HE染色步骤
HE 染色的步骤
HE 染色的步骤
待干燥后的切片进行HE 染色，具体操作如下：1、脱蜡：室温条件下，将切片
夹于弹簧夹上，然后置于二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ（各10 min）→无水乙醇：二甲苯（1：1、3 min）；2、下行梯度酒精复水：无水乙醇Ⅰ→无水乙醇Ⅱ→95%乙醇→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇（各3
~
5 min）；3、苏木素染色：将脱水后的切片置于苏木素内染
色（15 min），然后蒸馏水洗涤 2 次；4、盐酸分化：用0.25%盐酸快速分化；5、蓝化：将切片置于30℃左右的自来水中蓝化（20 min）；6、上行梯度酒精脱水：50% 乙醇→70%乙醇→85%乙醇→95%乙醇（各3
~
5 min）；7、伊红染色：将切片置于伊红染
液中染色（15S）；8、脱水：95%乙醇（5 min）→无水乙醇Ⅰ（10 min）→无水乙醇Ⅱ（10 min）→无水乙醇：二甲苯（1：1、3 min）9、透明：二甲苯Ⅰ（10 min）→
二甲苯Ⅱ（10 min）；10 、封片：用中性树脂胶将切片封好即可。
HE染色步骤-使用
HE染色步骤：
事先准备好盖玻片
1.脱蜡：脱蜡二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10min
2.覆水：100%（Ⅰ、Ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5min，自来水冲洗5min×3
3.苏木精染色5min（根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间），流水冲洗。
4.5%乙酸分化1min，流水冲洗。
（用吸管滴加乙酸，布满玻片上的组织即可，分化后颜色
变浅了一些，成为蓝色）
5.返蓝：返蓝液（实验室没有，也可不用）
6.伊红染色1min（根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间），流水冲洗。
7.脱水：70%、80%、90%、100%酒精各10s，二甲苯1min（可以在通风橱自然晾干再封
片，约5min左右）
8.滴上中性树胶，封片。
（用吸管滴上一滴即可，尽量少滴，但压片后要将组织全部覆盖
完，避免中间有气泡）。
染色步骤
HE染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。
㈠染色程序1．石蜡切片HE染色（常规HE染色）（1）二甲苯Ⅰ 5～10min（2）二甲苯Ⅱ 5～10min（3）无水乙醇Ⅰ 1～3min（4）无水乙醇Ⅱ 1～3min（5）95%乙醇Ⅰ 1～3min（6）95%乙醇Ⅱ 1～3min（7）80%乙醇 1min（8）蒸馏水 1min（9）苏木素液染色 5～10min（10）流水洗去苏木素液 1min（11）1%盐酸-乙醇 1～3s（12）稍水洗 1～2s（13）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（14）流水冲洗 1～2min（15）蒸馏水洗 1～2min（16）0.5%伊红液染色 1～3min（17）蒸馏水稍洗 1～2s（18）80%乙醇 1～2s（19）95%乙醇Ⅰ 2～3min（20）95%乙醇Ⅱ 2～3min（21）无水乙醇Ⅰ &, nbsp; 3～5min（22）无水乙醇Ⅱ 3～5min（23）石炭酸-二甲苯 3～5min（24）二甲苯Ⅰ 3～5min（25）二甲苯Ⅱ 3～5min（26）二甲苯Ⅲ 3～5min（27）中性树胶封固注：①（12）和（13）项可省去，但（14）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。
②（23）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。
2．冰冻切片HE染色（1）冰冻切片固定 10～30s（2）稍水洗 1～2s（3）苏木素液染色（60℃） 30～60s（4）流水洗去苏木素液 5～10s（5）1%盐酸-乙醇 &n, bsp; &nbs, p; &nb, sp; 1～3s（6）稍水洗 1～2min（7）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（8）流水冲洗 15～30s（9）0.5%伊红液染色 1～2min（10）蒸馏水稍洗 1～2min（11）80%乙醇 1～2min（12）95%乙醇 1～2min（13）无水乙醇Ⅰ 1～2min（14）无水乙醇Ⅱ 1～2min（15）石炭酸-二甲苯 2～3min（16）二甲苯Ⅰ 2～3min（17）二甲苯Ⅱ 2～3min（18）中性树胶封固注：①（7）和（8）项可省去，但（9）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。
HE染色步骤
HE染色步骤1．将于60℃烤箱中的烤片取出后立即放入二甲苯Ⅰ（透明）中15min，若切片已放置已久，则在浸二甲苯之前需将切片在60℃烤箱中烤2h以上；2．将切片于二甲苯Ⅱ15min，应观察到组织切片呈透明状，否则继续浸于二甲苯中；3．切片浸于1/2酒精+1/2二甲苯5min；4．将切片从二甲苯中取出稍甩掉二甲苯，于梯度乙醇中脱去二甲苯：无水乙醇Ⅰ5min→无水乙醇Ⅱ5min →95%酒精5 min→90%酒精5min→80%酒精5min→70%酒精5min；5．切片从70%酒精取出后稍冲洗：浸洗于蒸馏水Ⅰ5min →蒸馏水Ⅱ5min；6．蒸馏水浸洗后稍甩干水分用苏木精染色约15min；7．苏木精染色后用自来水冲洗(稍洗)；8．冲洗后用1%盐酸酒精（99毫升70%酒精+1毫升浓HCl）镜检分化，操作时可以按先浸10S后用自来水稍冲洗，吸水纸吸掉水珠后镜检，若观察到细胞质部分染色很浅而核仍较深则自来水冲洗约15分钟（时间可为几分钟至1小时不等，以充分洗掉HCl），否则分化不全时则继续学浸于盐酸酒精中至20S、30S等直至达到满意染色。
9．冲洗后判断染色，浸入1%氨水酒精（99毫升70%酒精+1毫升浓氨水）迅速（约几s至半分钟不等，不同的组织情况不同，需进行摸索）取出用蒸馏水冲洗后于蒸馏水Ⅰ(3min) →蒸馏水Ⅱ(3min)；10．甩干水分，1%伊红(水溶性伊红Y 1g溶于100毫升85%酒精)染色约3min，若着色困难可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色；11．70%酒精稍冲洗切片将伊红洗掉，之后则梯度乙醇浸洗（脱水作用）：70%酒精(1 min) →80%酒精(1min) →90%酒精(3min) →95%酒精(2min) （此段时间应尽量缩短，因伊红易在95%酒精中脱色）→无水酒精Ⅰ(5min) →无水酒精Ⅱ(5min) ；12．1/2二甲苯+1/2酒精(5min) →二甲苯Ⅰ(5min) →二甲苯Ⅱ(15min)；13．将染色完成的切片取出，确保二甲苯未干燥，迅速用移液枪吸取树胶滴在组织上，盖上盖玻片，待凝固后观察结果。
HE染色步骤[推荐]
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HE染色步骤[推荐]
染色是加入染料将细胞或组织着色的过程。
HE染色是指使用
血红蛋白染成红色，细胞核染成蓝色的染色方法。
HE染色步骤如下：
1. 取制好的玻片（细胞或组织已固定在玻片上），用甲醇或乙醇进行脱水，使细胞或组织变得透明。
2. 将玻片放入染料盒中，加入苏丹三液（血红蛋白染料）浸泡。
时间通常为5-10分钟。
洗净玻片以去除多余的染料。
3. 将玻片放入氧化性酸液中（酸性洗涤液或稍微含有酒精的酸性水溶液），将苏丹三液中的铁离子还原成溶于水的亚铁离子。
时间通常为1-2分钟。
4. 接下来，将玻片放入碱性染色液中（含有甲苯重组溶液和酸性洗涤液的甲苯重组溶液），染色液中的亚铁离子被氧化成沉淀（血红蛋白）。
5. 最后，将玻片漂洗并脱水，然后用透明介质将玻片封闭，使其防止氧化。
通过HE染色，可以使细胞核染成蓝色，血红蛋白染成红色，
从而在显微镜下清晰地观察细胞或组织的结构和特征。
这是一种常用的组织学染色方法。
he染色法名词解释
HE染色法名词解释1. 引言在细胞学和组织学研究中，染色技术是一种非常重要的方法，可以通过染色剂将细胞和组织的结构及其组成部分可视化。
HE染色法（Hematoxylin and Eosin staining）是一种常用的染色方法，被广泛应用于组织学和病理学领域。
本文将对HE染色法进行详细解释。
2. HE染色法的原理HE染色法是通过对细胞和组织中的酸性成分和碱性成分进行染色，以区分它们的分布和结构。
该方法结合了两种染色剂：血红木素（Hematoxylin）和红精（Eosin）。
2.1 血红木素染色血红木素染色的目的是染色细胞核和呈碱性的细胞质。
血红木素是从天然产物血树中提取得到的紫色染料，它对酸性物质有亲和力。
在HE染色法中，血红木素溶液通常是呈酸性的，它可以与细胞核中的核酸结合形成复合物，使细胞核染上紫色。
另外，细胞内已染色的AB-PAS（Alcian Blue–Periodic Acid-Schiff）阳性物质也能与血红木素反应，被染成紫色。
2.2 红精染色红精染色的目的是给细胞胞质和特定细胞成分染色，以鉴别组织中的细胞类型和组织结构。
红精是一种酸性的有机染料，它对蛋白质和细胞膜等酸性物质有亲和力。
在HE染色中，红精溶液通常是呈碱性的，它可以与细胞胞质和胶原纤维等酸性成分反应，使其染上红色。
3. HE染色法的步骤HE染色法通常包括以下步骤：3.1 组织固定首先，需要将待染色的组织标本经过固定处理，使组织中的细胞和结构保持在染色过程中的原始状态。
常用的固定剂有福尔马林和乙醛溶液等。
3.2 组织脱水固定后的组织需要进行脱水处理，以使组织中的水分逐渐被有机溶剂代替。
常用的有机溶剂有乙醇和二甲苯等。
组织脱水的目的是为了使组织中的脂质和有机物质逐渐转变为透明状态，为后续的染色提供条件。
3.3 组织浸渍在脱水之后，需要将组织标本浸入熔蜡中，使其浸透均匀并变得硬化。
这个步骤被称为组织浸渍。
3.4 组织切片组织浸渍后，需要将标本切割成薄片，通常为5-7μm厚。
HE染色步骤
HE染色液的配制：Harris苏木素：甲液苏木素0.9克100%酒精10 ml乙液铵（或钾）明矾20 克蒸馏水200ml然后加入氧化汞0.5克甲液加乙液加热煮沸后离开火焰缓缓加入氧化汞，玻棒搅拌，然后烧杯于冷水速冷，第二天过滤（夜），临用前加几滴醋酸（100ml加入0.25克）对核着色效果更好。
伊红1%：1g溶于10ml蒸馏水，溶解后逐滴加冰醋酸，边滴边搅拌，至糊状时，再加数毫升蒸馏水，继续逐滴加冰醋酸至沉淀不再增加时过滤，滤纸放入温箱（50-60）过夜，烘干物用100 毫升85%酒精溶解。
1.切片：将切片刀磨好，装到机上，将预定使用的刀部位移至蜡块下方，刀的倾斜角为30度，调整切片机厚度为6um，右手摇片扒，左手持一毛笔拖住蜡带，随切片机的转动轻轻把蜡带拉开，用毛笔拖住蜡带，挑断后顺序放在纸上。
（切片时，放入-20度冰箱中冻一下再切，效果比较好）2.摊片：41-42度，将预先切开的蜡片摊于水面上，使蜡片受热自然张开浮在水面上，也可用细针帮助张开皱褶，用经过APES处理过的载玻片伸入水中把蜡片移至玻片上，拨正位置。
注：2%APES前期处理载玻片的方法第一缸：4ml APES + 196 ml丙酮，配成2%的APES液，1.5-2 min第二缸：200ml丙酮（I）2min，震荡第三缸：200ml丙酮（II）2min，震荡第四缸：200ml蒸馏水（I）5min第五缸：200ml蒸馏水（II）5min自然风干，备用3.烘片：8h4.HE染色步骤二甲苯脱蜡(1)(2)5～10min(冬天10～20min)→100％酒精1 min→95％酒精1 min→85％酒精1 min→70％酒精1 min→50％酒精1 min→蒸馏水1–3 min(苏木精时水擦干)→苏木精染色1–2 min→自来水冲洗3–5 min(酚化分化3–5 min)→蒸馏水洗3–10min →70％酒精1–2 min→85％酒精2min→伊红20s→95％酒精→100％酒精(1)(2) 1～2min→二甲苯(1)(2)5～10min→封片。
HE染色步骤
惯例HE染色步调之阳早格格创做（1）二甲苯（Ⅰ） 510 min(2) 二甲苯（Ⅱ） 510 min(3) 95%乙醇（Ⅰ） 13 min （4）95%乙醇（Ⅱ） 13 min （5）80%乙醇 1 min （6）蒸馏火 1 min （7）苏木粗液染色 515 min(8 ) 流火稍洗去苏木粗液 13 s(9) 1%盐酸乙醇 13 s(10) 稍火洗 1030 s(11)促蓝液返蓝 1030 s(12) 流火清洗 1015 min （13）蒸馏火过洗 12 s(14) 0.5%曙黑液染色 13 min(15) 蒸馏火稍洗 12 s(16) 80%乙醇稍洗 12 s(17) 95%乙醇（Ⅰ） 35min(18) 95%乙醇（Ⅱ） 35 min(19) 无火乙醇 510 min(20) 无火乙醇 510 min(21) 二甲苯（Ⅰ） 35 min(22) 二甲苯（Ⅱ） 25 min(23) 二甲苯（Ⅲ） 35 min(24) 中性树胶启固截止：细胞浆红色，细胞核蓝紫色.转：惯例HE染色步调（1）二甲苯（Ⅰ） 510 min(2) 二甲苯（Ⅱ） 510 min(3) 95%乙醇（Ⅰ） 13 min（4）95%乙醇（Ⅱ） 13 min （5）80%乙醇 1 min（6）蒸馏火 1 min（7）苏木粗液染色 515 min(8 ) 流火稍洗去苏木粗液 13 s(9) 1%盐酸乙醇 13 s(12) 流火清洗 2030min（13）蒸馏火过洗 12 s(14) 0.5%曙黑液染色 13 min(15) 蒸馏火稍洗 12 s(16) 80%乙醇稍洗 12 s(17) 95%乙醇（Ⅰ） 23 s(18) 95%乙醇（Ⅱ） 35 s(19) 无火乙醇 510 min(20) 石冰酸二甲苯无火乙醇 510 min(21) 二甲苯（Ⅰ） 2 min(22) 二甲苯（Ⅱ） 2 min(23) 二甲苯（Ⅲ） 2 min(24) 中性树胶启固注：①第（10）、（11）步可省去，（12）步冲火时间需延少至2030min.②第（20）步如果没有必石冰酸二甲苯，可改用无火乙醇.1．与材构制块，经牢固后，惯例石蜡包埋，4μm切片.2．切片惯例用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至火洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏火洗2min.（各二次，而后把火吸搞） 3．苏木素染色5min，自去火清洗.（吸搞火） 4．盐酸乙醇瓦解30s（提插数下）. 5．自去火浸泡15min或者温火（约50℃）5min.（吸搞火） 6．置伊黑液2min. 7．惯例脱火，透明，启片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min（简略）→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂启固.HE染色步调一、HE染液的配制：1、 Harris苏木素：称与苏木素粗 1g硫酸铝钾 20g量与无火乙醇 10ml蒸馏火 200ml苏木素溶于无火乙醇，钾明矾溶于蒸馏火，二者混同后煮沸，离火，加进氧化汞，用玻棒搅拌，试剂形成深紫色，坐时移进热火赶快热却，静置一夜，过滤，棕色小磨心试剂瓶稀启保存.使用前加进5%冰乙酸4ml（或者冰乙酸3滴）.量与 95%乙醇 25ml蒸馏火 75ml先与少量蒸馏火加进伊黑，用玻棒将伊黑碾碎并搅溶，再加进局部蒸馏火，实足溶解后，再加进乙醇，末尾加进冰乙酸1滴.红色小磨心试剂瓶稀启保存.3、1%盐酸火溶液：盐酸 3ml蒸馏火 297ml混匀，红色试剂瓶保存.4、中性树胶启片剂：往125ml棕色滴瓶中倒进中性树胶若搞，加进二甲苯适量用吸管调匀，有一定粘稀度即可.试剂二甲苯 1瓶 Harris苏木素染液无火乙醇 2瓶 1%盐酸火溶液95%乙醇 2瓶 0.5%伊黑(火溶性)染液中性树胶启片剂二、染色步调1、电吹风吹片或者烤片，至溶蜡；2、进二甲苯（I）中脱蜡5分钟，用吸火纸吸搞液体；3、进二甲苯（II）中脱蜡10分钟（切片透明），用吸火纸吸搞液体；4、进100%乙醇（I）5分钟，用吸火纸吸搞液体；5、进100%乙醇（II）5分钟，用吸火纸吸搞液体；6、进95%乙醇3分钟；7、进流火2分钟，用吸火纸吸搞火分；8、 Harris苏木素染色 4~8分钟；9、自去火稍洗；10、1%盐酸火溶液瓦解5~10秒（切片由蓝变黑）；11、自去火洗返蓝15~30分钟；12、0.5%伊黑(火溶性)染色30秒~1分13、95%乙醇（I）脱火5分钟，用吸火纸吸搞液体；14、95%乙醇（II）5分钟，用吸火纸吸搞液体；15、进100%乙醇（I）5分钟，用吸火纸吸搞液体；16、进100%乙醇（II）2分钟，用吸火纸吸搞液体；17、进二甲苯（I）中透明23分钟，用吸火纸吸搞液体；18、进二甲苯（II）中透明5分钟；19、中性树胶启片.20、镜下瞅察截止：细胞核深蓝色，胞浆及纤维构制呈深浅没有等的红色.三、注意事项1、苏木素染色时间应根据染液的新陈或者陈旧、及着色力决断.2、盐酸瓦解要妥当，瓦解缺累，会核、浆同染，瓦解过分会制成核染色过浅.3、火洗蓝化时间应充分，以防褪色.4、启片后，玻片应即时揭上标签并写上编号.。
HE染色步骤
一、 取材 组织块的大小一般为 0.5x0.5x0.2 厘米，或者 1x1x3 厘米，1.5x1.5.0.5 厘米，最厚不 超过 0.5 厘米。 二、 固定 一般固定 12-24 小时，小块组织 4-16 小时即可。 （如：小鼠卵巢用多聚甲醛固定 12 小时即可） 固定剂（多聚甲醛）用量：固定组织时，固定剂一般为组织体积的 10-15 倍，容器勿 太小。且固定剂应避免阳光。 三、 脱水 70%酒精 1 小时 ↓ 85%酒精 1 小时 ↓ 95%酒精 1 小时 ↓ 100%酒精（1） 30 分钟 ↓ 100%酒精（2） 1 小时 ↓ 100%酒精（3） 30 分钟 同浓度酒精应该准备两份以备脱水不完全 1 脱水在有盖子的瓶内进行 2 组织在更换高一级酒精时，可先用吸水纸吸干以免带入水分 3 纯酒精有水分可加入无水硫酸铜去除水分 四、 透明 1/2 纯酒精+1/2 二甲苯混合液 ↓ 二甲苯 ↓ 二甲苯 五、 透蜡 使用石蜡熔点为 70℃，温箱温度调到 64℃ 1/2 二甲苯+1/2 石蜡混合液 30 分钟 ↓ 纯蜡 1 小时 ↓ 纯蜡 1 小时 六、 包埋 用 L 型金属框包埋。 30 分钟 30 分钟 分钟 二甲苯 7 分钟 100%酒精 1 分钟 100%酒精 1 分钟 95%酒精 2 分钟 85%酒精 2 分钟 70%酒精 2 分钟 50%酒精 2 分钟 蒸馏水 2 分钟 苏木精 20 秒 自来水冲洗 4 分钟 蒸馏水 6 分钟 50%酒精 2 分钟 70%酒精 7 分钟 85%酒精 2 分钟 伊红染色 20 秒 95%酒精 2 分钟 100%酒精 2 分钟 二甲苯 4 分钟 二甲苯 4 分钟 中性树脂封片
Harris 苏木素： 甲液 苏木素 0.9 克 100﹪酒精 10ml 乙液 铵（或钾）明矾 20 克 蒸馏水 200ml 然后加入氧化汞 0.5 克 甲液加乙液加热煮沸后离开火焰缓缓加入氧化汞。玻棒搅拌，然后烧杯于冷 水速冷，第二天过滤，临用前加几滴醋酸（100ml 加入 0.25 克）对核着色效果更 好。 伊红： 1g 溶于 10ml 蒸馏水，溶解后逐滴加冰醋酸，边滴边搅拌，至糊状时，再加 数毫升蒸馏水， 继续逐滴加冰醋酸至沉淀不再增加时过滤， 滤纸放入温箱 （50-60） 过夜，烘干物用 100 毫升 85﹪酒精溶解。
HE染色法
苏木素 1克
碘酸钠 0.2克
钾明矾 50克
水合氯醛 50克
蒸馏水 1000ml
柠檬酸 1克
将苏木素及碘酸钠用蒸馏水加温溶解,呈樱 桃红色,再加入钾矾, 使溶液变为兰紫色,煮沸5min后,再加入水合氯醛搅拌,此时液体变为红紫色,溶解完后加入柠檬酸,取下冷却,滤过后即可使用。此液能长久保存。
(三)Harris氏苏木素液:
苏木素 0.9克 铵明矾(或钾)20克
甲液 无水酒精 10ml 乙液 蒸馏水 200ml
一氧化汞 0.5～1克
甲、乙两液分别溶解,然后两液混合,加热熬沸,再加入一氧化汞, 以玻棒搅至溶液呈深紫色,置于凉水中急速冷却,静置一夜后,滤过密封保存。用前若加入少许5%冰醋酸,则染色效果更好。此液经2～3个月后,着色力减退,故宜少配。
(3)入苏木素染液,1%盐酸分化,水洗 兰化;
(4)入0.5～1%酸性复红液5～30min,水洗 至红色不退;
(5)蒸馏水洗30秒钟以上,入买洛里氏染色液20min,流水冲洗2～5min;
Devil入95%酒精分化,入无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。
结果:胶元纤维, 网状纤维呈深红色、粘液、淀粉样物呈淡兰色,纤维素、 肌纤维、胶质纤维酸性颗粒呈红色.红细胞、髓鞘呈红色,细胞核呈兰色。
3.移入90%酒精中(二瓶),约2min。
4.移入80%酒精中(二瓶),约2min。
5.移入70%酒精中,约2min。
6.移入水中,洗去酒精,约2～3min。
7.移入蒸馏水中,约2min。
(二)染色:
1.移入苏木素中,浸染8～15min,一般以稍深染为宜。
2.移入水中,洗去苏木素和浮色,约1～2min。
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HE染色法是苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）的首个字母缩写。
苏木精是碱性染料，使细胞核染色质和胞质内的核糖体呈紫蓝色。
伊红是酸性染料，使细胞质和细胞外基质中带较强碱基的蛋白质成份着红色。
常规he染色步骤：
(1)二甲苯（Ⅰ）15min
(2) 二甲苯（Ⅱ）15 min
（3）二甲苯：无水乙醇=1:1 2min
(4)100%乙醇（Ⅰ）5min
(5)100%乙醇（Ⅱ）5 min
(6)80%乙醇5min
(7)蒸馏水5 min
(8)苏木精液染色5 min
(9) 流水稍洗去苏木精液1-3 s
(10) 1%盐酸乙醇1-3 s
(11) 稍水洗10-30 s
(12)蒸馏水过洗1-2 s
(13) 0.5%伊红液染色1-3 min
(14) 蒸馏水稍洗1-2 s
(15) 80%乙醇稍洗1-2 s
(16) 95%乙醇（Ⅰ）2-3 s
(17) 95%乙醇（Ⅱ）3-5 s
(18) 无水乙醇5-10 min
(19) 石炭酸二甲苯5-10 min
(20) 二甲苯（Ⅰ）2 min
(21) 二甲苯（Ⅱ）2 min
(22) 二甲苯（Ⅲ）2 min
(23) 中性树胶封固
注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。
②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
冷冻切片HE染色步骤：
（1）冰冻切片固定10～30 s
（2）稍水洗1～2 s
（3）苏木精液染色（60℃）30～60 s
（4）流水洗去苏木精液5～10 s （5）1%盐酸乙醇1～3 s （6）稍水洗1～2 s
（7）促蓝液返蓝5～10 s （8）流水冲洗15～30 s （9）0.5%曙红液染色30～60 s （10）蒸馏水稍洗1～2 s （11）80%乙醇1～2 s （12）95%乙醇1～2 s （13）无水乙醇1～2 s （14）石炭酸二甲苯2～3 s （15）二甲苯（Ⅰ）2～3 s （16）二甲苯（Ⅱ）2～3 s （17）中性树胶封固。