HPLC_荧光检测法测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质及相关物质
高效液相荧光法测定大鼠脑内氨基酸类神经递质方法的改良
分 离效 果 良好 ； ６２ ４ ０ｐ ｏ Ｌ浓 度 范 围有 较 好 的线 性 关 系 ， 相 关 系 数 不 低 于 ０９ ； 氨 基 酸 日内 试 验 精 在 ．５～ ０ ， ｌ ｍ ／ 其 ． ９ ６种 密 度 范 围 为 １３ ％ ～ ． ９ ； ．８ ７５ ％ １ ３间试 验 精 密 度 为 ２ ７ ～ ．８ ； 氨 基 酸 回收 率 不 低 于 ８ ％ 。 结论 改 良 后 的 ． ％ ８ ６ ％ ６种 ０ 反 相 高 效 液 相 色 谱荧 光 法 灵 敏 度 较 高 、 复 性 好 ， 有 效 分 离 检 测 大 鼠脑 组 织 分 区 中氨 基 酸 类 神 经 递 质 含 量 。 重 能
研 究 报 告
手
高 效 液 相荧 光 法 测 定 大 鼠脑 内氨 基 酸类 神 经 递 质 方 法 的改 良
张 丽 ， 叶翠 飞 ， 芊 ， 林 究 室 ， 京 市 老 年 病 医疗 研 究 中 心 ， 经 变 性 病 教 育 部 重 点 实 验 室 ； １首 北 神
２ ．首都 医科 大 学 宣 武 医 院 药 剂 科 ； 京 北 １０５ ） ０ ０ ３
【 要 】 目的 摘
改 良测 定 大 鼠脑 组 织 氨基 酸 类 神 经 递 质 的 反 相 高 效 液 相 色 谱 荧 光 法 。 方 法 改 良使 用 磷 酸
盐 一 醇一 甲 乙腈 作 为 流 动 相 ， 相 高 效 液 相 色 谱 洗 脱 ， 丝 氨 酸 作 为 内标 ， 苯 二 甲醛 柱 前 衍 生 和荧 光 检 测 器 ， 测 大 反 高 邻 检 鼠 大脑 皮 质 、 马 、 状 体 、 海 纹 中脑 、 脑 和 下 丘 脑 ６个 脑 区 中 天冬 氨 酸 （ ｓ） 谷 氨 酸 （ ｌ） 谷 氨 酰 胺 （ ｉ） 甘 氨 酸 小 Ａｐ 、 Ｇｕ 、 Ｇｎ 、 （ ｌ） 氨 基 丁 酸 （ Ａ Ａ） 牛 磺 酸 （ ａ ） Ｇｙ 、－ ＧＢ 和 Ｔ ｕ ６种 氨 基 酸类 神 经 递 质 含 量 。 结 果 ６种 氨 基 酸 在 ２ ｉ 洗 脱 完 全 ， ０ｍ ｎ内
库仑阵列电化学高效液相色谱法测定大鼠脑组织中单胺类神经递质及代谢产物
图 1 N E、D O PA C、D A 、HO M V 标准色谱图; 图 2 5 HT 、5 H IA A 标准色谱图; 图 3 大鼠脑组织样本 N E、DO PA C、D A、H O M V 色谱图;
图 4 大鼠脑组织样本 5 HT 、5 H IA A 色谱图
2. 2 标准曲线 由于脑组织标本中均存在以上生 0. 1397, r 2= 0. 9998; NE: Y= 0. 113X+ 0. 5664, r 2=
ZH A N G X iang hui , LI U J un , S U L in y an ( Mental H ealth I nstitute , Xiangy a 2nd H osp ital , Centr al South Univers ity , Changsha, 410011 China )
溶液配制成不同浓度的混合标准液。用 0. 2 mo l/ L 高氯酸将内 标 DH BA 储 备液稀 释成含 DH BA 20
g/ L ( 并含焦亚硫酸钠 0. 04% 和乙二胺四乙酸二钠 0. 04% ) 的溶液做为蛋白沉淀剂的工作液[ 1] 。 1. 5 组 织样本制备 90~ 100 g WKY 种雄 性大 鼠, 断头后迅速取脑皮质立即置液氮中深冻, 固化后 精确称重, 每 100 m g 脑组织加 1 m l 预冷的工作内 标液, 于冰浴下快速玻璃匀浆, 4 & 条件下 14 000 ∀ g 低温离心 15 m in, 取上清液用 0. 22 m 针头过滤器 过滤, 滤液作为待测样品进样。 1. 6 伏安曲线 取以下待测物质每种含 100 g/ L 的标 准液, 设置 电势为: 0、50、100、150、250、300、 350、400、450、550、600 mv, 进样 20 l, 记录峰面积。 峰面积为 Y 轴, 电势为 X 轴, 作连线图。根据伏安 曲线设置 4 道电势为: - 50、100、300、500 mv。 1. 7 统计学处理 以 M illenium32 软件采集并处 理原始数据, 以 Ex cel 软件做统计学数据处理。
高效液相色谱法对大鼠各器官中单胺类神经递质的测定
高效液相色谱法对大鼠各器官中单胺类神经递质的测定毛有彦;李爱芝【期刊名称】《中国误诊学杂志》【年(卷),期】2007(7)25【摘要】目的:以高效液相色谱法同时测定五种神经递质的含量,为神经递质的检测探索新的实验方法。
方法:色谱柱为C18柱,流动相为甲醇水(体积比为4∶6,其中每升中含EDTA-Na20.028g、SDS0.15g及浓硫酸0.22ml),流速1.0ml/min。
结果:本实验方法对大量样品进行过测定,其中包括正常、肝气郁症、肝气逆症等动物模型测定及用药后动物模型的测定,取得了可靠的结果。
结论:本方法实验成本低、样品处理量大,为稳定性及精密度、准确性都可靠的检测方法。
【总页数】2页(P5983-5984)【关键词】色谱法;高压液相;神经递质/分析;生物源单胺类/分析;动物【作者】毛有彦;李爱芝【作者单位】山东省潍坊市人民医院检验科;山东省潍坊市市立医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R122.11【相关文献】1.库仑阵列电化学高效液相色谱法测定大鼠脑组织中单胺类神经递质及代谢产物[J], 张向晖;刘军;苏林雁2.荧光-反相高效液相色谱法同时测定小鼠脑组织中3种单胺类神经递质 [J], 魏小娟;许建华3.库仑阵列电化学-高效液相色谱法同时检测大鼠不同脑区中的8种单胺类神经递质 [J], 邓少东;卢洪梅;林励;肖凤霞;成晓燕4.高效液相色谱法测定百草枯染毒后小鼠脑组织中8种单胺类神经递质的含量变化[J], 昝富文; 解裴育; 贾昊然; 刘迎; 马莉5.柱前衍生-高效液相色谱法同时测定血清中氨基酸类及单胺类神经递质 [J], 白洁;王妲;刘泽平;张佳琪;刘丽艳;韩艳梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
荧光分光光度法测定大鼠不同脑区单胺类神经递质
第４卷第 １ ｌ 期
２１ ０ ０年 １ 月
东
北
农
业
大
学
学
报
４ｌ ｌ ： ３ ６ １ ９ ￣９ ｒ
Ｊｕ ｎ ｌｏ ｒｈ ａｔＡｇｉｕｔｒｌＵｎｖ ｒｉｙ ｏ ｒ ａ ｆＮｏｔｅ ｓ ｒｃ ｌ ａ ｉｅｓｔ ｕ
Ｊｎ． ０１ ａ ２ ０
荧 光 分 光 光 度 法 测 定 大 鼠不 同脑 区单胺 类神 经递 质
中图 分 类号 ：Ｒ ８ ． ２５ ５ 文献 标 志 码 ：Ａ 文 章编 号 ： １０ — ３ ９２ １） ｌ０ ９ — ４ ０ ５ ９ ６ （０ Ｏ Ｏ 一 ０ ３ ０
Ｃｏ ｔ ｎ ｅ ｅ ｍ ｉａ ｉｎ ｏ ｎ ａ ｎ ｅ ｒ ｔａ ｓ ｉｅ ｉｅ ｅ ｔ ｎ ｅ ｎｅ ｔ ｔ ｒ ｎ ｔ ｆ ｄ ｏ ｍｏ ｏ ｍｉ ｅ ｎ ｕ ｏ ｒ ｎ ｍ ｔ ｒｉ ｄｆ ｒ ｎ ｃ — ｔ ｎ ｆ ｅ ｐ ａ ｉ ｅ ｉｎ ｎ ｒ ｔｂ ｌｏ ｏ ｐ ｃ ｒ ｐ ｏ ｏ ｔ ／ Ｈ Ｎ ａ ’ Ｎ ｏｇ ｉ ， ｈ ｌ ｒ ｇｏ ｓ ｉ ａ ｙ ｆ ｒ ｓ ｅ ｔｏ ｈ ｔ ｍｅ ｒ ｚ Ａ Ｇ Ｙ ｎ， ｃ ｕ ｙ ＷＡ Ｇ Ｈ ｎ ｂ ’ ｎ
Ｎ 、Ｄ Ｅ Ａ和 ５ Ｈ － Ｔ三种 单胺 类神经递质 的含量 。结果表明 ，荧光 强度 与浓度 呈线性相关 ，Ｎ 、Ｄ Ｅ Ａ和 ５ Ｈ － Ｔ的检 测回收率分别为 １２２ ０ －％、９ ＿ ５４ ％和 １２ ％。该 方法快速、灵敏 、重复性较 高，可为临床监测及科研提供参考。 ０． ８ 关键词：荧光分光光度法 ；不同脑 区；单胺类神 经递质
高效液相色谱-荧光检测法同时测定大鼠不同脑区中的8种单胺类神经递质
高效液相色谱-荧光检测法同时测定大鼠不同脑区中的8种单胺类神经递质赵燕燕;刘丽艳;韩媛媛;白洁;杜光玲;高茜【摘要】A method for the simultaneous detection of L-dihydroxyphenylalanine , norepinephrine, epinephrine , dopamine ,3,4-dihydroxyphenylacetic acid , serotonin hydrochloride, 5-hydroxyindole-3-acetic acid and homovanillic acid in the different sections of mouse brains was established by using high performance liquid chromatography ( HPLC ) with fluorescence detection and isocratic elution. Before analysis, the sample was deproteinized by 0.60 mol/L perchloric acid, followed by adjusting pH value of the sample with 1.20 mol/LK2HPO4, addition of 0.1 g/L L-cysteine as antioxidant and 0.50 mmol/LNa2EDTA as complexing agent. The separation column was a Shim-packC18 column ( 250 m m ×4.6 mm, 5 μm ) and the mobile phase ( pH 3.8 ) was 13％ methanol containing 50 mmol/L citric acid , 50 mmol/L sodium acetate . 0.5 mmol/L 1-heptanesulfonic acid sodium salt, 5 mmol/L triethylamine and 0.5 mmol/L Na2EDTA. The flow rate was 1.0 mL/min. The injection volume was 10 μL. The emission and excitation wavelengths were 330 nm and 280 nm , respectively. Under the optimized separation conditions, the calibration curves showed good linearity within the concentrations of 1.25 -5000 μg/L ( r＞0.9999 ). The limits of detection were between 0.20 - 5.00 μg/L, the average recoveries were between 94.83％and 99. l9％. and the relative standard deviations ( RSDs ) were between0.08％ and 2.51％. The advantages of the method include easy and prompt operation,high recovery, low detection limit, good separation effect, high accuracy and precision. The method has practical value for detecting 8 monoamine neurotransmitters in biological samples.%采用高效液相色谱-荧光检测法同时测定了大鼠不同脑区中的左旋多巴、去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、二羟基苯乙酸、5-羟色胺、5-羟基吲哚乙酸及高香草酸8种单胺类神经递质的含量.样品经组织裂解液(0.60 mol/L 高氯酸、0.50 mmol/L Na2 EDTA、0.1 g/L L-半胱氨酸的混合水溶液)处理后,冷冻离心得到上清液;上清液中加入高氯酸沉淀剂(1.20 mol/L K2 HPO4、2.00 mmol/L Na2 EDTA的混合水溶液)处理后,冷冻离心、过滤.在该优化的色谱条件下,8种单胺类神经递质在1.25～5 000μg/L范围内线性关系良好(r＞0.999 9),最低检出限在0.20～5.00μg/L之间,平均回收率在94.83%～99.19%之间,相对标准偏差在0.08%～2.51%之间.该方法具有操作简便、快捷、回收率高、检出限低、分离度好、结果准确可靠等优点,可以用于体内8种单胺类神经递质的同时检测与分析.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2011(029)002【总页数】6页(P146-151)【关键词】高效液相色谱;荧光检测;单胺类神经递质;脑;大鼠【作者】赵燕燕;刘丽艳;韩媛媛;白洁;杜光玲;高茜【作者单位】河北大学医学实验中心,河北,保定,071000;河北大学化学与环境科学学院,河北,保定,071002;河北大学化学与环境科学学院,河北,保定,071002;河北大学医学实验中心,河北,保定,071000;河北大学医学实验中心,河北,保定,071000;河北大学医学实验中心,河北,保定,071000;河北大学化学与环境科学学院,河北,保定,071002【正文语种】中文【中图分类】O658单胺类神经递质包括儿茶酚胺类化合物(去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺)、吲哚胺类化合物(5-羟色胺)及相关代谢产物(多巴胺代谢前体左旋多巴、多巴胺代谢产物二羟基苯乙酸和高香草酸、5-羟色胺代谢产物5-羟基吲哚乙酸)。
RP-HPLC-荧光法测定大鼠海马组织中5种氨基酸类神经递质
RP-HPLC-荧光法测定大鼠海马组织中5种氨基酸类神经递质白钰;张莉;马晓丽;孔彬;李新霞;李新宇【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2014(000)001【摘要】目的：采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）-荧光检测技术建立一种用于测定脑海马组织中5种氨基酸[天门冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、天冬酰胺（Aspa）、谷胺酰胺（Gln）、甘氨酸（Gly）]类神经递质的方法。
方法采用甲醇∶水＝1∶1提取大鼠脑海马组织中多种氨基酸类神经递质。
用6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚胺氨基甲酸酯（AQC）柱前衍生RP-HPLC-荧光法测定海马组织中Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly含量。
结果5种氨基酸类神经递质在15 min内完全分离，分离效果良好；在0．5～100．0μg/μL范围有较好的线性关系，相关系数（r）≥0．99990；Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly的检出限分别为0．05、0．068、0．037、0．05、0．02μg/μL。
精密度[相对标准偏差（RSD）]为0．4％～2．5％，加样回收率为70．27％～128．20％，RSD均＜5％；8只正常大鼠海马组织中Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly含量分别为38．98±9．66、126．42±34．06、216．00±0．75、90．44±33．75、（12．95±4．42）μg/g。
结论 RP-HPLC-荧光法快速、准确、灵敏度高，适用于脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定。
【总页数】4页(P69-72)【作者】白钰;张莉;马晓丽;孔彬;李新霞;李新宇【作者单位】新疆医科大学附属中医医院，新疆乌鲁木齐830011;石河子大学医学院，新疆石河子832002;新疆医科大学分析测试中心，新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学分析测试中心，新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学分析测试中心，新疆乌鲁木齐830011;兰州军区乌鲁木齐总医院，新疆乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】Q517【相关文献】1.高效毛细管电泳测定海马组织和脑脊液中氨基酸类神经递质 [J], 宣柳;沈佐君;何晓东;伊茂礼;金鑫;鲁明;傅先明2.AQC柱前衍生RP-HPLC荧光法测定颅脑损伤患者脑脊液中氨基酸类神经递质[J], 陈为;柯雪红;杨小催3.反相高效液相色谱荧光法测定大鼠脑组织中氨基酸类神经递质 [J], 吴强恩;郑力行;谢芳;吴同俊;阮国洪;周志俊4.高效液相荧光法测定大鼠脑内氨基酸类神经递质方法的改良 [J], 张丽;叶翠飞;沈芊;李林5.反相高效液相色谱荧光法测定氨基酸类神经递质 [J], 顾拥军;倪文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱_荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质_张璐璐
学报Journal of China Pharmaceutical University2010，41（4）：367－371高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质张璐璐1，冯芳1，2*，叶小敏1，朱杰1，马冯飞1（中国药科大学1药物分析教研室；2药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京210009）摘要建立高效液相色谱-荧光分析方法，研究小鼠脑皮层、海马、纹状体、丘脑等不同部位的单胺类神经递质及其相关物质。
脑组织样本经高氯酸沉淀蛋白后进行色谱分析，采用Lichrospher C18柱（250mmˑ4.6mm，5μm），流动相为pH 3.06缓冲液（含1mmol/L庚烷磺酸钠；30mmol/L磷酸二氢钠-磷酸溶液）-甲醇（85ʒ15）；流速：1.0mL/min；柱温：35ħ。
荧光检测：激发波长为280nm，发射波长为315nm。
采用建立的方法，鉴别出小鼠脑中存在去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、酪氨酸、色氨酸、3，4-二羟苯乙酸和5-羟吲哚乙酸等物质；对NE、DA和5-HT进行定量研究，确定它们的线性范围分别为2.4 471.0ng/mL（r=0.9996），2.6 519.5ng/mL（r=0.9994），2.4 469.3ng/mL（r= 0.9991），日内、日间RSD均小于9.0%，准确度达到限度要求，提取回收率大于90%。
本法专属性好，准确度高，可以反映不同鼠脑区域单胺类神经递质及相关物质含量上的差异。
关键词高效液相色谱-荧光分析；单胺类神经递质；相关物质；脑组织中图分类号R917文献标识码A文章编号1000－5048（2010）04－0367－05Determination of monoamine neurotransmitters and related substances in mouse brain tissue by HPLC-FLDZHANG Lu-lu1，FENG Fang1，2*，YE Xiao-min1，ZHU Jie1，MA Feng-fei11Department of Pharmaceutical Analysis;2Key Laboratory of Drug Quality Control and Pharmacovigilance(Ministry of Education)，China Pharmaceutical University，Nanjing210009，ChinaAbstract To establish an HPLC-FLD method for the investigation of monoamine neurotransmitters and related substances in mouse frontal cortex，hippocampus，striatum，and hypothalamus.Mouse brain samples were depro-teinized by perchloric acid and analyzed.The separation was carried out on a Lichrospher C18column(250mmˑ4.6mm，5μm).The mobile phase was composed of pH3.06buffer(including1mmol/L heptanesulfonic acidsodium salt，30mmol/L NaH2PO4-H3PO4solution)and methanol in the ratio of85ʒ15;the flow rate was1.0mL/min and the column temperature was35ʎC.Fluorescence detection:the excitation and emission wavelengthswere set atλex =280nm，λem=315nm.Under the optimized conditions，norepinephrine(NE)，dopamine(DA)，5-hydroxytryptamine(5-HT)，3，4-dihydroxy-phenyl acetic acid(DOPAC)，5-hydroxyindoleacetic acid(5-HIAA)，tyrosine(Tyr)，and tryptophan(Trp)in mouse brain were detected.NE，DA，and5-HT were quantified.The line-arity ranges of NE，DA，and5-HT were2.4-471.0ng/mL(r=0.9996)，2.6-519.5ng/mL(r=0.9994)，and 2.4-469.3ng/mL(r=0.9991)，respectively.The intra-and inter-day precision was always lower than9.0%．The accuracy could attain the demands and the absolute recovery values were always higher than90%．The pro-posed method has good specificity and accuracy.It could be used to analyze the content differences of monoamine neurotransmitters and related substances in different mouse brain areas.Key words HPLC-FLD;monoamine neurotransmitter;related substances;brain tissueThis study was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30973858)763*收稿日期2010-03-12*通讯作者Tel：025－83271301E-mail：fengfang1@基金项目国家自然科学基金资助项目（No.30973858）学报Journal of China Pharmaceutical University第41卷单胺神经递质，如去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）是中枢神经系统中非常重要的生物活性物质，它们的前体是酪氨酸（Tyr）和色氨酸（Trp），酸性代谢产物有3，4-二羟苯乙酸（DOPAC）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）等。
荧光法测定脑组织单胺类递质和有关技术问题及其在运动医学中的应用
荧光法测定脑组织单胺类递质和有关技术问题及其在运动医学中的应用论文题目：荧光法检测脑组织单胺类递质及其在运动医学中的应用摘要：脑组织中的单胺类递质具有重要的生理作用，与精神健康、神经功能和行为发展紧密相关。
近年来，荧光法已成为研究脑单胺类递质的有效解决方案。
本文将首先介绍荧光法检测脑单胺类递质的技术特点、优点和临床应用，然后重点介绍在多种运动医学领域中荧光法检测脑单胺类递质的应用。
本文旨在为科学家提供一种易于操作和可重复性好的荧光检测工具，以进一步研究脑单胺类递质的分布特征、病理变化和调节机制提供一份宝贵的研究贡献。
关键词：荧光法；脑组织单胺类递质；运动医学；神经功能在运动医学中，荧光法检测脑组织单胺类递质的应用形式有很多。
首先，荧光法可以用于研究脑性认知功能和认知障碍中所涉及的单胺类递质分布，这些递质在神经系统发育和功能维持中有特殊的作用。
此外，荧光法还可用于研究运动性疾病，例如脑外伤、脊髓损伤和中风。
在这些疾病中，荧光技术可以用来检测单胺类递质损失及其病理变化，从而开发更有效的治疗策略。
此外，荧光技术还可以被用来检测运动过程中脑组织中单胺类递质的变化，以更深入地了解运动对认知功能和神经功能的影响。
最后，荧光技术可以被用来检测改变认知功能和情绪状态的治疗中涉及的单胺类递质改变，从而验证治疗机制是否有效。
总之，荧光法检测脑组织单胺类递质的应用在运动医学领域有着广泛的应用前景，可以为研究者提供宝贵的信息，为治疗提供有效的指导。
在前述应用中，荧光法检测脑组织单胺类递质有一些独特的优势。
首先，荧光法在神经活动检测和认知障碍研究方面具有很强的敏感性，可以以低污染的方式获得灵敏的检测效果。
此外，荧光技术允许科学家以多种形式进行大范围的实验，并可以紧密结合其他科学技术，为研究者提供更多的信息和数据，以更深入地了解治疗措施的机制。
此外，荧光技术在实验和临床诊断方面也有显著的优势，可以为研究者提供细节和准确的信息，从而更好地解释脑组织中神经成分的作用。
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Bet w een days ( n = 3)
C /m g ・ L-1 RSD / %
解 ,并稀释成含量为 1 mg ・ L 的标准贮备液 ,置 4 ℃ 冰箱内保存 。分别将大鼠迅速断头处死 , 冰盘上分 离纹状体 ,准确称重 , 置 - 60 ℃ 冰箱保存 。测定时 , 室温下解冻 ,置 1 m l组织匀浆器中 , 加入其重量 10 倍体积 、 4℃ 的提取液 ,冰浴下匀浆 , 4 ℃、 1. 2 × 10 r ・
作者简介 : 林凌云 ,男 ,福建莆田 ,副主任药师 ,从事精神药理学的研究工作 。
558
华 西 药 学 杂 志
第 22 卷
20 μ l,日内重复测定 5 次 。另将上述对照品溶液连
测 3 d,每日 3 次 。计算 ,结果见表 3。
表 2 回收率测定结果 ( m g ・ L - 1 , n = 5)
的标准曲线在一定浓度内线性关系良好 ,方法的加样回收完全 , 精密度好 。结论 所建方法简便 、 快速 、 准确 , 可用于脑组织 中单胺类神经递质及相关物质的测定 。 关键词 : 大鼠脑组织 ; 单胺类神经递质 ; 高效液相色谱 - 荧光检测 中图分类号 : R917 文献标识码 : A 文章编号 : 1006 - 0103 ( 2007 ) 05 - 0557 - 03
m in 冷冻离心 10 m in, 取上清液过滤 , 滤液作为供
- 1 4
- 1
1. 10 ± 0. 03 0. 19 ± 0. 01 2. 10 ± 0. 10 0. 59 ± 0. 02 0. 49 ± 0. 01 0. 78 ± 0. 03 0. 13 ± 0. 01
2. 59 4. 73 4. 88 2. 54 2. 12 3. 20 4. 62
表 1 各成分的线性与范围及检测限
Table 1 Regression equa tion s and detection li m it
Comp. TRS NE DA TRP HVA 5 - HT Regression equation
Y = 819 × 104X + 313 × 103 Y = 1171 Y = 2135 Y = 7188 Y = 1191 r
-1
column ( 150 mm × 319 mm , 4μm ) , mobile phase: methanol– buffer ( 14 ζ 86 ) ; flow rate: 110 m ・ l m in ; fluorometric detector wave2 length setting of excitation at 280 nm and em ission at 330 nm. RESUL TS The calibration curves of 7 monoam ines and related com 2 pounds were linear w ithin the lim ited concentration ranges . The methodology recovered fully, the w ithin day RSD and betw een days
ng ・ mg - 1 ) Table 4 L evels of m onoam in es and rela ted com pounds in str ia tum of SD ra ts( x ± s, ng ・ mg- 1 )
- 1
1 实验部分
111 仪器与试剂 2690 型高效液相色谱仪包括 474 荧光检测器 、 312 色谱工作站 (美国 W aters) 。对照品重酒石酸去
基金项目 : 广东省自然科学基金资助项目 (编号 : 04020238)
柱 ( 150 mm × 3. 9 mm , 4 μm ) ; 流动相为甲醇 - 缓冲 - 1 - 1 液 (含 40 mmol・ L 醋酸钠 、 30 mmol ・ L 柠檬酸 、 - 1 - 1 012 mmol ・ L EDTA - 2Na、 0. 4 mmol ・ L 辛烷磺酸 - 1 钠 , pH3. 8 ) ( 14 ζ 86 ) ,流速 1. 0 m ・ l m in ; 荧光检测 λ λ 波长 EX = 280 nm , EM = 330 nm; 柱温为室温 。在上 述条件下 ,各成分无干扰且实现完全分离 (图 1 ) 。
华西药学杂志 2007, 22 (5) : 557 ～559 W CJ ・PS
HPLC - 荧光检测法测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质及
相关物质
林凌云 ,李 慧 ,许崇涛
(汕头大学精神卫生中心 , 广东 汕头 515063 )
摘要 : 目的 采用 HPLC - 荧光检测方法测定大鼠脑组织中的单胺类递质及相关物质 。方法 脑组织匀浆用提取液 (含 0. 1
RSD were low. CO NCL UT I O N This method is simp le, fast, sensitive and accurate and can be used to deter m ine si m ultaneously the
concentrations of monoam ine trans m itters and related compounds in rat brain tissue. Key words: Rat brain tissue; Monoam ine trans m itters; HPLC - fluorometric detection CLC num ber: R917 D ocum en t code: A
-1 ion - pair HPLC w ith fluorometric detector . M ETHOD S The brain tissues were homogenized in HClO4 ( 0. 1 mol ・ L ) and EDTA -
2Na (012 mmol ・ L
-1
). And the supernatants were injected into the chromatographic system. The HPLC condition was Nova - pak C18
用提取液准确配制成系列浓度的溶液 。分别吸取 20 μ l对照品溶液和供试品溶液 , 进样分析 , 记录各 有关成分的峰面积 , 按外标法计算含量 。以峰面积 Y 对浓度 X 进行线性回归 (表 1 ) 。将各对照液稀释 后 ,取 20 μ l进样 ,以 S /N > 3 计算检测限 (表 1 ) 。
mol ・ L
-1
HClO4 和 0. 2 mmol ・ L
-1
EDTA )提取后进样 。色谱柱用 W aters Nova - Pak C18 ( 150 mm × 3. 9 mm , 4 μm ) ; 流动相为甲
-1 醇 - 缓冲液 ( 14 ζ 86 ) ; 流速 1. 0 m ・ l m in ; 荧光检测波长 λEX = 280 nm ,λEM = 330 nm。结果 7 种单胺类神经递质及相关物质
Table 2 Result of sam ple recovery test( m g ・ L - 1 , n = 5)
Comp. TRS NE DO PAC DA TRP HVA 5 - HT O riginal 0. 214 0. 122 0. 127 0. 505 0. 058 Added 0. 500 0. 500 1. 000 0. 500 0. 250 4. 000 0. 100 D etected 0. 715 0. 575 1. 011 0. 627 0. 753 3. 466 0. 146 Recovery / % 100. 2 90. 6 101. 1 100. 0 99. 2 86. 7 88. 0
RSD / %
2. 59 3. 49 8. 27 2. 54 2. 12 5. 57 5. 08
图 1 对照品 ( A) 与大鼠脑组织提取液 ( B) 的色谱图
F ig 1 HPLC chroma togram s of con trol solution ( A) and extract of ra t bra in tissue ( B)
1. 13 ± 0. 03 0. 18 ± 0. 01 2. 08 ± 0. 08 0. 59 ± 0. 02 0. 50 ± 0. 01 0. 79 ± 0. 02 0. 13 ± 0. 01
2. 44 4. 77 3. 71 2. 51 2. 12 3. 03 3. 05
试品溶液 。
11213 线性关系 取各种对照品溶液适量 , 混合 ,
11212 溶液的制备 分别精密称取 NE、 TRS、 DA、 DOPAC、 HVA、 5 - HT、 TRP 对照品适量 ,用提取液溶
表 3 精密度试验结果
Table 3 Results of prec ision test
Comp. TRS NE DO PAC DA TRP HVA 5 - HT W ith a day ( n = 5)
甲肾上 腺 素 ( NE ) 、 酪 氨 酸 ( TRS ) 、 盐酸多巴胺 (DA ) 、 ( 3, 4 - 二 羟基 苯乙酸 DOPAC ) 、 高香草酸 ( HVA ) 、 盐酸 5 - 羟色胺 ( 5 - HT) 、 色氨酸 ( TRP ) (美国 Sigma 公司 ) ; 甲醇为色谱纯 ; 水为双蒸水 ; 其 - 1 余试剂均为分析纯 ; 提取液为含 0. 1 mol ・ L HC lO4 和 012 mmol ・ L EDTA - 2Na的混合溶液 。 112 方法与结果 11211 色谱条件 采用 W aters Nova - Pak C18色谱
11217 应用 应用上述方法 ,对 9 只正常 SD 大鼠