胞浆、胞核提取(细胞)
细胞核-胞浆分离方法
本试剂盒提取的胞核和胞浆组分仍保持其生化功能，适合下游分析如转录活性，RNA 拼接，gel－shift 分析，报告分析，酶活性分析和 WB 等。
使用方法： 1. 取 5-10×106 个细胞①，在 4℃，500×g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养基， 尽可能吸干，收集细胞。 2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 3. 在细胞沉淀中加入 200μl 冷的提取液 A，涡旋振荡混匀或吹打混匀，置冰上振 荡 30 分钟。（没有振荡条件的话，也可冰上静置，中间每隔 5 分钟涡旋振荡或 吹打混匀。） 4. 在 4℃，1200×g 条件下离心 5 分钟。 5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到胞浆组分，请置冰箱保存备用或直 接用于下游实验。 6. 沉淀用 PBS 洗涤一次，然后在 4℃，2000×g 条件下离心 5 分钟，弃上清。 7. 沉淀为细胞核组分，将沉淀用 200ul 保存液 B 重悬后保存备用或直接用于下游 实验。
-1-
细胞核/胞浆分离试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
提取液 A 核保存液 B 蛋白酶抑制剂混合物
BB-36021-1 50T 10ml 10ml 250ul
BB-36021-2 100T 20ml 20ml 500ul
储存条件： 提取液 2-8℃保存； 蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期： 一年。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
产品简介： 贝博细胞核/胞浆分离试剂盒可以从哺乳动物细胞中分离细胞核和胞浆组分。此试剂
胞浆胞核蛋白提取
胞浆胞核蛋白提取
1 细胞密度80%-90%时，取出细胞置于冰上。
2 使用预冷的PBS缓冲液冲洗3遍，去除残留液体。
3 向培养瓶中加入300ul的胞质溶胶提取缓冲液A(cytosol extraction buffer A, CEB-
A)，刮取细胞至1.5ml进口离心管中。
4 在涡旋震荡混匀器上震荡30s，冰上静置10min，每5min震荡一次。
5 加入30ul的胞质溶胶提取缓冲液B(cytosol extraction buffer B, CEB-B)，
涡旋震荡混匀10s，冰上放置1min.
6 4℃离心，1000g，5min。
7 吸取上清，既得到胞浆蛋白。
8 加入100ul的CEB-A，清洗核沉淀，4℃离心，1000g，5min。
9 弃上清，加入40ul的核提取缓冲液(nuclear extraction buffer，NEB)
涡旋震荡混匀10s，冰上放置30min，每5min涡旋震荡10s。
10 4℃离心，1000g，5min。
11 吸取上清，既得到核蛋白。
12 分装至0.2进口EP管中，-80℃保存。
胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒说明书
胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒产品编号产品名称包装SINP001 胞浆－核蛋白抽提试剂盒50×产品简介：细胞核和细胞浆目前成为研究细胞组分的两个热点，获得高浓度的细胞核蛋白和细胞浆蛋白成为得到好的研究结果的重要实验过程。
本试剂盒主要原理是在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，离心得到细胞核沉淀。
最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒是本公司非放射性EMSA试剂盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004,）实验成功的重要部分，经BCA测定24cm2贴壁细胞(或50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)抽提物，核蛋白浓度约为 2.5ug/ul或更高。
抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
本试剂盒可足够您进行50次抽提操作！包装清单：试剂包装总量5X Buffer A 1瓶35ml/瓶2X Buffer B1支 1.5ml/支Solution I（溶液I）1支 1.75ml/支Solution II（溶液II）1支 1.75ml/支Solution III（溶液III）1支 1.5ml/支PMSF Solution 1支0.85ml/支User Manual (说明书)1份1份/Kit保存温度： 4℃保存。
Ⅰ.准备抽提试剂：按照下列方法制备胞浆－核蛋白抽提液：1.制备3ml胞浆蛋白裂解液I ：试剂体积5X Buffer A0.6mlSolution I（溶液I）30ulSolution II（溶液II）30ulPMSF Solution 15uldd-H2O 2.325ml总体积 3.0ml注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
2.制备1.02ml胞浆蛋白裂解液II：试剂体积Solution III（溶液III）20ul胞浆蛋白裂解液I 1.0ml总体积 1.02ml3.制备1ml核裂解液：试剂体积2X Buffer B25ulSolution I（溶液I）0.5ulSolution II（溶液II）0.5ulPMSF Solution0.25uldd-H2O23.75ul总体积 50ul注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)
胞浆蛋白/核蛋白/膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞) (Catalog #DBI-1021 ; DBI-1022; Store kit at 4℃)描述:本试剂盒提供了蛋白抽提试剂A，蛋白抽提抽提试剂B，蛋白抽提试剂C三种具有独特组分的缓冲液。
所有试剂采用PIPES缓冲系统。
通过实验，可以得到：细胞胞浆蛋白（其中含有含有可溶性的骨架蛋白）；细胞膜蛋白（其中包含细胞质膜蛋白和细胞器膜蛋白）；细胞核蛋白；其最后剩余的沉淀为难溶性的胞质骨架和纤维蛋白。
提取方法简单，可靠，快速。
获得的各种部分蛋白纯度高，可用于PAGE 电泳、Western Blot、免疫共沉淀、EMSA等后续研究。
该试剂盒所得到的蛋白溶液适合用Bradeford法（DBI生物产品：DBI-1045,1046）蛋白定量和BCA方法（DBI生物产品：DBI-1047,1048）进行定量。
II 试剂盒组分:III.蛋白质抽提步骤:A. 注意事项和试剂准备:•打开试剂盒后，于4度保存蛋白抽提液；于-20度保存蛋白酶抑制剂，样品缓冲液（6×）。
•使用前, 加10ul的蛋白酶抑制剂于1ml蛋白抽提试剂A中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——A)；加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂B中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——B)；加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂C中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——C)；试剂盒组分DBI-1021 DBI-1022 包装50 次100 次颜色蛋白抽提试剂A蛋白抽提试剂A-1蛋白抽提试剂B蛋白抽提试剂C混合型蛋白酶抑制剂(100×)SDS-PAGE 样品缓冲液(6×)50ml500ul50ml25ml1支5支100ml1000ul100ml50ml1支10支棕色棕色棕色棕色棕色绿色•在试验过程中确保抽提混合物始终保存在在碎冰中。
胞核-胞浆-胞膜制备
胞核-胞浆-胞膜制备
培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 × g 5~10 min离心收集细胞。
计数。
每次提取需要5 × 107个细胞。
加入1.5 ml冰预冷的Mito-Cyto Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内。
用间隙严密的研杵研磨细胞30-40次
制备的细胞核、细胞浆组分纯度甚高，而且较少交叉污染。
单一的细胞膜的纯化是一个特殊问题，本试剂盒制备的胞膜是细胞膜和细胞器如线粒体、内质网、高尔基体及其质膜的混合物。
制备的细胞核是完整的未裂解的细胞核，但胞浆组分为可溶性胞浆蛋白。
制备的亚细胞组分的纯度可胜任后续免疫共沉淀、SDS-PAGE、2-D gel电泳、Western Blot、酶活性测定、受体分析等。
细胞膜-胞浆-核膜蛋白分步提取方法
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
浴10 分钟，37℃下②1000g-2000g 力离心5 分钟，此时溶液分为两层
（对着光线看），上层为核内蛋白，下层是核膜蛋白约为20-40μl。小心移除上 层，用1-2 倍体积的提取液D 溶解下层即为细胞核膜蛋白。 9. 在步骤6 中所得到的上清（I）中加入5ul 提取液C，充分混匀。37℃水浴10 分钟。
10. 37℃下② 1000g 离心3 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层是胞浆
蛋白部分，下层是细胞膜蛋白部分约为40-50μl。 11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
12. 用80-200μl 冰冷的提取液D 溶解步骤10 中的下层部分，即得细胞膜蛋白。 13. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5 分钟，小心将匀浆吸入 另一预冷的干净离心管。在4℃，500g 条件下离心2-3 分钟，弃上清。）
3. 用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每5×106 个细胞中加入400ul 冷的蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下用试 剂盒所配针筒反复吸吹细胞，使细胞完全破裂。 5. 在4℃，1000g 条件下离心5 分钟。 6. 快速将上清（I）吸入另一预冷的干净离心管，在沉淀中加入200μl 冷的提取液 B，高速涡旋振荡15 秒。 7. 将混匀的提取液B 置2-8℃振荡1-2 小时，至沉淀充分裂解，沉淀明显减少。8. 37℃水
骨髓活检诊断病理学基本知识介绍[1]
![骨髓活检诊断病理学基本知识介绍[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/758f935f804d2b160b4ec0a2.png)
骨髓活检诊断病理学基本知识介绍一、骨髓组织的结构与功能(图1)(一)支持造血组织的骨组织结构1.骨小梁：骨小梁是骨皮质在松质骨内的延伸部分，即骨小梁与骨皮质相连接，在骨髓腔中呈不规则立体网状结构，如丝瓜络样或海绵状，起支持造血组织的作用。
正常情况下，骨小梁具有一定的长度，它们之间有一定距离。
骨小梁形成后至20岁左右，骨小梁表面被覆一层骨原细胞(osteogenic cell)或成骨细胞(o ast)，因为都在骨髓腔内表面，故通称骨内膜细胞(endosteal cell)。
成骨细胞，排列在骨小梁表面，胞浆突起可与周围的成骨细胞胞浆相接，它是由紧贴骨表面扁平的骨原细胞发育来的(1)。
图1 骨髓组织基本结构图2 骨与骨髓组织结构从左到右：骨外膜、皮质骨、骨小梁及骨髓造血组和血管。
石蜡切片H-E 染色100 ×2.骨原细胞：骨原细胞可认为是松质骨或骨小梁表面处于静止状态的“干细胞”，具有多向分化的潜能，在不同的因子刺激下可转化为不同类型的细胞。
它常常与附近窦内皮相连续，在骨改建过程中它转化为成骨细胞，由扁平状变为立方状。
成骨细胞的作用是分泌骨胶原，合成骨基质中的有机成分(胶原和糖蛋白等)并身包埋在骨基质中。
在20岁以前的骨皮质内侧可见软骨基质(HE染色呈蓝色)及成串排列的软骨细胞，骨内膜面成骨细胞、破骨细胞也较多，软骨基质嗜呈浅灰蓝色。
20岁以后软骨细胞及软骨基质逐渐减少，成熟骨组织逐渐增多，25岁以后均为成熟板层骨(HE染色呈红色)，成骨细胞及破骨细胞也明显减少Islam HHA(1985)认为在适当的造血因子作用下，骨原细胞还可能转化为造血干细胞并发育或演变为某些造血细胞，如可分化发育为粒系造血细胞。
因常骨髓幼稚粒系造血细胞总是靠近骨小梁表面生长的，并将逐步发育成熟的粒细胞推向骨小梁之间中央区。
即越靠近骨小梁粒系细胞越幼稚，越远离骨小系细胞越成熟。
3.破骨细胞：破骨细胞(osteoclast)是一种大型分支状游动细胞，胞体直径可长100μm ，其分支不规则，形状和大小不一，胞核大小也不一致，数目可由6～50个或更多不相连。
细胞质 细胞内的胞浆和细胞器
细胞质细胞内的胞浆和细胞器细胞质是细胞内的一种特殊结构，由胞浆和细胞器组成。
它在维持细胞功能和生命活动中起着重要的作用。
本文将从细胞质的组成和功能两个方面介绍细胞质的相关知识。
一、细胞质的组成细胞质由胞浆和细胞器两部分组成。
1. 胞浆：胞浆是细胞质的基础物质，它是由细胞器在其中悬浮的胶状物质。
胞浆主要由水、有机物、离子、蛋白质等组成。
它的主要功能是提供细胞内各种化学反应所需的环境，并提供细胞器运动的场所。
2. 细胞器：细胞器是细胞质中具有特定结构和功能的小器官。
常见的细胞器有核糖体、内质网、高尔基体、线粒体、溶酶体等。
（1）核糖体：核糖体是细胞中参与蛋白质合成的重要细胞器。
它由RNA和蛋白质组成，分布在胞质中或附着在内质网上。
核糖体主要的功能是根据DNA中的信息合成蛋白质。
（2）内质网：内质网是一种复杂的膜系统，存在于细胞质中。
它分为粗面内质网和滑面内质网。
粗面内质网上覆盖着许多核糖体，参与合成蛋白质。
而滑面内质网则主要参与脂类的代谢和合成。
（3）高尔基体：高尔基体是由扁平而弯曲的膜片叠加而成。
它主要参与蛋白质的修饰、分拣和运输。
高尔基体还与溶酶体和内质网之间有着重要的联系。
（4）线粒体：线粒体是细胞内的“动力站”，主要参与细胞呼吸过程中的能量转换，并产生三磷酸腺苷（ATP）。
（5）溶酶体：溶酶体是一种包裹着消化酶的小膜囊，主要参与细胞对外界物质的摄取、消化和分解。
二、细胞质的功能细胞质作为细胞的重要组成部分，具有以下功能：1. 细胞代谢：胞浆中有丰富的溶胶和胶体，是细胞内许多生物化学反应的场所。
胞浆中发生的一系列化学反应，如蛋白质合成、糖原合成、脂肪代谢等，都依赖于细胞质的环境。
2. 细胞运动：细胞质中的胞浆可以提供细胞器的运动场所。
细胞器在胞浆中的运动对于细胞的形态维持、物质运输、信号传导等起着重要的作用。
3. 物质传递：细胞质中的细胞器通过胞浆与细胞膜相连，形成细胞内物质传递的通路。
细胞器之间通过胞浆中的胶束作为“公路”，使细胞内物质传递更加便捷。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
胞浆/胞核提取（细胞）
一、胞浆蛋白的提取
1、估计细胞的量
5*1051*1065*106
Cytosol Extraction Buffer A(ul) 25 50-100 300-500 Cytosol Extraction Buffer B(ul) 1.2-1.5 3-6 18-30
Nuclear Extraction Buffer (ul) 5-10 20 100
2、每个培养皿PBS洗两次，吸干PBS（冰上操作）
3、每个培养皿加入150ul CEB-A,把细胞刮下，每个皿刮80次，直到无滑腻感，说明细胞全部刮下，将细胞转入EP管，注射器抽吸10次左右，充分裂解细胞
4、冰上孵育20min,每5min震荡10s
5、离心1000*g，4℃，5min,把上清液吸入新EP管内，为胞浆蛋白，沉淀物包含粗制核蛋白（尽量把上清吸干净）
一、细胞胞核蛋白的提取
1、粗制核蛋白由上述步骤5得到，去除膜成分，用100ul CEB-A加入5ul CEB-B，漩涡震荡10s，冰上孵育1min，在低温离心机中以1000*g，4℃，5min,倒上清，并收集细胞碎片
2、用100ul CEB-A清洗细胞核碎片，1000*g，4℃，5min,去上清
3、加入70-100ul 冰的NEB转移到粗制细胞核中涡旋
4、将EP管放到冰上孵育30min，并间隔震荡5次
5、1200*g，4℃，5min
6、将含有核蛋白的上清液转移到新的离心管中，-20℃保存。