营养琼脂培养基使用说明
179营养琼脂msds
第1部分：化学品及企业标识1.1 产品中文名称：营养琼脂1.2 产品英文名称：Nutrient Agar1.3 产品编号：CM107/CM107-011.4 企业名称：北京路桥技术股份有限公司1.5 推荐用途和限制用途：生化研究/分析第2部分：危险性概述2.1 紧急情况概述：吸入后，立即呼吸新鲜空气；接触皮肤后，立即用清水冲洗或淋浴：眼睛接触后，用清水冲洗；食入：清水漱口；如感不适，请立即就医。
2.2 GHS分类：非危险物质或混合物。
2.3 物理和化学危险：目前未掌握物理或化学危险性信息。
2.4 健康危害：目前未掌握物理或化学危险性信息。
2.5 环境危害：目前未掌握物理或化学危险性信息。
2.6 其他危害：无数据资料。
第3部分：成分/组成信息3.1 混合物：化学品成分参考培养基标签成分。
3.2 有化学害物质：无第4部分：急救措施4.1 必要的急救措施：吸入：立即移至新鲜空气处。
如不适就医。
皮肤接触：立即用清水冲洗。
眼睛接触：立即提起眼睑用大量流动清水冲洗。
如不适就医。
食入：清水漱口，如有不适请就医。
4.2 主要症状和影响，急性和迟发效应：据我们所知，此化学，物理和毒性性质尚未经完整的研究。
4.3 及时的医疗处理和所需的特殊处理的说明和指示：无数据资料第5部分：消防措施5.1 灭火方法和灭火剂：用水、耐醇泡沫、干粉或二氧化碳灭火器灭火5.2 危险特性：不助燃5.3 有害燃烧产物：碳氧化物，硫氧化物，磷的氧化物，氯化氢气体，碘化氢，氧化钾，钠的氧化物，氧化镁等5.4 消防员防护装备建议：戴上自给式呼吸器灭火第6部分：泄露应急处理6.1 个人防护：穿戴实验服，手套和口罩，避免吸入粉尘6.2 环境保护措施：在确保安全的前提下，防止进一步泄露或溢出。
6.3 清洁/收集措施：干燥扫除，存放进适当闭口容器中待处理，清洗污染区域，而后酒精消毒。
第7部分：操作处置与储存7.1 安全操作注意事项：防止粉尘和气溶胶生成，有粉尘时，应提供通风设备。
营养琼脂培养基使用说明
营养琼脂培养基使用说明022020 营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)用途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO标准)。
原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
配方(每升)：蛋白胨10g牛肉膏粉3g氯化钠5g琼脂15g最终pH 7.3±0.2使用方法：1、称取本培养基33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7、菌落计数的报告：选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。
《微生物学实验》操作步骤
实验一培养基的制备与灭菌实验步骤：（一）伊红美蓝培养基（EMB，用成品，分离大肠杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。
按成品说明称量、放入搪瓷杯，加水，加热完全溶化，倒入三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，作标记（培养基名称、批次组别、日期，下同），灭菌。
（二）营养琼脂培养基（即牛肉膏蛋白胨培养基，用成品，分离芽孢杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基，方法同上，灭菌。
（三）PDA培养基（即马铃薯蔗糖培养基，分离酵母菌、根霉用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。
培养基配方：马铃薯20%、蔗糖（白砂糖）2%、琼脂 2%，加水至所需体积，pH自然。
配制方法：马铃薯去皮，称量，切成小方块，放入搪瓷杯，加水适量，煮沸20 min，取汁液，补水至所需体积，加入蔗糖（白砂糖），加热溶化，最后加入琼脂（琼脂要预先单独用水浸泡，然后挤干再加入），加热至琼脂完全溶化，分装三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，灭菌。
培养基统一高压蒸汽灭菌（121℃25 min）。
（四）无菌平皿准备（下次实验倒平板用）每组10套，报纸包扎，高压蒸汽灭菌（121℃25 min）后，置干燥箱80℃烘干1 h。
（五）枯草样预处理及预培养（下次实验分离芽孢杆菌用）枯草样预处理：每组1瓶。
100 ml三角瓶＋自来水约50 ml，加5%可溶性淀粉，溶解。
枯草若干，剪短，浸入三角瓶水中，牛皮纸封口，包扎，置水浴中煮沸10 min，然后置培养箱30℃预培养3～7 d。
（六）葡萄样（或其它水果）酵母菌预培养（下次实验分离酵母菌用）每组1瓶。
葡萄（或其它水果）适量，捏碎，皮渣与汁液一起放入250 ml 三角瓶（装量1/2～2/3），封口，置培养箱25℃预培养3～7 d，观察自然发酵过程。
实验二微生物的分离与纯化实验步骤：（一）污水中大肠杆菌的分离（稀释倒平板法）1）用三角瓶取污水样适量。
常用培养基配方汇总
常用培养基配方汇总1. 营养琼脂培养基 (Nutrient Agar)- 夏洛特奥康纳 (Charlote A. O'Connor) 配方:-蛋白胨:5克-麦芽提取物:3克-胰蛋白酶胨:1.5克-硫酸镁:0.2克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。
2. 肉蔗糖琼脂培养基 (Tryptic Soy Agar, TSA)- 条件反射琼脂 (孟德尔和赛尼·特鲁斯 ('Sneath and Tres') 配方):-牛肉蛋白胨:17克-大豆酪蛋白胨:3克-肉汤提取物:5克-葡萄糖:2.5克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。
3. MAC琼脂培养基 (MacConkey Agar)- 麦康奈 (MacConkey) 配方:-紫胆杆菌胨:17克-葡萄糖:1.5克-硫酸盐:1.5克-中性红:0.03克-石蕊:0.3克-氯化钠:5克-地膜:10克-pH值调整到7.1-7.5-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。
4. LB琼脂培养基 (Luria-Bertani Agar)- 古斯塔夫·诺维斯 ('Gustaf Novis') 配方:-研磨大豆饼粉:10克-酵母提取物:5克-部分脱脂酪蛋白:5克-氯化钠:1克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。
5. 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (Potato Dextrose Agar, PDA)- 林登麦卡蒂 ('Lindenmuth and McCarty') 配方:-马铃薯提取物:4克-葡萄糖:20克-地膜:15克-pH值调整到5.6-5.8-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。
这些是一些常用的培养基配方，适用于细菌和真菌的培养。
各种培养基成分
1．营养肉汤成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。
2．营养琼脂培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121℃，15min高压灭菌备用。
3．MRS培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄（琼脂15~20g），蒸馏水1000mL。
糖20g，吐温80 1mL，MgSO4 .7H2O 0.58g，MnSO4 4H2O 0.25g，制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。
4．脱脂乳培养基成分：牛奶，蒸馏水。
制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，过夜冷却，脂肪即可上浮。
除去上层乳脂即得脱脂乳。
将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。
5．培养基A成分：蛋白胨10.0g，酵母提取物1.0g，葡萄糖10.0g，NaCL5.0g，琼脂15.0g，水1000mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至7.0~7.2，分装于三角瓶中，121℃，灭菌15min。
6．PTYG培养基成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐温80 0 1mL，琼脂15~20g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，盐溶液4mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.8~7.0，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。
盐溶液制备：无水氯化钙0.2g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，MgSO4 。
7H2O 0.48g，NaCO310g，NaCL 2g，蒸馏水1000mL，溶解后备用。
各种培养基配方
1．营养肉汤
成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。
2．营养琼脂培养基
成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。,
4．脱脂乳培养基
成分：牛奶，蒸馏水。
制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，过夜冷却，脂肪即可上浮。除去上层乳脂即得脱脂乳。将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。 9
7．豆芽汁液体培养基
成分：豆芽汁10mL，磷酸氢二铵1g，KCL 0.2g，MgSO4.7H2O 0.2g，琼脂20g。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，0.04%的溴甲酚紫酒精溶液（黄色5.2~6.8紫色）作为指示剂，115℃灭菌20min。.
水约20mL调匀，打至起沫，倒入糖化液中搅拌煮沸再过滤，即可得澄清麦芽汁。用波美计检测糖化液浓度，加水稀释至10倍，调pH5~6，用于酵母菌培养；稀释至5~6倍，调pH7.2，可用于培养细菌，121℃灭菌20min。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.8~7.0，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。
盐溶液制备：无水氯化钙0.2g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，MgSO4 。7H2O 0.48g，NaCO3 10g，NaCL 2g，蒸馏水1000mL，溶解后备用。
实验一培养基的配制和灭菌
15.不锈钢碗1个
每张实验台上物品：
电炉+石棉网+搪瓷盘1套
共用实验物品：
1.小塑料筐若干； 6.蒸馏水1瓶； 2.电子天平2台； 7.营养肉汤培养基1瓶； 3.称量纸若干； 8.营养琼脂培养基1瓶； 4.药匙2支； 9.高压蒸气灭菌器1台 5.毛刷2把；
四.注意事项：
在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的斜面 的长度不超过试管总长的一半。
用于活化菌种， 或培养菌种的斜面
用于保存菌种 的斜面
三.每组（4人/组）实验物品：
6.橡皮筋3根； 1.150－250ml三角瓶1个 （营养琼脂）做斜面（1 7.报纸或灭菌袋若干； 支/人）、平板（1个/人）。 8.试管架1个； 2.250ml烧杯（营养肉汤） 9.记号笔1支； +表面皿1套，分装试管， 10.酒精灯2个； 1支/人。 11.火柴1盒； 3.玻璃棒1根； 12.小棍（摆斜面用）1 4.试管8支； 根； 5.培养皿4个； 14.250ml量筒1个；
1.营养琼脂分装前必须充分溶解。 2.倒平板前必须冷却至50-60℃左右。 3.分装时要避免培养基粘染管（瓶）口， 引起污染。 4.剩余的营养琼脂培养基倒入垃圾桶，不 能倒入下水道。
1.实验完毕，各小组清洗所用 烧杯，三角瓶，玻璃棒等物品， 按原位置摆放整齐。 2.值日生清理实验台，打扫地 面，实验室整理完毕方可离开。
本次实验报告内容： 记录本实验配制培养基的 名称、数量，并图解说明其 配制过程，指明要点。
动物微生物学实验
实验一 培养基的配制和灭菌
一.实验目的
了解培养基的配制原理和方法，
掌握其配制过程。
掌握高压蒸汽灭菌法的原理及
营养琼脂(普通琼脂)
营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。
用途：作普通琼脂平皿。
血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。
用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。
2．尿液，脓液3．分离细菌标本用。
基础培养基（肉膏汤BB）成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。
用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。
2 作普通琼脂斜面。
血液培养基（大管肉汤培养基）成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升2 PABA（对氨基苯甲酸［相当于10mg/毫升］）1g% 1毫升3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升4 枸椽酸钠0．3g制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。
用途：作血，骨髓培养用。
肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22）克水1000毫升2%伊红溶液20毫升0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。
（高压以后方可再加乳糖）用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。
罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克纯甘油（丙三醇）12毫升水600毫升马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤）2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。
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营养琼脂培养基使用说明
022020 营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)
用途：
用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定
(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO标准)。
原理：
蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
配方(每升)：
蛋白胨10g
牛肉膏粉3g
氯化钠5g
琼脂15g
最终pH 7.3±0.2
使用方法：
1、称取本培养基33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：
做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7、菌落计数的报告：
选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。
平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计
A：稀释度的选择：
应选择平均菌落数在30—300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。
若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30—300之间，则视两者之比如何来决定。
若其比值小于或等于2，则应报告其平均数;若大于2则报告其较小的数字。
若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最底稀释倍数报告之。
若有稀释度的平均菌菌落数均不在30—300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
菌落数的报告：
菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位数字后面的有效数值，以四舍五入法计算。
为了缩短数字后面的零数，也可以用10的指数来表示。