实验五用大肠杆菌生长曲线的测定
大肠杆菌生长曲线实验报告
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简单。
测量时要等数字变化不大时再读取，可以读三次，最后取平均值，这样能保证实验结果更加准确。
721型分光光度计要先预热，实验过程中最好使用同一台仪器，同一个比色皿，这样可以减少仪器误差，分光光度计的使用操作要规范。比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。比色皿用擦镜纸擦干净，上面不要残留有纸纤维和水珠等。
延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。
改进措施:在试验过程中应严格按照标准的操作要求，在上述步骤时更加应该规范操作。
指导教师评语及评分：
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2.营养肉汤培养基灭菌:将步骤一包好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌30min.
大肠杆菌生长曲线的测定
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本实验采用分光光度计进行光电比浊测 定不同培养时间细菌悬浮液的光密度值， 绘制生长曲线。
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光吸收的基本定律：朗伯－比耳定律 A=kbc (k为摩尔吸光系数，b为液层厚度，c为溶液浓度)
朗伯－比耳定律的意义是：当一束平行单色光通过均匀、非散 射的溶液时，其吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。
大肠杆菌Байду номын сангаас长曲线的测定
授课教师: 孙运军 研 究 生: 何浩 张晨
黄同龙 左明星
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目的要求
1、通过光密度值的测量了解大肠杆菌的生 长规律，绘制生长曲线。
2、了解光电比浊法测量细菌数量的原理。
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基本原理
将一定量的细菌接种到恒容积的液体培养基 中，在适宜的培养条件下，该群体就会有规律的 增长。以培养时间为横坐标，以细胞数目的对数 或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细 菌的生长曲线。该曲线包括四个阶段：延滞期、 指数期、稳定期、衰亡期。
不同培养时间的菌液
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OD600 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20
2.5 2
1.5 1
0.5 0 培养时间
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OD600 OD600校正
注意事项：
1. 选用规格一致的试管； 2. 每支试管的装液量应相同(5 ml/支)； 3. 混匀的菌悬液加入到比色皿后应迅速读取OD值； 4. 保护比色皿透光面不受磨损，不要用手指直接接触； 5. 分光光度计在未测样品时应及时打开盖。
床、无菌试管、无菌吸管。
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大肠杆菌生长曲线
实训材料：
1．菌种 大肠埃希菌（E.coli）1~18h液体培 养物。 2．培养基 营养肉汤培养基，生理盐水 3．其它：721型光电比色计、1ml无菌移液 管、摇床等。
原 理
• 细菌的生长一般指群体的生长，常常具有一定的规 律性。描述细菌在液体培养基中的生长规律的曲线 叫做生长曲线，即将一定量的细菌接种到一定容积 的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，以培 养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标进行作图 得到的曲线。 • 典型的生长曲线可分为延迟期、对数生长期、稳定 期和衰亡期四个时期。
（6）吸光度的测定 将选择开关置于“A”，盖上试 样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节 旋钮，使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的 比色皿放入比色皿座架中的其它格内，盖上试样室 盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液进入光路， 此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数 后，打开试样室盖，切断光路。 • （7）关机 实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗 净，并将比色皿座架用软纸擦净。
使用方法
（1）预热仪器 将选择开关置于“T”，按下“电源”开关。 （2）选定波长 根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的 单色波长。 （3）固定灵敏度挡 （4）调节T=0% 轻轻旋动零旋钮，使数字显示为“00.0”， （此时试样室是打开的）。 （5）调节T=100% 将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的 比色皿放入比色皿座架中的第一格内
大肠杆菌生长曲线Байду номын сангаас定
实训目的
1．了解光电比浊计数法的原理。 2．了解细菌生长曲线的特点，绘制生长曲线。 3. 掌握光电比浊计数法测定大肠杆菌生长曲 线的方法。
752型分光光度计构造原理
• 752型分光光度计在构造原理上是由光源室、单 色器、试样室、光电管暗盒、电子系统及数字显 示器等部件组成。光源除了钨卤素灯外，还有氢 弧灯（或氘灯）。波长范围为200nm~850nm。 • 752型分光光度计能在紫外和可见光谱区域内对 样品物质作定性和定量分析 .
用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线(共3页)
用比浊法测定大肠杆菌的生长(shēngzhǎng)曲线(一)实验(shíyàn)目的了解细菌生长曲线的持点及测定(cèdìng)原理，学会用比浊法测定细菌的生长曲线。
(二)实验(shíyàn)原理将一定数量的细菌，接种于适宜的液体培养基中，在适温下培养，定时取样测数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，作出的曲线称为生长曲线。
该曲线表明细菌在一定的环境条件(tiáojiàn)下群体生长与繁殖的规律。
一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期，各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。
比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比关系，利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值)，用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量。
实验设正常生长、加酸抑制和加富培养等三种处理，以了解细菌在不同生长条件下的生长情况。
（三）实验器材(1)活材料：大肠杆菌(E.coli)。
(2)培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支(每支10mL)，浓缩5 倍的牛肉膏蛋白胨培养基1支。
无菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。
(3)器材：1mL无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、标签等。
（四）实验方法方法(1)1)接种(jiēzhòng)：取13支装有牛肉(niú ròu)膏蛋白胨培养液的试管，贴上标签(注明(zhù mínɡ)菌名、培养处理、培养时间、组号)。
按无菌操作法用吸管向每管准确(zhǔnquè)加入0.2mL的大肠杆菌培养液，接种(jiēzhòng)后，轻轻摇荡，使菌体混匀。
另一支不接种的培养管注明CK(对照)。
2)培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下振荡培养。
其中9支培养管分别于培养的0、1．5、3、4、6、8、10、12和14h后取山，放冰箱中贮存，待测定。
大肠杆菌生长曲线实验报告
大肠杆菌生长曲线实验报告抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长受到抑制。
但某些细菌对抗生素表现出抗性，原因是其基因发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。
在自然情况下，细菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。
当给与适当的物理条件时，其突变率会大大增加。
如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时，能够促进遗传物质突变。
DNA对紫外线（UV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。
紫外线引起DNA 结构变化的形式有DNA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。
因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微生物菌种选育。
一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变率高，诱变最有效的波长253~265 nm。
选择合适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。
在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。
本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。
若菌株没有发生定向突变，则该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。
紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。
因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下，比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析两者的相关性。
在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。
2.材料和方法2.1实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器试剂：牛肉膏蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水2.2实验方法2.2.1制备培养基普通培养基——牛肉膏蛋白胨培养基（400ml）：牛肉膏5g蛋白胨10g Nacl 5g琼脂20g蒸馏水1000ml Ph7.0 按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。
大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告思考题
大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告思
考题
在大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告中，以下是一些可能的思考题：
1. 实验结果显示大肠杆菌细胞在培养基中的生长呈现出典型的生长曲线，包括潜伏期、指数期、平台期和死亡期。
这种生长曲线的形成是由什么因素引起的？
2. 在实验中，为了测定大肠杆菌细胞的生长曲线，我们选择了什么样的培养基和培养条件？这些选择是否对实验结果产生了影响？
3. 在实验过程中，我们通过测量光密度或细胞数量来确定大肠杆菌细胞的生长情况。
这种测量方法可能存在的缺陷是什么？有没有更准确的测量方法可以应用于该实验？
4. 实验中，我们还讨论了大肠杆菌细胞生长的影响因素，如温度、pH值和营养成分等。
在未来的研究中，我们可以采取哪些控制变量的方法来深入探究这些影响因素对大肠杆菌细胞生长的具体影响？
5. 大肠杆菌细胞生长曲线的测定在哪些领域有广泛的应用？如何利用实验结果来研究和解决实际问题，比如食品安全、环境污染等？
这些思考题可以帮助你对实验结果进行进一步的思考和讨论，深化对大肠杆菌细胞生长曲线的理解并应用于更广泛的领域。
大肠杆菌生长曲线实验报告-xiang
E.coli growth curve measurement一、目的1、瞭解細菌生長曲線特徵，測定細菌繁殖的代時；2、學習液體培養基的配製以及接種方法；3、反復練習無菌操作技術；4、瞭解不同細菌，不同接種方法在同一培養基上生長速度的不同；5、掌握利用細菌懸液混濁度間接測定細菌生長的方法6、複習光電比濁法測量細菌數量的方法7、學習平板塗布技術二、原理1、大腸桿菌生長：將一定量的細菌接種在液體培養基內，在一定條件下培養，可觀察到細菌的生長繁殖有一定的規律性，如以細菌的活菌數的對數作縱坐標，以培養時間作橫坐標，可繪成一條曲線，成為生長曲線（如圖一）。
圖一微生物生長曲線示意圖單細胞微生物的發酵具有四個階段，即Ⅰ調整期（延滯期）、Ⅱ對數期（生長旺盛期）、Ⅲ平衡期（穩定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生長曲線可表示細菌從開始生長到死亡的全過程的動態。
不同的微生物有不同的生長曲線，同一種微生物在不同的培養條件下，其生長曲線也不一樣。
因此，測定微生物的生長曲線對於瞭解和掌握微生物的生長規律是很有幫助的。
測定微生物生長曲線的方法很多，有血球計數板法、平板菌落計數法、稱重法和比濁法等。
本實驗採用比濁法測定，由於細菌懸液的濃度與混濁度成正比，因此，可利用分光光度計測定細菌懸液的光密度來推知菌液的濃度。
將所測得的光密度值（OD600）與其對應的培養時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線。
注意，由於光密度表示的是培養液中的總菌數，包括活菌與死菌，因此所測定的生長曲線的衰亡期不明顯。
2、平板塗布技術：塗布法接種是一種常用的接種方法，不僅可以用於計算活菌數，還可以利用其在平板表面生長形成菌苔的特點用於檢測化學因素對微生物的抑殺效應。
原理:將一定濃度，一定量的待分離菌懸液加到已凝固的培養基平板上，再用塗布棒快速地將其均勻塗布，使長出單菌落或菌苔而達到分離或計數的目的。
其目的:用於目的微生物的分離；用於藥物的抑菌試驗；觀察菌苔的形狀和特點。
2012-阎-实验五或九-碳源氮源的利用实验-大肠杆菌生长曲线的测定讲解
在600 nm波长下，用未接种的LB液体培 养基作空白对照，分别对培养了0、2、6、10、 14、18和22 h的大肠杆菌培养液，进行光电比 浊测定。对于高浓度的大肠杆菌培养液,要用 未接种的LB培养基进行稀释，使其吸光值不 超过1。
比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品润 洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面只 能用吸水纸吸干，以免光面被划破。
2.加待测碳源、氮源底物
待菌液被培养基吸收后，用镊子夹灭菌滤纸 分别沾取碳源、氮源测试溶液，再将滤纸 贴于涂菌平板上，每皿共贴3片滤纸。皿 底做好标记。
3、培养与观察
每小组的碳源、氮源平板用报纸包成1筒，标记组 号，放37 ℃培养。
根据滤纸片周围的菌体生长状况，判断不同菌株对 几种氮源、碳源的利用能力。
一个典型的生长曲线分为延缓期、对数期、 稳定期和衰亡期四个时期
微生物数量的测定方法
稀释平板计数法 显微镜直接计数法 最大概率法 光电比浊法
稀释平板计数法
对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。 优点：活菌计数方法，对设备要求不高。 缺点：操作复杂。
显微镜直接计数法
使用血球计数板在显微镜下直接计数。 优点：操作简便，计数直观。 缺点：计数结果为活细菌和死菌体的总和。
光电比浊法
光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细 胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在 溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中 测定时所吸收的光线越多。
优点：简便快速，适合于自动控制。 缺点：测定结果受培养液成分影响；某些样品 样品பைடு நூலகம்适合用此法。
三、实验器材
菌种 培养不同时段的大肠杆菌。
1.5％
待测氮源底物
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➢最大概率法
例如：某细菌在稀释培养法中生长情况如下：
稀释度：
10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8
重复数：
5
5
5555
有菌生长管数： 5
5
5410
根据上述结果，数量指标为“541”，查表得近似值为17，乘 以第一位数的稀释倍数，得出原始培养物的活菌数=17×105个
➢ 掌握水和环境中微生物的测定方法。
➢ 检测污染水域微生物的类型和数量。
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二、实验原理
➢ 应用平板菌落计数技术测定污染水的细菌 总数。由于细菌种类繁多，不可能找到一 种培养基在一种条件下，使所有的细菌均 能生长繁殖。因此，计算出来的细菌总数 仅是一种近似值。
➢ 利用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基可以大 致测定不同环境中存在的微生物。
优点：活菌计数，适用于特殊细菌。
缺点：计数结果为概值。
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➢光电比浊法
光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细 胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在 溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中 测定时所吸收的光线越多。
优点：简便快速，适合于自动控制。
缺点：测定结果受培养液成分影响；某些样品
样品不适合用此法。
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三、实验器材
➢ 菌种 培养不同时段的大肠杆菌。
➢ 仪器或其他用具 分光光度计，比色皿等。
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四、实验步骤
1.样品测试前的调试
➢ 开电源，仪器预热20 min，将波长调至 600 nm处。
➢ 打开样品室，将挡光体插入比色皿架，将 其推或拉入光路。
➢ 盖好样品室盖，在T MODE下，按0%T键 调零透射比。
大肠杆菌生长曲线的测定 水、环境中微生物的测定
林亲雄 阎春兰 李晓华
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实验31 大肠杆菌生长曲线的测定
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ一、实验目的
➢ 了解光电比浊计数法的原理。 ➢ 学习、掌握光电比浊计数的操作方法。 ➢ 通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物
特征和规律，绘制生长曲线。
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二、实验原理
➢生长曲线
形态
胨平板中，涂布均匀。
(LTA)
3.实验室空气中微生物的测定
将牛肉膏蛋白胨平板盖揭开，分别置实验台10， 20，30，40，50，60 min后，盖上皿盖，倒置培 养。
4.自来水、橙汁中微生物的测定
取1 ml涂布牛肉膏蛋白胨平板。自来水用无菌三
角瓶收集。
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四、实验结果 观测实验结果时间？
无菌操作采用10-1， 10-2 ， 10-3稀释液涂布牛肉膏 蛋白胨平板;每个稀释度2个重复。
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每个培养皿 加0.1ml 稀 释液
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2.口腔、人民币和门把手微生物的测定
用棉签分别从牙周、人民币纸币和门把手表面
挑取微生物，然后放入装有0.5 ml无菌水的EP管
中，颠倒均匀后，用移液器全部吸入牛肉膏蛋白
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➢稀释平板计数法
对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。
优点：活菌计数方法，对设备要求不高。
缺点：操作复杂。
➢显微镜直接计数法
使用血球计数板在显微镜下直接计数。
优点：操作简便，计数直观。
缺点：计数结果为活细菌和死菌体的总和。
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➢最大概率法
待测菌液经十倍系列稀释，每稀释度做3-5个 重复，经培养后，检查细菌的生长，以有细菌 生长的最后三个稀释度的管数作数量指标，由 数理统计表查出近似值，再乘以数量指标第一 位的稀释倍数，即为原菌液中的菌数。
➢ 取出挡光体，按100%T/OA键调100%透
射比。
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2.样品测定
➢ 将参比溶液（未接种的LB液体培养基）以及 被测溶液倒入比色皿中。
➢ 打开样品室盖，将参比溶液放在样品架的第 一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽位。
➢ 将参比溶液推入光路，按100%T/OA键调 满度。
➢ 按 MODE ， 将 测 试 方 式 调 至 吸 光 度 方 式 （A）。此时,显示器显示“0.000”。
比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样 品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光 面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。
比色皿之间吸光度进行比较。
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四、实验结果
记录不同大肠杆菌培养液的OD600值， 并绘制大肠杆菌的生长曲线。
培养时间 （h）
光密度值 OD600
4 8 12 16 20 24
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将少量纯种单细胞微生物接种到定量的 液体培养基中，定时取样测定细胞数量， 以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作 图，得到一条反映单细胞微生物在整个培 养期间菌数变化规律的曲线。
一个典型的生长曲线分为延缓期、对数期、 稳定期和衰亡期四个时期
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微生物数量的测定方法
➢稀释平板计数法 ➢显微镜直接计数法 ➢最大概率法 ➢光电比浊法
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三、实验器材
➢ 样品的采取
自来水 取自自来水管道。 橙汁 购于超市。 口腔、人民币、门把手和实验环境中的微生物。 南湖水 距水面10-15 cm的深层水样。
➢ 培养基
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 。
➢ 仪器或其他用具
灭菌培养皿，无菌枪头，涂棒等。
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四、实验步骤
1.南湖水中微生物的测定 N-乙酰葡糖胺
➢ 将被测溶液推入光路，显示器显示为被测样 品的吸光值。
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在600 nm波长下，用未接种的LB液体培 养基作空白对照，分别对培养了0、4、8、 12、16和20 h的大肠杆菌培养液，进行光电 比浊测定。对于高浓度的大肠杆菌培养液,要 用未接种的LB培养基进行稀释，使其吸光值 在0.1-0.65范围内。
➢ 计算每ml南湖水中含有微生物的数量。 ➢ 你所测定的环境中微生物的数量和种类；
并试着分别记录每种细菌的大小、形态、 干湿、透明度、颜色以及边缘等特征。
名 称 数量
南湖水
自来水 口 腔 人民币 门把手 空 气 （个 （个 （个 （个 （分钟） /mL） /cm2） /cm2） /cm2） （个）
10-1 10-2 10-3 总数
13
五、思考题
➢光电比浊计数的原理是什么？这种计数法有何 优缺点？ ➢如果用活菌计数法制作生长曲线，你认为会有 什么不同？两者各有什么优缺点？
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实验67 水、环境中微生物的测定
一、实验目的
➢ 比较不同场所和不同条件下细菌的数量和 类型。
➢ 观察不同类群微生物的菌落形态特征。
➢ 体会无菌操作的重要性。