纤维素酶活力测定方法
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纤维素酶酶活测定纤维素酶活测定方法一、原理纤维素酶能将纤维素降解成纤维二糖和葡萄糖，具有还原性末端的纤维二糖糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可与DNS试剂发生显色反应。
反应颜色强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖量又与反应液中的纤维素酶的活力成正比。
酶活定义纤维素酶活力单位是指55℃、pH5.0的条件下，以每分钟催化羧甲基纤维素钠水解生成1μmol还原糖所需的酶量定义为一个酶活力单位U。
二、实验试剂羧甲基纤维素钠（聚合度1700-2000），内切纤维素酶（苏柯汉）50mmol NaAC-HAC、DNS试剂三、实验仪器容量瓶（1000ml ×2、500 ml×3、100 ml ×4、50ml×4 ml）、移液器、烧杯（500ml×3、50ml×3）、具塞试管、电热套、水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平四、标准曲线的绘制五、酶活测定由于苏柯汉给定的pH范围为4.8-5.2，故选用pH 5.0的50mmol NaAC-HAC缓冲液测定纤维素酶酶活。
1、样品的制备CMC-Na溶液的制备：用pH 5.0的50mmol NaAC-HAC缓冲液配置0.5%的CMC-Na （羧甲基纤维素钠）溶液，准确称量CMC-Na0.05g，精确至0.001g，溶于蒸馏水中，45℃水浴锅中搅拌溶解，冷却后定容至100ml。
纤维素酶液的制备：准确称取纤维素酶，精确到0.001g。
用50mmol NaAC-HAC pH5.0的缓冲液配置成适当的浓度10000倍，保证吸光度在0.2-0.6之间。
2、DNS法测酶活：取1.8ml 0.5% CMC-Na的溶液于25ml 具塞刻度试管中，55℃预热10min左右，加入0.2ml 适当稀释的酶液，于55℃水浴锅中保温30min后，然后加2ml DNS，混匀，沸水浴5min，冷却至室温，定容到25ml。
混匀测OD540nm。
纤维素酶的三种活力测定方法
纤维素酶的三种活力测定方法
纤维素酶是一种重要的酶类，具有分解纤维素的作用。
为了评估纤维素酶的活力，人们研究出了多种测定方法，其中较为常用的有以下三种：
1. 滴定法：将一定量的纤维素酶加入含有纤维素的溶液中，反应一定时间后，使用酸碱滴定法测定反应液的酸碱度变化，从而得出纤维素酶的活力。
2. 电泳法：将一定量的纤维素酶加入蛋白质凝胶中，进行电泳分离，然后在凝胶中添加含纤维素的溶液，观察纤维素的降解情况，从而得出纤维素酶的活力。
3. 显色法：将一定量的纤维素酶加入含有纤维素的溶液中，反应一定时间后，使用显色剂对反应液中的产物进行染色，然后利用分光光度计测定反应液的吸光度变化，从而得出纤维素酶的活力。
这三种测定方法各有优劣，研究者应根据实际需要选择合适的方法进行测定。
- 1 -。
两种常用纤维素酶活力测定方法滤纸酶活-CMC酶活
检测纤维素酶酶活力—滤纸酶活力(F PA)滤纸酶活力代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。
采用3，5一二硝基水杨酸法测定酶活：(简称DNS法)1、原理：纤维素经纤维素酶水解后生成还原糖，还原糖能将3，5一二硝基水杨酸中硝基还原成氨基，溶液变为橙色的氨基化合物，即：3一氨基一5二硝基水杨酸，在一定的还原糖浓度范围内，橙色的深度与还原糖的浓度成正比，据此可以推算出纤维素酶的活力。
2、采用的滤纸酶活单位定义：滤纸酶活反映了纤维素酶的3种水解酶，即内切型葡聚糖酶、外切型葡聚糖酶和β葡聚糖苷酶组成的诱导复合酶系的协同水解纤维素能力。
是该菌株整个纤维素酶系的酶活力水平的综合体现。
代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。
在此滤纸酶活单位定义为：以滤纸为底物，在一定反应条件(pH4.8，50℃，恒温lh)下，以水解反应中，1ml纤维素酶液1mi n催化纤维素生成lu g葡萄糖为1个滤纸酶活单位，以U表示。
3、滤纸酶活力(F PA)的测定：①取0．5ml适当稀释的酶液，加入PH值为4.8，0.1mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液l ml或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液lml；②再加入50±0.5mg滤纸(1cmx6c m)一条，于50℃保温酶解反应1小时，(先预热5分钟)；③加入DNS显色液3ml(标准曲线用量是1.5ml)，放入已沸腾的水中沸水浴l Omin，流水冷却后在540nm下测吸光度；④同时用100℃煮沸lOmi n后失活的酶液做对照，扣除本底；⑤根据吸光度从葡萄糖标准曲线中查出相应的葡萄糖含量，根据生成的葡萄糖克数计算出酶活值。
滤纸酶活按下面公式计算：X=（WxNxlO OO）／（TxM）X:为滤纸酶酶活力，单位U／mL。
纤维素酶活力的测定
目的本检测方法是用来确定本公司纤维素酶类的催化活性。
本方法适用于各种固体和液体纤维素酶制剂。
说明本方法适合于纤维素类酶的质量分析和质量控制领域。
但不是本公司产品及其它公司产品的绝对活力的预测，而各种酶制剂的最终的酶活力在良好的实验操作下仍可发挥出更好的催化活力。
原理纤维素被纤维素酶水解最终降解生成β-葡萄糖。
鉴于纤维素结构的复杂性，没有任何一种酶能将纤维素彻底水解。
1950 年Reese提出了C1-Cx概念。
C1是一水解因子，作用于纤维素的结晶区（如棉花纤维即为高度结晶性纤维），使氢键破裂，呈无定形可溶态，成为长链纤维素分子。
再由Cx最终催化形成还原性单糖。
而Cx通常包括：（1）内切葡萄糖苷酶(endo-1,4-β-D-glucanase，EC3.2.1.4，简称EG)。
这类酶随机水解β-1,4-糖苷键，将长链纤维素分子（羧甲基纤维素钠（CMC）即为人工合成的一种线形纤维素钠盐）截短。
（2）外切葡萄糖苷酶（exo-1,4-β-D-glucanase，EC3.2.1.91），又称纤维二糖水解酶（cellobiohydrolase，简称CBH）。
这类酶作用于β-1,4-糖苷键，每次切下一个纤维二糖分子。
（3）β-葡萄糖苷酶（β-glucosidase，EC3.2.1.21，简称BG），这类酶将纤维二糖（水杨素即为葡萄糖苷键连接的纤维二糖）水解成葡萄糖分子。
据上述理论，分别设计以滤纸（filter paper）、棉球、CMC、水杨素为底物，分别衡量纤维素的总体酶活性（FPA）、C1、Cx、Cb酶活性。
将底物水解后释放还原性糖（以葡萄糖计）与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应产生颜色变化,这种颜色变化与葡萄糖的量成正比关系,即与酶样品中的酶活性成正比。
通过在550nm的光吸收值查对标准曲线(以葡萄糖为标准物)可以确定还原糖产生的量,从而确定出酶的活力单位。
纤维素酶类活性的定义Ⅰ 1g酶粉（1ml酶液）于50℃pH4.8条件下，每分钟水解1×6cm的滤纸（FPA）产生1μg还原糖（以葡萄糖计）的酶量定义为1个FPA酶活力单位。
纤维素酶活力测定
纤维素酶活力测定
原理：纤维素是植物细胞壁的主要组成成分,在多种纤维素酶的协同作用下，植物细胞壁纤维素多糖被逐步降解为葡萄糖等还原糖。
在碱性环境下，3，5—二硝基水杨酸试剂与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，棕红色氨基化合物在540nm波长下具有最大吸收。
利用此原理测定540 nm处吸光度来测定酶活力。
试剂：
1mg/mL葡萄糖标准溶液:无水葡萄糖于80 °C烘至恒重，准确称取0.100g于烧杯中,加适量蒸馏水溶解,转入容量瓶中并蒸馏水定容至100 mL。
DNS溶液：酒石酸钾钠182 g，溶于500mL蒸馏水中，加热，于热溶液中依次加入3，5-二硝基水杨酸6.3 g，NaOH 21g，苯酚5 g，搅拌至全溶，冷却后用蒸馏水定容至1000 mL，贮于棕色瓶中，室温保存。
方法：
标准曲线的绘制：取6支20mL的试管按下表顺序依次加入各试剂
沸水中煮沸5min,流水冷却2min,各管中加12.5mL蒸馏水，定容到16mL，摇匀，放置20min 后，测定540nm处吸光度。
纤维素酶活力的测定方法
纤维素酶活力的测定方法1 原理纤维素酶是一种复合酶。
酶系包括外切B-1.4-葡聚糖酶（ExoB-1.4glucanase,EC3.2.1.9）内切B-1.4葡聚糖酶（Endoβ-1.4-glucanase,EC1.2.1.4）和纤维二糖酶。
纤维素酶在一定温度和PH条件下，将纤维素酶底物（滤纸或羟甲基纤维素钠）水解，释放出还原糖。
在碱性，煮沸条件下，3.5-二硝基水杨酸（DNS试剂）与还原糖发生显色反应，其颜色的深浅与还原糖（与葡萄糖汁）含量成正比。
通过在540nm测定吸光度，可得到产生还原糖的量，计算出纤维素酶的FPA酶和CMCA酶活力，以此代表纤维素酶的酶活力。
2 操作A.FPA酶A.1绘制标准曲线按表1规定的量，分别吸取葡萄糖标准使用溶液、缓冲溶液和DNS试剂加入各管中，混匀。
表1葡萄糖标准曲线管号葡萄糖标准使用溶液缓冲液吸取量 DNS试剂吸取量ml 浓度mg/ml 吸取量ml 0 0.0 0.00 2.0 3.01 1.0 0.50 1.5 3.02 1.5 0.50 1.5 3.03 2.0 0.50 1.5 3.04 2.5 0.50 1.5 3.05 3.0 0.50 1.5 3.06 3.5 0.50 1.5 3.0将标准管同时置于沸水浴中，反应10min。
取出，迅速冷却至室温。
用水定容至25ml，盖塞，混匀。
用10mm比色杯，在分光光度计波长540nm处测量吸光度。
以葡萄糖量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性回归方程。
线性回归系数应在0.9990以上时方可使用（否则须重做）。
A.2 样品的测定A.2.1待测酶液的制备称取固体酶样1g，精确至0.1mg（或吸取液体酶样1ml,精确至0.01ml），用水溶解，磁力搅拌混匀，准确稀释定容（使试样液与空白液的吸光度之差恰好落在0.3-0.4范围内），放置10min，待测。
A.2.2 滤纸条的准备----将待用滤纸放入（硅胶）干燥器中平衡24h----将水分平衡后的滤纸制成宽1cm、质量为（50±0.5）mg的滤纸条，折成M型，备用。
纤维素酶活力的测定
实验5纤维素酶活力的测定一、原理：纤维素酶水解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3、5-二销基水杨酸中销基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比色法测定其还原物生成量来表示酶的活力。
二、试剂：1、3、5—二销基水杨酸显色液：称取10克3、5-二销基水杨酸，溶入蒸馏水中，加入20克分析纯氢氧化钠，200克酒石酸钾钠，加水500毫升，升温溶解后，加入重蒸酚2克，无水亚硫酸钠0.5克。
加热搅拌，待全溶后冷却，定容至1000毫升。
存于棕色瓶中，放置一周后使用。
2、0.1摩尔PH4.5醋酸-醋酸钠缓冲溶液。
3、0．5%羧甲基纤维素钠水溶液，溶解后成胶状液，静置过夜。
使用前摇匀。
4、标准葡萄糖溶液：称取干燥至恒重的葡萄糖100毫克，溶解后定容至100毫升，此溶液含葡萄糖1.00毫克/毫升。
三、测定方法：1、标准曲线的绘制：分别吸取0.2、0.4、0.6 、0.8.0、1.0毫升的葡萄糖于5支试管中,均用蒸馏水稀释至1毫升,加3.5-二销基水杨酸显色剂3毫升,在沸水浴中煮沸显色10分钟,冷却,加蒸馏水21毫升,摇匀.以1毫升蒸馏水代替糖作空白管,在550nm处比色。
以光密度为纵坐标，以葡萄糖微克数为横坐标，绘出标准曲线。
2、样品的测定：取0.5%羧甲基纤维素钠溶液3毫升，酶液1毫升,于40度水浴中糖化30分钟,取出,立即于沸水浴中煮沸10分钟使酶失活,得糖化液。
取糖化液１毫升，按制标准曲线时一样加显色液比色。
同时以１毫升煮沸的酶液代替酶做一空白对照。
四、计算：在上述条件下，1毫克酶每分钟催化纤维素水解生成１微克葡萄糖的酶量定为一个活力单位。
N *OD值对应的葡萄糖量纤维素酶活力单位＝——————————————３０*１N---酶液的稀释倍数３０――糖化所用时间１――反应酶液毫升数。
纤维素酶活力测定方法
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图２葡萄糖标准曲线
２．５底物的选择对酶活力的影响 目前理论认为，大多数由微生物产生的纤维素酶 是一个多组分酶系，主要含有三种组分：内切ｐｌ，４一葡 聚糖酶、外切８ １，４一葡聚糖酶和ｐ—ｌ，４葡萄糖苷酶。其 中，内切（ｅｎｄｏ一）酶能进攻纤维素大分子链的中间部 位，任意地切断大分子，而生成较短的链；而外切 （”ｍ）酶仅从纤维索大分子链的非还原性末端切下 一个个纤维二糖；６－葡萄糖苷酶则把低分子葡聚糖催
Ｉ。＝（０．８３：
１），杰能科：ＰＬＵＳ Ｉ。一（０．６７；１）。这与不同酶的
Ｉ。，ＰＬＵＳ Ｌ一１：
我们选择三种酸性纤维素酶，分别以滤纸和ＣＭＣ 为底物，其酶括力（ＦＰＡ和ＣＭＣ…）的测试数据结果如
表ｌ所示。
表１不同酶种的滤纸酶活（ＦＰＡ）和ＣＭＣ酶活（ＣＭＣ。。）
结论
从表ｌ可知，ＣＭＣａｓｅ和ＦｐＡ两种酶活的大小顺 序是：杰能科＞ＮＯＶＯ Ｌ＞ＰＬＵＳ Ｌ。这几种酶的内切 酶活（ＣＭＣ。）较高，且比总酶活（ＦＰＡ）大，几乎相差一 个数量级，这说明酶对水溶性底物有很高的活力．而滤 纸与酶属多相催化，酶也是高分子物，所以反应的空间 阻碍较大，这也表明了吸附对酶的活性部位与纤维素 分子链段的结合及催化均有很大影响。 ２．６纤维素酶活与织物酶减量率的关系 用这几种酶对织物进行整理，织物的减量率与酶 种及酶量的关系如图３所示。从图３可看出，当三种酶 的用量分别为２％、４％、６％、８％、ｌＯ％（ｏｗｆ）时，对 应的减量率的比值平均（杰能科：ＮＯＶＯ
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摘
纤维素酶活力测定方法
张瑞萍 南通工学院（２２６００７）
要用ＤＮＳ为显色剂，分别以滤纸和ＣＭＣ为底物，“滤纸糖酶括性（ＦＰＡ）和羧甲基纤维索酶活性（ＣＭＣｍ）表征
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收稿日期 : 2010203224 基金项目 : 四川省财政育种工程青年基金项目 (2008VJJ2018) 作者简介 : 康纪婷 (1984 - ) , 女 , 四川成都人 , 硕士在读 , 从事环境
现将其中具有代表性 、应用较为广泛的方法简介如下 :
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河北农业科学
2010 年
21111 棉线切断法 采用恒温振荡器 , 将细棉线的一 端浸入含有酶液的试管中 , 在最佳温度和 pH 值条件下 微振荡 。测定细棉线切断所需的时间 , 求得酶活力 。 21112 滤纸崩溃法 采用恒温振荡器 , 以一定规则的滤 纸片为底物 , 加入装有酶液的试管中 , 在最佳温度和 pH 值条件下微振荡。测定滤纸完全崩溃所需要的时间 , 求得 酶活力。由于滤纸崩溃的时间较难确定 , 所以误差很大。
微生物研究 。E2mail: kangjiting11zhong@yahoo. com. cn。 通讯作者 : 张小平 。
素酶是起协同作用的多组分酶系 , 可以促进纤维素的分 解 。纤维素酶主要来自于真菌和细菌 。按照其作用机 理 , 可分为内切葡聚糖苷酶 、外切葡聚糖苷酶和 β2葡萄 糖苷酶 3类 [5 ] 。 11211 内切葡聚糖苷酶 又称 Cx酶 、CMC 酶 、 endo2 1042β2D 2glucanase (来自真菌的简称 EG, 来自细菌的简 称 Cne) 。Cx酶作用于纤维素内部的无定型区域 , 随机 水解 1042β2葡萄糖苷键 , 将长链纤维素分子切短 , 产生 大量非还原性末端的小分子纤维素 。 11212 外切葡聚糖苷酶 又称 C1 酶 、 exo21042β2D2glu2 canase (来自真菌的简称 CBH, 来自细菌的简称 Cex) 。 C1酶作用于纤维素线状分子的末端 , 水解 1042β2D 2葡 萄糖苷键 , 每次切下 1个纤维二糖分子 , 又称纤维二糖 水解酶 ( cellobiohydrolase) 。 11213 β2葡萄糖苷酶 又称纤维二糖酶 、β21042gluco2 sidase (简称 BG) 。这类酶将纤维二糖或可溶性纤维糊 精水解成葡萄糖分子 。
3 纤维素酶活力测定存在的问题与展望
311 纤维素酶活力测定存在的问题 纤维素酶活力的测定方法有很多 , 至今也没有统
一 , 而且测定中存在着很多困难 , 给纤维素酶的开发利 用带来了很多不利影响 。其主要问题有 [6 ] : ( 1 ) 根据 酶反应动力学通则 , 酶活力的测定是在底物过量存在的 条件下 , 测定酶促反应的初速度来表示酶活力 。但纤维 素酶是多组分酶系 , 各组分间有协同作用 , 形成了多种 终产物 , 涉及多种反馈控制机理 。测初速度的原则也就 难以反映底物特性 , 使得确定酶活力测定的标准化方法 非常困难 。 (2) 纤维素是不溶于水的高聚糖 , 纤维素酶 与其反应是在固体界面上进行的 , 其酶解反应速率受底 物对酶蛋白的吸附速率和产物扩散速率的影响 。不同来 源的同一类纤维素酶 , 其组成和各组成成分的比例也有 较大的差异 , 使得测定结果存在较大的不准确性 。 ( 3) 由于纤维素酶结构的复杂性 , 酶组分生化特性和酶学作 用的影响 , 以及异构酶的存在 , 在不同试验条件下得到
摘要 : 关于纤维素酶活力测定方法很多 , 至今也没有统一 。国内许多单位根据各自的实验目的采用了不同的测 定方法 , 并据各自的经验对其做了部分修改 , 使得测定方法更加多样化 。综述了纤维素酶活力的测定方法及其 存在的问题 , 旨为不同目的纤维素酶活力测定方法的选择提供借鉴 。 关键词 : 纤维素酶 ; 酶活力 ; 测定方法 中图分类号 : TQ92011 文献标识码 : A 文章编号 : 100821631 ( 2010) 0420151203
河北农业科学 , 2010, 14 (4) : 151 - 153 Journal of Hebei Agricultural Sciences
编辑 李布青
纤维素酶活力测定方法
康纪婷 1 , 吴 翔 2 , 甘炳成 2 , 张小平 13
(11四川农业大学资源与环境学院 , 四川 雅安 625014; 21四川省农业科学院土肥所微生物实验室 , 四川 成都 610000)
近年来国内通用的和新提出的一些纤维素酶活力测 定方法 , 大多利用 DNS法原理 , 即纤维素经纤维素酶 水解后生成的还原糖能将 3052二硝基水杨酸 (DNS) 中 的硝基还原为氨基 , 生成棕红色的氨基化合物 。在一定 的浓度范围内 , 还原糖的量与棕红色的深浅呈正比关
系 [12 ] 。可用比色法测定 。 21211 内切纤维素酶活 ( CMCaseactivity) 以无定形 纤维素为底物 , 以还原糖的生成量表征 CMC 酶活力 。 如 Amano法采用了羧甲基纤维素钠 , 国际药品联合会提 供的测定方法采用了羟乙基纤维素 [14 ] , Merz法采用了 磷酸膨胀纤维素 [15 ] 。 21212 外切纤维素酶活 ( PNPCase) 以对硝基苯纤 维二糖苷 ( pNPC) 为底物 , 以对硝基苯的生成量表示 酶活力 [15 ] 。也可以微晶纤维素 (Avicel) 为底物水解得 到的还原糖量表示酶活力 , 称为 Avicelase 活力 。但内 切葡聚糖苷酶对 Avicel水解程度也高 , 对原酶液而言 , 它反映的是纤维素酶各组分协同作用的结果 ; 对单一组 分来说 , 它反映外切葡聚糖苷酶的活力 。 21213 纤维二糖酶活 以纤维二糖为底物 , 测定酶解 反应后葡萄糖生成量 , 表示酶活力 。由于葡萄糖和纤维 二糖都具有还原性 , 定糖方法难以区分 。常用人工合成 的糖苷化合物 , 如对硝基酚 2β2葡萄糖苷 ( PNPG) 、水 杨素为底物 , 测定生成的对硝基酚或葡萄糖 。 21214 滤纸酶活 1984 年国际理论和应用化学协会的 发酵委员会确定滤纸酶活法为标准方法 。滤纸为天然结 晶类纤维素 , 以其为底物经纤维素酶水解后生成的还原 糖量 , 表示纤维素酶系总的糖化能力 , 得到了广泛的应 用 。然而由于滤纸结构的不均一性 , 方法繁琐 , 导致测 定结果误差较大 , 难以精确定量 。 21215 差重法 以砂芯坩埚为酶解反应器 , 避免了水 解液转移过程中产生的偏差 , 同时也不必在酶解液中添 加反映终止剂 , 直接过滤洗涤使反应终止 。节约了试 剂 , 避免了试剂干扰 。测出的酶水解率比常规的以还原 糖量测出的酶水解率要高 。试验操作简便易行 , 重现性 好 , 适合于酶解样品较少的试验研究 [16 ] 。
在此基础上又发展了滤纸失重法 。即在最佳温度和 pH值条件下 , 让滤纸片和酶液反应一段较长的时间 (通常需要 2周以上 ) , 然后将滤纸片水洗烘干 , 测定滤 纸片反应前后的质量变化 , 计算出滤纸的失重率 , 从而 推算出酶活力 。 21113 羧甲基纤维素钠为底物的粘度减少和还原糖增 加的测定法 [9 ] 测定 CMC 粘度降低的方法分为旋转粘 度计法和工研法 。旋转粘度计法采用旋转粘度计 , 测定 底物 3 m in 和 18 m in 的粘度 , 利用公式推算出酶活力 。 工研法采用奥氏粘度计 , 测定底物粘度减至 1 /2 时所需 的时间 , 以 l0 m in使底物粘度降低 1 /2 的酶活作为 1 个 活力单位 。
D eterm ina tion M ethods of Cellula se Activ i ty
KANG J i2ting1 , WU Xiang2 , GAN B ing2cheng2 , ZHANG Xiao2p ing13 ( 11College of Resources & Environment, Sichuan Agricultural University, Yaπan 625014, China; 21M icrobiology Laboratory of Soil and Fertilizer Institute, Sichuan Academy of Agricultural Sciences, Chengdu 610000, China)
还原糖增 加 法 是 通 过 底 物 与 酶 液 在 特 定 条 件 下 反 应 , 用葡萄糖含量的增加来计算酶活力 。目前普遍采用 该方法来测定纤维素酶的酶活 。 21114 分光光度计法 [10 ] 酶促反应中生成的糖类物质 与显色剂发生显色反应 , 用分光光度计在 500 nm 左右 的波长处测定吸光度 , 换算成还原糖量 , 计算出酶活 力 。分光光度计法大大缩短了酶活力测定所需要的时 间 , 而且有较高的精确度 , 是目前应用最广泛的方法 。 国内许多科研机构根据各自的实验目的 , 采用了不同的 底物和显色剂 , 因而由此衍生出的方法更加多样化 。 21115 快速测定纤维素酶 CMC液化活力法 [11 ] 以铬矾 为交联剂 , 使羧甲基纤维素交联产生粘度较大的凝胶 , 通过观测凝胶液化的程度和快慢确定酶活力的大小 。此 法简单方便 , 目测即可 , 用于菌种初筛十分方便 。 21116 平板法 在菌种选育工作中 , 都希望在平板上 对纤维素酶产生菌进行筛选 , 这样可以大大提高工作效 率 。磷酸膨胀纤维素易于制成均匀的双层平板 , 纤维素 酶在其上能够形成清晰的透明圈 , 此法广泛应用于产纤 维素酶的真菌选育中 。 21117 巴鲁阿 2斯温 (Barnch and swain) 测定法 以水 杨酸为底物 , 根据被水解出的水杨醇和 β2D 2葡萄糖量 , 用比色法测定 β2葡萄糖苷酶活力 。此法普遍应用于 β2 葡萄糖苷酶活力的测定 。 212 纤维素酶活力测定的主要方法
1 纤维素和纤维素酶
111富的碳水化合物 , 也是生物界最重要的碳 源之一 [1 ] 。纤维素分子是由许多吡喃型的 D2葡萄糖残 基以 1042β2葡萄糖苷键相联结而形成的多糖 , 是 1 种高 分子化合物 。