营养琼脂培养基配方及使用说明
营养琼脂配制标准操作规程
营养琼脂配制标准操作规程
1.目的
规范营养琼脂培养基配制的操作规程。
2．原理
培养基含有氮源、碳源和微量无机盐，适宜细菌生长繁殖。
3．用途
供细菌培养、菌株纯化及传种使用。
4．配方
营养琼脂干粉28g、蒸馏水1000ml
5.操作步骤
将28g营养琼脂干粉溶于1000 ml蒸馏水中，混匀至完全溶解，分装，经121℃灭菌15分钟，冷藏备用。
6.储存条件
2～8℃冰箱
7.有效期
实验室自行规定，确保培养基质量。
8.质量控制
8.1 质控频度每次新配制时做质控
8.2 质控方法及结果见表5-17。
表5-17 配制营养琼脂培养基质量控制方法及结果
试验方法结果
无菌试验<100块抽检5%，>100块
随机取10块，35℃培养24～
49h
无细菌生长
生长试验金黄色葡萄球菌
ATCC25923，35℃培养24～
49h
菌落浅黄色
铜绿假单胞菌ATCC27853 35℃培养24～48h 菌落无
色或浅绿色
直径>2.7mm
平行试验平行试验做质控时取新旧批号的
培养基同时做
9．注意事项
倾倒时温度不易过高，否则冷凝水过多易污染；若温度过低，琼脂易凝固。
参考文献
[1] 谢正旸主编。
现代微生物培养基和试剂手册。
福州：福建科学技术出版社，1994
[2] 王钦升，周正明，高屹主编。
实用医学培养基手册。
北京：人民军医出版社，1999
编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员
批准人：。
营养琼脂培养基的配置
营养琼脂培养基的配置
营养琼脂培养基其实就是一种选择性较低的营养成分的固体培养基，主要用于细菌菌落计数，也可以用于细菌的传代和増菌，但是一般不用于细菌鉴定（除非该细菌菌落有比较特殊的形态）只适合营养要求不高的细菌生长。
营养琼脂
成分：
牛肉膏3g
氯化钠5g
蛋白胨10g
琼脂 15-20g
蒸馏水 1000ml
制备步骤：
检查所用物品级别和洁净程度合格.
戴上手套.
开启天平,放上一张称量纸,调零.
称取蛋白胨g,置一玻璃容器中.
称取牛肉浸出粉g,置同一玻璃容器中.
称取氯化钠g,置同一玻璃容器中.
称取琼脂g
关闭天平.
取1000ml蒸馏水倒入上述烧杯内,用玻璃棒搅拌.
放入水浴锅内微温溶解调节pH为弱碱性. 加入琼脂,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2. 分装,121℃高压灭菌15min.。
几种培养基的配方
几种培养基的配方培养基是用于培养和繁殖微生物的营养物质的混合物。
根据微生物的特性和应用需求，可以设计出不同成分和配方的培养基。
以下是几种常见的培养基配方：1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）的配方：-牛肉膏：5g-蛋白胨：5g-水解酵母膏：1.5g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将牛肉膏、蛋白胨和水解酵母膏溶解在蒸馏水中，添加纯化琼脂，混合并加热直至溶解，然后倒入培养皿中。
2. EMB（Eosin Methylene Blue）培养基的配方：-蛋白胨：17g-明胶胨：3g-乳糖：10g-酵母提取物：3g-果糖：1g- Eosin Y：0.4g-亚甲蓝：0.065g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将蛋白胨、明胶胨、乳糖、酵母提取物和果糖溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后添加Eosin Y和亚甲蓝，最后加入纯化琼脂，混合并倒入培养皿中。
3. 铡锰培养基（Sabouraud Agar）的配方：-葡萄糖：40g-酵母膏粉：5g-水解麦粉：15g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将葡萄糖、酵母膏粉和水解麦粉溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后添加纯化琼脂，混合并倒入培养皿中。
4.胰蛋白酶-大豆酪蛋白肉汤培养基（TRYPTICASE™SOYBROTH）的配方：-胰蛋白酶胨：15g-大豆酪蛋白胨：5g-食盐：5g-葡萄糖：20g-蒸馏水：1000mL将胰蛋白酶胨、大豆酪蛋白胨、食盐和葡萄糖溶解在蒸馏水中，混合并加热至溶解，然后冷却至室温。
5. M9盐碱培养基（M9 minimal medium）的配方：-磷酸一氢二钾：3g-硫酸镁：0.5g-氯化钠：0.5g- 氨氯化铁：7.5mg-葡萄糖：4g-去离子水：1000mL将磷酸一氢二钾、硫酸镁、氯化钠和氨氯化铁溶解在去离子水中，混合并加热至溶解，然后冷却至室温后添加葡萄糖。
这只是几种常见的培养基配方，实际上还有很多不同成分和配方的培养基。
普通肉汤琼脂培养基使用
中文名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)英译名称：Nutrient Agar品种编号：022020营养琼脂规格：250g干粉培养基营养琼脂用途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定。
营养琼脂使用原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
微生物图册：营养琼脂配方(每升)：蛋白胨10g牛肉膏粉3g氯化钠 5g琼脂15g最终pH 7.3±0.2营养琼脂使用方法：1、称取本品33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7、菌落计数的报告：选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。
平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计。
营养琼脂的成份和制作方法
营养琼脂的成份和制作方法营养琼脂培养基配方蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15～20g蒸馏水1000mL营养琼脂培养基配制将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH 至7.2～7.4。
加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。
分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。
注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。
如用于菌落计数，琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面，则应为2%。
琼脂粉Agar琼脂粉质量标准符合国标GB1975-80规定：干燥失重:≤15%烧灼残渣%(灰分)：≤5 水不溶物%：≤1 砷(AS)%：≤0.0001 重金属(以Pb计)%：≤0.004 吸水力：75毫升(最高数)淀粉：合乎规定凝胶强度：>800g/cm2 产品优点凝胶强度：>800g/cm2琼脂粉Agar组培上的应用说明：培养基的配制，别名：Agar-agar;Gum agar 分子式：(C12H18O9)n 工作浓度： 3-4.5 g/L。
强度：1300g/ c㎡外观：类白色粉末储存条件：室温琼脂的用途琼脂又名卡拉胶系用一种稀有而珍贵的热带海洋红藻—麒麟菜为原料，经科学方法取制而成。
它属于关乳糖硫酸脂，含碳水化合物约75%，此外还含有人体不可缺少的无机物质—钙、碘、铁、钠等。
琼脂是一类从石花菜及其它红藻类植物提取出来的藻胶，在我国及日本已有三百多年的历史。
因其有特殊的凝胶性质，已被广泛使用于食品、医药、化工、纺织、国防、科研等领域，被国际上称为“新奇的东亚产品”。
琼脂卡拉胶不仅广泛应用于食品，具有清热凉肺、开胃健脾，增进食欲等功能，并可防治便秘和治疗高血压病。
由于琼脂、卡拉胶溶液的胶凝性的凝胶稳定性而使琼脂广泛应用在食品工业中，可作为食品食品的稳定剂。
琼脂、卡拉胶比其它胶类作出的食品味道好得多，口感更隹。
琼脂除了可作稳定剂外，还可以防止包装粘连。
琼脂的浓度达到0.5%至1.0%时，可作为油饼透明糖衣的稳定剂，同时提高了黏度和表面的黏着力，快速凝固并增加食品柔韧性，减少表面缺陷和裂纹。
营养琼脂培养基配方及使用说明
营养琼脂培养基配方及使用说明022020 营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)(Nutrient Agar)营养琼脂培养基用途：营养琼脂培养基NA用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO标准)。
营养琼脂培养基检测原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
营养琼脂培养基配方(每升)：蛋白胨 10g牛肉膏粉 3g氯化钠 5g琼脂 15g最终pH 7.3±0.2培养基使用方法：1、称取营养琼脂培养基NA 33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
硫酸锰营养琼脂培养基产品说明书
化学品安全技术说明书第一部分化学品及企业标识产品中文名称：硫酸锰营养琼脂培养基产品英文名称：Manganese Sulphate Nutrient Medium产品编号：022023企业名称：广东环凯微生物科技有限公司地址：广东省广州市黄埔区广州开发区科学城神舟路788号邮编：510663公司网址电子邮件地址：*********************传真号码：************销售热线：************-8602技术热线：************-8877/8876推荐用途和限制用途：生化研究/分析第二部分危险性概述GSH危害性类别非危险物质或混合物GSH标签要素非危险物质或混合物其它危害（健康危害、环境危害）未见报道第三部分成分/组成信息混合物化学品成分：参考培养基使用说明。
有害物质成分：无第四部分急救措施一般信息：无特殊的措施要求。
皮肤接触：立即用清水彻底清洗。
眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水冲洗15min。
如不适就医。
吸入：如果吸入，将人员移动到新鲜空气处，如果没有呼吸，进行人工呼吸操作，并联系医生。
食入：如误食，用水冲洗口腔，如不适就医。
就医信息：出示产品使用说明或者此MSDS。
第六部分 泄露应急处理个人防护：穿个人实验服,佩戴手套和口罩,避免吸入干粉。
环境保护措施：用湿布和地拖擦拭干净。
清洁/收集措施：保持干燥。
迅速清洗弄脏的区域。
第七部分 操作处置与储存安全操作注意事项：防止粉尘扬起，应提供通风设备。
储存注意事项：贮存于避光、干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
第八部分 接触控制/个人防护职业接触限值没有已知的国家规定的暴露极限。
工程控制：提供安全淋浴和洗眼设备个人保护措施呼吸系统防护：在通风橱里称取产品，佩戴口罩。
眼睛防护：佩戴安全眼镜。
身体防护：穿实验室服。
手防护：戴防化学品手套。
其他防护：常规的工业卫生操作，工作后及时清洗双手。
第九部分 理化特性外观：粉末 pH 值： 7.2±0.2 颜色：淡黄色 气味： 特征性 熔点：无数据资料 沸点： 无数据资料 燃点：无数据资料 闪点： 无数据资料 爆炸限度下限：无数据资料 上限： 无数据资料 热分解： 无数据资料第五部分 消防措施危险特性：不助燃。
营养琼脂(普通琼脂)
营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。
用途：作普通琼脂平皿。
血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。
用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。
2．尿液，脓液3．分离细菌标本用。
基础培养基（肉膏汤BB）成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。
用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。
2 作普通琼脂斜面。
血液培养基（大管肉汤培养基）成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升2 PABA（对氨基苯甲酸［相当于10mg/毫升］）1g% 1毫升3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升4 枸椽酸钠0．3g制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。
用途：作血，骨髓培养用。
肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22）克水1000毫升2%伊红溶液20毫升0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。
（高压以后方可再加乳糖）用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。
罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克纯甘油（丙三醇）12毫升水600毫升马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤）2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。
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营养琼脂培养基配方及使用说明
022020 营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)
(Nutrient Agar)
营养琼脂培养基用途：
营养琼脂培养基NA用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO标准)。
营养琼脂培养基检测原理：
蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
营养琼脂培养基配方(每升)：
蛋白胨 10g
牛肉膏粉 3g
氯化钠 5g
琼脂 15g
最终pH 7.3±0.2
培养基使用方法：
1、称取营养琼脂培养基NA 33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：
做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。