化学发光法-定量试剂盒
Cobase电化学发光免疫分析仪用户操作手册
cobas e411（Disk）操作手册 罗氏诊断产品（上海）有限公司广州分公司 第一章 一． 二． 三． 四． 五． 第二章 一． 二． 1． 2． 3． 三． 1． 2． 3． 四． 第三章 一． 二． 三． 四． 五． 第四章 一． A：操作开关 置）
C ：测试区 D ：消耗品区 E ：显示及控制单元 位于仪器右侧面 位于仪器左侧面 A ：主电源开关 B ：电源线 A ：USB 接口 C ：HOST 接口 二． 控制单元 三． 样品／试剂区 A ：取样区 B ：样品盘保护盖 A ：磁珠搅拌针 B ：冲洗站 C ：样本/试剂针 四． 测试区 A ：孵育池（共32个孵育位） B ：吸样位 B A ：触摸屏 B ：虚拟键盘（触摸屏幕 上需输入内容区域 时，自动在屏幕下方 跳出） C ：数字键盘 A ：定标/质控条形码阅读口 B ：带开关盖装置的试剂仓 （18个位置） C B
A ：系统试剂保护门 B ：Sipple 针 C ：CleanCell （黑盖） D ：ProCell （白盖） 五． 消耗品区 废吸头/反应杯盒 A ：蒸馏水桶 B ：废液桶 第二章 基本操作 一． 开机 a ． 检查蒸馏水桶，将SysWash 浓缩液配置 为1:100的系统用水 b ． 清空废液桶 c ． 打开ProCell 和CleanCell 盖子，关好系统试剂保护门。 注意：运行过程中不能打开系统试剂保护门，否则仪器将停止运行。 d ． 打开仪器右面主电源开关，再打开仪器前面操作开关，等界面出现后，录入用户名和 密码，仪器自动初始化后进入待机状态 注意：仪器分不同级别及权限使用，可根据实际情况设定；添加用户名后，第 一次输入的密码即为以后的密码。 e. 待仪器进入待机后清空废吸头/反应杯盒。 二． 准备工作 仪器进入待机后，进行每日工作前准备。 1． 清除前日标本记录 B B D C A ：吸头位1-2 B ：反应杯位3-5 C ：吸头丢弃位 D ：反应杯丢弃位 A B A ：抓手 B ：抓手移动时的横纵轴 C ：吸头/反应杯区1（120个吸头，60个反应杯） D ：吸头/反应杯区2（120个吸头，60个反应杯） E ：吸头/反应杯区3（120个吸头，60个反应杯）
化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品技术审评要求规范(2017版)1204
化学发光免疫类体外诊断试剂（盒）产品技术审评规范（2017版） 本规范旨在指导注册申请人对化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本规范是对化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品的一般要求，申请人应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化，并依据产品特性确定其中的具体内容是否适用。 本规范是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本规范。 本规范是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本规范相关内容也将进行适时调整。 一、适用范围 本规范适用于利用化学发光免疫分析技术对被测物质进行定量检测的第二类体外诊断试剂（包括以微孔板、管、磁颗粒、微珠和塑料珠等为载体的酶促及非酶促化学发光免疫分析测定试剂）的注册技术审查。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号，以下简称《办法》）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管
〔2013〕242号）化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品分类代号为6840。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、临床意义、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。 （二）主要原材料研究资料（如需提供） 主要原材料（例如各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等标记用酶、磁微粒及其他主要原料）的选择、制备、质量标准及实验验证研究资料；校准品、质控品的原料选择、制备、赋值过程及试验资料；校准品的溯源性文件，包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料。 （三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供） 1.主要生产工艺介绍，包括工作液的配制、分装和冻干,固相载体的包被和组装，发光系统等的描述及确定依据等，可以图表方式表示； 2.反应原理介绍； 3.确定反应所需物质及其用量（校准品、样本、试剂等）的研究资料； 4.确定反应最适条件研究（反应条件、校准方法、质控
Cobase电化学发光免疫分析仪用户操作手册
cobas e411（Disk）操作手册罗氏诊断产品（上海）有限公司广州分公司 第一章 一． 二． 三． 四． 五． 第二章 一． 二． 1． 2． 3． 三． 1． 2． 3． 四． 第三章 一． 二． 三． 四． 五． 第四章 一． A：操作开关 B） C：测试区 D 位于仪器右侧面 A：主电源开关 B：电源线 A：USB接口 C：HOST接口 二．控制单元
三． 样品／试剂区 A ：取样区 B ：样品盘保护盖 A ：磁珠搅拌针 B ：冲洗站 C ：样本/试剂针 四． 测试区 A ：孵育池（共32个孵育位） B ：吸样位 A ：系统试剂保护门 B ：Sipple 针 C ：CleanCell （黑盖） D ：ProCell （白盖） B A ：触摸屏 B ：虚拟键盘（触摸屏幕 上需输入内容区域 时，自动在屏幕下方 跳出） C ：数字键盘 A ：定标/质控条形码阅读口 B ：带开关盖装置的试剂仓 （18个位置） C B
五． 消耗品区 废吸头/反应杯盒 A ：蒸馏水桶 B ：废液桶 第二章 基本操作 一． 开机 a ． 检查蒸馏水桶，将SysWash 浓缩液配置为1:100的系统 用水 b ． 清空废液桶 c ． 打开ProCell 和CleanCell 盖子，关好系统试剂保护门。 注意：运行过程中不能打开系统试剂保护门，否则仪器将停止运行。 d ． 打开仪器右面主电源开关，再打开仪器前面操作开关，等界面出现后，录入用户名和密码，仪器自动初始 化后进入待机状态 注意：仪器分不同级别及权限使用，可根据实际情况设定；添加用户名后，第 一次输入的密码即为以后的密码。 e. 待仪器进入待机后清空废吸头/反应杯盒。 二． 准备工作 仪器进入待机后，进行每日工作前准备。 1． 清除前日标本记录 定标： 1．录入定标物参数（扫描定标物BC 卡）： 将BC 卡插入扫描位2．分配定标品位置 a ：使用定标瓶上条形码 直接将定标瓶放上标本盘，并将定标瓶上的条码对准读码器即可。 b ．手工安排定标品位置 B A ：吸头位1-2 B ：反应杯位3-5 C ：吸头丢弃位 D ：反应杯丢弃位 A B A ：抓手 B ：抓手移动时的横纵轴 C ：吸头/反应杯区1（120个吸头，60个反应杯） D ：吸头/反应杯区2（120个吸头，60个反应杯） E ：吸头/反应杯区3（120个吸头，60个反应杯）
化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品技术审评规范(2017版)1204
化学发光免疫类体外诊断试剂（盒）产品技 术审评规范（2017版） 本规范旨在指导注册申请人对化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本规范是对化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品的一般要求，申请人应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化，并依据产品特性确定其中的具体内容是否适用。 本规范是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本规范。 本规范是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本规范相关内容也将进行适时调整。 一、适用范围 本规范适用于利用化学发光免疫分析技术对被测物质进行定量检测的第二类体外诊断试剂（包括以微孔板、管、磁颗粒、微珠和塑料珠等为载体的酶促及非酶促化学发光免疫分析测定试剂）的注册技术审查。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号，以下简称《办法》）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕
242号）化学发光免疫类体外诊断试剂(盒)产品分类代号为6840。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、临床意义、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。 （二）主要原材料研究资料（如需提供） 主要原材料（例如各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等标记用酶、磁微粒及其他主要原料）的选择、制备、质量标准及实验验证研究资料；校准品、质控品的原料选择、制备、赋值过程及试验资料；校准品的溯源性文件，包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料。 （三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供） 1.主要生产工艺介绍，包括工作液的配制、分装和冻干,固相载体的包被和组装，发光系统等的描述及确定依据等，可以图表方式表示； 2.反应原理介绍； 3.确定反应所需物质及其用量（校准品、样本、试剂等）的研究资料； 4.确定反应最适条件研究（反应条件、校准方法、质控方法）；
磁微粒子化学发光法测定AFP
磁微粒子化学发光法测定AFP、CEA的应用 关键词】癌胚抗原 【摘要】目的研究磁微粒子化学发光酶免疫法检测的可靠性及方法学评价。方法利用磁微粒子化学发光法检测血清AFP、CEA，并进行精密度、灵敏度、特异性、回收率方面的探讨。结果化学发光法测定AFP的线性范围0.30～1380μg/L，CEA的线性范围0.51～1067μg/L。测定AFP的批内精密度CV值为1.16%～3.53%，批间为1.49%～4.67%;CEA的批内精密度CV值为0.87%～4.47%，批间为1.92%～4.71%。AFP的最低检测限度0.30μg/L;CEA 的最低检测限度0.51μg/L。AFP的回收率97.7%～99.0%;CEA的回收率98.4%～101.65%。黄疸、脂血、溶血对AFP、CEA的测定无明显影响。结论磁微粒子化学发光酶免疫法在病人结果可报告范围宽、精密度好、灵敏度高、特异性高、抗干扰能力强。 【关键词】磁微粒子化学发光甲胎蛋白癌胚抗原 近十年来通过不断改进和发展，使化学发光免疫分析成为非放射性标记免疫分析中最有前途的方法之一。测定时间短，无放射污染等特点，广泛应用在临床和科研［1］。甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA）是最常用的肿瘤标志物之一。它们的测定有助于肿瘤病人的诊断、治疗及术后疗效观察。BECKMAN COULTER公司生产的ACCESS型免疫分析仪，即全自动微粒子化学发光免疫分析系统。我们用此法对血清中的AFP和CEA的测定，作了精密度、分析灵敏度、回收试验及干扰试验等实验，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 仪器美国BECKMAN COULTER公司生产的ACCESS型全自动化学发光免疫分析仪。 1.2 试剂 AFP和CEA试剂盒由BECKMAN COULTER公司提供配套试剂。 1.3 方法按仪器操作手册，用配套试剂盒测定定值、样品。数值在标定值允许的范围内，继续做精密度、灵敏度、回收试验和干扰试验等相关实验。 2 结果 2.1 精密度采取批内和批间差异来确定。分别取AFP和CEA高、中、低浓度各三份混合血清标本，其中一半重复测定20次，计算均值、方差，及批内CV值。另外一半分成20份，装入塑料离心管置于-20℃冰箱，每天1次连续测定20天，计算均值、方差及批间CV 值。结果见表1。 表1 AFP和CEA批内、批间变异值（略）
促肾上腺皮质激素(ACTH)测定试剂盒(电化学发光免疫分析法)产品技术要求北京联众泰克
促肾上腺皮质激素(ACTH)测定试剂盒（电化学发光免疫分析法） 适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人体血清样本中促肾上腺皮质激素（ACTH）的含量。 1.1包装规格：50人份/盒、100人份/盒。 1.2主要组成成分 试剂盒由磁分离试剂（M）、试剂a（Ra）、试剂b（Rb）和定标品（ACTH-Cal）（选配）组成。组成及含量见下表： 注：1、定标品靶值批特异，详见靶值单。 2、试剂盒条码卡内含主校准曲线。 2.1 外观 2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏； 2.1.2 磁分离试剂摇匀后应为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集、无絮状物； 2.1.3 其它液体组分应澄清，无异物，沉淀物或絮状物； 2.1.4 包装标签应清晰、无磨损、易识别。 2.2 空白限
应不大于1.0pg/mL。 2.3 准确度 将已知浓度的ACTH标准溶液加入到血清中，其回收率应在(85%～115%)范围内。 2.4 线性 在[3.00，2000.0]pg/mL范围内，线性相关系数（r）应不小于0.9900。 2.5 精密度 2.5.1 重复性 在试剂盒的线性范围内，测定高、低两个水平的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于8%。 2.5.2 批间差 在试剂盒的线性范围内，用3个批号试剂盒分别测定高、低两个水平的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于15%。 2.6 效期末稳定性 本产品效期为15个月，试剂盒在2～8℃下保存至有效期末进行检测，检测结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1的要求。 2.7 溯源性 依据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求提供促肾上腺皮质激素（ACTH）定标品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，定标品溯源至企业工作校准品。
化学发光免疫分析法自己整理
化学发光免疫分析法(CLIA) A、管式磁性微粒子化学发光免疫分析法: (竞争法:用标记抗原与待检抗原竞争性结合固相抗体,待检抗原与检测信号成反比) 一、原理:本实验采用竞争法,酶标抗原与标准品抗原竞争抗体,标准品抗原浓度越大,结合到抗体上的酶标抗原越少,RLU越小,B/B 值越小。例:A为一种抗原 小分子,有免疫反应性。实验中采用竞争法对尿液中的A进行分析,使待测A、辣根过氧化物酶标记的A(A-HRP)在均相体系中与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗A 抗体(FITC-A抗体)发生竞争性免疫反应,再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒,反应生成物结合在磁微粒上,在磁场经分离、洗涤后加发光底物,用冷光分析仪检测发光强度(RLU),测定尿液中A的含量。 二、仪器: 1、Flash’n glow LB955 30 管全自动进样冷光分析仪(Berthold 公司); 2、高速离心机(Beckman 公司), 转速13000 r/min 3、磁性分离器(北京科美生物技术有限公司定制, 磁场强度2800 高斯) 4、XW80 旋涡混合器(上海精科实业有限公司)
5、试管12 × 60 mm(浙江拱东医用塑料厂) 6、磁性微粒子(磁性分离剂, Adaltis 公司) 三、试剂 1、A标准品 2、A单克隆抗体 3、A-BSA结合物 4、抗FITC抗体包被的磁性微粒子(5mg/mL) 5、FITC标记的A单克隆抗体 6、HRP标记的A 7、PBST 洗涤液(0、05mol/L PBS, 含0、05% Tween-20) 8、分析缓冲液(0、05 mol/L 的PBS 缓冲溶液, pH 7、4, 含2、0%BSA、0、5 %的水解明胶、0、1%的Proclin-300) 9、发光底物液(鲁米诺、过氧化氢与对碘苯酚溶液) 实验用水为二次蒸馏水 四、试剂处理 1、用分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释标准品; 2、取A-BSA-HRP溶液, 以分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000 的A-BSA-HRP 溶液,4 ℃保存、 FITC-A单克隆抗体溶液的配制: 取FITC-A单克隆抗体溶液, 以分析缓冲液为稀释液,梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000、1:10000、1:12000 的FITC-A单克隆抗体溶液, 4 ℃保存。(具体分析) 五、数据处理 通过测量标准品与样品溶液的发光强度(RLU),使用Fl ash’n glow LB955 发光分析仪自带软件中的数据处理程序对测得的数据进行处理、线性方程采用的就是logit(Y)-log(X)的线性回归数学模型, 以logitY 为纵坐标, logX 为横坐标, 其线性方程表达式为logit(Y) = a + blog(X), 线性方程中 X 为标准品(或待测样品)溶液的浓度, logit(Y) =ln(y/1-y),y=B/B0,式中, B 为标准品(或待测样品)溶液的发光强度, B0 为不加标准品(或待测样品)而加分析缓冲液的发光强度、根据标准品的浓度与发光强度值, 经线性回归得标准曲线, 代入样品
促甲状腺激素(TSH)测定试剂盒(电化学发光免疫分析法)产品技术要求lianzhongtaike
促甲状腺激素（TSH）测定试剂盒（电化学发光免疫分析法） 组成： 适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人体血清样本中促甲状腺激素（TSH）的含量。 2.1 外观 2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏； 2.1.2 磁分离试剂摇匀后应为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集、无絮状物； 2.1.3 其它液体组分应澄清，无异物，沉淀物或絮状物； 2.1.4 包装标签应清晰、无磨损、易识别。 2.2 空白限 应不大于0.01μIU/mL。 2.3 准确度 用TSH国家标准品（150530）进行检测，其测量结果的相对偏差应在±10%范围内。 2.4 线性 在[0.01,100.0]μIU/mL范围内，线性相关系数（r）应不小于0.9900。 2.5 精密度
2.5.1 分析内精密度 在试剂盒的线性范围内，浓度为（5.0±1.0μIU/mL）和（30.0±6.0μIU/mL）的样品检测结果的变异系数（CV）应不大于8%。 2.5.2 批间精密度 在试剂盒的线性范围内，用3个批号试剂盒分别检测浓度为（5.0±1.0μIU/mL）和（30.0±6.0μIU/mL）的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于15%。2.6 特异性 2.6.1 与促卵泡生成激素（FSH） 浓度不低于200mIU/mL促卵泡生成激素（FSH）样品，在本试剂盒测定结果应不大于0.01μIU/mL； 2.6.2 与促黄体生成素（LH） 浓度不低于200mIU/mL促黄体生成素（LH）样品，在本试剂盒测定结果应不大于0.01μIU/mL； 2.6.3 与人绒毛促性腺激素（HCG） 浓度不低于1000mIU/mL人绒毛膜促性腺激素（HCG）样品，在本试剂盒测定结果应不大于0.01μIU/mL。 2.7 效期末稳定性 本产品效期为15个月，试剂盒在2～8℃下保存至有效期末进行检测，检测结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1的要求。 2.8 溯源性 依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至TSH国家标准品（编号150530）。
UltraECL底物化学发光检测试剂盒说明书
◆UltraECL底物化学发光检测试剂盒◆目录号1924 ◆使用手册 ◆实验室使用，仅用于体外
UltraECL底物化学发光检测试剂盒目录号：1924 目录编号包装单位 192401 50ml （A液B液各25ml） 192402 100ml （A液B液各50ml） 192403 500ml （A液B液各250ml） 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50ml 100ml 500ml 溶液A 4℃避光25 ml 50 ml 250 ml 溶液B 4℃避光25 ml 50 ml 250 ml 本产品收到后按照上面指示温度存放，至少6个月内有效。
产品介绍： Western blot底物发光检测试剂可由标记于二抗上的辣根过氧化酶催化，产生化学发光反应，可以灵敏地检测出目的蛋白的存在。UltraECL底物化学发光检测试剂盒基于新一代增强型化学发光底物研制而成，并对成份做了优化。产品背景低，稳定性好，比普通ECL试剂敏感度高数十倍。它由辣根过氧化物酶(HRP)催化发生化学反应，发出荧光，可对X光胶片曝光，也可直接进行luminometer检测或者荧光CCD扫描。 操作步骤： 1.按常规Western blot操作，二抗孵育后，进行最后一次洗涤时，根据膜的大小，按 每10cm2膜混合0.5ml溶液A和0.5ml溶液B，混匀，配制成发光检测工作液。 2.用平头镊子将膜取出，膜的下缘轻轻接触吸水纸，以去除膜上多余的液体。膜的 蛋白面朝上，置于洁净保鲜膜（某些市售保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜）上。用吸管将配制的发光检测液转移到蛋白膜上，使其均匀覆盖，室温孵育1-2分钟。 3.用平头镊夹持蛋白膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，以去除膜上多余的液体。膜的 蛋白面朝上，包裹于洁净保鲜膜内。轻轻赶出其间的气泡，固定在X片暗盒内。 4.在暗室中取一张X片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30秒至1分钟。立即显影定 影，根据其曝光强度，缩短或延长下一张X片的曝光时间（对微弱信号，曝光时间可延长至数小时）,或者曝光0.5，1，2，4，6分钟一系列后再显影定影挑选一张满意的。也可用合适的照相器材直接记录蛋白膜的化学发光图像。 注意：如果储存使用时间过长，溶液B中过氧化氢可能随时间分解降低曝光敏感度，可取普通纯水按照每10ml纯水加入40μl 30％H202（商品化的H202一般为30％）比例配成新鲜H202溶液替代溶液B使用，可以完全恢复发光工作液最大发光敏感度，效果和新鲜的溶液B完全一样。
化学发光免疫分析法-自己整理
化学发光免疫分析法（CLIA） A、管式磁性微粒子化学发光免疫分析法： （竞争法：用标记抗原与待检抗原竞争性结合固相抗体，待检抗原与检测信号成反比） 一、原理：本实验采用竞争法，酶标抗原与标准品抗原竞争抗体，标准品抗原浓度越大，结合到抗体上的酶标抗原越少，RLU越小，B/B0值越小。例：A为一种抗原小分子，有免疫反应性。实验中采用竞争法对尿液中的A进行分析，使待测A、辣根过氧化物酶标记的A(A-HRP)在均相体系中与异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗A抗体（FITC-A抗体）发生竞争性免疫反应，再加入用羊抗FITC抗体包被的磁微粒，反应生成物结合在磁微粒上，在磁场经分离、洗涤后加发光底物，用冷光分析仪检测发光强度（RLU），测定尿液中A的含量。 二、仪器：
1、Flash’n glow LB955 30 管全自动进样冷光分析仪(Berthold 公司); 2、高速离心机(Beckman 公司), 转速13000 r/min 3、磁性分离器(北京科美生物技术有限公司定制, 磁场强度2800 高斯) 4、XW80 旋涡混合器(上海精科实业有限公司) 5、试管12 × 60 mm(浙江拱东医用塑料厂) 6、磁性微粒子(磁性分离剂, Adaltis 公司) 三、试剂 1、A标准品 2、A单克隆抗体 3、A-BSA结合物 4、抗FITC抗体包被的磁性微粒子（5mg/mL） 5、FITC标记的A单克隆抗体 6、HRP标记的A 7、PBST 洗涤液(0.05mol/L PBS, 含0.05% Tween-20) 8、分析缓冲液(0.05 mol/L 的PBS 缓冲溶液, pH 7.4, 含2.0%BSA、0.5 %的水解明胶、0.1%的Proclin-300) 9、发光底物液(鲁米诺、过氧化氢和对碘苯酚溶液) 实验用水为二次蒸馏水 四、试剂处理 1、用分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释标准品； 2、取A-BSA-HRP溶液, 以分析缓冲液为稀释液, 梯度稀释, 配制1:1000、1:2000、1:5000 的A-BSA-HRP 溶液,4 ℃保存. FITC-A单克隆抗体溶液的配制:
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(化学发光法)
【药品名称】 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（化学发光法） 【英文或拉丁名】 CLIA Diagnostic Kit for Hepatitis B Surface Antigen 【汉语拼音】 YI XING GAN YAN BING DU BIAO MIAN KANG YUAN HUA XUE FA GUANG ZHEN DUAN SHI JI HE 【试剂盒组成】 1.检测HBsAg用发光固相板 8孔×12条 2.检测HBsAg用发光标记物12ml×1瓶 3.HBsAg阴性对照1ml×1瓶 4.HBsAg阳性对照1ml×1瓶 5.发光底物A液6ml×1瓶 6.发光底物B液6ml×1瓶 7.浓缩洗涤液（使用前用纯化水稀释至700ml）35ml×1瓶 【用途】 适用于体外血清、血浆中乙肝表面抗原定性检测。 【检测原理】 采用单克隆抗-HBs包被发光固相板加入待检样品反应后，再加发光标记多克隆抗-HBs应用双抗体夹心法原理检测人血清或血浆中的HBsAg。用鲁米诺化学发光系统做发光底物进行发光反应。 【仪器】 1. 化学发光测定仪 2. 微孔洗板机 【样本要求】 血清或血浆应新鲜，无溶血，无微生物污染，如不能及时检测样本可在零下18-25℃储存6个月。 【操作步骤】 1.取出试剂盒，平衡至室温。按1:1比例混合发光底物A、B液，避光待用。混合后底物放置时间不超过8小时。
2.加阴性对照3孔，阳性对照2孔及待检标本至预包被发光固相板各相应孔内，100μl/孔，置37℃水浴箱中温育30分钟。 3.用自动洗板机，洗涤5次，在干净吸水纸上拍干。 4.每孔加检测HBsAg用发光标记物100μl，置37℃水浴箱中温育30分钟。 5.用自动洗板机，洗涤5次，在干净吸水纸上拍干。 6.每孔加混合发光底物液100μl，在室温中避光放置10分钟读取各孔RLU。 【结果判定】 Cutoff＝RLU阴性对照×2.1。 阳性结果：样本RLU≥Cutoff 阴性结果：样本RLU当阴性对照RLU不足500时按500计算，超过500时按实际RLU 计算 【注意事项】 1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡30分钟以上。试剂使用前请振荡摇匀。每次测试后，剩余试剂请及时于2-8℃保存，一周内用完。 2.请按需配制底物，混合底物放置时间不超过8小时。 3.确保待测标本无溶血无污染，忌反复冻融，勿用NaN3防腐。 4.自动洗板时应保证每次洗涤后其孔中洗涤液残留液不大于5μl。 5.浓缩洗涤液若有结晶时，请置37℃溶解后再行稀释。 6.所有样品应按传染源处理。 7.不同批号的试剂不能混用。 【局限性】 本产品只用于血清、血浆等样品检测，不适用于全血的检测。 【规格】 96人份/盒 【贮藏】 于2-8℃避光保存。 【包装】 塑料瓶、玻璃瓶及铝箔袋。 【有效期】 有效期为6个月。
化学发光项目检测临床意义
化学发光项目临床意义 定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。2、定量分析HBsAg和抗-HBs的浓度变化，可以预见急性乙肝是否处于恢复期。3、定量分析HBeAg和抗-HBe的浓度变化，可以反映病情变化和治疗效果。4、抗-HBc 浓度的高低可以反映病毒感染的状态。高浓度的抗-HBc提示乙肝急性或现行感染，常与HBsAg并存，恢复期浓度降低。慢性乙肝呈抗-HBc持续高浓度。而低浓度的抗-HBc一般为恢复期或既往感染，常于抗-HBs并存，无肝损害或肝损害早已静息。5、急性乙肝一般会在六个内病情缓解，甚至自愈。病情超过六个月仍未缓解者，多转为慢性化，通过五项联合定量分析，可以对病情的发展做出预测及制定相应的治疗方案。即若表现为HBeAg下降、抗-HBe 出现或渐升，HBsAg和HBV DNA血清水平降低，这是病变恢复的时相，可望在1-2年病毒被清除而疾病痊愈；若HBeAg和HBV DNA 血清水平持续很高的病人，预期可能保留慢性无症状携带（AsC）或慢性乙型肝炎。 产品特点：化学发光定量检测HBsAg灵敏度可达0.05-0.1ng/ml，而酶免（ELISA）检测HBsAg灵敏度是0.5-1.0ng/ml，胶体金（POCT）检测HBsAg灵敏度是1-5ng/ml，也就是说只有血清中的HBsAg达到0.5-5ng/ml酶标或胶体金才会呈阳性反应。使用化学发光法提高了灵敏度，大大缩短了窗口期。 乙型肝炎病毒前S1抗原： 人体感染乙型肝炎病毒后，最早的免疫应答就是针对前S1抗原的。由于前S1抗原的出现在HBV感染的最早期，因而可以起到早期诊断的作用。前S1蛋白在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面起有十分重要作用，前S1抗原（Pre-S1Ag）检测是对乙肝“两对半”尤其是e抗原和HBV-DNA测定的重要补充和加强。 产品特点：支持28天定标功能及急诊功能，可以敏感的反映乙肝病毒复制，可作为早期诊断乙肝病毒感染的较好指标，前S1蛋白与HBV的复制指标HBV-DNA有较好的一致性，但与HBV-DNA相比，操作简单，价格低廉，试验要求不高。
化学发光微粒子免疫分析法在HIV检测中假阳性的应用分析
化学发光微粒子免疫分析法在HIV检测中假阳性的应用分 析 唐春雪;杨涛;赵静;朱琳 【期刊名称】《医药前沿》 【年(卷),期】2018(008)015 【摘要】目的:在HIV检测中应用化学发光微粒子免疫分析法,分析假阳性的发生情况.方法:选择HIV检测的16263例患者,化学发光微粒子免疫分析法检测.结果:16263例HIV检测的患者经化学发光微粒子免疫分析法检测,筛查出阳性标本54例,阳性检出率为0.33％;之后,经免疫印迹法检测,确定有阳性标本37例(阳性检出率为0.23％),8例为阴性和9例为不确定.结论:化学发光微粒子免疫分析法在HIV检测中的假阳性率较高,需要结合多种试验结果进行综合诊断.%Objective To analyze the occurrence of false positive by chemiluminescence microparticle immunoassay in HIV detection. Methods 16263 HIV patients were detected by chemiluminescence microparticle immunoassay. Results In 16263 HIV patients, 54 positive samples were screened by chemiluminescence microparticle immunoassay, the positive rate was 0.33 ％. After that, 37 positive specimens were identified by western blotting (positive detection rate was 0.23 ％), 8 were negative and 9 were uncertain. Conclusion Chemiluminescence microparticle immunoassay has a high false positive rate in HIV detection, which needs to be combined with various test results for comprehensive diagnosis.
电化学发光免疫法
一、概念 发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassayECLI)。ECLI 是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术。电化学发光法源于电化学法和化学发光法，而ECLI 是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，包括了电化学和化学发光二个过程。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于／RNA探针检测。 二、反应底物 ECL 反应底物有两种： 1.三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3] 2+络合物： 钌(Ruthenium Ru)，原子序数44，原子量101.07。元素名来自拉丁文，原意是“俄罗斯”。1827年俄国化学家奥赞在铂矿中发现钌；1844年俄国化学家克劳斯肯定它是一种新元素。钌在地壳中的含量约为十亿分之一，是铂系元素中含量最少的一个。钌常与其它铂系元素一起分散于冲积矿床和砂积矿床中。钌有7种天然稳定：钌96、98、99、100、101、102、104。钌为银白色金属，熔点2310℃，沸点3900℃，密度12.37×103/m3 。 钌的化学性质不活泼，在空气和潮湿环境中稳定；不溶于酸和王水，溶于熔融的强碱、碳酸盐、氰化物等；到900℃，时能与氧反应；加热时能与氟、氯、溴反应；钌有形成配位的强烈倾向，还有良好的催化性能。 钌是铂和钯的有效硬化剂；金属钛中加入0.1%的钌就可大大提高耐腐蚀性；钌钼合金是一种超导体；含钌的催化剂多用于石油化工。 2.三丙胺(Tripropylamine，TPA) 三、电化学发光反应原理 电化学反应过程：在工作电极上(阳极)加一定的电压能量作用下，二价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy)3]2+ 释放电子发生氧化反应而成为三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+，同时，电极表面的TPA也释放电子发生氧化反应而成为阳离子自由基 TPA+ ，并迅速自发脱去一个质子而形成三丙胺自由基 TPA·，这样，在反应体系中就存在具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+和具有强还原性的三丙胺自由基 TPA·。 化学发光过程：具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+和具有强还原性的三丙胺自由基 TPA·发生氧化还原反应，结果使三价的三氯联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+ 还原成激发态的二价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+，其能量来源于三价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+与三丙胺自由基 TPA·之间的电势差，激发态 [Ru(bpy)3]2+以荧光机制衰变并以释放出一个波长为 62Onm 光子的方式释放能量，而成为基态的[Ru(bpy)3]2+。 循环过程：上述化学发光过程后，反应体系中仍存在二价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+和三丙胺(TPA)，使得电极表面的电化学反应和化学发光过程可以继续进行，这样，整个反应过程可以循环进行。 通过上述的循环过程，测定信号不断的放大，从而使检测灵敏度大大提高，所以 ECL 测定具有高灵敏的特点。
甲型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒说明书
甲型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒说明书 Elecsys Anti-HAV Elecsys 2010/MODULAR ANALYTICS E170 11820605 100人份 【名称】 通用名：甲型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒 英文名：Elecsys Anti-HAV 汉语拼音：Jia xing gan yan bing du kang ti dian hua xue fa guang jian ce shi ji he 【使用目的】 用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的甲型肝炎病毒总抗体。甲型肝炎病毒抗体检测有助于检测过去或现在的甲肝病毒感染，观察甲肝疫苗注射后的免疫反应。 电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys2010和MODULAR ANALYTICS E170免疫测定分析仪。 【概述】 甲肝病毒是一种没有胞膜的RNA病毒。它属于细小的核糖核酸病毒家族。至今，仅1种人血清型和7种基因型被记述。病毒衣壳由三种蛋白 (VP1-VP3) 组成，在病毒颗粒表面形成一个免疫决定簇结构，它被高度表达在所有基因型。在注射疫苗后或正常感染后这个结构诱发免疫反应1。 甲型肝炎是最普通的急性病毒性肝炎，通过消化道传播。这种肝炎不会发展成慢性肝炎，病毒也不会持续存在组织中2。 甲型肝炎病毒是引起病毒性肝炎爆发流行的最常见原因(10-20%)3。 甲型肝炎感染发作时总的甲型肝炎抗体呈阳性。在自然感染后，抗HAV-IgG抗体能够终生存在，如果组织再次感染会对机体起到保护作用4。 现在已经有甲肝病毒疫苗和甲肝和乙肝混合疫苗5。在注射甲肝疫苗后, 抗HAV-IgG抗体两周后就可以检测到。在完全免疫过程中，这种保护作用可以持续很多年6。免疫保护作用对于抗体值没有限定，但是抗HAV浓度在10-20IU/L以上对机体有保护作用。 抗HAV抗体检测用于检查甲型肝炎病毒存在或过去感染过。同时也用于观察甲肝疫苗注射后的免疫反应。 【原理】 竞争法：总检测时间18分钟。 ·第1步孵育：50μl标本；标本中的抗-HAV与HAV抗原结合。 ·第2步孵育：加入生物素化的和钌标记的抗HAV抗体以及链霉亲和素包被的微粒，HAV抗原上仍然游离的位点被占据。形成的免疫复合物通过生物素与链霉亲和 素间的反应结合到微粒上。 ·反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 ·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。 【试剂主要成份】 M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml： 链霉亲和素包被的微粒：0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng生物素/mg微粒。含防腐剂。 R1：HAV抗原（灰盖），1瓶，10ml： HAV抗原(人)：40U/ml（罗氏单位），HEPES缓冲液50mmol/l，pH7.2，含防腐 剂。 R2：生物素化的抗HAVAg抗体；Ru(bpy) 32+标记的抗HAV Ag－Ab（黑盖），1瓶， 10ml： 生物素化的抗HAVAg单克隆抗体(鼠)：0.25ug/ml；Ru(bpy) 32+标记的抗HAVAg 单克隆抗体(鼠)：0.15ug/ml；HEPES缓冲液50mmol/l，pH7.2，含防腐剂。 Cal 1 定标液1（白盖），2瓶，1.0ml/瓶：抗HAV阴性人血清, 含防腐剂。 Cal 2 定标液2（黑盖），2瓶，1.0ml/瓶, 抗HAV（人）浓度约46IU/L在人血清中, 含防腐剂。 【预防措施和警告】 仅用于体外诊断。 采用正确的预防措施，遵照实验室试剂使用规定。 所有废物的丢弃应遵循当地法规的要求。 定标液（Cal 1和Cal 2）制备使用的献血者血清经FDA批准的方法检定HB S Ag、HCV 抗体、HIV1＋2 抗体均为阴性。 含有Anti-HAV(定标液2)和HAV-Ag(人,R1)的血清使用β-丙稀内酯和UV射线低温消毒。 但由于任何实验方法都不能绝对地排除潜在感染的危险，故该产品仍需视作病人标本一样仔细处理。一旦泄漏，应遵循权威机构的指令7，8。
Western blotting ECL化学发光法检测试剂盒说明书
Western blotting ECL化学发光法检测试剂盒说明书 货号： SW2010Western blotting(小鼠IgG)ECL化学发光法显色试剂盒 SW2020Western blotting(兔IgG)ECL化学发光法显色试剂盒 SW2030Western blotting(山羊IgG)ECL化学发光法显色试剂盒 SW2040Western blotting(小鼠/兔IgG)ECL化学发光法显色试剂盒 SW2050Western blotting(人IgG)ECL化学发光法显色试剂盒 产品内容： 1.封闭试剂：30g(可配制600ml)。 2.10倍浓缩抗体稀释液，50ml。 3.HRP标记二抗，0.1ml，效价1：5000-10000。 4.ECL显色液，25ml A+25ml B。 保存： -20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL显色液存放于2-8℃以方便使用。 产品简介： SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。
操作步骤：(仅供参考) 常规电泳转膜后: 1)清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。 2)按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。 3)将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。 4)用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。 5)用TBS-T缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。 6)用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入1-2ul HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。 7)用TBS-T缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次10min。 8)根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1-5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。 注意事项：
电化学发光简介
1.1 电化学发光简介 近年来，电化学发光(ECL)作为一种高灵敏度和高选择性的分析方法已引起人们极大的究兴趣。电化学发光是指通过电化学方法来产生一些特殊的物质，然后这些电生的物质之间或电生物质与其它物质之间进一步反应而产生的一种发光现象。它是化学发光方法与电化学方法相互结合的产物。它保留了化学发光方法所具有的灵敏度高、线性范围宽、观察方便和仪器简单等优点；同时具有许多化学发光方法无法比拟的优点，如重现性好、试剂稳定、控制容易和一些试剂可以重复使用等优点，从而引起人们的注意。目前，ECL技术已广泛应用于免疫分析、核酸杂交分析和其他生化物质的测定，不仅大大推动了生物化学和分子生物学的研究，而且带来了临床诊断的又一次技术革命。 1.1.2 电化学发光反应原理 电化学发光分析是通过电极对含有化学发光物质的某化学体系施加一定的电化学信号（包括电压和电流），一直产生某种新物质，该物质能与体系中存在的化学物质反应或自身进行分解反应，反应不但提供足够的能量，而且还能产生合适的发光体并接受该反应的释放能量，形成激发态发光体，不稳定的激发态返回基态时便发出与该发光体性质相一致的发射光，用光电倍增管等普通光学手段测量发光光谱或发光强度从而对物质进行痕量分析。如果按激发态分子或离子产生的历程，可将电化学发光分为四种类型。[7-8] 1.1. 2.1 通过单重激发态途径的电化学发光（S-Route） 一般是在电极上施加一定的电压，是分子R在电压作用下氧化或还原产生R+或R-，然后，R+和R-互相反应产生单重激发态，激发态回到基态时发光。用方程式表示如下： R → R+ + e R + e → R- R- + R+→ 2R* R*→ R +hv 大多数芳香族化合物的电化学发光是按此机理进行。 1.1. 2.2 通过三重激发态途径的电化学发光（T-Route） 一般是在电极上施加一定的电压，使分子R在电压作用下氧化或还原产生R+或R-，然后，R+或R-互相反应产生三重激发态，激发态回到基态时发光，用方程式表示如下：