B-raf基因突变检测试剂盒(PCR-毛细管电泳法)标准化操作流程
基因突变检测技术的使用方法
基因突变检测技术的使用方法基因突变检测技术是一种用于检测生物体基因组中发生的突变的技术。
这些突变可能导致一些疾病或者其他遗传性状的变化。
基因突变检测技术在医学、生物学和遗传学等领域都有着广泛的应用，可以帮助研究人员了解基因突变对生物体的影响，也可以帮助医生诊断疾病，选择治疗方案。
1.样本采集：首先需要采集来自样本患者的DNA。
样本可以是血液、唾液、组织等，根据具体实验的需要选择合适的样本。
2.DNA提取：将采集到的样本中的DNA提取出来。
DNA提取是基因检测的第一步，是整个检测流程中最关键的一步。
提取出的DNA需要保持完整性和纯度，以确保后续的检测结果准确可靠。
3.PCR扩增：为了提高检测的灵敏度和特异性，通常需要对目标基因进行PCR扩增。
PCR是一种快速、灵敏的核酸扩增技术，可以将少量的DNA扩增至足够数量进行检测。
4. 基因检测：通过各种基因检测技术，如Sanger测序、PCR-RFLP、聚合酶链式反应（PCR）、序列特异放大（SSCP）等，对样本DNA中的基因序列进行检测。
通过比对样本DNA序列与正常基因序列之间的差异，可以发现是否存在基因突变。
5.数据分析：将检测到的基因序列数据进行比对和分析，确定是否存在突变以及其类型和位置。
数据分析是整个检测流程中最复杂的步骤，需要借助专业的软件和基因数据库进行分析和解读。
6.结果报告：根据数据分析的结果，生成基因突变检测报告，包括样本信息、检测方法、检测结果、结论等内容。
根据检测结果，可以为患者提供个性化的诊断和治疗方案。
总的来说，基因突变检测技术是一项复杂而精密的技术，需要严谨的操作流程和专业的数据分析能力。
在使用基因突变检测技术时，需要结合具体的实验目的和样本类型，选择合适的检测方法和分析工具，以确保检测结果的准确性和可靠性。
随着基因检测技术的不断发展，相信在未来基因突变检测技术将会在医学和生物学领域发挥更加重要的作用。
检测目的基因操作流程
检测目的基因操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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pcr检测 流程
pcr检测流程PCR（聚合酶链反应）是一种常用的遗传物质检测方法，可以快速、准确地检测出目标物质的存在与否。
下面将详细介绍PCR检测的流程。
一、实验准备在进行PCR检测之前，需要准备相应的实验试剂和设备。
实验试剂包括模板DNA、引物、聚合酶、缓冲液等。
设备包括PCR仪、离心机、电泳仪等。
确保实验室环境干净整洁，仪器设备无故障。
二、PCR反应体系的配制根据实验需求，按照一定的比例将所需试剂加入PCR反应管中。
通常，反应体系包括模板DNA、引物、聚合酶、缓冲液和去离子水。
确保各种试剂按照正确的比例加入，避免出现浓度偏差。
三、PCR反应的程序设置根据实验需求和所使用的PCR仪型号，设置PCR反应的程序。
程序设置包括温度和时间的设定。
一般情况下，PCR反应包括三个步骤：变性、退火和延伸。
变性温度通常在94-98℃之间，退火温度根据引物的Tm值确定，延伸温度通常在72℃左右。
四、PCR反应的进行将配制好的PCR反应体系放入PCR仪中进行反应。
反应过程中，PCR仪会按照预设的程序进行温度的升降，从而使DNA的变性、退火和延伸反应发生。
反应时间一般为数十分钟到数小时不等，具体根据实验需求而定。
五、PCR产物的分析PCR反应结束后，可以通过多种方法对PCR产物进行分析。
常用的方法包括琼脂糖凝胶电泳、荧光定量PCR、实时定量PCR等。
这些方法可以直观地观察PCR产物的大小、数量和纯度，从而判断PCR 反应的结果是否符合预期。
六、PCR结果的解读根据PCR产物的分析结果，可以对目标物质的存在与否进行判断。
如果PCR产物在琼脂糖凝胶电泳中出现了预期大小的条带，说明目标物质存在；如果没有出现预期大小的条带，说明目标物质不存在。
荧光定量PCR和实时定量PCR可以更精确地测量PCR产物的数量，从而判断目标物质的含量。
七、PCR结果的验证为了确保PCR结果的准确性和可靠性，通常需要进行结果的验证。
验证的方法包括重复实验、平行实验和阳性对照实验等。
4病理标本基因突变检测的流程及质量控制
• 选用带盖子的塑料瓶；
• 在塑料瓶上做好患者信息的标记。
痰液标本收集及蜡块制作流程
NSCLC
非NSCLC
重视痰液细胞学标本的病理质控
• 痰液细胞学标本病理评估是基因突变检测的第一步； • 病理评估的目的：1）确定被检测标本中是否存在非 小细胞肺癌细胞；2)是否有足够量癌细胞的用于检 测；3）以及决定下一步的处理方法； • 提高痰液细胞学诊断水平，注意鉴别不典型鳞化与 鳞癌、增生肺泡上皮细胞与腺癌细胞； • 必要时可以采用免疫细胞化学方法。
egfr突变检测egfr突变阴性egfr突变阳性真阳性假阳性假阴性真阴性病理评估及质控的目的尽可能排除质量达标质量不达标标本接收取材组织处理蜡块和he染色切片制作病理质量控制egfr基因突变检测无egfr基因突变检测病理科临床医生协作保证及时充分固定手术标本10中性缓冲福尔马林固定标本定期对福尔马林固定液进行检测核对患者姓名病历号手术标本取材应尽量全部取肿瘤组织避开坏死区域并放入有颜色的取材盒以区别用于常规病理诊断组织块
• 标本较小； • 通常是福尔马林固定处理。
• 视肿瘤组织的大小5-10uM/张，5-10张切片能满足 突变检测需求（其中要备出HE染色需要以及必要 时免疫组织化学的需要）。
细胞学标本
• 胸水、腹水细胞学
• 痰液 • 支气管盥洗液 • 穿刺细胞学悬液 • 载有肿瘤细胞的细胞学涂片
在日本，突变检测的验证研究 (东北大学附属医院/井上晃)
标本接收、取材
组织处理、蜡块和 H&E染色切片制作
病理质量控制
质量达标
质量不达标
EGFR 基因突变 检测
无EGFR 基因 突变检测
核对患者姓名、病历号
病理科、临床医生协作保证 及时充分固定手术标本
pcr实验室操作流程
pcr实验室操作流程PCR（聚合酶链反应）是一种常用的实验技术，用于扩增DNA序列。
下面是PCR实验室操作流程的详细步骤：1.实验前准备：a.准备实验材料，包括PCR管、DNA模板、引物、dNTPs、聚合酶、缓冲液等。
b.检查和准备实验仪器，包括PCR仪、微量离心机、显微镜等。
c.消毒实验台、实验器具，并戴上手套。
2.DNA提取和纯化：a.从样品（如细胞、组织等）中提取DNA，使用适当的DNA提取方法，如酚/氯仿法、离心柱法等。
b.确保提取的DNA质量和浓度，可以使用分光光度计或凝胶电泳进行检测和分析。
c.根据需要，使用DNA纯化方法进一步纯化提取的DNA。
3.PCR反应设计：a.根据实验目的，设计合适的引物序列，一般包含正向引物和反向引物。
b.选择合适的PCR条件，包括退火温度、延伸温度、PCR循环数等。
4.PCR反应体系准备：a.通过计算，准备所需的反应体系，包括PCR缓冲液、DNA模板、引物、dNTPs、聚合酶等。
b.将反应体系中的各组分按比例添加到PCR管中，并轻轻混匀。
5.PCR反应条件设置：a.将PCR管放入PCR仪中，并按照所设定的PCR条件设置仪器参数。
b.在PCR仪中开始PCR反应，并记录反应开始时间。
6.PCR循环程序：a.根据PCR条件设置的参数，在PCR仪中进行以下循环程序：变性、退火和延伸。
b.通过PCR仪的温度递增和降低，实现DNA的变性、引物的结合和DNA的扩增。
7.PCR结果分析：a.检查PCR反应结束后的PCR管，观察是否有目标片段扩增产物的出现。
b.可以进行凝胶电泳分析，将PCR产物与DNA分子量标准品一起加载到凝胶中，通过电泳分离观察PCR产物的大小。
8.结果验证和记录：a.如果PCR产物符合预期，可以进行测序验证，确保扩增的DNA序列的准确性。
b.记录PCR实验的结果，包括反应时间、PCR条件、扩增产物的大小等。
9.清洁实验台和器具：a.实验结束后，彻底清洁实验台和使用的器具，使用适当的消毒剂进行消毒。
PCR室检测结果分析的标准操作程序
PCR室检测结果分析的标准操作程序1.目的保证扩增及结果分析的标准化、规范化；保证实验结果的有效性，准确判断实验失控的原因，加强实验的可靠程度。
2.适用范围本规则适用于实验结果判定标准3.制定依据《临床基因扩增检验技术》申子瑜李金明主编人民卫生出版社出版2002年第一版；试剂使用说明书4.职责由经培训合格的临床基因扩增实验室技术人员负责操作。
5.结果分析标准程序5.1对于结果曲线的分析，应按以下步骤进行：全部曲线——阴性对照——阳性室内质控品——阳性标准品——逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）——调整参数，获得较好的标准曲线，显示定量结果——登记，发报告。
5.2整体曲线的观察将所有曲线选中进行整体观察①观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一Ct值出现上涨的情况。
②观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。
5.3空白对照的分析空白对照：仅含扩增反应混合液的管作用：监测扩增试剂是否发生污染5.4阴性对照的分析阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。
作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。
5.5阳性对照的分析阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。
作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。
5.6阳性室内质控品的分析阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知浓度的阳性室内质控血清。
作用：用以监控日常实验的精密度。
5.7阳性标准品的分析5.7.1各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明阳模稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。
5.7.2观察各曲线的Ct值是否在平常的正常位置。
有两种情况：①若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct 值均后移，则判断是否为试剂扩增效率下降（如试剂过期或保存条件不合格）。
②出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线Ct值均正常，则提示可能存在低拷贝阳性标准品的降解情况。
基因检测标准化操作流程
基因检测标准化操作流程
基因检测是一种用于检测个体基因组中特定基因或基因组序列的技术，可以帮助人们了解自己的遗传信息，预测疾病风险，指导个性化治疗等。
然而，由于基因检测技术的复杂性和多样性，标准化操作流程对于确保检测结果的准确性和可靠性至关重要。
基因检测标准化操作流程包括以下几个关键步骤：
1. 样本采集：首先，需要采集来自被检测个体的生物样本，通常是唾液、血液或组织样本。
样本采集的质量和准确性对后续的检测结果至关重要。
2. 样本处理：采集到的样本需要进行处理，包括提取DNA或RNA等核酸物质。
样本处理的过程中需要遵循严格的操作规程，以确保提取到的核酸质量和纯度符合检测要求。
3. 实验操作：在进行基因检测实验时，需要按照标准化的实验操作流程进行。
这包括PCR扩增、测序、基因芯片分析等步骤，每一步都需要严格控制实验条件和操作流程，以确保结果的准确性和可重复性。
4. 数据分析：得到实验数据后，需要进行数据分析和解读。
这包括对基因序列、变异位点等信息进行比对和分析，以确定个体的基因型和可能的遗传风险。
5. 结果报告：最后，需要将分析结果整理成报告，向被检测个
体提供详细的基因检测结果和解读。
报告中需要包括检测方法、结
果解读、可能的遗传风险等信息，以帮助个体理解自己的遗传信息。
在整个基因检测标准化操作流程中，严格遵循操作规程、保证
实验条件的稳定性和结果的准确性是至关重要的。
只有通过标准化
操作流程，才能确保基因检测结果的可靠性和可信度，为个体提供
准确的遗传信息和健康指导。
毛细管等电聚焦电泳(CIEF法)标准操作规程SOP
颁发部门：质量保证部分发部门：分析研究部拷贝号：NO. /目录1目的 (4)2范围 (4)3定义 (4)4环境、健康和安全 (4)5培训 (4)6职责 (4)7程序（内容） (4)7.1原理 (4)7.2实验材料 (5)7.3操作步骤 (6)7.4结果分析 (8)7.5判定标准 (9)7.6注意事项 (9)8相关文件 (9)9参考文献 (9)10流程图 (9)11附录 (9)毛细管等电聚焦电泳（CIEF法）测定记录 (1)毛细管等电聚焦电泳（CIEF法）测定记录（适用于多个样品） (1)1目的规范毛细管等电聚焦电泳（CIEF法）检验的操作过程。
2范围本规程适用于常规毛细管等电聚焦电泳检验，涉及到蛋白质等电点相关指标的测定。
3定义3.1CIEF：毛细管等电聚焦电泳。
3.2pI：等电点。
3.3DDI：超纯水。
4环境、健康和安全4.1乙酸其水溶液呈弱酸性且腐蚀性强，蒸汽对眼和鼻有刺激性作用，因此需适当防护。
4.2氨水具有刺激性气味，易挥发，有毒，对眼、鼻、皮肤有刺激性和腐蚀性，能使人窒息。
有燃烧爆炸危险。
应储存于阴凉、干燥、通风处，远离火种、热源。
5培训5.1培训部门：分析研究部。
5.2培训对象：分析研究部相关人员。
5.3培训方式和时数：授课，8小时。
5.4考核方式：现场操作。
6职责6.1质量保证部：负责监督本文件的执行。
6.2分析研究部：负责严格执行本规程规定。
7程序（内容）7.1原理两端电极槽中分别加入酸液和碱液，施加电压后毛细管中的操作电解质溶液逐渐形成pH梯度，各溶质在毛细管中迁移至各自的等电点（pI）时变为中性形式聚焦的区带，而后改变检测器末端电极槽储液的pH值的方法使溶质通过检测器。
采集色谱图后，根据各marker pI值与色谱峰的迁移时间的线性关系，从而得到供试品的pI值。
7.2实验材料7.2.1试药与试液如无特殊说明，所有试液有效期均为2~8℃，保存3个月。
7.2.2标准物质7.2.3.1毛细管电泳仪：SCIEX公司PA 800plus或CESI 8000 Plus。
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B-raf基因突变检测试剂盒(荧光PCR-毛细管电泳法)标准化操作流程1、预期用途该产品用于定性检测确诊的结直肠癌患者石蜡包埋病理组织切片DNA的B-rafV600E 基因突变。
B-raf 基因是一种癌基因，编码一种丝/ 苏氨酸特异性激酶，是RAS/RAF/MEK/ERK/MAPK 通路重要的转导因子，参与调控细胞内多种生物学事件，如细胞生长、分化和凋亡等。
B-raf 基因位于7p34，长约190kb，转录mRNA 长2.5kb，编码783 氨基酸的蛋白，相对分子质量为94000-95000 Da。
研究表明，在多种人类恶性肿瘤中，如恶性黑色素瘤、结直肠癌、肺癌、甲状腺癌、肝癌及胰腺癌等均存在不同比例的B-raf 突变，B-raf 突变主要发生在Exon15 上的激活区的第1799 氨基酸上(T 突变为A)，导致编码的氨基酸由谷氨酸变成缬氨酸(V600E)，该突变能使B-raf 激酶活性提高，V600E 突变能模拟T598 和S601 两个位点磷酸化作用，使BRAF 蛋白激活。
近来研究表明，对于野生型Kras、但存在B-raf 基因V600E 突变患者，抗EGFR 单抗治疗无效。
2010 年版《NCCN 结直肠癌临床实践指南》中已明确指出“如K-ras 基因无突变时，需检测B-raf 基因突变，如果后者存在V600E突变，则不应该给予抗EGFR 单抗治疗。
”2、仪器配置要求移液器，振荡器，微型离心机，生物安全柜，高速冷冻离心机，定性PCR仪，荧光定量PCR仪（ABI7500，LightCycler® 480，MX3000P，CFX-96等），微量紫外分光光度计，基因分析仪（ABI3130，ABI3500DX）。
3、耗材要求无菌带滤芯吸头、吸水纸，离心管（1.5ml，0.5ml，0.2ml）、PCR反应管（配套荧光定量PCR仪型号）及无粉一次性乳胶手套，基因分析板。
4、责任人基因扩增实验室室长负责技术指导和质量监督。
5、执行人操作人员应经过专业培训，具有合格的操作技能的检验专业技术人员。
6、检测原理本产品选取人类基因组B-raf 基因Exon 15 上设计特异性引物和探针，对扩增后的PCR 产物片段进行测序分析。
使用尿苷酶(UNG)防污染体系，经加热可以选择性地降解U-DNA，以防止先前PCR 扩增产物的污染。
7、试剂来源北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司8、样本要求8.1用量：每例标本切5张(10µm)白片，连续切片，不漂洗脱蜡，直接封存于1.5ml EP管中；8.2质量：为确保DNA提取成功率，必须选择2年以内的石蜡标本；8.3标本收集方法：石蜡包埋病理切片样品应确定含有肿瘤病变细胞，为了保证切片组织中含有足够比例的肿瘤细胞，需要加同一组织HE染色片子一张（在显微镜下肿瘤细胞比例＞70%）。
9、标准操作程序9.1试剂准备（在试剂准备区完成）9.1.1配置说明：检测反应设置阴性质控品和阳性质控品。
9.1.2配置过程提前30分钟将试剂取出，室温融化，涡旋振荡10秒，2000 rpm离心15秒待用。
确定反应数N，N=待检样本数(n)+质控品数(2)+1。
计算加到反应混合物中的各个试剂的量，取1个灭菌离心管配置上述反应体系，试剂全部加入后涡旋振荡10秒，2000 rpm离心15秒。
然后将上述混合液23 μL/管分装至PCR反应管中(无菌和RNase-Free)。
配完试剂后，充分混合均匀，瞬时离心15sec，放入传递窗。
9.2标本制备（标本制备去完成）9.2.1在缓冲间内更换隔离衣，戴上帽子、口罩、手套，将传递窗的试剂取出放入标本制备区的冰箱冷藏，备用。
9.2.2从样本盒中取出待检石蜡组织样本，添加1ml二甲苯于样品中，剧烈涡旋10sec。
12000rpm离心2min，吸除上清，小心不要吸到沉淀。
9.2.3加入1ml无水乙醇于沉淀中，涡旋混匀。
12000rpm离心2min，吸除上清，小心不要吸到沉淀。
9.2.4打开管盖，室温（15℃-25℃）或者37℃放置10min直至残余的乙醇挥发完全。
注意：完全去除残余的乙醇很重要，任何残余的乙醇均会对DNA产生影响。
9.2.5重悬沉淀于180ul缓冲液GA中，加入20ul蛋白酶K，彻底涡旋均匀。
56℃水浴1小时（水浴到样本完全裂解为止），再转移到90℃孵育1小时。
9.2.6向离心管中添加200ul缓冲液GB，涡旋均匀。
加入200ul无水乙醇，涡旋均匀。
再加入200ul无水乙醇，彻底均匀。
9.2.7将上述得到的溶液加入吸附柱CR2中（吸附柱放在收集管中），12000rpm离心1min。
将离心出的溶液重新加入到吸附柱中，12000rpm再次离心1min，直到所有的溶液通过吸附柱，弃掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
9.2.8向吸附柱中加入500ul缓冲液GD，12000rpm离心1min，弃掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
9.2.9向吸附柱中加入500ul漂洗液PW，室温静置2min，12000rpm离心1min，弃掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
9.2.10重复步骤15。
9.2.11将上步实验所得吸附柱12000rpm离心3min，弃掉收集管及废液，将吸附柱转入一个新的1.5ml离心管中，打开吸附柱的盖子置于室温放置数分钟。
注意：此步骤目的是使吸附柱中残余的漂洗液挥发干净，漂洗液的残留，可能会影响后续的实验。
9.2.12向吸附柱膜的中央滴加20-50ul洗脱缓冲液TB，室温放置2min，12000rpm离心2min，得到DNA溶液。
9.2.13加样将B-raf阴性质控品C、已处理样本和B-raf阳性质控品C 分别取2 μL加入PCR 反应管中，盖紧管盖，瞬时离心将管壁上的液体全部甩至管底，避免产生气泡，如有气泡产生，轻弹PCR 反应管壁，再次瞬时离心（若仍有气泡重复此步骤），然后立即进行PCR 扩增反应。
9.3PCR扩增收集荧光：FAM 通道10、PCR结果分析10.1结果分析条件设定10.1.1 ABI 7500 型荧光定量PCR仪(Version 1.4.0)反应结束后，根据PCR仪说明书及荧光曲线进行手动或自动调整基线和阈值。
手动调整时，基线（Baseline）的起始点（Start）设定在5~8之间，终止点（Stop）设定在12~15之间，阈值线（Threshold）通常设定在1000~5000之间（视具体情况而定）。
设定之后，点击“Analyze”（分析）按键，即可从“Report”窗口的“Ct”处得到各样本的Ct值。
10.1.2 Stratagene Mx3000P型荧光定量PCR仪反应结束后，根据荧光曲线进行手动或自动调整基线和阈值，手动调整基线（Non-adaptive baseline）的起始点（Start）一般设定为5~8，终止点（Stop）一般设定为12~15，阈值线（Threshold fluorescence）通常设定在500~2000之间（视具体情况而定）。
设定之后，可以从“Text report”窗口的“Ct(dRn)”处得到各样本的Ct值。
10.2质量控制10.2.1B-raf 阴性质控品C：靶基因通道无S 型扩增曲线，Reports 界面Ct 一栏显示Undetermined；10.2.2B-raf 阳性质控品C：靶基因通道有S 型扩增曲线，且15≤Ct≤25；以上条件必须在同一次实验中全部满足，否则本次实验结果无效；10.2.3待测样品的Ct>32 时，低于本试剂盒测序检测下限，不能进行后续的测序反应，说明加入的DNA 含量不足或含有较多的PCR 抑制物，应重新提取DNA 或调整DNA 加样量，必须使待测样品的Ct≤32，才能满足后续实验要求；10.2.4若检测靶基因通道无S 型扩增曲线，Reports 界面Ct 一栏显示Undetermined，则样本提取无DNA，为阴性，建议重新提取；10.3反应完毕，存储PCR结果以便进行数据分析，PCR产物用于后续实验。
11、PCR产物的酶解对样本DNA 含量(Ct≤32) PCR 产物和B-raf 阳性质控品C 分别取5 μL于PCR反应管中，再分别加入2 µL SAP酶混合液涡旋振荡10秒，2000 rpm离心15秒，于PCR仪上进行酶解。
酶解程序如下：37℃ 60分钟，80℃ 15分钟。
12、基因分析PCR反应分别取样本和B-raf 阳性质控品C 酶解产物3 µL、测序试剂1 µL和B-raf 测序引物2 µL13、基因分析产物纯化0.2 ml离心管中13.1.在每孔内加入16 µL醋酸钠-乙醇混合物(3M NaAc:无水乙醇=1:15)，剧烈振荡，避光静置15分钟12000 g以上4 ℃离心30分钟，吸弃上层液体；13.2.加入70 µL 70%预冷乙醇，剧烈振荡，12000 g以上4 ℃离心15分钟，吸取上层液体；13.3.让酒精在室温挥发干净，加入12 µL Hi-Di Formamide溶解DNA；13.4.在PCR仪上变性：95 ℃ 4分钟，4℃ 4分钟，上机电泳；在自动化的基因分析仪上进行分析，若不能当日基因分析，可置-20℃保存。
14、检测结果分析采用测序分析软件Chromas 对结果进行分析：14.1.用Chromas 软件打开测序结果，在Edit 菜单下点击“Reverse+Complement”；14.2.删除不稳定测序区域；14.3.在Find 下，找到序列GGAGCT，移动光标至“G”左侧的第一个碱基，按快捷键Alt+L 选中测序前段不稳定区域，在Edit 菜单下点击“Delete Cutoff Sequences”删除以上区域；14.4.按快捷键Ctrl+1，显示氨基酸序列，将其后面的序列与下面的野生型标准序列比对，标记处600(T1799A)位密码子GTG 可能会发生T→A的突变（参考突变判读依据）。
野生型核苷酸野生型氨基酸F G L A T K S突变型核苷酸突变型氨基酸F G L A T K S突变判读依据：杂合峰：如果在一个特定的位点上出现了两种颜色的峰叠在一起即为杂合峰。
在毛细管电泳时，这些测序图的峰高代表荧光强度，一种荧光素的高度能在一定程度上代表某一特定片段的量。
临床取得的肿瘤组织一般会携带正常细胞和肿瘤细胞，因此得到的测序结果中往往会存在2 种颜色的峰同时存在。
判读结果时根据突变的热点区、噪音的高低以及污染的轻重来综合判断，当杂合峰的高度显著高于其左右周边的噪音时，可判读为存在突变型。
按上述方法查找突变位点，并将结果记录在报告上，若没出现则可能前面的序列发生了移码突变、插入碱基等情形,需要对照标准序列将测序序列校正后返回本步骤重新分析。