ibidi 易必迪血管生成体外实验Angiogenesis
去甲苔藓蒽噻吩抑制血管生成作用的体外实验研究(英文)
去甲苔藓蒽噻吩抑制血管生成作用的体外实验研究(英文) Chen Zhong;Xiangdong Zhou;Minghui Zhang;Yide Hu【期刊名称】《中德临床肿瘤学杂志：英文版》【年(卷),期】2011(10)2【摘要】Objective:The aim of the study was to investigate the effect of Demethyl bryoanthrathiophene(DBT) on proliferations of human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) and human lung adenocarcinoma cell line A549,and antiangiogenic effect of DBT on HUVECs in vitro.Methods:MTT assay was used to observe the effect of DBT on proliferations of HUVECs and A549 cells,flat plate scarification assay and tube formation in vitro test were used to observe the impact of DBT on migration and vaso-formed ability of HUVECs.The effects of DBT on apoptosis and cell cycle of HUVECs were calculated by flow cytometry.Results:MTT assay showed that treatment with DBT resulted in strong inhibition to the growth of HUVECs and A549 cells.The inhibition effects of DBT on HUVECs and A549 cells were related to dosage and times of dependency.In different doses of DBT(0.16,0.32 and 0.48 μmol/L) of flat plate scarification for 24 h,inhibition rates of DBT to migration of HUVECs were 14.70%,38.23% and58.82%,respectively.In dose of DBT from 0.04,0.20 to 0.40 μmol/L for 24 h in tube formation,there were significance differences(P < 0.01) in the decreasing number of angiogenesis and incomplete blood vessel compared with control groups.All results showed that DBT promoted theapoptosis rate of HUVECs,and the increase of concentration of DBT accompanied the acceleration of apoptosis rate.Conclusion:DBT could inhibit the proliferations of HUVECs and A549 cells,and effectively suppress angiogenesis in vitro.【总页数】7页(P63-69)【关键词】抗血管生成;体外增殖;DBT;血管内皮细胞;A549细胞;人脐静脉内皮细胞;细胞凋亡;MTT法【作者】Chen Zhong;Xiangdong Zhou;Minghui Zhang;Yide Hu【作者单位】Third Department of Oncology, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400037, China;Department of Pharmacochemistry of Third Military Medical University, Chongqing 400037, China【正文语种】中文【中图分类】Q78;S884.21【相关文献】1.去甲斑蝥素对胆囊癌细胞体外模拟血管生成拟态的抑制作用 [J], 孙伟;范跃祖;张文忠;葛春燕;赵凤娣;周婷婷;宁艳霞2.血管生成抑制剂TNP-470抑制血管瘤血管内皮细胞增殖的体外实验研究 [J], 洪莉;肖现民3.去甲苔藓葸噻吩抑制血管生成作用的体外实验研究 [J], ChenZhong;Xiangdong Zhou;Minghui Zhang;Yide Hu4.血管生成抑制剂候选物——去甲苔藓蒽噻吩的设计合成 [J], 罗圣霖;覃容欣;周向东5.去甲二氢愈创木酸对活体血管生成作用的实验研究 [J], 孙慧勤;陈意生;史景泉;卞修武;邹仲敏;傅晓岚;章容因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血管生成生物标志物检测及其临床意义
血管生成生物标志物检测及其临床意义引言：血管生长是一种复杂的生物过程，涉及多种细胞、生理和生化因素的相互作用。
血管生成在许多疾病中起到关键作用，例如肿瘤的生长和转移，而且在组织再生和修复过程中也起到重要的作用。
因此，了解血管生成的机制以及发现可以用于监测和预测相关疾病的生物标志物具有重要的临床意义。
一、血管生成的机制和调控因素血管生成是指新的血管形成过程，它包括血管内皮细胞的增殖、迁移和管腔形成，以及血管周细胞（如平滑肌细胞和间充质细胞）的招募和分化。
血管生成的过程受到多种生理和病理因素的调控。
一种重要的调控机制是血管生成因子及其受体的信号通路。
血管内皮生长因子（VEGF）家族是调节血管生成最重要的因子之一。
VEGF 通过与其受体（如VEGFR-2）结合，激活下游信号通路促进内皮细胞的增殖和迁移。
除了VEGF家族外，其他因子如血小板源性生长因子（PDGF）、基础纤维生长因子（bFGF）等也参与血管生成的调控。
另一个重要的调控机制是血管生成抑制因子的作用。
如血管抑制蛋白1（Angiostatin-1）和血管抑制蛋白2（Angiostatin-2）通过干扰VEGF的信号通路，抑制血管内皮细胞的增殖和迁移，从而抑制血管生成过程。
二、血管生成生物标志物的分类和检测方法血管生成生物标志物是指可以用于检测和评估血管生成过程的生物标志物。
根据其来源和类型的不同，血管生成生物标志物可以分为细胞因子、激素、蛋白质、基因等多种类型。
最常用的血管生成生物标志物是细胞因子，如VEGF、PDGF、bFGF等。
这些细胞因子在血液和组织中的水平可以通过酶联免疫吸附实验（ELISA）或其他免疫检测方法进行测定。
这些方法具有高灵敏度和特异性，可以用于评估血管生成的活性以及疾病的进展和预后。
除了细胞因子，一些激素如雌激素和甲状腺素在血管生成中也发挥重要作用。
对这些激素的水平进行检测可以了解其对血管生成的调节作用。
蛋白质是细胞生物学中的重要参与者，在血管生成过程中也发挥着重要的作用。
化疗药物抗肿瘤血管作用的研究进展_百替生物
稿号：02-09-29 待发表化疗药物抗肿瘤血管作用的研究进展尹鸣综述陈龙邦审校南京军区南京总医院肿瘤科，南京210002关键词：化疗药；肿瘤；血管形成中图分类号：R734.2 文献标识码：A 文章编号：1、引言肿瘤生长是血管依赖的，肿瘤通过分泌某种因子促进了内皮细胞的增殖和毛细血管的形成，而新生血管通过营养控制影响着肿瘤的生长。
在缺乏新生血管的情况下，肿瘤将被限制于2-3mm大小的静止状态。
不仅如此，肿瘤血管在肿瘤从良性向恶性的转变，癌细胞进入血液循环，转移灶的发展和破裂中都起着重要作用。
血管生成涉及肿瘤从形成到转移的全过程(1)。
当前，抗肿瘤血管生成正成为抗肿瘤治疗新的研究热点，已报道的具有血管生成抑制活性的物质有数百种，并且数量还在不断增加。
令人感兴趣的是一些已在临床广泛应用的化疗药物也具有血管生成抑制活性，并且在研究中取得了显著的血管抑制效果.大量研究结果表明：化疗药物可以成为肿瘤血管床的有效抑制剂，将开辟化疗药物新的应用领域。
2、化疗药物抗血管生成的研究方法及其评估标准.在过去的10年中，血管生成的研究经历了从细胞培养、动物模型到人体应用3个阶段。
概括的说，可分为体外实验和体内实验。
体外实验(2)：主要是分离和培养内皮细胞，观察其在外源因素作用下的增殖、迁移和功能变化。
这些实验包括：观察细胞迁移状况的Boyden盒分析法和组织培养皿、胶原基质分析法及观察细胞存活情况的细胞计数、胸腺嘧啶的掺入、免疫组化标记等方法。
体外实验简单、便宜而迅速，能够进行有效的实验控制和便于观察，但不同实验室使用的试剂、内皮细胞的种类、实验条件和技术的不同加大了横向比较的困难，更重要的是体外实验结果往往不能有效的推广到体内，因此只适用于初筛。
体内实验：体内实验更为直接的观察生理条件下药物对血管生长的作用,它首先需要一个合适的宿主,能够较好的观察微血管的生长状况;其次,这一生长部位还应较少受到宿主本身各种理化因素的影响,以便于实验结果的归纳和讨论;第三,在需要时,应能方便的进行各项操作,如试剂的添加、肿瘤的嫁接等。
血管生成实验步骤及方法
血管生成实验步骤及方法
一、技术简介
血管生成（Angiogenesis）是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉新的毛细血管性血管的生长。
无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1-2 mm，都会有血管生成。
这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。
小管形成实验是测量在体外血管生成一种快速的，可量化的方法。
二、实验流程
1. 第一天matrigel（BD，354230）放入4℃冰箱过夜。
2. 第二天待matrigel冻融后，离心数分钟。
3. 冰上操作（matrigel不能凝固）。
matrigel用预冷枪头混匀，EP管提前预冷，每500μl分装。
4. 96孔板提前预冷，每孔加入50μl matrigel，避免产生气泡。
在37℃孵箱放置45分钟。
5. 当细胞长满70-80%时，消化下来，并用含10%FBS的DMEM重悬，每孔加入50μl重悬液，浓度为10000-60000/孔细胞，重复三孔。
6. 37℃孵育，四小时后可见血管形成。
血管紧张素I(Angiotensin I)测定试剂盒(化学发光法)产品技术要求新产业
2.性能指标
2.1外观和性状
2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰，准确、牢固。
2.1.2试剂盒内组分(磁性微球溶液除外) 应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。
2.2净含量
净含量应符合表1的要求。
表1 净含量要求
辅助试剂：1. 0.30 M EDTA 二钾溶液（抗凝剂）一瓶，5.5 mL /瓶。
2.0.34 M 8-羟基喹啉硫酸盐溶液（酶抑制剂）一瓶，5.5 mL/瓶。
3.0.5 M PH 缓冲液（调节剂）一瓶，20.0 mL/瓶。
4.0.32 M 二巯基丙醇溶液一瓶，3.0 mL/瓶。
2.3精密度
2.3.1批内精密度
批内变异系数(CV)应≤10%。
2.3.2批间精密度
批间变异系数(CV)应≤15%。
2.4准确度
回收率应在90%～110%范围内。
2.5空白限
空白限应小于0.1 ng/mL。
2.6线性
在(0.4-24.0) ng/mL 浓度范围内，线性相关性系数（r）应大于0.9800。
2.7质控品准确度
测量结果在质控范围（可接受区间）内。
2.8质控品均一性
瓶间重复性CV%应≤10%。
1 /1。
材料成血管实验报告
实验名称：材料成血管实验实验日期：2023年X月X日实验地点：实验室实验目的：探讨材料在血管生成中的应用，通过体外实验验证材料诱导血管生成的能力。
实验原理：血管生成是生物体内重要的生理过程，对维持组织器官的代谢和生长具有重要意义。
近年来，材料科学在生物医学领域取得了显著进展，血管生成材料作为一种新型生物材料，具有广阔的应用前景。
本实验旨在通过体外实验验证材料诱导血管生成的能力。
实验材料与仪器：1. 实验材料：（1）材料A：一种新型血管生成材料；（2）材料B：一种对照材料；（3）小鼠成纤维细胞（L929）；（4）小鼠内皮细胞（MVECs）；（5）胎牛血清（FBS）；（6）DMEM培养基；（7）青霉素、链霉素；（8）透明质酸酶；（9）血管内皮生长因子（VEGF）。
2. 实验仪器：（1）细胞培养箱；（2）CO2培养箱；（3）倒置显微镜；（4）酶标仪；（5）流式细胞仪；（6）凝胶成像系统。
实验方法：1. 细胞培养：（1）将小鼠成纤维细胞（L929）和小鼠内皮细胞（MVECs）分别接种于6孔板，置于细胞培养箱中培养；（2）待细胞生长至对数生长期，用0.25%胰蛋白酶消化细胞，按1:10的比例传代；（3）分别将材料A和材料B与L929细胞共培养，以研究材料对成纤维细胞的影响；（4）将L929细胞与MVECs共培养，并在培养体系中加入VEGF，以研究材料对血管生成的影响。
2. 材料诱导血管生成实验：（1）将材料A和材料B分别与L929细胞共培养，观察材料对成纤维细胞的影响；（2）将L929细胞与MVECs共培养，并在培养体系中加入VEGF，分别将材料A和材料B添加到培养体系中，观察材料对血管生成的影响；（3）通过倒置显微镜观察细胞形态变化，记录血管生成情况；（4）通过酶标仪检测细胞增殖情况；（5）通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况；（6）通过凝胶成像系统观察血管生成情况。
实验结果：1. 材料A和材料B对成纤维细胞的影响：材料A和材料B均能促进成纤维细胞的增殖，但材料A的促进作用更明显。
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ibidi血管生成实验分析软件Tube Formation Image Analysis - WimTube一个基于网络的研究血管生成实验的定量成像分析软件产品特点：1.全面解决血管生成实验-从样品准备到成像分析仅需几步；2.客观性和可重复性实验分析；3.简单快速的数据处理-几分钟出结果；4.不需要额外的硬件和软件。
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蝎毒多肽提取物的抗血管生成作用
流式细胞仪检测到的膜联蛋白Ｖ标记阳性／碘化 丙啶标记阴性的细胞为凋亡细胞。１０ ｇｇ／ｍｌ ＰＥＳＶ 作用ＨＵＶＥＣ ２４ ｈ后，凋亡细胞的比例增加１倍， 作用ＨＵＶＥＣ ４８ ｈ后，凋亡细胞的比例增至１０．５％， 与对照组比较差异显著，Ｐ＜０．０１（表２）；ＰＥＳＶ作用 ４８ ｈ后，凋亡相关基因也随之发生改变，凋亡诱 导基因Ｂａｘ表达增加，凋亡抑制基因Ｂｃｌ一２表达降低 （表３）。
血管生成抑制剂的筛选一般首先经体外实验观 察对血管内皮细胞增殖能力的影响，再经器官组织 水平的 筛选和研究确证，然后应用肿瘤模型进行最 终和全面的评价。肿瘤模型水平的评价是必需的， 因为许多药物虽然在体外实验中具有良好的抗血管 生成能力，但体内实验时对肿瘤的血管依赖性生长 则无明显影响，可能与这些药物在体内不能达到抑 制血管生成所需的浓度有关【１４】。
细胞生物学杂志Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２００５，２７：３４３ ３４６
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｊｃｂ．ｏｒｇ
蝎毒多肽提取物的抗血管生成作用
张维东术 崔亚洲ｔ 武利存 贾 青 宋守芹 王朝霞 董 强
（ｔｈ东省医学科学院基础医学研究所，济南２５００６２；１山东省医药生物技术研究中心，济南２５００６２）
性及抗ＢｒｄＵ酶标抗体作用后底物显色，读取Ａ。，。值。 １．４ ＰＥＳＶ对ＨＵＶＥＣ凋亡的影响
ｌｘｌＯｓ个ＨＵＶＥＣ细胞加入９６孔板中培养２４ ｈ 后，处理组加入１０ ｇｇ／ｍｌ ＰＥＳＶ，对照组加入等量 生理盐水。作用２４ ｈ和４８ ｈ两个时相，ＨＵＶＥＣ 经ＰＢＳ清洗，胰蛋白酶／ＥＤＴＡ消化，离心，用流 式细胞术检测凋亡细胞比例。ＨＵＶＥＣ与０．１ ｇｇ膜 联蛋白ｖ和０．５ ｇｇ碘化丙啶常温下温育１５ ｍｉｎ后， 用流式细胞仪检测膜联蛋白ｖ和碘化丙啶的表达。 １．５流式细胞仪检测ＰＥＳＶ对ＨＵＶＥＣ凋亡相关
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易必迪ibidi μ-Slide Angiogenesis
体外血管生成实验
产品特点：
ibidi血管生成系列产品，包括μ-Slide Angiogenesis和μ-Plate Angiogenesis 96 well，是ibidi 公司根据血管生成实验的要求的改进型设计。
它较之传统的血管生成实验，有以下优点：
1、节省基质凝胶--Gel matrix（自行准备），比传统96孔板实验节省9/10（传统实验用量100ul，ibidi血管生成板—ibidi μ-Slide Angiogenesis 用量10ul）；
2、特殊的双层孔洞设计，可形成厚度均匀（0.8mm）的平整Gel matrix表面，使细胞落于同一层物镜对焦平面，细胞形态更易观察；
3、紧密的上盖设计，有效的减缓液体蒸发；
4、适用多通道微量分注器；
注：配合ibidi 加热与孵育系统，可以进行清晰、长期的活细胞显微拍摄。
ibidi “Well-in-a-Well” 和普通标准孔的对比：
订购信息：
产品规格: µ-Plate Angiogenesis 96 well 1. Planar air-liquid interface:
good phase contrast all over the
observation area 2. Planar gel surface:
all cells are in one optical plan
V olume of Matrigel: 10 µl
Standard well
1. Meniscus on air-liquid interface:
poor phase contrast in most of the observation area
2. Mensicus on the gel surface: not
possible to focus on all cells simultaneously
V olume of Matrigel: 100 µl
技术特征:
1. 标准的玻片规格
2. 紧密的结合盖可以减少蒸发
3. 4mm内孔在5mm外孔里的设计
4. 均匀的厚度为0.8mm的胶层
5. 细胞生长均匀
6. 染色和固定兼容性好
7. 优良的光学显微特性
8. 兼容多通道分注器
9. 生物相容性的塑料材料制成的——无胶水，无泄漏
10. 适合各种类型的胶，例如；Matrigel™, 胶原蛋白, and 琼脂糖*
11. 同样适合96孔板：µ-Plate Angiogenesis 96 well
*Matrigel不是产品的一部分
产品介绍：
1.样品准备/Sample Preparation
「ibidi血管生成板」的应用非常广泛
1
2
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2.显微成像/Microscopy
可配合ibidi加热&孵育系统进行长时间的显微摄影。
ibidi加热&孵育系统为您提供稳定的CO2，温度和湿度条件。
3.成像分析/Image Analysis
显微镜用于评价血管形成的过程。
根据您的兴趣，不仅可以使用显微视频拍摄（持续的影像），还可以定点进行成像观察（例如：6h 和12h 后）。
人脐静脉内皮细胞在基质凝胶上培育12h 后的「ibidi_易必迪血管
生成板」一个孔中的图像 人脐静脉内皮细胞的特征图，
用Calcein 染色
4. 定量和统计分析/Quantitative and Statistical Analysis 从样品制备到图像分析只需要四步。
数据分析
小管形成成像分析是血管生成的关键步骤。
Wimasis ，ibidi 提供高品质成像分析的认证合作伙伴，已经开发出分析解决方案Wim Tube 用于细胞神经网络的生成的定量评价。
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分析数据包括：
小管长度，数量和平均值 细胞覆盖面积
环状结构的数量，区域和周长 分叉点的数量。