大肠杆菌生长曲线的测定
大肠杆菌生长曲线实验报告
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简单。
测量时要等数字变化不大时再读取，可以读三次，最后取平均值，这样能保证实验结果更加准确。
721型分光光度计要先预热，实验过程中最好使用同一台仪器，同一个比色皿，这样可以减少仪器误差，分光光度计的使用操作要规范。比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。比色皿用擦镜纸擦干净，上面不要残留有纸纤维和水珠等。
延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。
改进措施:在试验过程中应严格按照标准的操作要求，在上述步骤时更加应该规范操作。
指导教师评语及评分：
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2.营养肉汤培养基灭菌:将步骤一包好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌30min.
微生物生长曲线测定
实验七 测定细菌生长曲线一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；3. 反复练习无菌操作技术；4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。
其计算公式为：2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组：第（1）小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm第（2）小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm第（3）小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
大肠杆菌生长曲线的测定
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本实验采用分光光度计进行光电比浊测 定不同培养时间细菌悬浮液的光密度值， 绘制生长曲线。
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光吸收的基本定律：朗伯－比耳定律 A=kbc (k为摩尔吸光系数，b为液层厚度，c为溶液浓度)
朗伯－比耳定律的意义是：当一束平行单色光通过均匀、非散 射的溶液时，其吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。
大肠杆菌Байду номын сангаас长曲线的测定
授课教师: 孙运军 研 究 生: 何浩 张晨
黄同龙 左明星
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目的要求
1、通过光密度值的测量了解大肠杆菌的生 长规律，绘制生长曲线。
2、了解光电比浊法测量细菌数量的原理。
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基本原理
将一定量的细菌接种到恒容积的液体培养基 中，在适宜的培养条件下，该群体就会有规律的 增长。以培养时间为横坐标，以细胞数目的对数 或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细 菌的生长曲线。该曲线包括四个阶段：延滞期、 指数期、稳定期、衰亡期。
不同培养时间的菌液
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OD600 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20
2.5 2
1.5 1
0.5 0 培养时间
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OD600 OD600校正
注意事项：
1. 选用规格一致的试管； 2. 每支试管的装液量应相同(5 ml/支)； 3. 混匀的菌悬液加入到比色皿后应迅速读取OD值； 4. 保护比色皿透光面不受磨损，不要用手指直接接触； 5. 分光光度计在未测样品时应及时打开盖。
床、无菌试管、无菌吸管。
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大肠杆菌生长曲线实验报告
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简单。
[2].杨革.微生物学实验教程.第2版.北京:科学出版社, 2010.
[3].何国庆，贾英民，丁立孝等. 食品微生物学. 第2版. 北京: 中国农业大学出版社，2009.
[4].周德庆，胡宝龙.微生物学实验教程.第2版.北京: 高等教育出版社, 2006.
七．教师对实验方案设计的意见
签名：
年 月 日
整个过程最好是在无菌操作台上操作，这样培养基受空气中微生物的影响就较小，同时也可以减少污染，保证培养基里大肠杆菌纯度较高，否则会在一定程度上影响结果的准确性。
每隔半小时或一个小时(测量时间要安排合理，时间要控制好:在实验初期30min对菌悬液进行一次测定。实验中期每小时测一次，后期1～2小时测定一次，依次持续到20小时后。)从恒温摇床取出锥形瓶，用无菌移液管移取少量，操作要快，先进行预测，OD值应在0.10-0.65 之间，如果超过这个范围则需要进行稀释后再测量。
但有两点不足:一是一开始忽略了OD值必须在0.10-0.65 之间才有效;二是时间的间隔不太合理,开始的阶段应该时间安排紧密一点，还有晚上的一段数据没有测，实验时间不够长，延迟期和衰亡期曲线不明显。实验中若能考虑全面，这样测出来的数据才更有代表性，更加准确。
2．本实验的关键环节及改进措施
大肠杆菌生长条件的探讨及其生长曲线的测定
大肠杆菌生长条件的探讨及其生长曲线的测定（综合性实验）The studies of the Growth Conditions of Eescherichia Coli and the Measure of it’sGrowth Curve曹少梅 0813030009 08食品摘要：本文通过时大肠样菌生长曲线测定方法的研究,采用加大接种量,大瓶接种,然后分试管培养的方法 ,时原实验方案进行改进 ,减少误差,缩短了实验时间, 采用分光光度计比浊法测定酵母的生长曲线,确定菌体生长规律。
关键词大肠杆菌；生长曲线（一)目的1.通过对大肠杆菌生长条件的探讨及其生长曲线的测定，综合训练微生物实验的基本实验技能。
2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。
3.学习用比浊法测定细菌的生长曲线。
4.比较不同培养基的生长曲线（二)原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。
因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。
本实验用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简单。
(三)材料1. 菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）2. 营养琼脂培养基：根据产品说明配制3. 生理盐水（0.9%NaCl）100mL，分装入10支试管（每支9mL）34正交表，正4．培养基：本实验采取正交实验确定大肠杆菌最优的生长条件，采取L9交设计如下：表头（L34）：9实验设计：培养基经121℃灭菌20min。
大肠杆菌生长曲线
实训材料：
1．菌种 大肠埃希菌（E.coli）1~18h液体培 养物。 2．培养基 营养肉汤培养基，生理盐水 3．其它：721型光电比色计、1ml无菌移液 管、摇床等。
原 理
• 细菌的生长一般指群体的生长，常常具有一定的规 律性。描述细菌在液体培养基中的生长规律的曲线 叫做生长曲线，即将一定量的细菌接种到一定容积 的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，以培 养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标进行作图 得到的曲线。 • 典型的生长曲线可分为延迟期、对数生长期、稳定 期和衰亡期四个时期。
（6）吸光度的测定 将选择开关置于“A”，盖上试 样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节 旋钮，使数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的 比色皿放入比色皿座架中的其它格内，盖上试样室 盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液进入光路， 此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数 后，打开试样室盖，切断光路。 • （7）关机 实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗 净，并将比色皿座架用软纸擦净。
使用方法
（1）预热仪器 将选择开关置于“T”，按下“电源”开关。 （2）选定波长 根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的 单色波长。 （3）固定灵敏度挡 （4）调节T=0% 轻轻旋动零旋钮，使数字显示为“00.0”， （此时试样室是打开的）。 （5）调节T=100% 将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的 比色皿放入比色皿座架中的第一格内
大肠杆菌生长曲线Байду номын сангаас定
实训目的
1．了解光电比浊计数法的原理。 2．了解细菌生长曲线的特点，绘制生长曲线。 3. 掌握光电比浊计数法测定大肠杆菌生长曲 线的方法。
752型分光光度计构造原理
• 752型分光光度计在构造原理上是由光源室、单 色器、试样室、光电管暗盒、电子系统及数字显 示器等部件组成。光源除了钨卤素灯外，还有氢 弧灯（或氘灯）。波长范围为200nm~850nm。 • 752型分光光度计能在紫外和可见光谱区域内对 样品物质作定性和定量分析 .
大肠杆菌生长曲线实验报告
大肠杆菌生长曲线实验报告抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长受到抑制。
但某些细菌对抗生素表现出抗性，原因是其基因发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。
在自然情况下，细菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。
当给与适当的物理条件时，其突变率会大大增加。
如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时，能够促进遗传物质突变。
DNA对紫外线（UV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。
紫外线引起DNA 结构变化的形式有DNA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。
因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微生物菌种选育。
一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变率高，诱变最有效的波长253~265 nm。
选择合适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。
在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。
本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。
若菌株没有发生定向突变，则该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。
紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。
因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下，比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析两者的相关性。
在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。
2.材料和方法2.1实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器试剂：牛肉膏蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水2.2实验方法2.2.1制备培养基普通培养基——牛肉膏蛋白胨培养基（400ml）：牛肉膏5g蛋白胨10g Nacl 5g琼脂20g蒸馏水1000ml Ph7.0 按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。
大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告思考题
大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告思
考题
在大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告中，以下是一些可能的思考题：
1. 实验结果显示大肠杆菌细胞在培养基中的生长呈现出典型的生长曲线，包括潜伏期、指数期、平台期和死亡期。
这种生长曲线的形成是由什么因素引起的？
2. 在实验中，为了测定大肠杆菌细胞的生长曲线，我们选择了什么样的培养基和培养条件？这些选择是否对实验结果产生了影响？
3. 在实验过程中，我们通过测量光密度或细胞数量来确定大肠杆菌细胞的生长情况。
这种测量方法可能存在的缺陷是什么？有没有更准确的测量方法可以应用于该实验？
4. 实验中，我们还讨论了大肠杆菌细胞生长的影响因素，如温度、pH值和营养成分等。
在未来的研究中，我们可以采取哪些控制变量的方法来深入探究这些影响因素对大肠杆菌细胞生长的具体影响？
5. 大肠杆菌细胞生长曲线的测定在哪些领域有广泛的应用？如何利用实验结果来研究和解决实际问题，比如食品安全、环境污染等？
这些思考题可以帮助你对实验结果进行进一步的思考和讨论，深化对大肠杆菌细胞生长曲线的理解并应用于更广泛的领域。
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本实验采用分光光度计进行光电比 浊测定不同培养时间细菌悬浮液的光密度 值，绘制生长曲线。
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光吸收的基本定律：朗伯－比耳定律
A=kbc
(k为摩尔吸光系数，b为液层厚度，c为溶液浓度)
朗伯－比耳定律的意义是：当一束平行单色光通过均匀、非散 射的溶液时，其吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。
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实验结果
1、将测定的OD600值填入下表： 培养时间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20 OD600
2、绘制大肠杆菌的生长曲线：
OD600值
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培养时间
LB液体培养基配方：100ml
酵母提取物(Yeast extract):
0.5g蛋白胨(Tryptone)：1g
氯化钠(Nacl)：
1g
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床、无菌试管、无菌吸管。
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操作步骤
1、养配制LB液体培养基100 ml，分装1支试管(5 ml/支)，剩余培 基装入250 ml的三角瓶，121℃灭菌20min。
2、取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、 3、4、6、8、10、12、14、16和20 h。
3、用5 ml无菌吸管取2.5 ml大肠杆菌培养液(培养12h)转入装有 LB液体培养基的三角瓶内，混匀后分别取5ml混合液放
不同培养时间的菌 液 精品课件
OD600 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20
2.5 2
1.5 1
0.5 0 培养时间
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OD600 OD600校正
注意事项：
1. 选用规格一致的试管； 2. 每支试管的装液量应相同(5 ml/支)； 3. 混匀的菌悬液加入到比色皿后应迅速读取OD值； 4. 保护比色皿透光面不受磨损，不要用手指直接接触； 5. 分光光度计在未测样品时应及时打开盖。
入上述标记的11支无菌大试管中。 4、将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(200 rpm)，在相应时间
取出试管放于冰箱中，最后一同测定OD600值。 5、进行光密度测定时，以未接种的LB液体培养基为空白对照，
从早取出的培养液开始依次测定，细胞密度大的培养液用 LB
液体培养基稀释精品后课测件 定，使OD600值在0.1~ 0.65之内。
大肠杆菌生长曲线的测定
授课教师: 孙运军 研 究 生: 何浩 张晨
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目的要求
1、通过光密度值的测量了解大肠杆菌的生 长规律，菌数量的原理。
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基本原理
将一定量的细菌接种到恒容积的液体培 养基中，在适宜的培养条件下，该群体就会有规 律的增长。以培养时间为横坐标，以细胞数目的 对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为 该细菌的生长曲线。该曲线包括四个阶段：延滞 期、指数期、稳定期、衰亡期。
精F品e课SO件4溶吸液收在曲65线0nm的光
大肠杆菌悬浮液的光吸收规律：
实验表明，OD600在0.1~ 0.65之内的大肠杆菌悬浮液基本符合朗 伯－比耳定律，即吸光度与菌液浓度成正比。
大肠杆菌梯度稀释液的 精品课件 光吸收曲线
器材
1、菌 种：大肠杆菌。 2、培养基：LB液体培养基。 3、仪器与耗材：722型分光光度计、恒温摇