明没有进到位，样品不
会完全打进去！！！
（7）实验完成后，应尽快关闭检测器，因为紫外灯的寿命只有2000小时，而且更换紫外灯的费用比较高！（8）冲柱子的冲柱水和甲醇都应该过滤和超声，且在换冲柱水和甲醇的时候都要调流速。
参照第（3）条！（9）经常注意观察桌面上和地上的废液缸，及时倒掉废液！。
高效液相色谱仪使用注意事项
高效液相色谱仪使用注意事项
1、循环水可用5%甲醇。
2、纯化水的电导率为18。
3、过滤溶液时混合溶剂用油膜；也可先用水膜过滤水溶液，再用油膜过滤有机溶剂。
4、开机后先用纯甲醇冲洗柱子20～30min →纯化水冲洗20～30min →流动相（盐溶液）
关机前冲洗柱子顺序相反。
5、柱子安装方向：柱子上箭头指示的方向（液体流动方向）安装；低压到高压的顺序。
注意
安装接头连接紧密。
进样量一般为3次，每次进样20µl。
6、检测器：AU 吸收值不变表示柱子中无杂质存在。
λ表示波长
E SAMP 样品池能量（大于200）
EREF 参比池能量不变
ADJ 参数不变
泵：PSI 压力不变表示无气泡
7、排气泡：可用大注射器抽5ml液体。
8、新柱子的柱压在1000左右。
10、进样器的针管与针头分开放，清洗时先用纯甲醇再用纯化水。
11、连续注入样品三次且保留时间和峰面积重合（误差5%）表明系统稳定可以检测。
12、标准品和样品做两组平行试验。
13、每周开机一次，每月用甲醇冲洗柱子至少一次（20～30min）。
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理 液相色谱操作规程
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理液相色谱操作规程液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，堵塞色谱柱。
2. 流动相：1）在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。
流动相确定要使用色谱级别的溶剂。
如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避开细菌产生。
2）流动相使用前需用微孔滤膜过滤,除去流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。
缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避开溶解度变化造成产生新的沉淀。
不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。
还可以使色谱柱更简单平衡）。
3）流动相需脱气后使用，可避开因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。
假如测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区分，应当使用过度分布的形式进行平衡。
避开由于流动相的蓦地变化造成柱压加添过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。
正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
4）流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水*好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
5）以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
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流动相：
1. 流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2. 流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3. 含水流动相最好在临实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。
最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
4. 流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
5. 流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
色谱柱:
1. 要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
2. 长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
3. C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
4. 一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会迅速降低柱效。
5. 经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。
6. 保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。
绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
使用注意事项：
1. 使用中避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行。
2. 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）。
3. 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇/乙腈中。