NA培养基
各种培养基及部分结果判读 HHT
各种培养基及部分结果判读1、营养琼脂（NA）用于一般细菌或真菌的培养及传代，细菌或真菌可在该培养基上形成菌落。
（注：主要做院感监测）2、5%羊血琼脂培养基（SBA）用于分离标本中一般细菌及需要血液成分的部分苛氧菌，多数细菌能在该培养基上形成具有典型特征的菌落，部分细菌能形成溶血现象。
根据溶血特征分为α溶血、β溶血、γ溶血，溶血特征有助于细菌鉴定。
3、巧克力培养基（CA）由于培养基中的血液受热破坏，血红素（X）及辅酶（V）释放出来,适合嗜血杆菌、奈瑟菌等需特殊生长因子细菌的分离培养。
大多数苛氧菌在该培养基上生长良好。
4、麦康凯培养基（MAC）该培养基属于弱选择性培养基，胆盐抑制革兰氏阳性细菌及部分真菌生长，对大部分肠道细菌及非发酵菌无抑制作用。
常作为革兰氏阴性杆菌的分离和初步鉴别之用，发酵乳糖的细菌在培养基上产粉色菌落，不发酵乳糖的菌落呈无色。
结果判读：大肠埃希菌：粉红色大菌落鼠伤寒沙门菌：无色中等军菌落奇异变形菌：淡橙色大菌落5、伊红亚甲蓝琼脂（EMB）该培养基是一种含酸碱染料的弱选择性培养基，伊红亚甲蓝既是指示剂又是选择剂，对革兰氏阳性菌有抑制作用。
不分解乳糖的细菌为无色或者灰白色。
用于分离肠道细菌及非发酵菌。
结果判读：铜绿假单胞菌：无色小菌落大肠埃希菌：紫红色有金属光泽的大菌落伤寒沙门菌：灰白色中等菌落球菌：不生长6、SS培养基该培养基为常用的弱选择性肠道致病菌分离鉴定培养基，用于从粪便标本或者环境中分离鉴定沙门氏菌和志贺氏菌。
结果判读：大肠埃希菌：红色菌落痢疾志贺菌：无色透明中等菌落鼠伤寒沙门菌：无色菌落，有黑色中心金葡菌：不生长7、XLD培养基XLD培养基即木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐培养基，用于从粪便标本或环境标本中分离鉴定沙门氏菌和志贺氏菌。
原理是加入去氧胆酸钠抑制某些肠道正常菌群来增加选择性。
正常肠道菌群因发酵木糖、蔗糖和乳糖呈黄色菌落，志贺和一些变形杆菌不发酵三种糖中的任何一种，而产生红色菌落。
NA培养基
ATCC 25922
+++
无色透明大菌落
沙门氏菌
ATCC 14028
+++
无色大菌落
铜绿假单胞菌
CMCC 10104
+++
有绿色色素
蜡样芽孢杆菌
ATCC 11778
+++
白色不规则菌落
营养琼脂（NA）Nutrient Agar
用途：细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(GB标准)
配方：（gБайду номын сангаасL）
蛋白胨
牛肉粉
氯化钠
琼脂
PH值
10.0g
3.0g
5.0g
15.0g
7.3±0.1
原理：
蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：
称取本品3.3克，加热搅拌溶解于100ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟备用。
质量控制：
在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株
菌株编号
生长情况
其它特征
金黄色葡萄球菌
ATCC 25923
+++
有黄色色素
化脓性链球菌
ATCC 12344
+++
无色透明小菌落
单增李斯特氏菌
ATCC 19114
+++
无色透明小菌落
培养基配方
1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌）：马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。
用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 µ g/ml，用于抑制细菌的生长。
2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌）：牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。
用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50µg/ml，用于抑制真菌生长。
115℃，20min 灭菌。
3、LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；4、DSM1培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0；5、DSM2培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，细菌学蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 µM，FeCl3 50 µM，ZnCl2 1 µM，VB1 2 µM，甘油0.5 %，谷氨酸0.5 %，色氨酸50 µg/mL，苯丙氨酸50 µg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g，8、BGM1培养基：牛肉膏3 g，胰蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
常用培养基
一般细菌培养基平板计数培养基（PCA）亚硝酸细菌培养基注：培养2周后，取培养液与白瓷板上，加格利斯试剂（详见硝化细菌的测定）甲液和乙液各1滴，若有亚硝酸存在，则成红色，证明有亚硝化作用。
格利斯试剂由两种溶液组成：A液：将0.5g对氨基苯磺酸加到150ml的20%稀乙酸溶液中。
B液：将1g α-萘胺加入到20ml蒸馏水和150ml的20%稀乙酸溶液中。
测试，若呈蓝色，表明有硝化作用。
二苯胺试剂：将0.5g二苯胺溶于20ml蒸馏水及100ml浓硫酸中。
反硝化细菌培养基注：用奈氏试剂（详见细菌生理生化反应）及格利斯试剂测定有无氨和亚硝酸根存在。
若有其中之一或二者均呈正反应，均表示有反硝化作用。
若格利斯试剂为负反应，再用二苯胺测试，亦为负反应时，表示有较强的反硝化作用。
奈氏试剂：溶解2g KI于5ml蒸馏水中。
在此溶液中加入HgI2小粒至溶解饱和为止（32g）；将12.4gKOH溶于约40ml蒸馏水中。
将此溶液倒入HgI2溶液中，加水至100ml。
微量元素溶液组成：H3BO32.86g, ZnSO4·7H2O 0.22g, CuSO4·5H2O 0.08g，MnSO4·4H2O 2.03g，Na2MoO4·2H2O 1.26g，水1000ml溶液II0.2M NaOH （8g/L）1% SDS先溶NaOH，冷却后再溶SDS10×MOPS培养基：MOPS 8.37g; Tricine 0.717g; 葡萄糖0.1 1g——加70ml水，使用KOH调节pH到7.4，加5mg X-Pi（对甲苯胺兰,BCIP）。
硫酸亚铁0.01M 1ml氯化铵1.9M 5ml硫酸钾0.276M 1ml氯化钙0.02M 0.025ml氯化镁 2.5M 0.21ml氯化钠5M 10ml微量元素（1000×）1ml总体积100ml。
1000×微量元素溶液：(NH4)6Mo7O243×10-3MH3BO34×10-4MCoCl2·6H2O 3×10-5MCuSO4·5H2O 1×10-5MMnCl28×10-5MZnSO41×10-5M具体配置方法见下图：改良高氏一号培养基：。
抗生素标记枯草芽孢杆菌实验
利福平标记枯草芽孢杆菌实验1、实验材料1.1试剂利福平溶液：用95%乙醇配制10mg/mL的利福平溶液，配好后经0.22um无菌滤膜除菌。
1.2培养基NA（牛肉膏蛋白胨培养基）培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1.0L，琼脂18.0g，pH7.0-7.2200μg/mL利福平NA培养基：NA培养基经高温灭菌，冷却至50-55℃时加入利福平（1LNA培养基加入20mL10mg/mL利福平溶液）。
液体培养基为对应固体培养基不添加琼脂，其余成分一致。
2、抗生素标记试验首先制备利福平浓度为100μg/mLNA平板，检测枯草芽孢杆菌天然抗药性。
根据天然抗药性检测结果，进行抗生素标记实验（杜立新等，2004），取纯化好的枯草芽孢杆菌单菌落接种到含有5ug/mL利福平NA液体培养基中，150r/min，28℃培养，待出现浑浊后稀释菌液，取三个不同浓度的稀释液100μL加到含有相同浓度抗生素的NA细菌平板，涂匀，继代培养一次，待长出单菌落后转入下一高浓度的利福平NA培养基，依次经过利福平5、10、20、40、80、120、160、200ug/mLNA液体培养基诱导，直至筛选出能耐受的最高利福平浓度200ug/mL。
筛选耐药枯草芽孢杆菌能否应用于研究，还必须验证其耐药的稳定性及拮抗性能。
耐药稳定性试验参考吴春胜等（1994）方法。
（1）将筛选的枯草芽孢杆菌在利福平含量依次升高的NA培养基上连续传代6次，观察其是否始终有菌落出现。
（2）将筛选枯草芽孢杆菌接种至不含利福平NA培养基中，连续传代3-5次，然后将其涂布于含200μg/mL利福平的NA培养基上，观察其是否有菌落出现。
（3）将抗药菌株置于4℃的低温中保藏2-3周，然后接种于含200μg/mL利福平的NA液体培养基上进行培养，观察是否出现浑浊，并在含200μg/mL利福平的NA培养基上划线培养，观察其是否有菌落出现。
一般细菌培养 过程
一般细菌培养过程一般细菌培养过程细菌培养是一种常见的实验技术，用于研究细菌的生长、代谢和生物学特性。
下面将介绍一般细菌培养的过程。
一、准备培养基细菌培养的第一步是准备培养基，培养基是供细菌生长和繁殖所需的营养物质。
一般培养基由碳源、氮源、无机盐和其他辅助物质组成。
常用的培养基有LB培养基、NA培养基等。
在制备培养基时，需要按照一定比例将各种成分混合，并通过高温高压灭菌处理，以确保培养基的无菌状态。
二、接种菌株在培养细菌之前，需要选择合适的菌株。
菌株的选择要考虑到研究的目的以及所需的特性。
接种菌株时，可以从已有的细菌液体培养物中挑取适量的菌液，然后转移到新的培养基中。
三、培养条件控制细菌培养需要提供适宜的环境条件，包括温度、湿度和氧气含量等。
一般来说，细菌在室温下培养需要较长的时间，所以通常选择在恒温培养箱中进行培养，温度一般设定在30-37摄氏度之间。
此外，保持培养环境的湿度也很重要，可以通过在培养箱中放置含水的盛器来增加湿度。
氧气含量对不同细菌的生长有不同的要求，在一般的细菌培养中，通常使用通气瓶或培养皿盖上的透气膜来控制氧气的供给。
四、培养时间控制细菌的生长速度与培养时间密切相关。
一般情况下，细菌培养需要一定的时间来达到最佳生长状态。
在培养的初期，细菌数量较少，此时主要是细菌的增殖阶段。
随着培养时间的延长，细菌数量逐渐增多，培养基中的营养物质也会逐渐减少，此时细菌进入平稳期。
最后，当培养基中的营养物质耗尽时，细菌进入凋亡期，细菌数量开始下降。
五、菌落计数与分离在细菌培养过程中，可以通过菌落计数来确定细菌的数量。
菌落计数可以通过将培养皿上的菌落数目进行统计，再根据所接种的细菌数量来计算。
此外，有时也需要将培养出的细菌进行分离，以得到纯种的细菌。
分离可以通过在富含某种特定营养物质的培养基上进行，利用细菌对不同营养物质的需求差异进行筛选。
细菌培养是微生物学研究中的重要实验技术，它可以提供大量的细菌供研究使用。
培养细菌真菌实验报告
培养细菌真菌实验报告实验目的：1.了解培养基的种类及其适用范围；2.理解细菌和真菌的生长环境和特性；3.掌握无菌技术，避免污染；4.掌握细菌和真菌的分离培养技术，能够分离和鉴定不同种类的微生物。
实验原理：细菌真菌是一类微生物，其生长繁殖需要一定的环境条件。
在实验室中，可以通过将细菌和真菌接种于培养基上并控制其生长条件，从而得到大量菌落，进行繁殖和鉴定。
常用的培养基包括：营养琼脂（NA）培养基、大肠杆菌培养基（LB）等。
实验步骤：1.准备实验仪器和试剂，遵守无菌操作规范；2.选择适当的培养基，制备培养基；3.将细菌真菌样品接种在培养基中，避免交叉感染和污染；4.在适当的温度和湿度下进行培养，观察菌落特征，记录生长情况，并进行细菌和真菌的鉴定。
实验结果：在实验过程中，我们选择了营养琼脂（NA）培养基和大肠杆菌培养基（LB）进行细菌和真菌的培养。
经过培养，我们观察到了不同特征的菌落，分别进行了鉴定。
我们得到的实验结果如下：NA培养基：菌名菌落特征鉴定结果大肠杆菌黄色，凹陷状阳性杆菌链球菌圆形，灰白色阳性球菌枯草芽孢杆菌白色，凸起状阳性杆菌酵母菌肉色，呈菌丝状真菌从实验结果中可以看出，在不同的培养基中，不同种类的细菌和真菌呈现出不同的生长特征，经过鉴定可以确定其种类。
同时，无菌操作和培养条件的控制对实验结果也有重要影响。
通过本次实验，我们学习了无菌技术，了解了细菌和真菌的特点，掌握了基本的分离培养技术，并能够进行基本的鉴定操作。
同时，我们也发现实验中操作规范和环境控制是实验结果准确的关键。
该实验有利于我们对微生物学的学习和研究，对我们今后的科研工作也有重要的帮助。
各种培养基配方
1．营养肉汤成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。
制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。
2．营养琼脂培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121℃，15min高压灭菌备用。
3．MRS培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温80 1mL，MgSO4 .7H2O 0.58g，MnSO4 4H2O 0.25g，（琼脂15~20g），蒸馏水1000mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。
4．脱脂乳培养基成分：牛奶，蒸馏水。
制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，过夜冷却，脂肪即可上浮。
除去上层乳脂即得脱脂乳。
将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。
5．培养基A成分：蛋白胨10.0g，酵母提取物1.0g，葡萄糖10.0g，NaCL5.0g，琼脂15.0g，水1000mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至7.0~7.2，分装于三角瓶中，121℃，灭菌15min。
6．PTYG培养基成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐温80 0 1mL，琼脂15~20g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，盐溶液4mL。
制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.8~7.0，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。
盐溶液制备：无水氯化钙0.2g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，MgSO4 。
7H2O 0.48g，NaCO3 10g，NaCL 2g，蒸馏水1000mL，溶解后备用。
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大肠埃希氏菌
ATCC 25922
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无色透明大菌落
沙门氏菌
ATCC 1Biblioteka 028+++
无色大菌落
铜绿假单胞菌
CMCC 10104
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有绿色色素
蜡样芽孢杆菌
ATCC 11778
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白色不规则菌落
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称取本品3.3 克，加热搅拌溶解于100ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟备用。
质量控制：
在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株
菌株编号
生长情况
其它特征
金黄色葡萄球菌
ATCC 25923
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有黄色色素
化脓性链球菌
ATCC 12344
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无色透明小菌落
单增李斯特氏菌
ATCC 19114
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营养琼脂（NA）Nutrient Agar
用途：细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(GB标准)
配方：（g/L）
蛋白胨
牛肉粉
氯化钠
琼脂
PH值
10.0g
3.0g
5.0g
15.0g
7.3±0.1
原理：
蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：