药物分析 第十章 甾体激素类药物的分析
⊙含量测定 UV法 四氮唑比色法(Tetrozoline colorimetry)
C6H5 C N C6H5 N N N Cl
+
C6H5 C 2e (H) C6H5 C6H5 N N H N N C6H5
2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride TTC Red tatrazoline RT
+H2O+HAc
苯丙酸诺龙
OCOCH2CH3
缩氨基脲m.p.178~185℃分解
OH
+H2O O
KOH O
+CH3CH2COOH
丙酸睾丸素
m.p.150~156℃
⊙杂质检查 地塞米松磷酸钠中杂质检查 ＊其他甾体检查
＊有机溶剂残留量测定 甲醇和丙酮(GC)
氢化可的松中其他甾体检查(P.252)
甲潜(Formazan)
深红色 λmax 480~490nm
C 6H 5 N C 6H 5 C N N N Cl OCH3 2e (H) OCH3 N C 6H 5 C N N+Cl N C 6H 5 C 6H 5 C N N
+
C 6H 5 N C 6H 5 C N NH N OCH3 2e (H) OCH3 N+Cl N C 6H 5 C 6H 5 C N N C 6H 5 C N N
衍生化反应
COCl + HO KOH O C O +KCl+H2O
炔雌醇
CH3 C O
m.p.201℃
CH3 C N OH
+2HO O
NH2 N HO
+2H2O
黄体酮
双肟m.p.238℃
OCOCH2CH2 C6H5 O +NH2CNHNH2 HCl O H2N O C H N N
OCOCH2CH2
共热
第一步
第二步
硫酸亚铁铵
加水
溶解 + 浓H2SO4 + H2O
与苯酚
混匀
A
465
515
450 500
550nm
Kober 反应吸收光谱
第一步反应 第二步反应
中国药典 采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、 复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮片中
的炔雌醇的含量
供试品 对照品 3.0mg/ml 60μg/ml
硅胶GF254 二氯甲烷-乙醚-甲醇-水 385 : 60 : 15 : 2 展开后晾干 105℃干燥10min 碱性四氮唑蓝显色
CHCl3-MeOH(9:1)
“乙炔基”的检查 采用AgNO3-NaOH滴定法
电位滴定法
指示电极：玻璃电极 参比电极：饱和甘汞电极(玻璃套管内装 饱和KNO3液) CH 中氢置换法 药典附录中表示： C 电极系统：玻璃-KNO3盐桥-饱 和甘汞
供试品溶液的制备 精密称取本品适量（相当于 氢化可的松20mg)，置烧杯中，加无水乙醇约 30ml ，在水浴中加热使溶解，再置冰水中冷 却，滤过，滤液置 100ml 量瓶中，如此提取 3 次，滤液并入量瓶中，用无水乙醇稀释至刻 度，摇匀，即得
测定法 精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml， 分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙 醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，
第十章 甾体激素类药物的分析 Analysis of Steroid Hormones ⊙分类与结构特点 ⊙鉴别 ⊙检查 ⊙含量测定
C
21
以下主要基团可供分析： 1.Δ4-3-酮，C20酮基 2.C11：
O C O
C
1 19 2
C 12 18 17 11 13 D 16
20
或
OH C
O
C
3.C17：
异烟肼法(Isonicotinic acid hydrazide)
O C + N O N NHNH2 O C H N N
Isonicotinic acid Hydrazide
INH
△4-3-酮
Kober反应比色法
雌激素 H2SO4 乙醇
H2O or 稀H2SO4 桃红色 呈黄色 稀释再加热 λ max 515nm λ max 465nm
C 6H 5 NH N OCH3
OCH3 N NH C 6H 5
Blue tetrazoline BT
3,3´-二甲氧基-双 --4,4´-(3,5-二苯 基 ) 氯化四氮唑
BT-单甲潜
BT-双甲潜 蓝色 λmax 525nm
氢化可的松软膏的含量测定
对照品溶液的制备 精密称取氢化可的松对照品 20mg ，置 100ml 量瓶中，加无水乙醇适量使 溶解并稀释至刻度，摇匀，即得
O C CH2OH
C17,21：二羟，C20：酮基 C18,19：二个角甲基 二个角甲基
睾丸素
OH
雌二醇
OH
O
HO
Δ4-3-酮基 C17：羟基 ( OH ) ( C17,21：
OCOR)
A环为苯环，C3： OH 羟基
C CH (炔雌醇)
C18,19：二个或一个角雌醇
⊙鉴别 一般反应 ＊显色反应 ⊕与强酸反应 ⊕官能团反应 ＊TLC ＊衍生化反应 IR法 ：炔雌醇 和黄体酮 IR(p.249～250)
各再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，
在25℃的暗处放置40min～45min，在485nm
的波长处分别测定吸收度，计算，即得
测定时各种因素如皮质激素的结构、溶剂、
反应温度和时间、水分、碱的浓度、空气
中氧等，对甲潜形成的速度、呈色强度和 稳定性都有影响
如：在各类碱中，采用氢氧化四甲基铵能
得到满意结果，故最为常用
CH2OH ， C
3
A
4
10 5
B
6
9
8
7
14
15
O
CH3 ，
OH ， OCR， C
CH
4.A环上的酚羟基 5.卤素(-F)，酯基
可的松
O H H O H
CH2OH(COCH3) C O OH
黄体酮
CH3 C O
Δ4-3-酮基
C11：
O C
O
或
OH C
Δ4-3-酮基 甲基酮
O C CH3
C17：α-醇酮基
药物分析甾体激素类药物的分析2讲课文档
（四）雌酮
原理 Zimmermann反应
高纯度
O
C CH2
间 二 硝 基紫 苯红色
碱性KOH乙醇
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四、硒
剧毒
来源
原理
合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢
Se , 二 氨 基 萘 ,苯并苯硒
pH ..
环己烷
方法
Anm
氧 瓶 S 燃 e 烧 盐 酸 S 羟 e
苯丙酸诺龙
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结构特点：
ⅰ．含有19个C
ⅱ．A环的4-3-酮
ⅲ．17位羟基、甲基、酯
供分析官能团：
A环4-3-酮
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3．孕激素
黄体酮
第12页，共86页。
结构特点：
ⅰ．含有21个C ⅱ．A环的4-3-酮
ⅲ．17位甲酮基
供分析官能团：
ⅰ．A环的4-3-酮
ⅱ．17位上的甲酮基。
第80页，共86页。
(3) 酸、异烟肼的量 盐酸 : 异烟肼 = 2 : 1
酸度↑→ 异烟肼盐↓ 酸度↓→ A↓
样品 : 异烟肼 = 1 : 8 →ν↑
(4) 温度 t℃ ↑ → ν↑
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Kober反应比色法 雌激素
1. 原理
雌 激 H S △ O 素 乙 黄 醇 H 色 △ O 桃
特臭
戊酸雌 醇 二 N H制 a醇 O戊 H 酸
己酸羟 醇 孕 O H制 H 酮 己酸
特臭
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（五） UV法
C C C O
△４-3-酮 240nm
C C C C C C
苯环
280nm
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大学《药物分析》章节试题及答案(四)
大学《药物分析》章节试题及答案第九章维生素类药物的分析一、选择题1．下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是( B )(A)维生素A (B)维生素B1 (C)维生素C (D)维生素D (E)维生素E2．检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液(每1ml标准铅溶液相当于0.01mg的Pb)多少毫升？( E )(A)0.2ml (B)0.4ml (C)2ml (D)1ml (E)20ml3．维生素C注射液中抗氧剂硫酸氢钠对碘量法有干扰，能排除其干扰的掩蔽剂是( C )。
(A)硼酸 (B)草酸 (C)丙酮 (D)酒石酸 (E)丙醇4．硅钨酸重量法测定维生素B1的原理及操作要点是( C )(A)在中性溶液中加入硅钨酸的反应，形成沉淀，称重求算含量(B)在碱性溶液中加入硅钨酸的反应，形成沉淀，称重求算含量(C)在酸性溶液中加入硅钨酸的反应，形成沉淀，称重不算含量(D)在中性溶液中加入硅钨酸的反应，形成沉淀，溶解，以标准液测定求算含量(E)在碱性溶液中加入硅钨酸的反应，形成沉淀，溶解，以标准液测定求算含量5．使用碘量法测定维生素C的含量，已知维生素C的分子量为176.13，每1ml碘滴定液(0.1mol/L)，相当于维生素C的量为( B )(A)17.61mg (B)8.806mg (C)176.1mg (D)88.06mg (E)1.761mg6．能发生硫色素特征反应的药物是( B )(A)维生素A (B)维生素B1 (C)维生素C (D)维生素E (E)烟酸7．下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是( B )(A)维生素A (B)维生素B1 (C)维生素C (D)维生素D (E)维生素E8．维生素A含量用生物效价表示，其效价单位是( D )(A)IU (B)g (C)ml (D)IU/g (E)IU/ml9．测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了( E )(A)保持维生素C的稳定 (B)增加维生素C的溶解度 (C)使反应完全(D)加快反应速度(E)消除注射液中抗氧剂的干扰10．维生素C的鉴别反应，常采用的试剂有( A )(A)碱性酒石酸铜 (B)硝酸银 (C)碘化铋钾 (D)乙酰丙酮 (E)三氯醋酸和吡咯11．对维生素E鉴别实验叙述正确的是( D )(A)硝酸反应中维生素E水解生成α-生育酚显橙红色(B)硝酸反应中维生素E水解后，又被氧化为生育酚而显橙红色(C)维生素E0.01％无水乙醇溶液无紫外吸收(D)FeCl3-联吡啶反应中，Fe3+与联吡啶生成红色配离子(E)FeCl3-联吡啶反应中，Fe2+与联吡啶生成红色配离子12． 2,6-二氯靛酚法测定维生素C含量( AD )(A)滴定在酸性介质中进行(B)2,6-二氯靛酚由红色→无色指示终点(C)2,6-二氯靛酚的还原型为红色(D)2,6-二氯靛酚的还原型为蓝色13．维生素C注射液碘量法定量时，常先加入丙酮，这是因为( B )(A)丙酮可以加快反应速度(B)丙酮与抗氧剂结合，消除抗氧剂的干扰(C)丙酮可以使淀粉变色敏锐(D)丙酮可以增大去氢维生素C的溶解度14．维生素E的含量测定方法中，以下叙述正确的是( C )(A)铈量法适用于复方制剂中维生素E的定量(B)铈量法适用于纯度不高的维生素E的定量(C)铈量法适用于纯度高的维生素E的定量(D)铈量法适用于各种存在形式的维生素E的定量15．有关维生素E的鉴别反应，正确的是( A )(A)维生素E与无水乙醇加HNO3，加热，呈鲜红→橙红色(B)维生素E在碱性条件下与联吡啶和三氯化铁作用，生成红色配位离子.(C)维生素E在酸性条件下与联吡啶和三氯化铁作用，生成红色配位离子.(D)维生素E无紫外吸收(E)维生素E本身易被氧化16．维生素C与分析方法的关系有( ABDE )(A)二烯醇结构具有还原性，可用碘量法定量 (B)与糖结构类似，有糖的某些性质(C)无紫外吸收(D)有紫外吸收 (E)二烯醇结构有弱酸性二、问答题1．维生素A具有什么样的结构特点？答: 共轭多烯侧链的环正烯 1有紫外吸收 2易氧化变质。
第十三章 甾体激素类药物分析
和溶液（2）各10μl，进样。记录 至主成分峰保留时间的2倍。溶液 （1）显示的杂质峰数不得超过4个， 各杂质峰面积及其总和分别不得大于 溶液（2）主峰面积的1/2和3/4。
供试溶液：溶液（1）2mg/ml 对照溶液：溶液（2）0.04mg/ml
特点：
（1）需特殊的仪器；
（2）不需对照品； （3）可以控制杂质的总量；
ν OH
C O
1750cm-1
C O C
1052cm-1
1232cm-1
1630cm-1
炔诺酮
C CH OH
O
结构特征：△4–3–酮、C17 –OH C17–乙炔基
C O
1650cm-1
3300cm-
ν OH
3270cm-1
ν CH
1615cm-1
C C
炔雌醇
3000～2700cm-1
1900～1650cm-1 1650～1450cm-1
C O
C C C H
1000～650cm-1
醋酸可的松
O
CH 2 OCOCH 3 C O OH
O
结构特征：△4–3–酮、C17 –OH C20 –酮基、 C11 –酮基、醋酸酯
亚甲基、角 甲基吸收带 3420cm-
O HO H3C
O
HO
雌酮
OH C CH
O 羟基雄甾
烯 , 二酮
乙炔化
HO
炔雌醇
（四）雌酮
原理
O C CH2
Zimmermann反应
间二硝基苯
高纯度
紫红色
碱性KOH乙醇
O NO2
NO2 HO
四、硒
药物分析10第十章甾体类药物
02 甾体类药物的化学结构与 性质
胆固醇类甾体
01
胆固醇类甾体是甾体类药物中最早被发现和应用的，其结构由 四个环戊烷并氢化菲组成，中心连接一个甲基。
02
胆固醇类甾体的性质主要表现在其脂溶性，难溶于水，但易溶
于有机溶剂。
胆固醇类甾体在人体内主要存在于脑、肾上腺和性腺等部位，
03
是人体重要的类固醇激素合成原料。
气相色谱法
气相色谱法适用于具有挥发性的甾体类药物的分析。
该方法将样品中的化合物通过气化后，在固定相和流 动相之间的分配系数差异进行分离，通过火焰离子化
检测器或电子捕获检测器进行检测。
气相色谱法具有分离效能高、分析速度快、灵敏度高 等优点，但仅适用于具有挥发性的甾体类药物。
质谱法
质谱法是一种高灵敏度、高 特异性的分析方法，适用于 复杂样品中微量甾体类药物
02
肾上腺皮质激素类甾体的性质表现为较强的亲脂性 和一定的极性，也易溶于有机溶剂和水。
03
肾上腺皮质激素类甾体在人体内主要参与应激反应 和免疫调节等生理过程。
其他甾体化合物
其他甾体化合物包括胆酸类、强 心苷类等，其结构与胆固醇类甾
体相似，但侧链和基团不同。
其他甾体化合物的性质表现多样， 如强心苷类化合物具有较强的亲 水性，能与生物碱结合形成难溶
药物分析10第十章 甾体类药物
目录
CONTENTS
• 甾体类药物概述 • 甾体类药物的化学结构与性质 • 甾体类药物的分析方法 • 甾体类药物的质量控制与杂质检查 • 甾体类药物的合成与工艺研究
01 甾体类药物概述
定义与分类
定义
甾体类药物是指具有甾体结构的化合 物，通常是指含有环戊烷多氢菲母核 结构的药物。
药物分析 课件 甾体激素类药物的分析
3 致突变性评价
评估甾体激素类物质的致 突变性可以了解其对遗传 物质的影响。
结论
通过本课件学习，我们可以深入了解甾体激素类药物的分析方法和质量控制， 以及对其安全性进行评估的重要性。还可以展望甾体激素类药物未来的发展 趋势。
甾体激素类药物的分类及常用药物
类固醇
类固醇是甾体激素类药物的 重要一类，具有抗炎、免疫 调节等作用。
雄激素与雌激素
雄激素和雌激素是甾体激素 的两个主要类型，它们在生 殖和激素替代治疗中起着重 要作用。
肾上腺皮质激素
肾上腺皮质激素是甾体激素 类药物的另一类，常用于抗 炎、免疫调节和治疗肾上腺 功能不足。
甾体激素类药物的分析方法
1
化学方法
高效液相色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是甾体激素类药物分析的常用化学方 法。
2
生物方法
免疫分析法和生物反应器法是甾体激素类药物分析的重要生物方法。
甾体激素类药物的质量控制
1 纯度检测
甾体激素类药物的纯度可以通过物理性质分 析和化学性质检测进行评估。
2 含量测定
准确测定甾体激素类药物的含量是确保药物 质量重要步骤。
3 杂质检测
杂质检测有助于评估甾体激素类药物的纯度 和安全性。
4 物理和化学性质检测
通过物理性质和化学性质的检测，可以进一 步评估甾体激素类药物的质量。
甾体激素类物的安全性评价
1 急性毒性评价
评估甾体激素类药物的急 性毒性对于确保人体安全 至关重要。
2 慢性毒性评价
慢性毒性评价可以揭示甾 体激素类药物的长期使用 对人体的潜在危害。
药物分析 课件 甾体激素类药 物的分析
这是一份关于甾体激素类药物分析的课件。通过本课件，我们将深入探讨甾 体激素的概述、分类、分析方法、质量控制、安全性评价以及未来发展趋势。
药物分析课件甾体激素类药物的分析
（IV）醋酸氟轻松
主要结构特征
（1）A环的C3上有酮基；C4/C5间有双键， 并与C3酮基共轭，称为，-不饱和酮，标记 为4-3-酮。 （2）D环的C17上有-醇酮基（ - ketol） 侧链（ ）。 （3）合成甾体抗炎药在结构上多具有C1/C2 间双键；C6-、C9-卤素；C16-羟基、甲基； C17-羟基等取代基。如：地塞米松磷酸钠、醋酸氟轻松。
第十章 甾体激素类药物的分析
甾体激素类药物（steroid hormone drugs）：
是指分子结构中含有甾体母核的激素类药物。 分子结构中均具有环戊烷并多氢菲母核，是临 床上较为重要的一类药物。
来源：天然物、人工合成品。 如： 氢化可的松、睾酮、雌二醇、黄体酮等。
中国药典收载本类药物及其各种制剂97个品种。
硒
一、游离磷酸
来源：磷酸酯化时残存的过量磷酸 检查方法：钼蓝比色法 原理：磷酸+钼酸铵 酸性溶液 磷钼酸铵 还原 磷铵酸蓝（钼蓝）
=740nm 有最大吸收
例：中国药典收载的地塞米松钠的检查
结果： 在740nm处测定吸收度，供试品溶液的吸收度不得
大于对照溶液的吸收度。
二、甲醇和丙酮
地塞米松磷酸钠中甲醇和丙酮的检查
第三节 特殊杂质检查
杂质：原料、中间体、异构体、降解产物、试剂、溶剂。 检查项目： 特殊杂质（有关物质）“其他甾体” （主要）
其它检查项目
地塞米松磷酸钠、氢化可的松磷酸钠 地塞米松磷酸钠 甲醇、丙酮 醋酸氟轻松 氟 炔诺孕酮 乙炔基 醋酸氟轻松、醋酸地塞米松、泼尼松龙 游离磷酸
来源：在生产工艺中使用大量甲醇和丙酮 检查：气相色谱法 规定：含丙酮不得过0.5%(g/g)，含甲醇不得
甾体激素类药物的分析详解
加速试验
在超常条件下进行加速试验，以 预测甾体激素类药物在短时间内 的稳定性。
长期试验
在接近实际储存条件下进行长期 试验，以确定甾体激素类药物的 有效期和储存条件。
05 甾体激素类药物的生物 活性评价
细胞水平评价方法
细胞增殖实验
通过检测药物对细胞增殖的影响，评估药物的抗增殖 或促增殖活性。
细胞凋亡实验
03 样品前处理技术
提取与纯化方法
液-液萃取法
利用样品与提取剂之间的溶解度 差异，将目标物从样品中提取出 来。常用的提取剂包括有机溶剂
、酸、碱等。
固相萃取法
利用固体吸附剂对样品中的目标 物进行选择性吸附，然后用适当 的溶剂洗脱，达到分离和纯化的 目的。常用的吸附剂包括硅胶、
氧化铝、活性炭等。
超临界流体萃取法
人体试验评价方法
临床试验
在人体中进行的药物疗效和安全性评价，包括I 期至IV期的临床试验。
生物等效性试验
比较创新药物与已上市药物的生物利用度和药 代动力学参数，以评估其生物等效性。
药物相互作用研究
探讨药物与其他药物或食物之间的相互作用，以指导合理用药。
06 甾体激素类药物的代谢 与排泄研究
吸收、分布和代谢过程
02 甾体激素类药物的分析 方法
色谱法
薄层色谱法（TLC）
利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数不同，实现对甾体激素类药物的分离和鉴别。该方法具有操作简 便、快速、成本低等优点，但分辨率和灵敏度相对较低。
高效液相色谱法（HPLC）
采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂等流动相泵入装有固定相的色谱柱，实现 对甾体激素类药物的分离和分析。该方法具有高分辨率、高灵敏度、分析速度快等优点，广泛应用于甾体激素类 药物的含量测定和有关物质检查。
2013年执业药师考试药物分析学考试重点：甾体激素类药物的分析
甾体激素类药物的分析
1四氮唑盐比色法进行含量测定时反应基团为：C17-2-醇酮基
2 Kober反应应用与含量测定的药物是：雌激素。
3雌激素类药物含量测定方法是：Kober反应。
4异烟肼比色法测定甾体激素类药物时，药物显色基团为：酮基
5甾体激素类药物分几类？
甾体激素类药物按药理作用分为肾上腺皮质激素和性激素两大类，性激素又可分为雄性激素及蛋白同化激素，孕激素和雌性激素等。
6四氮唑盐比色法的原理：肾上腺皮质激素类药物分子中17位α-醇酮基具有还原性，在碱性条件下将四氮唑盐定量的还原为有色的甲赞，在最大吸收处比色法测定含量。
第十章甾体激素类药物分析
第十章 甾体激素类药物分析练习思考题1.甾体激素类药物可分为哪几类？各类结构有何特征？2.如何根据甾体激素类药物的结构特征进行鉴别确证？3.指出氢化可的松、雌二醇和醋酸甲地孕酮的化学结构式中各自具有分析意义的并能体现该类激素专属性反应的基团及其分析方法。
4.本类药物的红外光谱图具有哪些特征吸收频率？5.中国药典与美国药典用红外光谱法鉴别药物时，采用的方法有何不同？各有何优缺点？6.如何区别睾丸素与炔雌醇的红外光谱图？7.用紫外分光光度法测定甾体激素类药物含量是利用了哪一部分结构特征？最大吸收波长分别在何处？8.可的松由于保存不当，C17-侧链已部分分解为C17-COOH，用异烟肼法不能测得其中可的松的含量，为什么？可以改用什么方法测定其含量，并说明此种方法测定原理？9.炔雌醇可用硝酸银-氢氧化钠滴定法测定含量，试用反应式表示测定原理。
10.四氮唑比色法测定肾上腺皮质激素药物含量，药物官能团对反应速度有何影响？列出可的松、氢化可的松和地塞米松磷酸钠的四氮唑比色法反应速度快慢顺序，并说明理由。
11.甾体激素类药物中含有哪些特殊杂质？分别采用什么方法检测？如何控制其他甾体的量？12.异烟肼比色法可用于哪些甾体激素类药物的含量测定？请说明测定原理、影响因素及主要应用范围。
13.Kober反应用于哪类甾体激素药物的分析？主要试剂是什么？14.地塞米松磷酸钠中甲醇和丙酮的检查：精密量取甲醇10µL（相当于7.9mg）与丙酮100µL（相当于79mg），置100mL量瓶中，精密加0.1%（mL/mL）正丙醇（内标物质）溶液20mL，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照液；另取本品约0.16g，置10 mL量瓶中，精密加入上述内标溶液2mL，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取上述溶液，照气相色谱法测定。
测得供试液中丙酮峰面积为423879，正丙醇峰面积为537838；无甲醇峰；对照液中丙酮峰面积430878，正丙醇峰面积为535428，甲醇峰面积为125436。
甾体激素类药物的分析——含量测定
第四节含量测定 容量法、⽐⾊法、紫外分光光度法、荧光法、⽓相⾊谱法、⾼效液相⾊谱法等，本章重点讨论四氮唑⽐⾊法、异烟肼⽐⾊法、Kober反应⽐⾊法、紫外分光光度法、⾼效液相⾊谱法等。
⼀、四氮唑⽐⾊法 （⼀）四氮唑的种类两种：2，3，5-三苯基氯化四氮唑（缩写为TTC），其还原产物为不溶于考，试⼤收集整理⽔的深红⾊三苯甲簪，λmax在480~490nm，也称红四氮唑（缩写为RT）。
蓝四氮唑（缩写BT），其还原产物为暗蓝⾊的双甲簪，λmax在525nm左右。
TTC和BT的结构式如下： （⼆）反应原理 ⽪质激素C17-α-醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有⾊甲簪。
可能路线为α-醇酮基，失去2个电⼦氧化为20-酮基-21醛基，在碱催化下，分⼦内部重排；有部分形成20-羟基-21-醛基，C20-C21键断裂形成甾基甲酸衍⽣物和甲醛，以前者为主。
四氮唑盐得到2个电⼦，开环形成甲簪显⾊。
（三）测定⽅法 USP（23）采⽤蓝四氮唑；中国药典（1995版）和BP（1993）采⽤红四氮唑。
中国药典收载地醋酸泼尼松龙软膏的含量测定⽅法如下： 1.对照品溶液制备：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置100ml量瓶中，加⽆⽔⼄醇振摇使溶解，并稀释⾄刻度，摇匀，即得。
2.供试品溶液的制备：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加⽆⽔⼄醇约30ml，置⽔浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，在置冰浴中放冷后，滤过，滤液滤⼊100ml量瓶中，同法提取3次，滤液并⼊量瓶中，加⽆⽔⼄醇稀释⾄刻度，摇匀，即得。
3.测定法：精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置⼲燥具塞试管中，各精密加⽆⽔⼄醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25℃暗处放置40~45min，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。