甘草多糖的提取及其抗氧化活性研究
1前言甘草别名还有乌拉尔甘草,国老,甜根,甜草,属豆科,是著名的传统药用植物[1],主要生长在内蒙古,新疆,宁夏等地.随着科学的发展,在1860-1869年学者们开始对甘草进行化学方面有关的研究[2],研究表明,甘草中含有许多药用成分.多糖是生物体的重要组成部分,可以从植物,微生物和动物等生物中提取.在体内,有许多重要的生物功能,如防御功能、结构支持和储能,同时,多糖在细胞和细胞之间,细胞与外界之间的能量和物质转化中起重要作用.作为甘草的重要活性成分之一,许多研究表明甘草多糖具有抗肿瘤,抗炎,抗病毒[3-5],免疫调节,抗氧化和抗菌等生理活性[6,7],常用的提取法主要有超声辅助提取法、溶剂浸提法等[8-12].本研究利用水提醇沉法从甘草中提取甘草粗多糖,进行分离纯化并对提取的粗多糖和三种分级多糖进行了光谱性能分析,根据芬顿反应原理研究了所制备的甘草多糖清除羟自由基的能力,并研究了加入甘草多糖对酱油试样的羟基的清除能力的影响.2实验部分2.1仪器和材料红外光谱仪(Nicilet iS5),紫外光谱仪(普析),SHD-(III)循环真空泵(河南予华),可见光度计(菁华科技);双氧水(30%,沈阳华东试剂),抗坏血酸(红岩试剂,硫酸亚铁铵(双船化学试剂),甲醇(国药),无水乙醇(国药),磷酸氢二钠(国药),二甲亚砜(沈阳华东试剂),正丁醇(恒兴化学试剂),三氯化铁(泉瑞试剂),其他试剂(KH 2PO 4,乙二胺四乙酸二钠,三氯甲烷,茚三酮等)均购于国药集团.2.2试剂配制(1)0.2mol/L 的PBS 溶液(pH =7.4):准确称量35.8010gNa 2HPO 4·12H 2O,溶于500ml 蒸馏水中,标为液①;准确称量3.1120gKH 2PO 4·2H 2O,溶于100ml 蒸馏水,标记为液②;适量混合①号溶液和②号溶液配制所需缓冲溶液.(2)2.0mmol/L 的EDTA-Fe (II)溶液:EDTANa 2溶液(4.0mmol/L ):EDTANa 20.3721g 溶于250ml 超纯水,记为溶液①,精确称量硫酸亚铁铵0.3923g 溶于250ml 蒸馏水记为溶液②,将①、②两种溶液按1:1的体积比进行混合,得到2.0mmol/L 的EDTANa 2-Fe(II)溶液.(3)0.52mg/mL 的番红花红T 溶液、6%的H 2O 2溶液、0.2%的水合茚三酮溶液的配制准确称量藏红花红T0.0525g 溶于超纯水中,转移至100ml 容量瓶中,定容,备用.量取10ml30%的H 2O 2,并转移至50ml 的容量瓶中后定容.在100ml 容量瓶中准确称取0.2010g 茚三酮,将其溶解在乙醇中,稀释至刻度并备用.(4)配制5%的FeCl 3溶液:在10ml 容量瓶中准确称取0.5000gFeCl 3,将其溶解在超纯水中,并稀释至刻度.2.3多糖的提取与分级用粉碎机将天然甘草破碎过,分别脱脂、脱色,按一定比例加入溶剂搅拌均匀,静置后置于80℃的水浴锅中恒温6h ,冷却至室温后离心分离,然后将残余物保持在烧杯中,重复上述步骤三次.将滤出四次的滤液合并,置于烧杯中,在60℃的水浴中浓缩至没有水层后冷却至室温.按体一定体积比加入乙醇密封静置36小时后过滤.将沉淀物用少量甲醇洗涤三次,并将沉淀物置于干燥的容器中真空干燥后的产Vol.35No.6Jun.2019赤峰学院学报（自然科学版）JournalofChifengUniversity （NaturalScienceEdition ）第35卷第6期2019年6月收稿日期:2019-03-14基金项目:赤峰学院科研服务地方项目(cfxyfd201703);内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJZY16259);赤峰学院2018年度大学生创新训练项目(2018DC-36);2019年赤峰市自然科学基金项目资助甘草多糖的提取及其抗氧化活性研究乌兰其其格1,宋学军2,段雪琴1,李春丽1,秦佳欢1(1.赤峰学院化学化工学院,内蒙古赤峰024000;2.巴林右旗山丹食品有限责任公司,内蒙古巴林右旗025150)摘要:本文利用水提醇沉法从甘草中提取甘草粗多糖,用沉淀法对提取的甘草粗多糖进行分离纯化后,得到三种多糖,即水提一级、二级、三级多糖,并对粗多糖和三种分级多糖进行了光谱性能分析.紫外光谱结果显示,四种多糖在260-280nm 处均有吸收,表明含有蛋白质或核酸;红外光谱结果表明,四种多糖都具有多糖的特征吸收峰.另外,根据芬顿反的原理研究了所制备的甘草多糖清除羟自由基的能力,并研究了甘草多糖对酱油中羟基自由基清除能力的影响,结果表明,加入甘草多糖的酱油试样对羟基的清除能力有明显的增强.关键词:甘草多糖;提取;分级;抗氧化性中图分类号:S567.2;O 657文献标识码:A文章编号:1673-260X (2019)06-0036-0336--多糖种类O-H 伸缩振动-C=O γs 振动C-O-C 的C-0γs 振动C-O-H 的C-O γs 振动α-糖苷键β-糖苷键多糖(一级)3450.41649.41257.31089.5859.6915.3多糖(二级)3434.21647.31245.61086.5874.6923.2多糖(三级)3443.91642.61233.11067.9873.7917.5表1提取的多糖各样品的红外特征吸收品即为甘草粗多糖.称取一定量的粗糖,加入蒸馏水,加热至60℃使多糖充分溶解后冷却至室温后过滤,然后加入无水乙醇,当醇的浓度达到20%时会产生大量的棕色沉淀,静置、抽滤,干燥后所得物质即为“水提1级多糖”.再将乙醇继续加入上述保留的滤液中,在溶液中得到浓度为40%的无水乙醇,得到沉淀物“水提2级多糖”,如上所述继续向母液中加入乙醇,使醇的浓度至60%,得到“水提3级多糖”,其他分级操作与1级糖的相同.2.4甘草多糖清除各样品羟自由基分别在六个试管中,吸取三毫升上述配制的PBS 缓冲液,再加1.5ml 浓度为2.0mmol/L 的EDTA 二钠铁,0.45ml 的浓度为0.51mg/mL 的番红花红T 溶液,然后加入2.0毫升不同浓度的多糖,加入0.9ml 的6%H 2O 2溶液后稀释至10毫升.将混合溶液置于40℃的恒温水浴中半小时,在520nm 的波长处测定样品吸光度.由测得的各空白和样品的吸光度值计算清除率E(%),计算公式如下:E(%)=(A 样品-A 空白)/(A 对照-A 空白)*100%3结果和讨论3.1甘草多糖的显色特性本研究对提取的甘草多糖进行了三氯化铁和茚三酮实验,结果表明每种甘草多糖和三氯化铁(FeCl 3)溶液样品反应溶液均变黄,表明不存在烯醇、酚羟基.在茚三酮显色实验中,发现部分多糖溶液变成紫色,表明含有氨,此结果与UV的结论一致.3.2紫外光谱研究对所提取各多糖试样进行了紫外吸收测试,实验在200-900nm 波长范围内进行.从紫外光谱测试结果可以看出,粗多糖,水提取物一级,二级和三级多糖均有吸收峰,表明粗多糖和每种分级的多糖含有蛋白质或核酸.3.3红外光谱设定红外光谱仪的试验条件,用溴化钾压片法制备粗多糖和各分级水提多糖红外试样,在4000-600cm -1之间依次扫描压制样品,获得相应多糖样品的红外光谱,红外特征峰的数据示于表1.以图2粗多糖为例,从红外光谱可以看出,在3450.4cm -1处有一个强而宽的吸收峰.这是多糖中的O-H 伸缩振动吸收峰;在1635.4cm -1处是C=O 的伸缩振动吸收峰;1257.3cm -1处的吸收峰是由糖环中醚环C-O-C 的C-O 伸缩振动引起的吸收峰;在1089.5cm -1处的强吸收峰是由糖环C-O-H 的C-O 伸缩振动引起的吸收峰;915.3在cm -1处是β-糖苷键的特殊吸收峰;α-糖苷键在859.6cm -1处具有特定的吸收峰,表明在水提粗多糖中存在β-糖苷键和α-糖苷图1提取的甘草多糖的UV 图,图A 为粗多糖;图B 为一级多糖;图C 为二级多糖;图D 为三级多糖图2粗多糖IR 图键.3.4甘草多糖对羟自由基清除能力的活性研究我们探讨了甘草多糖对羟自由基的清除能力,原理为在Fe 2+存在时,与H 2O 2可生成·OH 的同时还生成Fe 3+,反应方式如下:H 2O 2+Fe 2+→·OH+OH -+Fe 3+,而·OH 又可使翻红花红T 褪色,基于以上原理可通过分光光度计法来检测甘草多糖对羟自由基清除能力.本研究提取的四种甘草多糖各试样的清除羟自由基能力见表2,对应EC 50值的大小见图3.由以上实验结果可知,EC 50由小到大排列依次为1级多糖>粗多糖>2级多糖(EC50)>3级多糖(EC 50)>抗坏血酸(EC 50),由上述结果可知提取的多糖的羟自由基清除能力强于对照品(抗坏血酸).同时,也表明随着甘草水提分级的增加,羟自由基的清除能力降低.本研究也探讨了加入甘草多糖对酱油试样的羟基自由37--试样浓度(mg/mL )试样清除率(%)EC50(mg/mL)抗坏血酸2.003.787.704.0016.566.0041.898.0053.4510.0067.67水提粗多糖0.2021.450.880.4029.380.6036.720.8042.941.0052.54水提1级多糖0.2020.920.490.3031.630.4041.330.5050.120.6061.22水提2级多糖0.5011.52 1.640.7515.161.0026.061.2537.581.5053.94水提3级多糖0.5013.59 2.061.0026.631.5036.412.0048.372.5059.78注:EC 50:清除率达E=50%时样品的浓度mg/mL.值越小表明清除羟基的能力越强表2甘草水提多糖清除羟基自由基的清除率基清除能力的影响,结果表明,加入甘草多糖后酱油试样对羟基的清除能力明显的增强.4结论本文是以甘草为原料,采用水提醇沉法提取了甘草多糖后对甘草多糖进行分级,分别得到水提一级、二级,三级糖.用紫外、红外等方法对提取的多糖进行了表征,根据芬顿反的原理研究了所制备的甘草多糖清除羟自由基的能力,并在酱油试样中添加提取的多糖后,研究了其羟基自由基清除能力,结果表明,加入甘草多糖的酱油试样对羟基的清除能力有明显的增强.———————————————————参考文献院〔1〕陈橙,帕丽达.阿不力孜,米仁沙.亚库甫,胀果甘草酸性多糖的分离纯化、结构分析及免疫活性测定[J].2017,21(10):1110-1112.〔2〕贺敏,吕慧英,梁逸曾.甘草化学成分分析(英文)[J].湘潭化工学院化学工程与制药系,2014,27(4):290-295.〔3〕Ikegami N.Prophylactic effect of long-term oral admin ⁃istration of glycyrrhizin on AIDS development of a symptomatic patients.PO -825-0596IX International Conference on AIDS,Berlin,1993.〔4〕Chen M,Christensen S.B,Theander T.G,Kharazami A.Antileishmanial Activity of Licochalcone A in mice in ⁃fected with Leishmania major and in hamsters infected with Leishmania donovani.Antimicrobial Agents and Chemotheraphy,1994,38:1339-1344.〔5〕张泽生,史珅,杨超慧,等.甘草多糖免疫调节作用的研究[J],现代生物医学进展,2008,8(10):1855-1837.〔6〕王忱.甘草多糖抑瘤的体内实验及其分子机制的研究[D].天津医科大学,2002.1213-1215.〔7〕魏炜.甘草药用成分的萃取、分离、纯化方法研究[D].大连:大连理工大学,2005.〔8〕刘树兴,唐孟忠.“米邦塔”食用仙人掌多糖分级新方法的研究[J].食品工业科技,2006(4):108-109.〔9〕郭立山.郁金中水溶性多糖的梯度分离和含量测定[J].中医药学报,1996(4):48-49.〔10〕蔡亚平,韩学忠.五味子多糖分级注射剂的含量和性质测定研究[J].中草药,2010,32(7):228-230.〔11〕刘湘,汪秋安.天然产物化学[M].北京:化学工业出版社,2010.图3甘草水提分级多糖清除羟自由基的清除率图4加入多糖后酱油试样对羟基的清除率38--。
甘草多糖的提取及其抗氧化活性研究
甘草多糖的提取及其抗氧化活性研究作者：乌兰其其格宋学军段雪琴来源：《赤峰学院学报·自然科学版》2019年第06期摘要：本文利用水提醇沉法从甘草中提取甘草粗多糖，用沉淀法对提取的甘草粗多糖进行分离纯化后，得到三种多糖，即水提一级、二级、三级多糖，并对粗多糖和三种分级多糖进行了光谱性能分析.紫外光谱结果显示，四种多糖在260-280nm处均有吸收，表明含有蛋白质或核酸;红外光谱结果表明，四种多糖都具有多糖的特征吸收峰.另外，根据芬顿反的原理研究了所制备的甘草多糖清除羟自由基的能力，并研究了甘草多糖对酱油中羟基自由基清除能力的影响，结果表明，加入甘草多糖的酱油试样对羟基的清除能力有明显的增强.关键词：甘草多糖;提取;分级;抗氧化性中图分类号：S567.2;O657; 文献标识码：A; 文章编号：1673-260X（2019）06-0036-031 前言甘草别名还有乌拉尔甘草，国老，甜根，甜草，属豆科，是著名的传统药用植物[1]，主要生长在内蒙古，新疆，宁夏等地.随着科学的发展，在1860-1869年学者们开始对甘草进行化学方面有关的研究[2]，研究表明，甘草中含有许多药用成分.多糖是生物体的重要组成部分，可以从植物，微生物和动物等生物中提取.在体内，有许多重要的生物功能，如防御功能、结构支持和储能，同时，多糖在细胞和细胞之间，细胞与外界之间的能量和物质转化中起重要作用.作为甘草的重要活性成分之一，许多研究表明甘草多糖具有抗肿瘤，抗炎，抗病毒[3-5]，免疫调节，抗氧化和抗菌等生理活性[6，7]，常用的提取法主要有超声辅助提取法、溶剂浸提法等[8-12].本研究利用水提醇沉法从甘草中提取甘草粗多糖，进行分离纯化并对提取的粗多糖和三种分级多糖进行了光谱性能分析，根据芬顿反应原理研究了所制备的甘草多糖清除羟自由基的能力，并研究了加入甘草多糖对酱油试样的羟基的清除能力的影响.2 实验部分2.1 仪器和材料红外光谱仪（Nicilet iS5），紫外光谱仪（普析），SHD-（III）循环真空泵（河南予华），可见光度计（菁华科技）;双氧水（30%，沈阳华东试剂），抗坏血酸（红岩试剂，硫酸亚铁铵（双船化学试剂），甲醇（国药），无水乙醇（国药），磷酸氢二钠（国药），二甲亚砜（沈阳华东试剂），正丁醇（恒兴化学试剂），三氯化铁（泉瑞试剂），其他试剂（KH2PO4，乙二胺四乙酸二钠，三氯甲烷，茚三酮等）均购于国药集团.2.2 试剂配制（1）0.2mol/L的PBS溶液（pH=7.4）：准确称量35.8010gNa2HPO4·12H2O，溶于500ml蒸馏水中，标为液①;准确称量3.1120gKH2PO4·2H2O，溶于100ml蒸馏水，标记为液②;适量混合①号溶液和②号溶液配制所需缓冲溶液.（2）2.0mmol/L的EDTA-Fe（II）溶液：EDTANa2溶液（4.0mmol/L）：EDTANa20.3721g溶于250ml超纯水，记为溶液①，精确称量硫酸亚铁铵0.3923g溶于250ml蒸馏水记为溶液②，将①、②两种溶液按1：1的体积比进行混合，得到2.0mmol/L的EDTANa2-Fe （II）溶液.（3）0.52mg/mL的番红花红T溶液、6%的H2O2溶液、0.2%的水合茚三酮溶液的配制准确称量藏红花红T0.0525g溶于超纯水中，转移至100ml容量瓶中，定容，备用.量取10ml30%的H2O2，并转移至50ml的容量瓶中后定容.在100ml容量瓶中准确称取0.2010g茚三酮，将其溶解在乙醇中，稀释至刻度并备用.（4）配制5%的FeCl3溶液：在10ml容量瓶中准确称取0.5000gFeCl3，将其溶解在超纯水中，并稀释至刻度.2.3 多糖的提取与分级用粉碎机将天然甘草破碎过，分别脱脂、脱色，按一定比例加入溶剂搅拌均匀，静置后置于80℃的水浴锅中恒温6h，冷却至室温后离心分离，然后将残余物保持在烧杯中，重复上述步骤三次.将滤出四次的滤液合并，置于烧杯中，在60℃的水浴中浓缩至没有水层后冷却至室温.按体一定体积比加入乙醇密封静置36小时后过滤.将沉淀物用少量甲醇洗涤三次，并将沉淀物置于干燥的容器中真空干燥后的产品即为甘草粗多糖.称取一定量的粗糖，加入蒸馏水，加热至60℃使多糖充分溶解后冷却至室温后过滤，然后加入无水乙醇，当醇的浓度达到20%时会产生大量的棕色沉淀，静置、抽滤，干燥后所得物质即为“水提1级多糖”.再将乙醇继续加入上述保留的滤液中，在溶液中得到浓度为40%的无水乙醇，得到沉淀物“水提2级多糖”，如上所述继续向母液中加入乙醇，使醇的浓度至60%，得到“水提3级多糖”，其他分级操作与1级糖的相同.2.4 甘草多糖清除各样品羟自由基分别在六个试管中，吸取三毫升上述配制的PBS缓冲液，再加1.5ml浓度为2.0mmol/L的EDTA二钠铁，0.45ml的浓度为0.51mg/mL的番红花红T溶液，然后加入2.0毫升不同浓度的多糖，加入0.9ml的6%H2O2溶液后稀释至10毫升.将混合溶液置于40℃的恒温水浴中半小时，在520nm的波长处测定样品吸光度.由测得的各空白和样品的吸光度值计算清除率E （%），计算公式如下：E（%）=（A樣品-A空白）/（A对照-A空白）*100%3 结果和讨论3.1 甘草多糖的显色特性本研究对提取的甘草多糖进行了三氯化铁和茚三酮实验，结果表明每种甘草多糖和三氯化铁（FeCl3）溶液样品反应溶液均变黄，表明不存在烯醇、酚羟基.在茚三酮显色实验中，发现部分多糖溶液变成紫色，表明含有氨，此结果与UV的结论一致.3.2 紫外光谱研究对所提取各多糖试样进行了紫外吸收测试，实验在200-900nm波长范围内进行.从紫外光谱测试结果可以看出，粗多糖，水提取物一级，二级和三级多糖均有吸收峰，表明粗多糖和每种分级的多糖含有蛋白质或核酸.3.3 红外光谱设定红外光谱仪的试验条件，用溴化钾压片法制备粗多糖和各分级水提多糖红外试样，在4000-600cm-1之间依次扫描压制样品，获得相应多糖样品的红外光谱，红外特征峰的数据示于表1.以图2粗多糖为例，从红外光谱可以看出，在3450.4cm-1處有一个强而宽的吸收峰.这是多糖中的O-H伸缩振动吸收峰;在1635.4cm-1处是C=O的伸缩振动吸收峰;1257.3cm-1处的吸收峰是由糖环中醚环C-O-C的C-O伸缩振动引起的吸收峰;在1089.5cm-1处的强吸收峰是由糖环C-O-H的C-O伸缩振动引起的吸收峰;915.3在cm-1处是β-糖苷键的特殊吸收峰;α-糖苷键在859.6cm-1处具有特定的吸收峰，表明在水提粗多糖中存在β-糖苷键和α-糖苷键.3.4 甘草多糖对羟自由基清除能力的活性研究我们探讨了甘草多糖对羟自由基的清除能力，原理为在Fe2+存在时，与H2O2可生成·OH的同时还生成Fe3+，反应方式如下：H2O2+Fe2+→·OH+OH-+Fe3+，而·OH又可使翻红花红T褪色，基于以上原理可通过分光光度计法来检测甘草多糖对羟自由基清除能力.本研究提取的四种甘草多糖各试样的清除羟自由基能力见表2，对应EC50值的大小见图3.由以上实验结果可知，EC50由小到大排列依次为1级多糖>粗多糖>2级多糖（EC50）>3级多糖（EC50）>抗坏血酸（EC50），由上述结果可知提取的多糖的羟自由基清除能力强于对照品（抗坏血酸）.同时，也表明随着甘草水提分级的增加，羟自由基的清除能力降低.本研究也探讨了加入甘草多糖对酱油试样的羟基自由基清除能力的影响，结果表明，加入甘草多糖后酱油试样对羟基的清除能力明显的增强.4 结论本文是以甘草为原料，采用水提醇沉法提取了甘草多糖后对甘草多糖进行分级，分别得到水提一级、二级，三级糖.用紫外、红外等方法对提取的多糖进行了表征，根据芬顿反的原理研究了所制备的甘草多糖清除羟自由基的能力，并在酱油试样中添加提取的多糖后，研究了其羟基自由基清除能力，结果表明，加入甘草多糖的酱油试样对羟基的清除能力有明显的增强.参考文献：〔1〕陈橙，帕丽达.阿不力孜，米仁沙.亚库甫，胀果甘草酸性多糖的分离纯化、结构分析及免疫活性测定[J].2017，21（10）：1110-1112.〔2〕贺敏，吕慧英，梁逸曾.甘草化学成分分析（英文）[J].湘潭化工学院化学工程与制药系，2014，27（4）：290-295.〔3〕Ikegami N.Prophylactic effect of long-term oral administration of glycyrrhizin on AIDS development of a symptomatic patients.PO-825-0596 IX International Conference on AIDS，Berlin，1993.〔4〕Chen M，Christensen S.B，Theander T.G，Kharazami A.Antileishmanial Activity of Licochalcone A in mice infected with Leishmania major and in hamsters infected with Leishmania donovani. Antimicrobial Agents and Chemotheraphy，1994，38：1339-1344.〔5〕张泽生，史珅，杨超慧，等.甘草多糖免疫调节作用的研究[J]，现代生物医学进展，2008，8（10）：1855-1837.〔6〕王忱.甘草多糖抑瘤的体内实验及其分子机制的研究[D].天津医科大学，2002.1213-1215.〔7〕魏炜.甘草药用成分的萃取、分离、纯化方法研究[D].大连：大连理工大学，2005.〔8〕刘树兴，唐孟忠.“米邦塔”食用仙人掌多糖分级新方法的研究[J].食品工业科技，2006（4）：108-109.〔9〕郭立山.郁金中水溶性多糖的梯度分离和含量测定[J].中医药学报，1996（4）：48-49.〔10〕蔡亚平，韩学忠.五味子多糖分级注射剂的含量和性质测定研究[J].中草药，2010，32（7）：228-230.〔11〕刘湘，汪秋安.天然产物化学[M].北京：化学工业出版社，2010.。
甘草多糖提取工艺条件的研究
多糖是指由许多单糖分子以糖苷键结合而成 的高分子碳 水 化 合 物，是 除 核 酸 和 蛋 白 质 之 外，存 在于所有生命有机体的重要组成部分之一。近年 来，已有多 种 植 物 的 多 糖［1］ 被 提 取 分 离 鉴 定 出 来， 此类多糖来 源 广 泛、无 细 胞 毒 性，应 用 于 生 物 体 毒 副作用小，因此多糖生物资源的开发利用和研究日 益活跃。糖生物学也被称为“生物化学最后的巨大 前沿之一”。
取苯酚 5 g，加水 100 mL 溶解，置棕色瓶中，备用。 二、实验方法 1． 葡萄糖标准曲线［5］的绘制： 精确量取葡萄糖
标准溶液 0． 2、0． 4、0． 6、0． 8、1． 0 mL，置干燥具塞的 试管中，分别加蒸馏水至 1． 0 mL，加入 5% 苯酚溶液 1． 0 mL，摇匀，再滴加浓硫酸 5． 0 mL，充分摇匀后， 25 ℃ 水浴放置 25 min。另以蒸馏水 1． 0 mL 加 5% 苯酚和浓硫酸同上述操作作空白对照，于 490 nm 处 测吸光度。以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制 标准曲线。
·234·
世界中西医结合杂志 2011 年第 6 卷第 3 期 World Journal of Integrated Traditional and Western Medicine 2011，Vol. 6，No. 3
·药物研究·
甘草多糖提取工艺条件的研究
韩荣生1 李鹏2
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
【摘要】 目的 在超声条件下提取甘草中有效成分甘草多糖（ GPS） 并测定其含量，以筛选获得 适宜的甘草多糖提取工艺条件。方法 采用正交试验设计，选取提取时间、提取温度及料液比作为工 艺因素，每个因素采用 3 个水平，选择 L9 （ 34 ） 正交表进行实验，同时用硫酸 － 苯酚法测定甘草多糖的 含量来作为综合评价指标。结果 在超声条件下提取甘草多糖的适宜条件为： 提取次数为 3 次，提取 时间为 20 min，提取温度为 45 ℃ ，料液比为 1 ∶ 20 （ g · mL －1 ） ，该提取 条 件 下 甘 草 多 糖 的 含 量 为 2． 39% 。结论 利用超声提取多糖相对其他提取方法有较大优势，可缩短提取时间、提高提取效率， 且操作方便、自动化程度高，便 于 大 规 模 工 业 生 产，为 从 药 材 或 制 剂 中 提 取 甘 草 多 糖 提 供 了 依 据 及 参考。
超声辅助低共熔溶剂提取甘草多糖的研究
2021年1月第42卷第2期应用技术—84D01：10.12161/j.issn.l005-6521.2021.02.014超声辅助低共熔溶剂提取甘草多糖的研究孙悦1,何莲芝U苏卓文U李志田U刘娅心（1.石河子大学食品学院，新疆石河子832000；2.新疆植物药资源利用教育部重点实验室，新疆石河子832000）摘要：以甘草为原料,采用超+辅助低共熔溶剂法，研究低共熔溶剂的种类、摩尔比、含水量以及提取温度、料液比、超+时间、超+功率对甘草多糖提取率的影响，并通过响应面试验设计，优化提取甘草中多糖的工艺条件。
结果表明，以含水量40%,摩尔比为1:3的氯化胆碱-异丙醇体系为提取剂，提取温度39"、料液比1:50（g/iL）、超+时间30min、超+功率250W，此时多糖的提取率达8.31%。
关键词：低共熔溶剂q超+波辅助；甘草；多糖;提取Ultrasonic-assisted Eutectic Solvent Extraction of Glycyrrhiza PolysaccharideSUN Yue1,HE Lian-zhi1,SU Zhuo-wen1,LI Zhi-tian1,LIU Ya1,2F(1.College of Food Science,Shihezi University,Shihezi832000,Xinjiang,China;2.Key Laboratory ofXinjiang Phytomedicine Resource and Utilization,Ministry of Education,Shihezi832000,Xinjiang,China) Abstract:Using licorice as raw material,using ultrasonic-assisted eutectic solvent method,the effects of eutectic solvent types,molar ratio,water content,extraction temperature,material-liquid ratio,ultrasonic time,ultrasonic power on the extraction rate of glycyrrhizin polysaccharide were studied,and through the design of response surface experiment,the technological conditions for extracting polysaccharides from licorice were optimized.The results showed that the choline chloride-isopropanol system with a water content of40% and a molar ratio of1:3was used as the extractant.The extraction temperature was39°C,the material-liquid ratio was1:50(g/mL),the ultrasonic time was30min,and the ultrasonic power250W,the extraction rate of polysaccharide reached8.31%.Key words:low eutectic solvent;ultrasonic wave;glycyrrhiza;polysaccharide;extraction引文格式：孙悦，何莲芝，苏卓文，等.超+辅助低共熔溶剂提取甘草多糖的研究[几食品研究与开发,2021,42(2):84-91.SUN Yue,HE Lianzhi,SU Zhuowen,et al.Ultrasonic-assisted Eutectic Solvent Extraction of Glycyrrhiza Polysaccharide[J].Food Research and Development,2021,42(2):84-91.甘草为豆科、甘草属多年生草本植物，全世界有13种甘草，主要分布于亚洲、美洲中部、北非等地。
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展1. 引言1.1 研究背景多糖是一类具有多个单糖组成的生物大分子，广泛存在于动物、植物和微生物体内。
多糖具有多种生物活性和药用价值，被广泛应用于医药、食品、化妆品等领域。
随着人们对健康意识的提高和生物技术的发展，多糖的提取、纯化、化学修饰和功能研究已成为研究热点。
多糖的提取方法主要包括物理提取和化学提取两种途径。
物理提取方法包括热水提取、酶解法、超声波提取等，而化学提取方法则包括酸碱法、有机溶剂法等。
随着技术的不断发展，提取方法也在不断优化，使得多糖的提取效率和纯度得到提高。
多糖的纯化技术主要包括凝胶过滤、离子交换、透析等手段。
通过这些技术，可以去除多糖中的杂质和有害物质，提高多糖的纯度和稳定性。
由于多糖的天然结构以及功能的限制，化学修饰方法成为了研究的重点。
化学修饰可以改变多糖的性质和功能，扩大其应用范围。
多糖的抗氧化性研究也备受关注，抗氧化性是多糖的重要生物活性之一，在抗氧化防衰老、抑制肿瘤、保护心脑血管等方面具有潜在的应用前景。
多糖的提取、纯化、化学修饰以及抗氧化性研究对于拓展多糖的应用领域、开发新药物和保健品具有重要意义。
在未来的研究中，还需要进一步深入探讨多糖的结构与功能之间的关系，寻找更多多糖的生物活性，为多糖的应用提供更多可能性。
1.2 研究目的本文的研究目的旨在系统地总结多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究的最新进展，探讨多糖在生物医药领域中的应用前景。
通过对多糖的提取方法、纯化技术、化学修饰方法以及抗氧化性研究进行综合分析，为进一步深入探讨多糖的生物活性及其在药物开发中的应用提供理论基础和实验依据。
通过对多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究的意义进行分析和探讨，进一步强调了多糖在科研和工程领域中的重要性，并为未来相关研究方向提供启示和指导。
希望通过本文的研究，能够促进多糖研究领域的发展，推动多糖在医药领域的应用，为人类健康和生命质量的改善做出贡献。
甘草多糖的分离提取及含量测定研究
甘草多糖的分离提取及含量测定研究引言甘草（Glycyrrhiza）是一种广泛分布于亚洲和欧洲的植物，其根部含有丰富的生物活性成分。
其中甘草多糖是一种具有重要药理活性的化合物，已被广泛应用于中药领域。
为了深入研究甘草多糖的含量以及提取方法，本文进行了一系列实验并对结果进行了统计分析。
材料与方法材料•甘草根部•甘草提取液•离心管•蒸馏水•甘草多糖标准品•硫酸•硝酸•灰色硫酸铁•磷钼酸铵•高速离心机•紫外分光光度计方法1.甘草分离提取：–甘草根部切成小片，并用蒸馏水洗净。
–将甘草根部片放入离心管中，用甘草提取液浸泡。
–在室温下提取24小时后，将提取液离心分离。
–将提取液转移到干燥的离心管中，用高速离心机离心15分钟，取上清液备用。
2.含量测定：–取一定量的甘草多糖标准品和未知甘草多糖提取液，分别制备浓度为0.1 mg/mL的溶液。
–分别将甘草多糖标准品和未知提取液的溶液转移到离心管中。
–加入硫酸，硝酸和灰色硫酸铁，混匀，并在室温下反应20分钟。
–分别加入磷钼酸铵溶液并混匀。
–用紫外分光光度计测定吸光度，并根据标准曲线计算甘草多糖的浓度。
结果与分析在进行甘草多糖的分离提取实验后，我们成功得到了甘草提取液。
在含量测定实验中，我们利用甘草多糖标准品和未知提取液制备了浓度为0.1 mg/mL的溶液，并进行了一系列反应和测定。
通过紫外分光光度计测定吸光度并根据标准曲线计算甘草多糖的浓度，我们得到了未知提取液中甘草多糖的含量。
根据统计分析，我们可以得出以下结论：1.甘草多糖的分离提取方法相对简单且有效，能够得到高纯度的甘草多糖提取液。
2.通过含量测定实验，我们确定了未知提取液中甘草多糖的含量为X mg/mL。
结论本研究成功地进行了甘草多糖的分离提取实验，并通过含量测定方法测定了其含量。
我们得出的结论是未知提取液中甘草多糖的含量为X mg/mL。
这些结果对于进一步研究甘草多糖的药理活性及其应用具有重要意义。
参考文献[1] 张三, 李四. 甘草多糖的提取与含量测定方法研究[J]. 中草药, 20XX, 10(1): 123-135.[2] 王五, 赵六. 甘草多糖的生物活性及应用研究进展[J]. 中药学杂志, 20XX, 25(3): 456-468.。
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展多糖是一类由多个单糖单元组成的生物大分子，具有多种生物活性和广泛的应用价值。
多糖的提取、纯化、化学修饰和抗氧化性研究是多糖研究中的重要内容。
本文将对多糖提取纯化、化学修饰和抗氧化性的研究进展进行综述。
多糖的提取纯化是多糖研究的第一步，目前常用的多糖提取方法有酸碱法、酶解法和热水法等。
酸碱法是最常用和经济的提取方法。
在酸碱法中，多糖首先通过酸处理将其脱除，然后用碱中和溶液pH值调整至碱性，在极性溶剂中进行提取。
酶解法是一种通过酶分解作用将多糖从生物背景中提取出来的方法。
热水法是将生物样品与水加热浸泡，使多糖溶解于水中，然后通过沉淀、离心等步骤来纯化。
多糖的化学修饰是利用化学反应将不同的官能团引入到多糖分子中，从而改变多糖的结构和性质。
常用的多糖化学修饰方法有酯化、醚化、磷酸化和羟烷化等。
酯化是将多糖上的羟基与酸反应形成酯键的过程，可以增加多糖的溶解性和稳定性。
醚化是将多糖上的羟基与醇反应形成醚键的过程，可以提高多糖的溶解性和抗氧化性。
磷酸化是将多糖上的羟基与磷酸反应形成磷酸酯键的过程，可以提高多糖的生物活性和生物相容性。
羟烷化是将多糖上的羟基与环氧丙烷反应形成环氧丙基键的过程，可以增强多糖的交联性和机械强度。
多糖具有显著的抗氧化性，可以作为天然抗氧化剂应用于食品、生物医药和化妆品等领域。
多糖的抗氧化性主要通过清除自由基、抑制氧化酶活性、增强抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化等机制实现。
目前，越来越多的研究表明多糖的抗氧化性与其结构和物理化学性质密切相关。
多糖的抗氧化性受多糖分子量、空间构象、结构稳定性、官能团等因素的影响。
通过多糖的化学修饰来改变多糖的结构和性质，可以进一步提高其抗氧化性能。
多糖提取纯化、化学修饰和抗氧化性研究是多糖研究中的重要内容。
多糖的提取纯化方法有酸碱法、酶解法和热水法等。
多糖的化学修饰方法有酯化、醚化、磷酸化和羟烷化等。
多糖具有显著的抗氧化性，其抗氧化性与其结构和物理化学性质密切相关。
甘草化学成分及生物活性研究进展
甘草化学成分及生物活性研究进展一、本文概述甘草，作为一种具有悠久药用历史的传统中药材，其在中医药理论中占据重要地位。
甘草不仅被广泛应用于各类中药方剂中，以调和药性、增强药效，而且其独特的化学成分和生物活性也引起了现代科学研究的广泛关注。
本文旨在综述甘草的化学成分及其生物活性的最新研究进展，以期为甘草的深入开发和临床应用提供理论依据和科学指导。
我们将首先介绍甘草的主要化学成分，包括甘草甜素、甘草次酸、甘草苷等，并分析这些成分在甘草中的含量及其变化规律。
随后，我们将重点讨论甘草的生物活性，包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等方面的作用及其机制。
我们还将对甘草在临床应用中的疗效和安全性进行评估，以期为其在现代医学中的应用提供有力支持。
通过本文的综述，我们期望能够为读者提供一个全面、深入的甘草化学成分及生物活性研究进展的概览，为甘草的进一步研究和开发提供有益的参考和启示。
二、甘草的化学成分甘草，作为一种传统中药材，其化学成分丰富多样，主要包括甘草酸、甘草次酸、甘草素、甘草苷等。
这些成分不仅为甘草的药理作用提供了丰富的物质基础，也为其在中医药学中的应用提供了科学依据。
甘草酸是甘草中最具代表性的成分之一，其结构独特，具有显著的抗炎、抗氧化和保肝等作用。
甘草次酸则是甘草酸在体内的代谢产物，同样具有抗炎和保肝活性。
甘草素和甘草苷则是甘草中的黄酮类化合物，具有抗氧化、抗病毒和抗肿瘤等多种生物活性。
除了上述主要成分外，甘草还含有多种微量元素和氨基酸，如钙、铁、锌、锰等，以及甘氨酸、亮氨酸等。
这些成分虽然含量较低，但也在甘草的药理作用中发挥着重要作用。
近年来，随着现代分离技术的不断发展和应用，甘草中的新成分也在不断被发现和确认。
例如，利用高效液相色谱、质谱等先进技术，研究人员在甘草中发现了多种新的黄酮类、皂苷类和多糖类化合物，这些新成分的研究将为甘草的药理作用和应用提供更广阔的前景。
甘草的化学成分复杂多样，主要包括甘草酸、甘草次酸、甘草素、甘草苷等黄酮类化合物，以及多种微量元素和氨基酸。
甘草抗氧化现代研究进展
.综述.甘草抗氧化现代研究进展李念虹'，化敏2,戴衍朋'，石典花',周倩1(1.山东省中医药研究院，山东济南250014；2.山东中医药大学，山东济南250355)摘要:甘草作为一种常用的中药，临床应用广泛,其作为一种天然的抗氧化剂，其抗氧化活性越来越受到人们重视。
本文通过查阅国内外近年来有关文献，对甘草的抗氧化作用进行了综述，以期为甘草抗氧化性能的进一步研究以及扩大临床应用提供参考。
关键词：甘草；抗氧化活性;研究进展中图分类号：R285文献标识码：A文章编号:2095-5375(2020)12-0717-005doi：10.13506/ki.jpr.2020.12.008Recent research progress on the antioxidant activity of GlycyrrhizaU MaMo昭'出％Min2/Qzan7(7.Shandong Academy of Chinese Medicine,丿inan250074,China;2.Shandong^/ni^ersiiy ofTra^iiionaZ Chinese Medicine,Jinan250355,China)Abstract:As a common Chinese medicine,GZycyrrhiza is widely used in clinical practice.As a natural antioxidant,its antioxidant activity has attracted more and more attention.In order to provide reference for further study and clinical application of GZycyrrhiza antioxidation,this paper reviewed the relative literatures at home and abroad in recent years.Key words:GZycyrrhiza;Antioxidant activity;Research progress甘草为豆科植物甘草(GZycyrrhiza uraZensis Fisch.)、胀果甘草(GZycyrrhiza inflata Bat.)或光果甘草(GZycyrrhiza gZabra L.)的干燥根和根茎。
甘草多糖提取纯化工艺研究
甘草多糖提取纯化工艺研究甘草多糖是一种天然多糖，具有很多药理学特性，被广泛应用于中药、食品、保健品等领域。
然而，由于甘草多糖在天然状态下含量较低，提取纯化工艺成为了研究重点。
本文将针对甘草多糖提取纯化工艺进行探讨。
一、甘草多糖的结构和特性甘草多糖是一种天然多糖，由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等单糖组成。
其分子量较大，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降血糖等。
甘草多糖的结构特点是分支程度高，分子链长度不一，具有多种单糖组分。
二、甘草多糖的提取方法目前，甘草多糖的提取方法主要有水提法、酸提法、碱提法、超声波提取法、微波提取法等。
其中，水提法是最常用的提取方法，其具体步骤包括：将甘草粉末加入水中，加热至一定温度，过滤得到甘草多糖溶液，再经过浓缩、沉淀、洗涤等步骤，最终得到甘草多糖粉末。
三、甘草多糖的纯化方法甘草多糖在提取过程中容易受到杂质、色素等的干扰，因此需要进行纯化处理。
目前，甘草多糖的纯化方法主要有凝胶过滤法、离子交换法、超滤法、逆流色谱法等。
其中，凝胶过滤法是最常用的纯化方法，其具体步骤包括：将甘草多糖溶液经过过滤膜过滤，将过滤液加入凝胶柱中，通过洗涤、洗脱等步骤，最终得到纯化后的甘草多糖。
四、甘草多糖提取纯化工艺的优化甘草多糖提取纯化工艺的优化是提高甘草多糖产率和纯度的重要途径。
目前，甘草多糖提取纯化工艺的优化主要从以下几个方面入手：（1）提高提取效率。
可通过改变提取温度、提取时间、提取溶剂、提取pH值等因素，来提高甘草多糖的提取效率。
（2）降低成本。
可通过改变提取方法、减少中间步骤、优化设备等措施，来降低甘草多糖的生产成本。
（3）提高纯度。
可通过改变纯化方法、加强对杂质的去除等措施，来提高甘草多糖的纯度。
五、结论甘草多糖是一种具有广泛应用前景的天然多糖，其提取纯化工艺的研究对其应用价值的发挥至关重要。
通过优化提取纯化工艺，可以提高甘草多糖的产量和纯度，降低生产成本，为其在中药、食品、保健品等领域的应用提供了有力支持。
甘草多糖清除自由基活性的研究
第19卷 第1期2007年3月 塔 里 木 大 学 学 报Journal of Tari m UniversityVol.19No.1Mar.2007① 文章编号:1009-0568(2007)01-0001-03甘草多糖清除自由基活性的研究杨玲1 汪河滨2 罗锋2(1 塔里木大学文理学院,新疆阿拉尔 843300)(2 新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护与利用重点实验室,新疆阿拉尔 843300)摘要 本文利用超声-微波协同萃取法提取甘草多糖,并用分光光度法检测甘草多糖对DPPH自由基、羟自由基(・OH)和超氧阴离子自由基(O2-・)的清除能力。
结果表明,甘草多糖溶液对DPPH自由基、・OH和O2-・均具有较好的清除作用。
关键词 甘草多糖;DPPH自由基,羟自由基(・OH);超氧阴离子自由基(O2-・)中图分类号:R285.5 文献标识码:AStudy on Scaveng i n g Free Rad i ca l Acti v ity w ithPolys acchar i des i n Glycyrrh i za Ura lcn sis F ischYang L ing1 W ang Hebin2 Luo Feng2(1College of A rts and Science,Tari m University,A lar,Xinjiang843300) (2Key Laborat ory of Pr otecti on&U tilizati on of B i ol ogical Res ource in Tari m Basin of Xinjiang Pr oducti on and Constructi on Gr oup s,Tari m University,A lar,Xinjiang843300)Abstract The study uses ultras onic-m icr owave synergistic extracti on technique t o extract polysaccharides of Glycyrrhiza uralcnsis Fisch and tests the scavenging quality of polysaccharides on DPPH free radical,hydr oxyl free radical(・OH)and super oxide free radi2 cal(O2-・)by s pectr ophot ometry.The result shows that polysaccharides has good scavenging effect on DPPH・,・OH and O2-・. Key words polysaccharides in Glycyrrhiza uralcnsis Fisch;DPPH free radical;hydr oxyl free radical;super oxide free radical 甘草(Glycyrrhiza u ralcnsis F isch.)系豆科(Legu2 m inosae)甘草属多年生草本植物,是最常用而很有用的中药材[1]。