细菌的革兰氏染色
《革兰氏染色》课件
该方法基于细菌细胞壁的构造和成分 差异，通过染色剂对细菌细胞壁的吸 附和渗透作用，显示出不同的颜色， 从而进行鉴别。
革兰氏染色中使用的试剂及其作用
结晶紫
用于初步染色，能与细 胞壁结合，形成不溶性
复合物。
碘液
用于加强结晶紫与细胞 壁的结合，使染色更明
显。
酒精
脱色剂，去除染料与细 胞壁结合的复合物，使
染色
结晶紫染色
将结晶紫染液滴加在载玻片上，覆盖 菌体，染色1-2分钟。
冲洗
用吸水纸吸去多余染液，用清水轻轻 冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
水洗和脱色
水洗
用流水冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
脱色
将载玻片放入脱色液中染液滴加在载玻片上，覆盖菌体，复染1-2分钟。
色或粉红色。
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片
将待染色的菌体轻轻涂布在载玻 片上，确保菌体均匀分布。
干燥
将涂有菌体的载玻片放在室温下 自然干燥，避免强烈气流或直接 阳光照射。
固定
火焰固定
通过短时间轻触载玻片边缘，用火焰迅速固定菌体，使其与载玻片粘附。
冷却
将固定后的载玻片放在干净的桌面上自然冷却。
染色时间
染色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
脱色时间
脱色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
染色方法
不同的染色方法可能会影响染 色效果和观察结果。
05
革兰氏染色的应用和意 义
在医学诊断中的应用
01
鉴别细菌种类
革兰氏染色是鉴别细菌种类的重要方法之一，通过染色结果的不同可以
将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，有助于医生对感染进
细菌革兰氏染色
05
革兰氏染色的注意事项与局限性
染色过程中的注意事项
染色时间
染色时间对染色结果的影响较大，过短或过长的 染色时间都可能导致染色效果不佳。
涂片厚度
涂片过厚或过薄都会影响染色效果，需保持适当 的涂片厚度。
脱色程度
脱色时间与脱色剂的浓度需严格控制，否则会影 响染色结果。
染色液的新旧
染色液使用一段时间后，颜色会变淡，影响染色 效果，需定期更换。
细菌革兰氏染色
目
CONTENCT
录
• 革兰氏染色的历史与发展 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的注意事项与局限性
01
革兰氏染色的历史与发展
革兰氏染色技术的起源
1884年，丹麦医生革兰发明了革兰氏染色法，用于 区分细菌的形态和性质。
革兰氏染色法最初用于鉴别肠道细菌，如大肠杆菌 和志贺氏菌。
革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，经过染色后菌体形态饱满，不易被 渗透，呈现出比较清晰的紫色或蓝紫色。
革兰氏阴性菌的染色结果
红色或淡红色
革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，经过革兰氏染色后呈现红色或淡红色，这是由于 其细胞壁较薄，容易渗透染色液，与碘液结合形成复合物，呈现出红色或淡红 色。
菌体形态透亮
由于革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，经过染色后菌体形态透亮，容易观察其形态 特征。
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
取洁净的载玻片，在中央涂一薄层琼 脂，用接种环取少量待检细菌涂布均 匀，然后迅速将涂有细菌的载玻片置 于酒精灯火焰上加热，使琼脂凝固。
冷却后将玻片翻转，用铅笔在背面画 一横线，再将玻片正面朝上放置于显 微镜载物台上。
固定
用夹子夹住载玻片一端，用火焰加热固定液（甲醇或乙醇）直至冒蒸汽，然后将 载玻片放入固定液中，持续加热1-2分钟，使细菌被固定在载玻片上。
简述革兰氏染色方法
简述革兰氏染色方法革兰氏染色方法是一种常用的细菌染色方法，它能够将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
本文将从原理、步骤、应用以及优缺点等方面进行简述。
一、原理革兰氏染色方法是根据细菌细胞壁的化学组成差异而设计的。
细菌细胞壁是由多层薄而紧密的多糖和脂蛋白组成的，其中革兰氏阳性菌的细胞壁含有大量的胞内酶和胞外酶，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，胞内酶和胞外酶含量较少。
二、步骤1. 准备细菌涂片：将待染菌液滴于玻璃片上，用铅笔或曲别针将菌液均匀地涂开，然后用火焰烘烤片面，使其固定。
2. 染色：将涂片放在染色架上，先用蔗糖水浸润片面，然后滴加革兰氏紫液，静置1分钟。
3. 洗涤：用自来水冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
4. 酒精分解：滴加碘酒，静置1分钟，使细菌细胞壁与染色剂形成络合物。
5. 洗涤：用95%乙醇冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
6. 染色：滴加伊红，静置1分钟，使细菌细胞壁和胞质染成红色。
7. 洗涤：用自来水冲洗片面，直到洗涤液无色透明为止。
8. 干燥：将片面用吹风机吹干，然后用显微镜观察。
三、应用革兰氏染色方法广泛应用于细菌学和临床微生物学领域。
通过革兰氏染色，可以快速区分细菌的类型，对于细菌感染的诊断和治疗具有重要意义。
革兰氏阳性菌常见于致病菌中，如葡萄球菌、链球菌等；而革兰氏阴性菌常见于肠道菌群中，如大肠杆菌、沙门氏菌等。
四、优缺点1. 优点：革兰氏染色方法操作简单、快速，可以在短时间内对细菌进行初步分类。
此外，染色结果直观明确，易于观察和分析。
2. 缺点：革兰氏染色方法对于某些细菌可能存在染色困难或染色效果不明显的情况，这可能会导致结果的不准确。
另外，染色后的细菌仅能观察细胞形态和分布情况，无法提供更详细的细胞结构信息。
总结：革兰氏染色方法是一种简单、快速的细菌染色方法，通过染色结果可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
该方法在细菌学和临床微生物学中有着广泛的应用，对于细菌感染的诊断和治疗具有重要意义。
细菌革兰氏染色
• 实验原理
而革兰氏染色阴性 细菌肽聚糖层很薄，含 量少，脂肪含量高，经 乙醇处理后部分细胞壁 脂类可能被溶解并改变 其组织状态，细胞壁孔 径变大或通透性增加， 不能阻止溶剂透入，酒 精将结晶紫与碘的复合 物洗脱，细菌被脱色， 经复染后染成红色，
革兰氏阴性菌细胞壁结构图
• 实验原理
所有本实验的成败关键是酒精脱色， 脱色不够将革兰氏染色阴性转变为革兰 氏染色阳性，脱色过度将革兰氏染色阳 性变成革兰氏染色阴性。其次涂片要均 匀、薄；再者菌龄也可影响染色性，菌 龄老，陈旧的细菌培养物，往往G+转变 成G-，一般做革兰氏染色用18小时左右 的细菌培养物，不要超过24小时，以免 影响染色性。
• 染色程序
涂片
干燥
固定
染色
水洗
干燥
镜检
• 结果判断
金黄色葡萄球菌
大肠杆菌
细菌革兰氏染色法
巴州质检所 阿依尼萨.艾依提
微生物中细菌是很小的生物体，无 色透明，未经染色往往不易被识别，因 此只有借助于染色法可使细菌着色，与 背景形成鲜明对比，才容易在显微镜下 观察。并且还可以通过染色的方法鉴别 革兰氏染色特性.
革兰氏染色
革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定 的重要性状。它是1884年由丹麦医师 Gram创立的。革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态，而且 还可将所有细菌区分为两大类：染色反 应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用 G+表示；染色反应呈红色的称为革兰氏 阴性细菌，用G-表示。革兰氏染色是细 菌学上最常用的鉴别染色法。
• 革兰氏染液
1、碱性染料 （美蓝、碱性复红、结晶紫 ） 2、媒染剂 （碘液 ） 3、脱色剂 （95%的乙醇） 4、复染液 （复红溶液、番红溶液、沙 黄溶液）
细菌革兰氏染色的实验报告
细菌革兰氏染色的实验报告细菌革兰氏染色的实验报告一、引言细菌革兰氏染色是一种常用的实验方法，用于区分细菌的结构和特性。
通过革兰氏染色，可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类，从而在临床诊断和疾病治疗中起到重要的作用。
本次实验旨在探究细菌革兰氏染色的原理和操作方法，并通过观察染色结果，进一步了解细菌的特性。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 细菌培养物：选择两种细菌菌株，一种为革兰氏阳性细菌，另一种为革兰氏阴性细菌。
- 革兰氏染色试剂：包括紫晶染液、碘液、脱色剂和红色染色液。
- 玻璃片和显微镜片：用于制作细菌涂片和观察染色结果。
2. 实验方法：- 步骤一：取两种不同的细菌培养物，分别在玻璃片上制作细菌涂片。
- 步骤二：将制作好的细菌涂片分别加入紫晶染液，静置5分钟。
- 步骤三：用蒸馏水冲洗玻璃片，使其清洁。
- 步骤四：加入碘液，静置1分钟。
- 步骤五：用脱色剂冲洗玻璃片，直到无色流出。
- 步骤六：加入红色染色液，静置1分钟。
- 步骤七：用蒸馏水冲洗玻璃片，使其清洁。
- 步骤八：将玻璃片放在显微镜片上，用显微镜观察细菌染色结果。
三、实验结果与讨论通过观察细菌染色结果，可以清晰地看到两种细菌的差异。
革兰氏阳性细菌在染色后呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性细菌则呈红色。
这是因为细菌细胞壁的结构不同导致的。
革兰氏阳性细菌具有较厚的层状细胞壁，由多层的胞外多糖和蛋白质组成。
在染色过程中，细菌细胞壁的多糖会与紫晶染液结合，形成复合物。
而碘液的加入会使复合物更加稳定，不易被脱色剂去除。
因此，革兰氏阳性细菌在染色后仍保持紫色或蓝色。
相反，革兰氏阴性细菌细胞壁较薄，主要由一个薄层的胞外脂多糖组成。
在染色过程中，细菌细胞壁的脂多糖无法与紫晶染液结合，因此无法形成复合物。
碘液的加入也无法稳定脂多糖，使其被脱色剂去除。
因此，革兰氏阴性细菌在染色后会被红色染色液覆盖，呈现红色。
细菌革兰氏染色的结果可以帮助我们快速区分细菌的类型，从而指导临床的诊断和治疗。
革兰氏染色名词解释
革兰氏染色名词解释革兰氏染色（Gram staining）是一种常用的细菌鉴定和分类方法，由丹麦细菌学家克里斯蒂安·格拉默（Christian Gram）于1884年首次提出，并被广泛应用于临床微生物学和实验室研究中。
革兰氏染色的原理是通过对细菌细胞壁的染色特性进行区分。
细菌的细胞壁在结构上分为两种类型：革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌具有厚实的胞壁，其细胞壁主要由多聚肽和多糖组成，对革兰氏染色染料结构相对稳定。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，含有一个内膜和一个较薄的胞壁，对革兰氏染色染料结构不稳定，容易被清洗脱色。
革兰氏染色方法通常由紫晶染液（crystal violet)、碘液（iodine）、酒精脱色液（ethyl alcohol）和洗净液（wash buffer）组成。
以下是革兰氏染色的步骤：1. 取一块无菌玻璃片，用手套或钳子夹住，然后在玻璃片上滴加一滴样本（可以是细菌培养物或分离纯培养的菌液），将细菌均匀涂抹于玻璃片上形成细菌涂片。
2. 将预先烘干的细菌涂片放置在静止的温和热环境中，使菌液完全固定在玻璃片上。
3. 将预热的紫晶染液倒在细菌涂片上，让染液覆盖整个细菌涂片，静置片上1分钟。
4. 倒掉多余的紫晶染液，用洗净液将染液冲干净。
5. 加一倍稀释的碘液在细菌涂片上，静置片上1分钟。
6. 倒掉多余的碘液，用洗净液将碘液冲洗干净。
7. 用酒精脱色液滴在细菌涂片上，进行制片人定时（通常为15-30秒），直到底色变得非常浅。
8. 倒掉酒精脱色液，用洗净液将细菌涂片冲干净。
9. 加入红粉溶液，让染料覆盖细菌涂片，静置片上1分钟。
10. 倒掉多余的红粉溶液，用洗净液将细菌涂片洗净，待片子晾干。
观察结果时，革兰氏阳性菌会呈现出紫色或蓝色，因为其细胞壁能够保留紫晶染料和碘复合物的结晶。
而革兰氏阴性菌则会呈现出红色或粉红色，因为其细胞壁无法保留紫晶染料和碘复合物的结晶，在酒精脱色过程中已经被去除。
细菌革兰氏染色
（3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 （4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。
五、思考题
讲述革兰氏染色 的原理，并指出
1 E.C和B.S分别属 于革兰氏阳性或 阴性？
当对未知菌进行 革兰氏染色时，
3 怎样能证明你的 染色技术和结果 的正确性？
致密、坚硬、多皱、不 易用针挑起，不透明。 孢子成熟后，表面粉末 状，干燥(常有土腥味)。
三、实验材料
1、制片观察：曲霉、根霉、青霉、犁头霉、 酿酒酵母
2、菌落观察： （1）霉菌：曲霉、根霉、青霉、犁头霉 （2）酵母菌：红酵母、酿酒酵母 （3）细菌：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 （4）放线菌：S11、S14
Heat fixing
crystal violet stain wash with water
Staining
Counterstai n with
Safranin
注意事项：
（1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色 时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不
（平板一套可打开用于显微观察，一套不用 打开用于菌落形态观察）
四．实验方法
五．水浸片观察真菌形态
1. 根霉、曲霉、青霉和犁头霉——在载玻片上滴加一滴蒸馏水，用接 种针以无菌操作方式挑取少许菌丝于蒸馏水中充分展开（借助另一 接种针），盖上盖玻片（从一边向另一边覆盖，避免产生气泡）。
2. 酵母菌——用吸管吸取一滴酵母细胞悬液，盖上盖玻片。 ● 镜检：用低、高倍镜观察细胞形态。
C.Gram（革兰）
于1884年
细菌的革兰氏染色
实验内容
•对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡 萄球菌分别进行革兰氏染色。
•对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合涂片进 行革兰氏染色。
步骤
•经碱性染料结晶紫染色 •经碘液媒染 •用酒精脱色 ✓有的细菌紫色不被脱去——（G+）， ✓有的可被脱去——（G-）
• 脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等 进行复染。
•阳性菌菌体等电点较阴性菌低，在相同 pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料
较多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所 以染色时的条件要严格控制。
方法与步骤
•涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫染色 （1min）→水洗→路哥氏碘液媒染 （1min）→水洗→95%乙醇脱色（30s） →水洗→番红复染（1min）→水洗→干 燥→镜检。
固定
用碘液冲去残水，并用碘液覆盖菌膜1分 钟，对结晶紫染色进行巩固，之后用蒸 馏水对其进行冲洗，至无颜色流出为止。
脱色
将玻片倾斜，用滴管吸95%的酒精进行 冲洗脱色30秒，立即用蒸馏水冲洗。
复染
用沙皇复染液对其进行复染1分钟，用蒸 馏水冲洗。
镜检
用滤纸将水吸干，滴1滴香柏油在菌膜中 央，用油镜观察。
• 阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。
• 有芽孢的杆菌和绝大多数球菌，以及所有 的放线菌和真菌都成革兰氏正反应（G+）
• 弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆 菌都成负反应（G-）
•革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组 成和生理性质上有很多差别，染色反应 不一样。
•革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质 镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫 的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌 复合物结合程度低，吸附染料差，易脱 色，这是染色反应的主要依据。
制片
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
革兰氏阴性菌细胞壁脂类物质含量 高，肽聚糖含量较低，乙醇溶解了 脂类物质，使细胞壁通透性增加， 结晶紫——碘复合物易被抽出，于 是被脱色。
•阳性菌菌体等电点较阴性菌低，在相同 pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料 较多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所 以染色时的条件要严格控制。
方法与步骤
•涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫染色 （1min）→水洗→路哥氏碘液媒染 （1min）→水洗→95%乙醇脱色（30s） →水洗→番红复染（1min）→水洗→干 燥→镜检。
实验内容
•对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡 萄球菌分别进行革兰氏染色。 •对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合涂片进 行革兰氏染色。
步骤
•经碱性பைடு நூலகம்料结晶紫染色
•经碘液媒染
•用酒精脱色 有的细菌紫色不被脱去——（G+），
有的可被脱去——（G-）
• 脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等 进行复染。 • 阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。 • 有芽孢的杆菌和绝大多数球菌，以及所有 的放线菌和真菌都成革兰氏正反应（G+） • 弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆 菌都成负反应（G-）
制 片
取一片载玻片，在中央滴一小滴生理盐 水，用接种环以无菌操作，从单个菌落 中挑取少量的菌于生理盐水滴中，混匀 并涂成薄膜
干 燥
涂面朝上，瞬间通过火焰2-3次，使生理 盐水完全干。
初 染
在菌膜上滴加结晶紫染色1分钟，用蒸馏 水进行冲洗（不要正对着菌膜冲，以免 将细菌冲掉），至无紫色液体流出。
培训师评价单
项目 很好5 好4 一般3 差2 很差1
A-培训资料充分具体性
B-培训内容完整详细性 C-设计课程通俗易懂性
D-语言描述生动形象性
革兰氏染色法
2009年8月 一厂品控
目的要求
•学习并掌握革兰氏染色的方法
实验材料
•菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金 黄色葡萄球菌。 •染料：草酸铵结晶紫液、革兰氏碘 液、95%乙醇、番红液（沙皇复染液） •其他：显微镜、载玻片、接种环、酒 精灯、无菌生理盐水、香柏油、二甲 苯等。
基本原理
•革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一 种鉴别染色法。 •1884年由丹麦医师Gram创立。
关键点
•严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度， 则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够 时，阴性菌被误染为阳性菌。
•菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时 间很长，或已死亡及部分自行溶解了， 都常呈阴性反应
大肠杆菌（G-）
枯草芽孢杆菌（G+）
金黄色葡萄球菌与大肠杆菌
实验思考题
•大肠杆菌和枯草芽孢杆菌染色后，是G-还是 G+？ •为什么革兰氏染色所用细菌的菌龄有所要求？ •你的实验结果与与培训中所述是否一致？如 果不一致，试分析原因。
•革兰式阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组 成和生理性质上有很多差别，染色反应 不一样。 •革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质 镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫 的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌 复合物结合程度低，吸附染料差，易脱 色，这是染色反应的主要依据。
•与细菌细胞壁的化学组成及结构有关
•革兰氏阳性细菌由于细胞壁肽聚糖含量 高，脂类含量低，乙醇处理使细胞壁脱水， 肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫 碘复合物被保留在细胞内，细胞不被脱色。
固 定
用碘液冲去残水，并用碘液覆盖菌膜1分 钟，对结晶紫染色进行巩固，之后用蒸 馏水对其进行冲洗，至无颜色流出为止。
脱 色
将玻片倾斜，用滴管吸95%的酒精进行 冲洗脱色30秒，立即用蒸馏水冲洗。
复 染
用沙皇复染液对其进行复染1分钟，用蒸 馏水冲洗。
镜 检
用滤纸将水吸干，滴1滴香柏油在菌膜中 央，用油镜观察。