酶促反应动力学
酶促反应动力学
谢 谢 大 家
2.1.3 酶和细胞的固定化技术
一、固定化技术的基本概念 二、固定化酶的特性 三、固定化细胞的特性 四、酶和细胞的固定化技术
2.1.4 酶促反应的特征
一、优点： • 常温、常压、中性范围（个别除外）下进行反应； • 与一些化学反应相比，省能且效率较高； • 专一性好； • 反应体系较简单，反应过程的最适条件易于控制等。 二、不足， • 多限于一步或几步较简单的生化反应过程； • 一般周期较长。
2.2
均相系酶促反应动力学
2.2.1 酶促反应动力学基础 一、零级反应
dS rm a x dt
二、一级反应——即酶催化A→B的过程
db k1 (a0 b) dt
三、二级反应，即A + B → C
dc k 2 (a0 c)(b0 c) dt
k`1 k2 • 对于连锁反应，如， A B C
1、底物浓度S 远大于酶的浓度efree ，因此x的
形成不会降低底物浓度S ，底物浓度以初始浓 度计算。 2、不考虑P + E → ES这个可逆反应的存在。要 忽略这一反应，必须是产物P为零，换言之， 该方程适用于反应的初始状态。 3、ES → E + P是整个反应的限速阶段，也就是 说E + S = ES的可逆反应在初速度测定时间内 已达到平衡。ES分解生成产物的速度不足以破 坏这个平衡。
k 2 e S r p,max S r p (rs ) Km S Km S
在实际的酶促反应中，人们关心的是反应时间与 底物转化率的关系．所以，基于t=0，S=S0初值积 分得
rmax
S0 t (S 0 S t ) K m ln St
Km S0 1 t ln( ) s rmax 1 s rmax
酶促反应动力学名词解释
酶促反应动力学名词解释
酶促反应动力学是研究酶催化反应速率、酶与底物之间的相互作用以及反应机制的科学领域。
酶是一种生物催化剂，能够加速化学反应的速率，而酶促反应动力学则是用来描述和解释酶催化反应速率的规律。
酶促反应动力学的主要研究内容包括反应速率、反应机理和酶动力学参数等。
反应速率是指单位时间内反应物转化为产物的量，可以通过测量底物浓度的变化来确定。
酶催化反应速率通常比非酶催化的速率高几个数量级，这是因为酶能够提供更适合反应进行的环境，如形成特定的活性位点、降低反应的活化能等。
反应机理是指酶催化反应中涉及的化学步骤和中间产物的生成过程。
酶催化的反应通常包括底物与酶结合形成底物-酶复合物、底物在酶的活性位点上发生化学反应、产物与酶解离的过程。
通过研究反应机理，可以更好地理解酶催化反应的特点和机制。
酶动力学参数是描述酶催化反应速率和酶与底物之间相互作用的定量指标。
常见的酶动力学参数包括最大反应速率（Vmax）、米氏常数（Km）和催化效率（kcat/Km）等。
Vmax表示在酶的浓度饱和状态下的最大反应速率，Km表示酶与底物结合的亲和力，kcat/Km则是酶催化反应的效率常数。
总的来说，酶促反应动力学的研究对于理解酶催化的反应机制、设计高效的酶催化反应以及开发新型药物和工业催化剂等方面具有重要的意义。
通过深入研究酶
促反应动力学，可以为生物工程、医药化学和工业生产等领域的应用提供理论和实践基础。
酶促反应动力学米氏方程
酶促反应动力学米氏方程摘要：1.酶促反应动力学的基本概念2.米氏方程的推导过程3.米氏方程的应用4.酶促反应动力学的影响因素5.总结正文：一、酶促反应动力学的基本概念酶促反应动力学是研究酶促反应速度及其影响因素的科学。
在酶促反应中，酶作为催化剂，可以降低反应所需的活化能，从而加速反应速率。
酶促反应动力学主要研究酶浓度、底物浓度、温度、pH、抑制剂和激活剂等因素对反应速率的影响。
二、米氏方程的推导过程米氏方程是描述酶促反应速度与底物浓度之间关系的经典方程。
其推导过程如下：1.假设酶分子的数量为[E]，底物浓度为[S]，酶促反应速度为v。
2.酶在催化过程中会与底物结合形成酶- 底物复合物（ES），此过程为慢反应。
3.酶- 底物复合物在达到一定程度后会分解为酶和产物，此过程为快反应。
4.根据慢反应和快反应的速率常数，可以得到酶促反应速度的表达式。
5.将表达式中的慢反应和快反应速率常数用米氏常数（Km）表示，即可得到米氏方程：v = (Km * [S]) / (Km + [S])三、米氏方程的应用米氏方程可以用于分析酶促反应的动态过程，预测反应速度与底物浓度的关系，以及研究酶的结构与功能。
此外，通过比较不同底物和酶的米氏方程，可以了解酶的专一性和底物选择性。
四、酶促反应动力学的影响因素酶促反应动力学受到多种因素的影响，主要包括：1.酶浓度：在一定范围内，酶浓度的增加会提高反应速率，但当酶浓度达到饱和时，反应速率不再随酶浓度增加而提高。
2.底物浓度：底物浓度的增加会提高反应速率，但当底物浓度达到一定程度时，反应速率不再随底物浓度增加而提高。
3.温度：温度的升高会加速反应速率，但过高的温度会导致酶失活，使反应速率降低。
4.pH：酶的活性受pH 值的影响，pH 值的改变会影响酶的催化效率。
5.抑制剂和激活剂：抑制剂会降低酶的催化效率，而激活剂会提高酶的催化效率。
五、总结酶促反应动力学是研究酶促反应速度及其影响因素的科学。
酶促反应动力学
第一节 酶促反应的动力学方程
一、化学动力学基础
1、反应分子数和反应级数 1）反应分子数
指在反应中真正相互作用的分子数。
A
P
A+B
P+Q
2）反应级数
指实验测得的反应速率与反应物浓度之间的关系，符合 哪种速率方程，则这个反应就是几级反应。
蔗糖 + H2O 蔗糖酶 葡萄糖 + 果糖
1
3）零级反应的特征
反应速率与反应物浓度无关。初始浓度增加，反应速度不变， 要使反应物减少一半所需完成的反应量增加，因此最后表现为半 衰期与初始浓度成正比。
二、底物浓度对酶促反应的影响
1、酶促反应初速度与底物浓度之间的关系 1903年Henri以蔗糖酶水解蔗糖为例，研究底物浓度与酶促反
应速度之间关系时，发现两者的关系符合双曲线关系。
k2
Km= (k2+k3)/k1
Km是[ES]的分解常数与生成常数的比值。 Km的真正含义是， Km越大意为着[ES]越不稳定，越容易分解。但不能说明[ES]是容 易分解成底物还是产物。
kcat/Km可表示为 [k3/(k2 + k3)]k1， k3/(k2 + k3)代表[ES] 分解成产 物的分解常数占[ES] 总分解常数的比值。 k3/(k2 + k3)越大，说明 [ES]越容易分解成产物。 k1是[ES] 生成常数。因此， kcat/Km数 值大不仅表示[ES]容易生成，还表示[ES]易分解成产物。真正代 表酶对某一特定底物的催化效率。所以，也称为专一性常数。 极限值是k1 ，意为[ES]不会再分解为底物。
酶的化学本质是蛋白质，因此，酶 对温度具有高度的敏感性，随着温度 的升高，分子的构象会逐渐地被破 坏，失去催化活性。
酶促反应动力学(有方程推导过程)
酶促反应动力学(kinetics of enzyme- catalyzed reactions)是研究酶促反应速度及其影响因素的科学。酶促反应的影响因素主要包括酶的浓度、底物的浓度、pH、温度、抑制剂和激活剂等。
01
酶促反应动力学
02
3.4 酶促反应动力学
酶浓度的影响
在一定温度和pH下，酶促反应在底物浓度大于100 Km时，速度与酶的浓度呈正比。 酶浓度对速度的影响机理：酶浓度增加，[ES]也增加，而V=k3[ES]，故反应速度增加。
，所以
(2)
将（2）代入（1）得：
(3)
当[Et]=[ES]时，
(4)
所以
将（4）代入（3），则：
01
Vmax指该酶促反应的最大速度，[S]为底
02
物浓度，Km是米氏常数，V是在某一底物浓
03
度时相应的反应速度。从米氏方程可知：
04
当底物浓度很低时
05
<< Km,则 V≌Vmax[S]/Km ，反应速度
〔E〕〔S〕
〔ES〕
〔E〕〔I〕
〔EI〕
ki
解方程①②③得： 〔ES〕=
〔E〕t
（1 + ）＋1
Km
〔S〕
〔I〕
Ki
又因vi＝k3〔ES〕,代入上式得： Vi＝
（1 + ）＋〔S〕
Km
〔I〕
Ki
Vmax〔S〕
〔I〕
Ki
很多药物都是酶的竞争性抑制剂。例如磺胺药与对氨基苯甲酸具有类似的结构，而对氨基苯甲酸、二氢喋呤及谷氨酸是某些细菌合成二氢叶酸的原料，后者能转变为四氢叶酸，它是细菌合成核酸不可缺少的辅酶。由于磺胺药是二氢叶酸合成酶的竞争性抑制剂，进而减少细菌体内四氢叶酸的合成，使核酸合成障碍，导致细菌死亡。抗菌增效剂-甲氧苄氨嘧啶(TMP)能特异地抑制细菌的二氢叶酸还原为四氢叶酸，故能增强磺胺药的作用。
酶促动力学
H C
S CHCl E S As
H C
CHCl + 2HCl
巯基酶
S E S
路易士气
H2C SH
失活的酶
酸
H As C CHCl + HC SH H2C OH
H SH H2C S As C CHCl + HC S E SH H2C OH
失活的酶
BAL
巯基酶 BAL与砷剂结合物
三、酶的抑制作用
（五）一些重要的抑制剂
*竟争性抑制举例
1.丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制
琥珀酸
琥珀酸脱氢酶 FAD FADH2
延胡索酸
COOH CH2 C H2 COOH 琥珀酸
COOH CH2 COOH 丙二酸
•
磺胺类药物的抑菌机制
与对氨基苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶
二氢蝶呤啶 ＋ 对氨基苯甲酸 ＋ 谷氨酸
二氢叶酸 合成酶 二氢叶酸
H2N
加入非竞争性抑制 剂后，Km 不变，而 Vmax减小。
非竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ：
加入非竞争性抑制剂 后，Km 不变，而 Vmax减小。
非竞争性抑制剂与酶活 性中心以外的基团结合。 这类抑制作用不会因提高 底物浓度而减弱
三、酶的抑制作用
(二) 抑制作用的类型
（3）反竞争性抑制
影响因素包括有
底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂、酶浓度等。
※ 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。
影响酶促反应速率的因素：
底物浓度[S] 酶浓度[E] 反应温度 pH 值 抑制剂I 激活剂A
二、底物浓度对酶反应速度的影响
355
当底物浓度达到一定值 反应速度达到最大值 （Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加
酶促反应动力学
化反应过程； 与微生物反应体系相比，在经济上有时 并不理想； 酶促反应条件比较温和，但一般周期较 长，有发生杂菌污染的可能； 固定化酶并非一定就是最优质的生物催 化剂。
第二节 均相系酶促反应动力学
均相酶催化反应，系指酶与反应物系处于同相
----液相的酶催化反应。它不存在相间的物质
传递！！！
均相酶催化反应动力学阐明酶催化反应机理的
重要手段。
通过研究影响反应速率的各种因素进行静态和
动态分析。
酶催化反应动力学的研究历史
1902年，Henri
V进行转化酶、苦杏仁酶 和淀粉酶的催化反应实验，研究反应机 理，并导出了动力学方程式； 1913年，Michaelis和ML Nenten应用快速 平衡解析方法对该速率方程进行详细研 究，发表了米氏方程，即M-M方程； 1925年， Briggs GG发表了稳态法解析方 法，对M-M方程的推导进行了修正。
（1）酶的固定化技术
是将水溶酶分子通过一定的方式，如静电吸
附、共价键等与载体，如琼脂、海藻酸钠、 明胶、离子交换树脂等材料结合，制成固相 酶，即固定化酶(Immobilized enzyme)的技术。
（三）酶的固定化方法
1 载体结合法：将水不溶性的载体与酶结合形 成固定化酶的方法。 （1）物理吸附法：使酶直接吸附在载体上的方 法称为物理吸附法。常用的载体有: a 有机载体， 如面筋、淀粉等； b 无机载体， 如氧化铝、活性炭、皂土、 白土、高岭土、多孔玻璃、硅胶等 （2）离子吸附法：此法是将酶与含有离子交换 基团的水不溶性载体结合。此法在工业上应 用较广泛， 常用的载体有: (1) 阴离子交换剂， 如二乙氨基乙基(DEA E)－纤维素等; (2) 阳 离子交换剂， 如羧甲基(CM ) －纤维素、纤 维素－柠檬酸盐等。
酶促反应动力学及其在生物过程中的应用
酶促反应动力学及其在生物过程中的应用酶作为生物催化剂，可以在非常温和的条件下，加速化学反应速率，具有高效、特异性、多功能性等优点。
而酶促反应动力学则是研究酶作为催化剂时，催化剂和底物之间的反应速率与反应条件之间关系的学科。
本文将介绍酶促反应动力学的基本概念、实验方法以及在生物过程中的应用。
一、酶促反应动力学的基本概念1. Michaelis-Menten方程当酶与底物反应的速率受到限制时，酶的活性就会随着底物浓度的增加而饱和。
这种限制反应动力学模型被称作酶的Michaels-Menten模型。
Michaels-Menten方程描述了酶速率（V）和底物浓度（[S]）之间的关系，即：V = Vmax * [S] / (Km + [S])其中，Vmax为最大反应速率，Km为酶与底物结合的亲和力指标，即Km越小，酶与底物之间的关系越紧密。
2. 酶反应速率常数酶反应速率常数分为两种：酶催化反应速率常数（kcat）和酶底物结合速率常数（kM）。
kcat表示单位时间内，每个酶催化的底物的转化数。
在酶催化时，酶分子与底物反应所需的时间称为酶催化反应时间。
在相同的反应条件下，kcat一定，但不同酶的kcat可能不同。
kM则表示底物与酶结合的亲和力。
kM越小，说明酶与底物的结合亲和力越强，酶催化底物的效率越高。
3. 细胞内底物浓度细胞内底物浓度反映了化学反应是否发生的概率。
当细胞内底物浓度过低时，酶反应速率可能受到限制，反应速率在极低浓度下呈现一定的线性关系。
然而，当细胞内底物浓度越来越高时，酶反应速率将不再随着底物浓度的增加而线性增加，而是呈现饱和状态。
二、酶促反应动力学的实验方法在实验室中，可以通过测量酶反应速率的变化，来研究酶催化反应的动力学。
1. 单点酶反应速率测定法单点酶反应速率测定法，是指在已知酶底物的浓度下，只测量一次反应后的酶反应速率。
通过改变底物浓度，可以确定在不同浓度下的酶反应速率，从而建立酶反应速率曲线。
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a.双倒数作图法
(Lineweaver-Burk) Lineweaver1.0 0.8
斜率=Km/Vmax 斜率
0.6 1/v 0.4
-1/Km
0.2
1/Vmax
0 2 4
-1
0.0 -4 -2 6 8 10 1/[S](1/m ol.L ) m
v-v/[S]作图法 b. v-v/[S]作图法 Eadie(Eadie-Hofstee) 将米氏方程改写： 将米氏方程改写：
米氏方程最初是有Michaelis和Menten提出，然后有 Briggs和Haldane又加以补充与发展。 其公式的推导： 按照酶被底物的饱和现象出发，依据“稳态平 衡”假说理论，推导如下：
米氏方程的推导: 米氏方程的推导:
Michaelis和Menten的酶促反应动力学基础上 的酶促反应动力学基础上， 在Michaelis和Menten的酶促反应动力学基础上， 1925年 Briggs和Haldane提出酶反应分两步进行 提出酶反应分两步进行， 1925年，Briggs和Haldane提出酶反应分两步进行，即 稳态平衡”理论： “稳态平衡”理论： ES的浓度与 的浓度与（ ）（2 ES的浓度与（1）（2）都有关系 第一步： 第一步： （ 1） 第二步： 第二步：
（k2+k3）/k1=
（[E]—[ES]）（[S]） /[ES]
令Km= （k2+k3）/k1 ，则有 Km= （[E]—[ES]）（[S]） /[ES] 也就是 [ES]=[E][S]/（Km+[S]） 因为反应速度的大小与[ES]成正比，即v=k3[ES]，将 其带入上式则变换为： v=k3[E][S]/（Km+[S]） 而当底物浓度很高时，酶全部被底物所饱和，此时 [E]=[ES]，而反应速度达到最大反应速度，即： Vmax=k3[ES]=k3[E]，所以将其带入上式即可得到以下 表达式： v=Vmax[S]/（Km+[S]） 即米氏方程式。
用图式来说明： A B Q P ↓ ↓ ↑ ↑ E———EA———EAB ←→EPQ———EP———E 或者是： B A P Q ↓ ↓ ↑ ↑ E———EB———EBA ←→EPQ———EQ———E 如磷酸化酶催化的反应就属此类： 磷酸化酶 糖原+P————G—1—P+糖原 （3）乒乓反应机理（ping pong mechanism） P B
E+A ←→ EA ←→ FP ←→ F ←→ FB ←→ EQ ←→ E+Q 可用以下图式来说明： A P B Q
E——————————————————————→E EA ←→ FP F FB ←→ EQ
Michaelis Menten
（一）温度的影响
温度对酶促反应速度的影响具有双重效应。其一是当 温度升高时，随温度的升高反应速度加快（温度系数Q10为 1-2；每增加10 ℃ ，反应速度为原反应速度的1-2倍）；其 二是当温度升高到一定限度时，随温度的升高，酶发生变 性而使速度降低。 [ 说明：温度系数（tempperature coefficient）是指反应温度 升高10度，其反应速度与原来的反应速度之比。] 每种酶都有其最适温度，在温血动物提取的酶，其最适 温度一般为35-40℃；植物的为40-50℃；某些细菌的酶可 高达70℃ 。 最适温度不是酶的特征性常数，随环境因素而变化。 酶干燥状态下和低温下保存较好。
c.Hanes-Woolf作图法 c.Hanes-Woolf作图法
Km 1 1 1 = × + V Vmax [S] Vmax
Eisenthal和Cornish-Bowden直接线性作图 d. Eisenthal和Cornish-Bowden直接线性作图 将米氏方程改写为： 将米氏方程改写为：
1、底物浓度对反应速度的影响 底物浓度（substrate concentration）对反应速度的影响比较复杂。在一定的酶浓 度下，如将初速度对底物浓度的关系作图，可以发现：当底物浓度较低时，反应速 度与底物浓度成正比，表现为一级反应（first order reaction）。随着底物浓度的升 高，反应速度不再按正比升高，表现为混合级反应（mixed order reaction）。若再增 加底物浓度，曲线表现为零级反应（zero order reaction），这时尽管底物浓度还可 以不断增加，但反应速度却不再增加，说明酶已被底物所饱和，反应速度达到了最 大反应速度。如下图。
6、多种底物的反应
实际上大多数酶反应的机理是比较复杂的，一般包含有一种以上的底物，至 少也是两种底物，即双底物反应： E A+B——→P+Q 目前认为大部分双底物反应可能有三种反应机理： （1）依次反应机理（ordered mechanism） B P
E+A ←—→EA ←—→EAB ←→EPQ ←—→EQ ←—→E+Q 用图式说明： A B P Q ↓ ↓ ↑ ↑ E———— ———— ———— ———— ————→E EA EAB ←—→EPQ EQ 需要NAD+或NADP+的脱氢酶的反应就属此类型。 （2）随机机理（random mechanism ） 加入底物A及B后，产物P及Q以随机的方式释放出来。 同时，底物的加入也是随机的，E可以先和A结合，也可以先和B结合，其结 果都是形成中间产物EAB。在产物释放时，可先释放P，也可先释放Q。
丙酮酸
丙酮酸脱氢酶
乙酰CoA 乙酰CoA 乙醛
Km=1.3x10-3 mol/L Km=1.0x10-3mol/L
丙酮酸脱羧酶
米氏常数Km和Vmax的求法的求法 5. 米氏常数 的求法
V m ax [S ] V= K m + [S]
Km 1 1 1 = × + V Vmax [S] Vmax
木瓜蛋白酶 胆碱脂酶
PH影响酶活力的原因可能有以下几个方面 ： 1、过酸过碱会影响酶蛋白的构象，甚至使酶 变性失活。 2、PH影响底物分子和酶分子的解离状态。最 适PH与酶活性中心结合底物的基团及参与催化的 基团PK值有关，往往只有一种解离状态最有利于 与底物结合，在此PH下酶活力最高；也可能影响 到中间产物ES的解离状态。总之，都影响到ES 的形成，从而降低酶活性。 3、PH可影响酶分子中另一些基团的解离，这 些基团的离子化状态与酶的专一性及酶分子中活 力中心的构如果底物 浓度足够大，足以使酶饱和， 则反应速度与酶浓度成正比。 如右图。 这种正比关系可由下式表 示： V=K[E] 该式也可以由米氏方程推 导出来。式中的K表示K3[S]/ （Km+[S]）。 注意：使用的酶必须是纯酶制 剂或不含抑制物的粗酶制剂。
（四）底物浓度的影响
最适PH可因底物浓度、种类及缓冲液浓度不同而不 同，而且常与酶的等电点不一致，所以该值也不是 常数。
动物：6.5-8.0；植物及微生物：4.5-6.5，但 有例外。如胃蛋白酶为1.5；精氨酸酶为9.7
应当指出的是酶在试管反应的最适PH 与它所在正常生理的PH并不一定完全相同。 这是因为一个细胞内可能会有几百种酶。不 同的酶对此细胞内的生理PH的敏感性不同； 也就是说PH对一些酶是最适PH，而对另一 些酶则不是，不同的酶表现出不同的活性。 这种不同对于控制细胞内复杂的代谢途径可 能具有很重要的意义。
3、米氏方程式的分析
（1）当[S]Km时，v = Vmax[S]/Km ，反应为一级反应。 （2）当[S]Km时， v =Vmax，反应为零级反应。 （3）当v=Vmax/2时，Km=[S]，即米氏常数的含义为反应达 到最大反应速度一半时的底物浓度。它的单位是摩尔/升，与 底物浓度的单位一样。
4、米氏常数的意义
四、酶促反应动力学 酶促反应动力学（kinetics ofenzymecatalyzed reaction ）是研究酶促反应的速度 以及影响此速度的各种因素的科学。
Michaelis 与 Menten 发展出酶动力学 展出酶动力学
Nelson & Cox (2000) Lehninger Principles of Biochemistry (3e) p.258
物结合的难易程度。 物结合的难易程度。 无抑制剂时，ES的分解速度与形成速 6.Km与Km′ 无抑制剂时，ES的分解速度与形成速 度的比值符合米氏方程， 度的比值符合米氏方程，为Km; 而有抑制剂时发 生变化，则不符合米氏方程， 生变化，则不符合米氏方程，为Km′ 。
7.Km可以帮助推断某一反应的方向和途径 7.Km可以帮助推断某一反应的方向和途径 Km Km=1.7x10-5mol/L 乳酸脱氢酶 乳酸
底物浓度对反应速度的影响
提 高 底 物 浓 度 增 强 酶 活 性 表 現
80 60 0 1 2 3 4 5 6 7 8
生 成 40 物 浓 20 度
0 0 2 4 6 8
S + E ↓ P
在 固 定 時 間 內 反 應 (
底物浓度 mole
2、米氏方程式 人们曾提出各种假说来解释上述现象，其中比较合理的解 释是“中间产物学说”。按此学说，1913年前后Michaelis and Menten在前人工作的基础上，作了大量的定量研究，积累了足 够的实验证据，从而提出酶促动力学的基本原理，并归纳出一 个数学表达式，即： =Vmax[S]/ Km+[S] v =Vmax[S]/（Km+[S]） 此式即为米氏方程式，它的前提是酶与底物的“快速平衡 说”——开始反应速度快，迅速地建立平衡。米氏方程式圆 满地表示了底物浓度与酶反应速度间的定量关系。这就使 “中间产物学说”得到了人们的普遍承认，现在一般称为 “米氏学说”。
（ 2）
说明：设[E]为酶的总浓度；[ES]为中间产物浓度；[S]为底物 浓度；[E]—[ES]为游离状态酶的浓度。并且由于底物的量通常 要比酶的量高很多，所以在最初反应时间内，[S]浓度的减少可 忽略不计。同时，由于在最初反应时间内，产物的生成很少， 所以其逆反应可忽略不计。 因此根据中间产物学说的反应有： [ES]的生成速度为：v1=k1（[E]—[ES])（[S]） [ES]分解的速度为：v2+v3=[ES]（k2+k3） 根据恒态理论，ES形成的速度应等于分解的速度，所以： k1（[E]—[ES]）（[S]） = [ES]（k2+k3） 即：