Transwell 使用介绍
transwell共培养原理
一、Transwell共培养介绍Transwell共培养是一种常用的体外细胞培养技术，通过使用Transwell孔膜插入式细胞培养皿，可以模拟细胞间相互影响的情况，从而更好地研究细胞间信号传导、细胞迁移和细胞间相互作用等生物学过程。
本文将结合Transwell共培养的原理、应用和操作步骤，对该技术进行详细介绍。
二、Transwell共培养的原理Transwell共培养的原理是利用Transwell孔膜插入式细胞培养皿，使得上下室中的细胞可以通过孔膜进行相互作用。
孔膜的直径通常在3-12微米之间，可以根据实验需要选择不同直径的孔膜。
上下室中的细胞可以分别种植在孔膜的两侧，从而实现细胞间的共培养。
三、Transwell共培养的应用1. 模拟体内细胞间相互作用：Transwell共培养可以实现不同类型细胞之间的相互作用，如免疫细胞与肿瘤细胞、上皮细胞与间质细胞等，从而更好地模拟体内情况。
2. 研究细胞迁移和浸润：通过在孔膜上涂覆ECM或采用Transwell迁移实验可以模拟细胞的迁移和浸润过程，对细胞迁移机制进行研究。
3. 评价药物渗透性：可用于评价药物在肠道、肾小球等组织中的渗透性，以预测其在体内的分布和代谢情况。
四、Transwell共培养的操作步骤1. 准备Transwell孔膜：选择合适直径的Transwell孔膜，并在使用前进行灭菌处理。
2. 细胞培养：分别将上下室的细胞分别种植在Transwell孔膜的两侧。
3. 培养条件：放置Transwell共培养皿于细胞培养箱中，保持适宜的pH值和温度，并定期更换培养基。
4. 实验操作：根据实验的目的，可进行细胞迁移实验、信号传导实验等操作。
5. 结果分析：对实验结果进行统计分析，观察上下室细胞的形态及细胞指标的变化。
五、Transwell共培养技术的发展趋势随着生物医学研究的不断深入，Transwell共培养技术也在不断发展。
未来，Transwell共培养技术有望应用于疾病模型的构建、靶向药物筛选等领域。
Transwell 说明书
总览
0.4 μm孔径聚碳酯膜的扫描电镜
PTFE膜的扫描电镜，显示孔径结构
在6孔板中的聚酯Transwell透明 嵌套显示膜的清晰度
12mm直径的Transwell嵌套带有 聚碳酯膜 02
细胞和组织培养技术在基础和应用生命科学领域的重要性日益提高。为尽可能的模拟体内 环境以培养某些特殊的细胞系，新的培养容器和细胞贴附的表面不断涌现。顺理成章的， 使用带有多微孔膜的通透性支持物培养这些细胞成为基本的方法。通透性支持物可以有效 改善极性细胞的培养，因为这些支持物允许细胞从其基底面和顶面分泌和吸收分子，从而 以更为自然的方式进行代谢。
无 1 x 105孔/cm2
*数据为额定值，可能有生产流程误差有所不同，为保证实验成功，我们推荐研究者确立自己的实验方法。
表4. Transwell 通透性支持物生长面积
嵌套直径
多孔板和培养皿类型
嵌套膜生长面积
4.26mm
96 well
0.143 cm2
6.5mm
24well
0.33 cm2
12mm
Transwell® 通透性支持物的 选择和使用手册
目录
contents
02 总览 02 选择合适的Transwell膜和合适的孔径 03 选择合适的Transwell 系统 06 如何使用Transwell通透性支持物 06 使用提示 06 常规使用指南 07 技术支持 08 订购信息 08 聚酯（PET）Tranwell 嵌套 08 胶原包被的Tranwell-COL嵌套 09 聚碳酯Transwell嵌套 10 Snapwell 嵌套 10 高通量筛选HTS Transwell-24系统 11 6，12和24孔细胞培养板 12 HTS Transwell-96系统
transwell小体原理 -回复
transwell小体原理-回复transwell，也称为转移百分率孔板（Transwell Permeable Supports），是一种常用于研究细胞迁移、侵袭和转移的实验方法。
它通过模拟生理条件下的细胞迁移情况，提供了一种方便、可靠的实验平台。
本文将详细介绍transwell小体的工作原理和使用方法。
第一步：理解transwell小体的基本原理transwell小体由上下两个隔离的室组成，上室为细胞培养室，下室为培养液室。
两者之间分隔着一块孔径合适的膜片。
通常，膜片选择多孔性聚碳酸酯或胶原膜，其孔径大小可根据具体实验需求进行选择。
细胞可以通过膜孔迁移到下室中，从而模拟细胞在体内穿越生理屏障的过程。
第二步：制备transwell小体实验装置1. 准备上下室：选择适当容量的上下室，通常上室较小，下室较大，确保两个室都可以容纳足够的培养液和细胞。
2. 安装膜片：将膜片放入上室中，确保膜片放置平整，没有明显的气泡或污染物。
3. 连接上下室：使用连接管将上室与下室连接起来，并确保连接部分密封良好，以防止液体泄漏。
第三步：培养细胞1. 处理膜片：在实验前，先对膜片进行处理。
对于多孔性膜片，可以先进行预涂或预培养，以增加细胞附着和生长的效率。
2. 细胞培养：将需要进行迁移实验的细胞悬浮液加入上室中，并注意控制细胞密度，避免过高或过低的细胞数目。
3. 培养液添加：在上室中添加适当的培养液，以满足细胞的生长和迁移需求。
同时，在下室中加入相应的培养液，以提供适当的环境和条件。
第四步：进行实验1. 实验前处理：在进行实验前，可以对细胞进行预处理，例如添加化学物质或进行基因操作，以模拟特定的生理或病理状态。
2. 实验操作：将设备放置在恒温培养箱中，以保证适宜的温度和环境条件。
根据实验需要，可以对不同的上下室中的条件进行调控，例如填充不同的培养液、添加特定的化学物质等。
3. 实验时间：根据具体实验要求和细胞特性，确定合适的实验时间。
transwell小室实验原理
Transwell小室实验是一种常用于细胞学研究中的实验方法，主要用于研究细胞迁移、侵袭、成血管和细胞-细胞相互作用等细胞生物学现象。
本文将详细介绍Transwell小室实验的原理及其在细胞学研究中的应用。
一、Transwell小室实验原理Transwell小室实验是通过一种特殊的小室装置进行的，该装置由两个分隔的小室组成，上下两个小室之间通过一片具有微孔的多孔膜相连。
这片多孔膜的孔径可以根据实验需要进行选择，常见的孔径有3um、8um等。
在实验过程中，我们将需要观察的细胞或细胞外基质放置在上小室中，而下小室中则向其添加一定浓度的化学物质或药物。
待实验进行一定时间后，我们可以通过上下小室之间的多孔膜来观察细胞的迁移、侵袭或是其他相关现象。
在Transwell小室实验中，我们可以根据实验需要对多孔膜进行功能修饰，比如涂覆胶原蛋白、基质蛋白等物质，或是加入不同浓度的化学刺激物质，以模拟细胞在不同生理环境下的行为。
这种设置能够更真实地反映细胞在体内的生理活动，进一步帮助我们理解细胞的生理与病理过程。
二、Transwell小室实验在细胞学研究中的应用1.细胞迁移和侵袭研究Transwell小室实验广泛应用于细胞迁移和侵袭研究中。
我们可以将需要研究的细胞悬浮在上小室中，然后在下小室中添加诱导因子，比如趋化因子、血浆成分等，通过多孔膜对细胞进行筛选，并观察细胞在多孔膜上迁移扩散的情况。
这种实验能够模拟体内细胞在不同环境中的迁移和侵袭过程，帮助我们更好地理解细胞在肿瘤转移、炎症反应等生理和病理过程中的行为。
2.成血管研究Transwell小室实验也常用于细胞成血管相关的研究。
我们可以在上小室中培养内皮细胞或其他与血管生成相关的细胞，然后在下小室中添加适当的生长因子或细胞因子，观察细胞在多孔膜上形成管状结构。
这种实验方法有助于我们深入了解血管生成的分子机制，并为相关疾病的治疗提供新的思路。
3.细胞-细胞相互作用研究在细胞-细胞相互作用研究中，Transwell小室实验也具有重要的应用价值。
细胞内吞实验操作步骤 (Transwell)
细胞内吞实验操作步骤 (Transwell)细胞内吞实验是一种常用的实验方法，用于研究细胞对外界物质的摄取过程。
Transwell是一种常用的实验仪器，用于模拟细胞内吞的过程。
以下是细胞内吞实验操作步骤的简要介绍：1. 准备细胞培养物- 从细胞库中选取需要进行实验的细胞系，并进行细胞培养。
- 在适当的培养基中培养细胞，使其达到合适的密度。
2. 准备Transwell装置- 取出Transwell装置，检查是否完好无损。
- 将适当的培养基添加到Transwell的上室和下室中。
3. 细胞接种- 将预先培养好的细胞通过传代方法收集。
- 计算细胞的浓度，根据实验需要进行稀释。
- 将适当浓度的细胞悬液加入Transwell的上室中。
- 将上室和下室之间的孔隙区域密封，避免交叉污染。
4. 培养细胞- 将装有细胞的Transwell装置放入孵化箱中。
- 设置适当的温度、湿度和气体组成以提供最佳的细胞生长条件。
- 将细胞培养在孵化箱中的适当时间，以确保细胞内吞的进行。
5. 固定和染色- 取出细胞培养装置，并将培养液倒掉。
- 用适当的缓冲液进行细胞固定。
- 根据需要选择适当的染色方法，如普鲁士蓝染色、荧光染色等。
6. 观察和分析- 使用显微镜观察固定并染色的细胞。
- 记录细胞内吞的现象和观察到的细胞形态等。
- 根据需要使用图像分析软件对细胞进行图像处理和数据分析。
注意事项：- 在操作过程中，注意细胞的无菌处理，避免细菌或其它污染物的引入。
- 每个步骤都应该严格按照实验室的操作规范进行操作。
- 根据实验需要，可以根据具体情况进行适当的调整和优化。
以上是细胞内吞实验操作步骤的简要介绍，希望能对您的实验有所帮助。
(完整版)Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
transwell英语方法学
transwell英语方法学全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：Transwell方法学是一种常用的实验技术，用于研究细胞迁移和侵袭的过程。
该技术通过Transwell孔板的使用，可以模拟细胞在体内穿过基底膜向远离原始生长处的方向迁移的过程。
通过调整不同的实验条件，可以研究细胞迁移的机制、影响因素以及药物对迁移的影响等内容。
Transwell方法学的基本原理是在Transwell孔板上设置两个细胞培养室，分别为上室和下室。
上室中加入待测试的细胞悬液，下室中加入细胞培养基或药物，上下室之间通过具有不同大小的孔的膜隔开。
细胞悬液被加入到上室后，细胞便会通过孔板的膜向下室迁移，最终在下室中集聚或附着。
通过对下室中细胞数量或细胞可能产生的代谢产物进行检测，可以获得细胞迁移或侵袭的相关数据。
在进行Transwell实验时，需注意以下几点：1. 细胞选用：选择适当的细胞系进行实验，不同类型的细胞具有不同的迁移能力和侵袭能力，需要根据实验目的和研究对象来选择合适的细胞系。
2. 孵育时间：适当的孵育时间是保证实验结果准确性的关键。
孵育时间过短可能导致细胞未完全迁移或侵袭，孵育时间过长则可能导致细胞产生过多的迁移或侵袭，影响数据的解释。
3. 孔板处理：在使用Transwell孔板前需要进行处理，如预润滑、杀菌等步骤。
孔板的处理应该严格按照生产商的说明进行，避免处理不当导致实验结果的干扰。
4. 控制实验：在进行实验时需要设置对照组，如阴性对照组和阳性对照组。
通过对照组的设置，可以更准确地评价实验结果，排除外界因素的干扰。
Transwell方法学在肿瘤学、生物学、药理学等领域均有广泛的应用。
通过该技术，可以研究肿瘤细胞的侵袭和转移机制、药物对癌细胞迁移的影响、神经元的迁移等方面。
随着技术的不断完善和发展，Transwell方法学在相关研究领域中将发挥越来越重要的作用。
Transwell方法学是一种简单、经济且有效的实验技术，广泛应用于细胞迁移和侵袭相关研究领域。
Transwell是检测细胞侵袭能力的检测方法
Transwell是检测细胞侵袭能力的检测方法Transwell是检测细胞侵袭能力的检测方法我们所使用的是Chemicon公司的ECM554，基质胶已经包被好了，买来就可以用，很方便，而且我们算过，跟自己买胶来包被价格相差不大。
这种胶4度下很软，37度则变得比较坚硬，因此用前应先放在培养箱中10分钟作用，使胶完全凝固。
该试剂盒对穿过膜的细胞进行荧光染色，再用裂解液裂解细胞后检测荧光值。
我们在实际使用的时候对穿过膜的细胞采用1％结晶紫染色，镜下计数细胞数目。
结晶紫也可以用33%醋酸溶解，再用酶标仪570nm检测，同样可以反应穿过细胞数因为基质胶的厚度直接影响穿过膜的细胞数，因此建议有条件的话还是买这类已经铺好胶的试剂盒，比较可靠。
说明书该公司网上可以下载，对原理也有比较详细的阐述，可以去查一下。
我们做的时候，上室用0.5%BSA的培养液，下室用5%血清的培养液，下室血清的浓度可根据细胞类型的不同进行调整，如果细胞侵袭能力强，可适当降低血清浓度，否则可适当提高血清浓度。
需要注意的是：1。
上室内的细胞数目要适当，过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果用计数法的话将难以计数；最少也要保证在收样的时候，上室内还要有细胞存在。
具体细胞密度需要自己摸索。
2。
细胞计数的准确性对结果影响很大，各组间最好不要分开计数。
尽量用同一密度的细胞悬液给予不同处理，保证各组细胞量一致3。
对细胞的处理不可影响细胞生存。
否则难以肯定是细胞量的改变还是侵袭能力改变侵袭小室其实不止是transwell的，其它像Boyden chamber、Thincert也挺好用的。
我用过Thincert，个人感觉不错，而且价格便宜，是grelner的，孔径8微米用于24孔板的一个才45块人民币，而且可以零买，不想transwell，总是一箱一箱的卖，实在是太贵了！侵袭实验要结合实验目的，不一定非要包被的。
下面奉上用Thincert做侵袭实验的步骤（摘自《A quantitative cell migration assay using ThinCert? cell culture inserts》，大家如需要，可用google搜之）：1. Prepare cell cultures according to standard cell culture procedures2. Starve cells overnight in serum-free medium with 0.2 % BSA3. Harvest cells and wash them twice in PBS4. Resuspend cells in serum-free medium with 0.2 % BSA to an appropriate final cell concentration (e.g. 106/ml)5. Place 24 well ThinCertTM cell culture inserts in the wells ofa CELLSTAR? 24 well cell culture plate6. Add 600 μl culture medium with or without chemoattractant to each well of the cell culture plate7. Add 200 μl cell suspension t o each cell culture insert8. Incubate the cell culture plate for 3-24 h in a cell culture incubator at 37°C and 5 % CO29. Remove the cell culture medium from each well of the cell culture plate and replace it by 450 μl serum-free culture medium with 8 μM Calcein-AM10. Incubate for 45 min in a cell culture incubator at 37°C and 5 % CO211. Remove the culture medium from the cell culture inserts12. Transfer the cell culture inserts into a freshly prepared 24 well cell culture plate containing 500 μl prewa rmed Trypsin-EDTA per well13. Incubate for 10 min in a cell culture incubator at 37°C and 5 % CO2, agitate the plate from time to time14. Discard the cell culture inserts and transfer 200 μl of theTrypsin-EDTA solution (now containing the migratory cells) from each well into a black flat bottom 96 well plate15. Read fluorescence in a fluorescence plate reader at an excitation wavelength of 485 nm and an emission wavelength of 520 nm从第9步开始计数侵袭细胞时，这份说明书用的是荧光标记，但这种方法成本高而且繁琐。
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1. Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（perme able supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
下图是一个Transwell装置的纵切面将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
（2）趋化性实验可用5.0、8.0、12.0µm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。
②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
（3）肿瘤细胞迁移实验常用8.0、12.0µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
（4）肿瘤细胞侵袭实验常用8.0、12.0µm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。
上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，但与肿瘤细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。
计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
2.肿瘤细胞侵袭模型用于研究肿瘤细胞侵袭能力的肿瘤细胞侵袭模型有如下几种（引自司徒镇强《细胞培养》）：2.1 体内癌细胞侵袭模型2.1.1 皮下移植侵袭模型2.1.2 肌肉内移植侵袭模型2.1.3 腹腔内移植侵袭模型2.1.4 小鼠肾包膜下移植侵袭模型2.1.5 鼠睾丸包膜下移植侵袭模型2.1.6 小鼠耳廓皮下移植侵袭模型2.1.7 鼠爪垫皮下移植侵袭模型2.1.8 视网内界膜侵袭模型2.2 体外癌细胞侵袭模型2.2.1 体外静止器官培养法2.2.1.1 半固体培养基单细胞器官培养法2.2.1.2 液体培养基单细胞器官培养法2.2.2 半体外半体内器官培养法2.2.3 单层细胞器官培养法2.2.4 瘤细胞球体器官培养法2.2.4.1 静止球体器官培养法2.2.4.2 旋转摇动球体器官培养法2.2.5 单层细胞侵袭实验模型2.2.6 Transwell侵袭小室测定法可见，Transwell与侵袭实验之间并不能划等号，Transwell有多种应用，侵袭实验也有多种方法。
所谓Transwell侵袭实验，其实是指将Transwell这一技术应用于肿瘤细胞侵袭研究的一种实验。
由于其简单易行、重复性好，因而得到了越来越广泛的应用，但不能认为研究肿瘤侵袭只有Transwell一种方法。
第二节Transwell侵袭实验我的课题涉及Transwell侵袭实验和Transwell迁移实验，其他方面的Transwell应用我不太清楚，因此这里主要谈谈Transwell侵袭实验。
1.实验用品：①Transwell小室：多种厂家可提供，论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室，我们实验室用的是Chemicon公司的ECM550系列，另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell 和雕弓满月射天狼战友介绍的Thincert。
这些厂家提供的小室，有的已铺好基质胶，买来就可以用，很方便，但也比较贵，我们实验室用的Chemicon公司的ECM550系列是已经铺好胶的，质量很好，但是非常贵，2 4孔板配套的小室，每个价格约130元，不推荐给大家。
BD也有已包被好的，价格不清楚。
Coster和Corning公司生产的小室，是论坛里比较常用的，好像是要自己铺胶，但据说每个小室成本只有40左右，应该比较适合中国国情。
下面是一些战友提供的价格，具体建议大家联系代理商咨询。
linanping1979战友提供的价格：coster的24孔板的transwell的价格是456元RMB,8µm，用于肿瘤的侵袭实验。
iceyxy战友提供的价格：Millipore的8µm的50个1760RMB,0.4µm的2000多,是一次性的。
梅林战友提供的BD价格：240RMB一块（6.5um,24孔,12instert），好像是没胶的。
liguofan说国产的boyden30块一个。
jjyy提供的价格是：corning cat No.3422. 6.5mm tr answell with 8.0um prore polycarbonate membrane insert, Qty 48,950人民币不到。
平均每个20元不到。
Transwell小室按照公司的要求，都是一次性使用的。
不过其实洗洗泡泡还是可以重复用的。
我用的Chemicon公司的ECM554，用完后擦去基质胶，再用胰酶和75%酒精泡，可以把膜洗得很干净，用前用紫外里外都照30min。
sword01战友提供的处理方法：用棉签轻轻擦去胶和反面细胞，清水冲洗，超声清洗，低挡，30min，清水3×5min，蒸馏水3×5 min，室温凉干，用前紫外线小室正面3h，反面6h，微波，低火10min×2。
因为我买的是铺好胶的，所以没买Matrigel，二次利用的小室只用来做不需要铺胶的迁移实验。
以前的Chemicon ECM550系列，膜很结实，擦不坏，可以反复用很多次，但现在的膜已经改用一种很薄很脆的材料，一般只能重复用一次，真黑啊！很多战友说Cost ar和Corning也是可以重复用的，大家可以试试。
另外，根据论坛战友提供的信息，osmonic公司有专用的膜出售，鼎国生物代理。
Tr answell小室用过后，可把原来的膜切下，贴上osmonic公司的膜，这样又可以用了，不过我没用过，有兴趣的可以试试。
maojianwen战友的使用方法：trasnwell小室做一次后，将原来的膜去掉，重新泡酸，泡酒精，使用前照紫外，然后用女士用指甲油（注意用无色较稀的）将osmonic公司的膜贴上，剪掉多余的边缘。
再照紫外。
②上层培养液：上层培养液采用无血清培养基，为维持渗透压，需加入0.05%-0.2% BSA。
③细胞：值得注意的是，有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。
建议实验前先用酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。
如果不清楚细胞MMPs的表达情况，就盲目进行Transwell侵袭实验，可能会造成不必要的浪费，一次Transwell侵袭实验花钱少则数百，多则数千，并不是笔小数目，还是小心为妙。
另外，为了让实验结果更明显，可先撤血清让细胞饥饿12－24h，再进行实验。
④基质胶：常用的是人工重构基底膜材料Matrigel，主要成分为层黏连蛋白和Ⅳ型胶原，生产厂家有BD、美国Collaborative Rsearch公司等。
CaoY战友的帖这么说的：Matrigel是BD 公司生产的，是一种细胞外基质，4度时是液体，在37度会逐渐凝固成胶状，不可逆。
同样的东西在sigma叫ECM。
zhangyong1036战友提供的价格：BD公司的matrigel 1500左右。
如果购买的小室是已经铺好基质胶的，那么Matrigel就不需要购买了。
⑤下层培养液：下层常用含5%－10% FBS的培养基，具体浓度根据细胞侵袭力而定，侵袭力弱的细胞可适当提高FBS浓度。
下层也可用趋化因子，有战友将纤维粘连蛋白加入下层培养液作为趋化因子，但个人认为，FBS仍是最合适的。
⑥细胞培养板：常用于Transwell侵袭实验的细胞培养板有6孔板、12孔板、24孔板等，以24孔最常用。
细胞培养板没什么特殊要求，普通的细胞培养板就可以。
但要注意，细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套。
⑦此外，膜的下室面可涂上纤维粘连蛋白(fibronectin，FN，Sigma有售)，这样做的目的是使穿过膜的细胞更好地附着在膜上，也可用胶原（collagen）或明胶（gelatin）。
很多战友认为这不是必须的，而且我也是不涂的，细胞照样贴壁很好。
如果贴壁不好的话可以试试看。
linanping1979战友认为，如果培养时间很长（>24h），细胞还是会掉到下室里面去，所以有条件的话，最好还是在膜下层涂上FN。
另外，值得一提的是，膜下层涂上FN还有一定的趋化作用。
2．步骤2.1 Transwell小室制备2.1.1 无基质胶Transwell小室制备①包被基底膜：用50mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃风干。
如果需要在下室面铺FN的话，可将200ul枪头的尖端剪掉,吸取FN均匀涂抹在小室的下面。
用胶原（collagen）的话，一般配成0.5mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。
②水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37℃，30min。