油镜及荧光显微镜的原理及使用方法
荧光显微镜的基本原理及应用
六、荧光组化实验中应注意的几个问题
1、每种荧光染料，均有自己的最适pH值，此时荧光最强。 当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因 此荧光检测时要在一定的pH值的缓冲液中进行。 2、一放荧光染色在20。C以下时荧光比较稳定，温度升高常 出现温度猝灭。 3、在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰 竭，造成观察和照相困难。为此最好用能量小的长波长光进 行观察，需照相时再适当增强激发光。 4、一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一， 也能使标本着色。在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的 浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，这是由 于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。
2.药物筛选
荧光探针分布是利用信号传 导中信号分子的迁移功能，将 一荧光蛋白与信号分子相偶联， 根据荧光蛋白的分布情况即可 推断信号分子的迁移状况，并 推断该分子在迁移中的功能。 由于GFP分子量小，在活细胞 内可溶且对细胞毒性较小，因 而常用作荧光探针
八、使用注意事项
1 暗室内进行，打开汞灯5-10min稳定后再观察。
A filter set consists of two barrier filters (1 and 3) and a dichroic mirror (beam-splitting 2)
三、荧光显微镜的操作
(1)安装紫外防护罩。
(2)打开高压汞灯的电源控制箱开关。
(3)插入挡光板，中断光路。
七、荧光显微镜应用技术
1. 对细胞结构或组分的定性位、半定量研究
免疫荧光技术 用荧光标记的抗体或抗原与样品(细胞、组织或分离 的物质等)中相应的抗原或抗体结合，以适当检测荧光的 技术对其进行分析的方法。将抗原或抗体与荧光染料连 接，用于检测相应特异性的抗体或抗原的方法称“直接 免疫荧光技术(direct immunofluorescent technique)”。 用荧光染料标记的第二、第三抗体等检测相应抗原抗体 复合体的方法则称“间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescent technique)”。
显微镜油镜的使用方法及维护
油镜的使用方法及维护通型生物显微镜的放大倍数可达几百倍. 一般真菌和酵母菌等微生物个体较大, 用低倍物镜和高倍物镜即可得到良好的效果. 但要看到经染色的细菌的形态和真核生物细胞的形态构造, 最好使用油镜头.油镜比干燥系高倍物镜的工作距离短得多, 最短的只有0.1mm,且调焦程序又不同于干燥系物镜, 操作时须特别细心,防止油镜压碎标本或损坏油镜.显微镜油镜原理由于细菌体积微小, 故在细菌的形态学研究中,经常需要借助显微镜油镜才能比较清楚地进行观察.因此, 必须熟练地掌握油镜的使用及保护法.（一）油镜头的识别：各接物镜的放大率可由其外形辨认, 镜头长度越大,镜片直径越小, 放大倍数大；反之,放大倍数小.油镜头长度大于低、高倍镜,镜头下缘一般刻有一圈黑线或白线, 并刻有100×、1.25 或oil 等字样.（二）油镜的使用法：1 、使用显微镜油镜时, 必须将显微镜端正直立桌上, 不得将镜臂弯曲, 使载物台倾斜,以免香柏油流溢,影响观察,污染台面.2 、调焦距：A 、转动粗调节器使载物台徐徐上升（或使镜筒渐渐下降）, 直至油镜头浸没至油中. 此时眼睛应从侧面观察, 以免压碎标本片和损坏镜头.B 、将标本片放载物台上, 用标本推进器固定, 将欲检部分移至接物镜下. 先用低倍镜找出标本的位置, 然后提高镜筒, 在标本的待检部位滴镜油一滴, 再换油镜观察.C 、然后双眼移至接目镜, 一面从接目镜观察, 一面反方向缓慢地转动粗调节器（下降载物台,或上升镜筒）,当出现模糊物象时,换用细调节器,转动至物象清晰为止.D 、观察完毕, 应先提高镜筒, 并将油镜头扭向一侧, 再取下标本片.油镜头使用后,应立即用擦镜纸擦净镜头上的油. 若镜油粘稠干结于镜头上, 可用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭镜头, 并随即用干的镜纸擦去残存的二甲苯, 以免二甲苯渗入, 溶解用以粘固透镜的胶质物, 造成镜片移位或脱落.3 、对光：采用天然光为光源时,宜用平面反光镜；若用人工灯光时,则用凹面镜.首先打开光圈,转动反光镜,使光线集中于集光器.可根据需要,上下移动集光器和缩放光圈, 以获得最佳光度.一般用低倍镜或高倍镜观察物象或用油镜检查不染色标本时, 需下降集光器并适当地缩小光圈, 使光度减弱；若用油镜检查染色标本时,光度宜强. 应将显微镜亮度开关调至最亮,光圈完全打开, 集光器上升至与载物台相平.先在干燥系高倍物镜下找准被检物, 并置于视野中央, 然后升高镜筒约1.5cm,再把油镜头旋转至对准正下方. 在玻片标本的镜检部位滴一滴浸液（镜头油）, 将头偏于一侧观察,下降镜筒, 到物镜的前透镜与浸液接触时停止.继而从目镜里细心观察视野,旋转粗准焦螺旋,使镜筒缓慢地上升, 刚出现不太清晰的物象时就换用细准焦螺旋, 至物象清晰后进行观察.初次使用油镜,也可按照干燥系物镜的调焦程序调节焦距. 即先下降镜筒至物镜最接近盖玻片, 但绝不能压在标本上,再上升物镜调焦. 但此法有将浸液挤出去和造成空泡的缺点. 若上调粗准焦螺旋时, 镜筒已升到油浸镜头离开油滴,仍不能发现被检目的物,须重新调节.油镜使用完毕, 提升镜筒约2cm,把油镜转离光轴, 先用擦镜纸擦去镜头上的大部分油,再用浸少量二甲苯的擦镜纸擦去镜头上的残余油迹, 最后用干擦镜纸擦去镜头上的二甲苯. 擦拭时要顺镜头的直径方向, 不要沿镜头的圆周方向擦.玻片标本上的油也要进行清洁,即把一小张擦镜纸盖在载玻片油滴上, 在纸上滴一些二甲苯,趁湿把纸往外拉,这样连续作三四次即可干净（如果是使用石蜡油清洁时只用擦镜纸不必滴二甲苯）.油镜使用的镜头油为香柏油或石蜡油. 因香柏油黏稠度较高, 使用之后擦拭较麻烦,因而许多人采用石蜡油代替使用.滴浸液时,要尽量避免气泡的形成, 如果形成了气泡,可用解剖针尖将气泡排在一边, 以免影响观察.由于细菌体积微小, 故在细菌的形态学研究中,经常需要借助显微镜油镜才能比较清楚地进行观察.因此, 同学们必须熟练地掌握油镜的使用及保护法.油镜的使用原理：油镜的透镜很小, 光线通过玻片与油镜头之间的空气时,因介质密度不同发生折射或全反射,使射入透镜的光线减少, 物象显现不清. 若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率（n=1.52 ）相近的香柏油（n=1.515 ）, 则使进入透镜的光线增多,视野亮度增强,使物象明亮清晰.Welcome !!! 欢迎您的下载，资料仅供参考！。
实验一_显微镜油镜的使用ppt课件
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实验一
显微镜油浸系物镜的 使用
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[目的要求]
1、巩固普通光学显微镜的使用方法 2、掌握显微镜油镜的使用方法
3、掌握细菌的观察方法,初步认识细菌的形态特征
4、学习显微镜的日常保养
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[实验原理]
普通光学显微镜
相差显微镜
暗视野显微镜
显微镜技术
电子显微镜
荧光显微镜
完整版课件
显微摄影术
3 使用乙醚乙醇擦镜头时，注意乙醚乙醇不能过多，
以防溶解固定透镜的树脂。
4 注意保持显微镜的洁净，对金属部分要用软布擦
拭，擦镜头必须用擦镜纸，切勿用手或用普通布、
纸等，以免损坏镜头。
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作业： 用铅笔绘图，边看边画下所观察到的结果。
完整版课件
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实验报告包括以下内容： 1 实验目的： 2 实验原理：（油镜的原理，10页） 3 实验材料和用具： 4 实验步骤 5 实验结果（绘制大肠杆菌或金黄色葡萄 球菌的镜检结果） 6 实验分析
4. 实验中如遇菌液外溢、皮肤划伤或菌液吸入等意外，应立即报 告老师及时进行处理，不得隐瞒，以免酿成后患。
5. 注意安全，易燃物品如二甲苯、酒精等应远离火源。
6. 实验完毕，必须将仪器放到指定地点，带菌工具应先进行消毒。
完整版课件
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实验室注意事项：
7. 实验需进行培养的材料，要标明姓名、组别、日期后，放于 教师指定的培养箱中进行培养。
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普通光学显微镜
实验步骤
9 用过的标本片，于涂面上滴一滴乙醚乙醇，用吸水纸 擦去油污至洁净后，放入标本盒中。
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普通光学显微镜
显微镜油镜的使用方法及维护
显微镜油镜的使用方法及维护显微镜油镜的使用方法和维护其实并不复杂，但它确实需要一些细心和耐心。
首先，了解油镜的工作原理是个不错的开始。
油镜，顾名思义，就是使用特殊的浸油来提高成像质量。
它的透光率高，能够让我们看到更细微的结构，真是显微观察的“秘密武器”。
使用油镜前，先确保显微镜的其他部分干净整洁。
镜头上残留的灰尘和油污可不是小事，特别是在观察细胞或微生物时，任何杂质都可能影响我们的视野。
准备好所需的浸油，通常是用于显微镜的矿物油。
用一根干净的滴管，把油滴在载玻片上，接着轻轻对准镜头。
确保镜头与油接触，不要用力过猛，轻轻一放就好。
然后，我们进入观察阶段。
调节显微镜的光源，让光线均匀地照射在样品上。
细心观察时，可能会发现一些意想不到的细节，真是让人惊喜。
像是在探险，每个细胞的结构都在向我们诉说它的故事。
这个过程绝对是令人振奋的，特别是当你发现某种新细胞或奇特的形态时，那种成就感简直无与伦比。
不过，油镜的维护也不可忽视。
每次使用后，记得及时清洁镜头。
可以用专业的镜头纸轻轻擦拭，避免用力过大导致划伤。
如果长时间不使用，最好把油镜取下，放在干燥的环境中保存。
浸油如果长时间留在镜头上，会导致镜头老化，影响其使用寿命。
接下来，咱们谈谈油镜的常见故障。
使用过程中，有时会出现成像模糊的问题。
这时候可以调整光圈，或者检查油镜是否有划痕。
及时发现问题，及时解决，才能保证观察的准确性。
记得，要随时保持观察的热情，遇到问题也不要气馁。
总结一下，使用油镜需要讲究技巧，细节决定成败。
每一个步骤都很重要，从清洁到观察，从维护到故障排查。
油镜的魅力在于它能带领我们深入微观世界，让我们看到那些平时无法想象的美丽与奥秘。
希望每次观察都能给你带来新的发现，激发你的探索精神。
让我们一起继续在科学的海洋中遨游吧！。
油镜光学原理
油镜光学原理油镜光学原理油镜是由在液体表面上堆积的油膜组成的光学装置，是一种常见而又实用的光学元件。
它最初被用来进行绘画和装饰，后来被发现可以用于制造望远镜、显微镜等光学仪器。
油镜的制作和使用非常简单，而且成本低廉，因此受到了广泛的应用。
本文将介绍油镜的光学原理、制作方法以及应用。
油镜的光学原理任何液体表面都有一个折射率，这通常是因为液体的密度不同于周围环境的密度而导致的。
油镜的原理在于，当光线从周围环境（如空气）射入油膜时，光线将会被折射，从而产生一种奇特的像。
当液面呈现曲面形状时，光线会依据此曲面折射。
在一定条件下，人眼就可以看到一幅令人惊叹的图像。
油镜的制作方法制作油镜的方法非常简单。
首先将适量的油膜涂在一个平整的透明表面上，然后用手指或工具轻轻地调整油膜的厚度和位置，直到形成所需的曲面。
随后，将一束光线照射在油镜上，观察产生的像。
如果需要调整像的大小或位置，可以调整油膜的曲率和位置，以达到所需的效果。
油镜的应用油镜的应用非常广泛。
最常见的应用场景包括艺术绘画、倒映、望远镜、显微镜、天文学仪器等领域。
在艺术绘画中，艺术家可以利用油镜制作出令人惊叹的色彩效果和逼真的图像。
在天文学领域，油镜被用来制作望远镜和显微镜等仪器，以观测星空和微观世界的细节。
除此以外，油镜还被用于测量曲率、汇聚和分散光线等实验中。
油镜是一种非常实用的光学元件，可以用于各种场景，无论是摆放在桌子上的装饰品，还是高精度的天文仪器，都有着广泛的应用前景。
油镜的应用不仅仅局限于艺术和天文学，它还可以发挥重要作用于科学研究、医学检验和工业生产等领域。
在科学研究中，油镜广泛应用于材料科学和光学实验中。
科研人员利用油镜微调光线，测量材料的各种物理属性，比如硬度、形状、厚度、密度等等，同时也可以利用油镜观察无法直接观测到的小尺度现象，比如细胞的结构和运动过程，以及分子级别的化学反应等等。
在医学检验中，油镜被用来进行细胞检测和诊断。
医生和医学实验室技师可以将细胞样本放置在油镜上，然后通过显微镜观察细胞的结构和变化。
显微镜油镜的原理
显微镜油镜的原理
显微镜是一种能够放大微小物体的光学仪器，而油镜则是显微镜中的一个重要
部件。
油镜的原理是利用油的折射率大于空气的特性，来增加光的聚焦能力，从而提高显微镜的分辨率和清晰度。
接下来，我们将深入探讨显微镜油镜的原理。
首先，我们需要了解油的折射率大于空气的基本原理。
折射率是光线在两种介
质中传播时的速度比值，而油的折射率大于空气意味着光线在油中传播时会发生折射，使得光线的聚焦能力增强。
这就是为什么在显微镜中使用油镜可以提高分辨率和清晰度的原因。
其次，油镜的制作和使用也是非常关键的。
通常情况下，我们会在玻璃片上涂
抹一层透明的油脂，然后将待观察的样本放置在油脂上方。
由于油脂的折射率大于空气，样本中的细小结构在光线的作用下会显得更加清晰和立体。
这样一来，我们就可以通过显微镜观察到更加细微的结构和细胞器官，从而更好地了解生物体的微观世界。
此外，油镜在显微镜的使用中还有一些注意事项。
首先，我们需要注意在使用
油镜时要尽量避免气泡的产生，因为气泡会影响光线的传播，降低观察效果。
其次，油镜的清洁和保养也非常重要，要定期清洗和更换油脂，以确保观察效果的稳定和清晰。
总之，显微镜油镜的原理是利用油的折射率大于空气的特性，来增加光的聚焦
能力，从而提高显微镜的分辨率和清晰度。
通过对油镜的制作和使用进行深入了解，我们可以更好地利用显微镜来观察微小物体，从而更好地了解生物体的微观世界。
希望本文能够帮助大家更好地理解显微镜油镜的原理和使用方法。
显微镜油镜的使用方法
显微镜油镜的使用方法显微镜油镜是一种特殊的显微镜目镜，它主要用于高倍数的显微观察。
油镜能够提供更大的放大倍数和更清晰的图像，因为它通过与物镜和样品之间的空气接触表面更大的接触面积，减少了光的折射和散射，提高了透视能力和分辨率。
接下来，我将详细介绍显微镜油镜的使用方法。
在使用显微镜油镜之前，首先需要准备以下设备和材料：显微镜、油镜、载玻片、草片或其他待观察的样品以及净化棉。
1. 检查油镜的清洁度：使用净化棉轻轻擦拭油镜的表面，确保其清洁无尘。
请注意，油镜表面非常脆弱，所以要避免使用擦拭剂或其他粗糙的物质，以免刮伤油镜。
2. 准备样品：将要观察的样品放置在载玻片上。
可以使用草片、细胞悬液、细菌等样品。
请确保样品放置在载玻片中央，并且不要有气泡或杂质。
3. 安装油镜：将油镜轻轻放置在物镜表面上，并用手指稍微按下。
4. 调节焦距：将物镜（一般为100倍或以上高倍物镜）轻轻转动到最低位置，然后用调焦旋钮逐渐将载物台向上移动，调节焦距，以使显微镜视野中样品的图像清晰可见。
5. 加油：将一滴显微镜油滴在样品的上方，确保油滴完全覆盖样品。
请注意，加油时要小心，避免直接滴在样品上以免破坏它。
6. 调整焦距和放大倍数：在加油后，使用调焦旋钮继续调整焦距，以获得更清晰的图像。
您还可以根据需要选择更高的放大倍数，但要注意不要超过物镜的最大放大倍数。
7. 观察和记录：使用显微镜的目镜和眼镜，在透视镜内观察并记录您所感兴趣的可见细胞、组织或其他结构。
您可以使用目标套筒，在不改变焦距的情况下轻轻旋转样本，从而观察到不同的角度和深度。
8. 清理：在使用结束后，用纸巾轻轻擦拭油镜和物镜上的残余油滴。
总结：显微镜油镜是高倍显微镜观察的理想工具，通过减少光的折射和散射，提高了透视能力和分辨率。
使用显微镜油镜时，首先需要确保油镜的清洁度，然后将其安装在物镜上。
调节焦距和放大倍数以获得清晰的图像，并在油镜上加一滴油以提高图像质量。
最后，利用显微镜观察和记录感兴趣的结构，并在使用结束后对设备进行清洁。
荧光显微镜原理特点及使用
荧光显微镜原理特点及使用
荧光显微镜的原理和结构特点：荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。
这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。
荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。
荧光光源——般采用超高压汞灯(50一200W)，它可发出各种波长的光，但每种荧光物质都有一个产生最强荧光的激发光波长，所以需加用激发滤片（一般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片），仅使一定波长的激发光透过照射到标本上，而将其他光都吸收掉。
每种物质被激发光照射后，在极短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。
荧光具有专一性，一般都比激发光弱，为能观察到专一的荧光，在物镜后面需加阻断(或压制)滤光片。
它的作用有二：一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和损伤眼睛，二是选择并让特异的荧光透过，表现出专一的荧光色彩。
两种滤光片必须选择配合使用。
荧光显微镜就其光路来分有两种：
1．透射式荧光显微镜: 激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。
常用暗视野集光器，也可用普通集光器，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上．这是比较旧式的荧光显微镜。
其优点是低倍镜时荧光强，而缺。
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如吖啶橙，能使细胞内的DNA呈绿色荧光；RNA呈红色荧光。
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荧光显微镜
➢荧光显微镜(Fluorescence microscope) 是以紫外线为光源， 用以照射被检物体，
使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的
形状及其所在位置。
➢荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、 运输、化学物质的分布及定位等。荧光显微
低倍→高倍→油镜
低倍→油镜
•油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和 标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。
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光学显微镜注意事项
1.持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势； 2.水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台， 如果沾污应立即擦净； 3.放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反 放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜； 4.不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也 不要任意拆卸各种零件，以防损坏； 5.使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内。
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激发滤板
根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板， 提供一定波长范围的激发光。
400nm 可见光
紫外光激发滤板
紫 外蓝光激发滤板
紫蓝光激发滤板
400nm 紫外光
300-450nm 光
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350-490nm 光
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分光镜
•分光镜反射短波，透射长波。
•短波激发光在分光镜处反射，由 物镜到荧光物质，产生的长波长发 射光经物镜返回，并透过分光镜。
镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工 具之一。
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汞灯光源
•多采用200W的超高压汞灯作光源。 •原理：电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光 量子的结果。 •作用：它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质， 因此，为荧光显微镜普遍采用。 •注意：超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好 的散热条件，工作环境温度不宜太高。
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荧光显微镜的使用原理
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什么是荧光？
概念：物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能 状态，再回到低能状态时释放出的光。 即：物质吸收短波光，发射出的长波光。
分类
自发性荧光 细胞内的成分经短波长照射后，可以发出荧光
一般很微弱，如叶绿素。
诱发性荧光
细胞内的成分经紫外线照射后不发荧光，但 与荧光染料结合后可呈现一定颜色的荧光
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Thank You
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3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置， 调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。
4．放置标本片，调焦后即可观察。
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荧光显微镜的使用方法
注意事项： 1.末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；
2.用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜；
3.高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才 能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。
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光学显微镜的使用方法
•低、高倍镜观察 •进一步放大的部分移到视野的中心
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光学显微镜的使用方法
•集光器上升到最高位置 •光圈开到最大
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光学显微镜的使用方法
•高倍镜头离开通光孔，在需观 察部位的玻片上滴加一滴香柏油 •转换油镜时，从侧面水平注视 镜头与玻片的距离
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光学显微镜的使用方法
•用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。 不出现物象 目标不理想
光学显微镜的使用方法 及注意事项
荧光显微镜的使用原理
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1 光学显微镜的使用方法 2 光学显微镜注意事项 3 荧光显微镜的使用原理
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光学显微镜
➢光学显微镜（Optical Microscope， 简写OM）是利用光学原理，把人眼所 不能分辨的微小物体放大成像，以供 人们提取微细结构信息的光学仪器。
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300-490nm
520-560nm >510nm
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荧光显微镜的使用方法
1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。
2．落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发 滤版／分光镜／压制滤板。
透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的 激发滤版，在物镜的后面装上相应的压制滤板。
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Hale Waihona Puke 压制滤板压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波 长范围的荧光。
紫外光
紫外光压制滤板
紫 外蓝光压制滤板
紫蓝光压制滤板
可见光
>510nm
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>460nm
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落射式
荧光显微镜的种类
透射式
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荧光显微镜的主要部件
落射式
• 汞灯光源 • 激发滤版 • 分光镜 • 压制滤版
透射式
• 汞灯光源 • 激发滤版 • 暗场聚光镜 • 压制滤版