去壁低渗法制备植物染色体标本实验
植物染色体技术-去壁低渗法
五、酶解去壁：倒去固定液，蒸馏 水漂洗2-3遍，加入2.5%纤维素酶 与果胶酶的混合酶液1ml.
目的：分离细胞和软化去壁。
六、低渗处理：倾去酶液，加入 0.075M KCl溶液，在20~25℃条件 下低渗处理30min。 目的：使细胞吸收水分而膨胀， 染色体分散到细胞质中，在制片 时便于染色体分散开。
七、去沉淀：静止片刻，去掉大 块沉淀物，倒取上层悬液。
目的：自然沉降。
八、离心：上层清液以200g离心1020min。
九、标本制备：将分离所得的 悬液滴至载玻片上，在酒精灯 火焰上微微加热烤干，用卡宝 品红染色5~10min，在光镜下观 察小麦根尖细胞中期染色体的 形态结构。
这个方法与传统的压片法相比具有若 干优： 用这个方法获得的染色体形态比较完整, 接近正常状态。染色体各组成 部分— 长臂、短臂、着丝点、随体、染色单 体显示的都比较清楚,有利于染色体的测 量 和分析这个方法不但可使 中期染色 体散开,而且也 可使前中期,甚至前期的 染色体散开。
一、材料培养：取约30粒种
子,加水浸润后置于培养皿中 于25℃恒温培养发芽。
二、取材：待根长到1.0-2.0cm时， 在上午9：00剪取种子跟约0.51.0cm。
三、预处理：0.1%的秋水仙素处 理3-4小时，或冰水混合物浸泡24 小时。 目的：是染色体分裂滞留在中期。
四、固定：将经过预处理的根尖清 洗后用镊子将细胞夹碎，定液4-5ml 目的：使小麦根尖细胞固定在原来 的分裂状态，病史构成染色体的核 蛋白变性成沉淀，保持染色体的固 有形态。
植物染色体制片技术—— 去壁低渗法
近年来,有人试图将人类染色体标本 制备方法引用到植物材料上来，取得 一些进展。我们参照人类染色体标本 制备技术,开展了对植物细胞去壁、 低渗、火焰干燥方法的研究。
低渗液处理细胞染色体标本制作过程
低渗液处理细胞染色体标本制作过程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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开放实验 染色体制片
玉米、洋葱、人染色体
果蝇染色体
三、实验步骤
利用血淋巴细胞制备染色体标本步骤 ： 1、采血（0.5ml） 可在采血前向实验动物腹腔注射0.01％秋水素，因血易在注射器
内凝固，故注射器预先经肝素纳浸湿，可采心脏血、静脉血。 2、低渗 加入经37℃预温的0.0375mol/L KCl溶液至7ml混匀后，置37℃水浴中低渗
=3：1)中固定4-5h，固定后的根尖若不能及时制片，用蒸馏水冲洗后， 换70%
的乙醇溶液，置冰箱中保存备用 。
3、解离 根尖从冰箱中取出后，先用自来水冲洗掉根表面的乙醇，再用1N HCL
酸解根尖，温度55—60℃左右，时间1—2分钟，以根变软为止。
4、染色 用水冲洗根表面的HCL，取前端乳白色部分放在干净的载玻片上捣
处理20分钟左右﹙目的 红细胞将破裂，白细胞吸水充分膨大，利于染色体的分散﹚。 3、预固定 加1ml新配制的甲醇-冰醋酸3∶1的固定液，待充分混匀后，离心
1500r/min、 10min ，弃上清液，留管底细胞。 4、固定 加5 ml固定液，室温20 min，再离心，1500r/min、10min，弃上清液，留
培养基的一种配方 ：
1640 4ml ：优质胎牛血清 1 ml
PHA 0.2mg ：肝素钠 0.03ml ： 双抗
PHA (植物凝集素，从血豆中提取的一种糖蛋白，可刺激淋巴母细胞进 行分裂 ) 肝素钠 (配成的浓度为700—1000个效价/ml，起防止血液凝固用 ) ，
双抗（青霉素和链霉素，最终浓度各为100单位/ml ，起杀死培养基中
得染色体的不同带型。 以上采的血样未经培养直接制片，还可将血放入到培养基中培养一定的时间，再制 片。但采血及培养基的配制都必须在无菌室内进行。制片过程将步骤1改为1★其余步 骤相同。 1★收集细胞 速1500r/min 将含有血细胞的培养基（培养瓶充分摇匀）转移到离心管中离心，转 10min ，弃上清液（用吸管吸走，不要将下部细胞吸走），留1ml 。
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意
义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法是通过去除细胞壁，使得细胞内的染色体能够在液态介质（通常是醋酸或者醋酸-乙醇混合液）中自由展开，并与染色剂染色，从而得到适合观察和分析的染色体标本。
这种制备方法在植物细胞遗传学中得到广泛应用。
首先，通过去除细胞壁，可使得染色体得以展开成线性或环形的形式，方便进行观察和分析。
其次，在去壁液中低渗透压下染色质水肿膨胀，使染色体的结构更加明晰，染色效果更佳。
同时，去壁液中还含有某些成分，如乙酸和染色剂，可促进染色体的凝聚和染色，从而也有助于染色体的分析和研究。
植物染色体标本制备的去壁、低渗法在植物细胞遗传学中有着重要的应用价值，可用于染色体数目和形态的分析、基因定位和标记、染色体变异的检测和研究等。
特别是在遗传改良中，该方法也被广泛应用于植物杂交和基因转移等研究领域。
5-牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察
报告成绩实时记录成绩实验五牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察学生姓名学号班级座位号：同组同学日期：年月日备注：【Introduction】（1）简述染色体显色技术：将没有染色的中期染色体经过预处理后，再用不同的方法和染料处理，使染色体上出现明暗相间或深浅不同的明显而稳定的斑带。
每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至染色体结构异常也可被检出。
染色体显色技术分为两大类，一类是产生的染色带分布在整个染色体上，如G、Q和R带；另一类是只能使少数特定的区域显带，如C、T和N带。
染色体显色技术极大地促进了细胞遗传学的发展，使每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至出现小的染色体结构异常也可被检出。
（2）制备中期染色体标本的原理和应用：识别染色体的形态特征的最佳时期是细胞有丝分裂中期和早后期。
这时染色体收缩程度最大，形态最稳定，并且分散排列、易于计数。
如果在同一时间内获得不同物种的染色体标本，就可以了解不同物种之间的染色体水平的异同；或者在同一时间内获得同一物种不同技术处理条件下的染色体标本，还可以了解不同技术处理对染色体的影响。
【Materials & methods】实验仪器：复式双筒显微镜（带油镜）；Motic数码互动系统；擦镜纸/盖玻片；载玻片/镊子；记号笔；小片滤纸；移液器/吸头；香柏油/二甲苯；搪瓷盘，剪刀，烧杯，小离心管，玻璃注射器；离心机，一次性手套，骨剪（实验班公用），冰箱（0℃）。
实验材料：肉用成体牛蛙（两组1只）。
实验试剂：0.65％生理盐水；甲醇—冰醋酸(3:1)固定液；蒸馏水；自来水;Giemsa染液。
实验操作：1．动物前期处理：牛蛙称重→注射秋水仙素→3.5~4小时后麻醉→取牛蛙→肢解。
2．取骨髓：剪下四肢→剔骨→剪开骨髓腔→生理盐水冲洗→分四个离心管离心→弃去上清液→生理盐水吹打沉淀物→合并于一管。
3．低渗：每管加蒸馏水1 ml→吹打混匀→30度下静置20 min。
4．固定：离心→弃去上清液→加甲醇-冰醋酸固定液l ml→固定15分钟→吹打悬浮→重复上面步骤一次→离心→弃去上清液→吹打悬浮。
实验七 植物染色体标本的制备与观察
解离：取出根尖放入1mol/L HCl（58-60 ℃解离 对比）解离14-15min，软化去除细胞壁及果胶物 质，使细胞易于分散。 染色：倒去热HCl后，用改良苯酚品红染色液染 色5～10min。 漂洗：吸去染色液，用漂洗液换洗2-3次，每次12分钟。
酶解：在载玻片上切取根尖着色深的部分，浸入 小酒杯内1-2第混合酶液中，室温下酶解40min左 右或在28 ℃温箱中酶解20min左右。
取材：将小麦放在25℃温箱中发芽，待根长到 1~2cm左右，窃取0.5cm长的根尖部分。
前处理：剪下根尖用0.1％秋水仙素溶液处理3～ 4h。也可将剪下的根尖放在0～3℃蒸馏水中，置 冰箱中24小时，使分裂的细胞尽可能集中于分裂 中期。
固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定2～ 24小时。换入70%的酒精，使细胞的分裂活动处 于停滞状态。 制片：有多种方法——切片、压片、滴片等。
洗涤：吸去酶液，加蒸馏水，用吸管换洗几次， 吸去残留的煤业后加入45%的醋酸。 压片：用吸管从醋酸中吸去材料，置于干净的载 玻片上，保留少许醋酸，盖上盖玻片，覆以吸水 纸，轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 镜检
四：实验观察结果
1．分裂细胞观察 低倍镜找分裂细胞区,高倍镜观察染色体形 态。估计染色体数目。
染色体组在细胞分裂中期的表型称为染色体组型 或称核型，包括染色体数目、形态、大小、着丝 点位置及副缢痕及随体的有无等特征。 染色体组型分析就是通过对染色体标本或其照片 进行测量、对比分析、配对、分组、排列，对组 内各染色体的形态进行测量、描述，从而阐明生 物染色体组成的过程。
三、实验材料
器具：恒温培养箱，显微镜
试剂：0.1％秋水仙素溶液，Carnoy固定液， 1mol/L HCL, 亚硫酸水溶液（漂洗液），纤维素酶 ，果胶酶，改良苯酚品红染色液（Carbor fuchsin ，）
大麦和玉米染色体去壁低渗法制片及其核型分析
１３ １ 去壁低 渗火焰 干燥 法制备 染色体 标本 。 ．． 根 尖染 色体 制片步 骤是 ：
催芽一根尖取样 预处理 一固定 一前底渗一解
离一后 低渗 一再 固定 一涂 片一染 色一制 片 。 具体 染色体 制 片方法 是 ：
究具有重要 意义。以往作为简便 的染 色体 制片技
维普资讯
８
大麦与谷类科学
Ｂ Ｒ Ｅ Ｎ Ｅ Ｅ ＬＳ Ｉ Ｎ Ｅ Ａ Ｌ Ｙ Ａ Ｄ Ｃ Ｒ Ａ ＣＥ Ｃ Ｓ
大麦和玉米染色体去壁低渗法制片及其核型分析
虢 国成 向 洋
（ 长沙理工大学生物与食 品工程学院 ，湖南 长沙 ４ ０７ ） １０ ６
摘要 运用去壁低渗火焰干燥法制备大麦和玉米染 色体 片 ，然后对玉 米 、大麦的染色体 核型进行研究 。结果表 明 ：该 法使 细胞质残 留较少和染色体更分散 ，为细胞 学研究提供清 晰度高 的染色体制 片 ；通过核型分析得 到 ，大 麦根尖细胞染 色体数 目为 ２ ｎ＝１ ４，核型公式为 ２ ２ ｎ＝ ｘ＝１ ２ （ Ｓ Ｔ ＋ ｓ （ Ｓ Ｔ ，玉米 根尖细胞染色体 数 目为 ２ ４＝１ｍ ２ Ａ ） ２ｍ ２ Ａ ） ｎ＝２ ，其核 型公 式为 ０
湿 润 ，然 后将 种子 均匀地 摆放 在滤纸 上 ，种 子 间距
约 ０５ ｅ ． ｍ，盖上 盖 ，２ ２ ℃ 条件下 培养 。 ５— ８
（ ） 取 材预处 理 ：处 在 细胞 分 裂 中期 的染 色 ２
体最易观察 ，但细胞分裂中期持续时间很短，一般
只有 １ ３ ｎ ０～ ０ ｍｉ，因此 固定 材 料 的 中期 分裂 相 较 少 ，而且染 色体 紧密排 列在 赤道 面上 ，很 难将 染色
２ ２ ｎ＝ ０＝１ ｍ ＋ ｓ （ ｅｔ） ２ ８ｍ ２ａ 。 ｓ
去壁低渗法制备植物染色体标本
一、实验目的 1、掌屋植物染色体标本的去壁低渗方法 2、了解中期染色体的形态结构
二、实验原理：
植物细胞有很坚实的细胞壁，染色体很难像动 物染色体那样平整地贴在载玻片上，可通过纤 维素酶和果胶酶处理去掉细胞壁；用低渗溶液 处理可以提高染色体的分散程度。陈瑞阳等 （1979，1982）提出了植物染色体标本制备 的酶解去壁低渗法，并在多种植物上得到广泛 应用，成为当前植物染色体研究中的重要方法。
7、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意 观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置， 并尽可能找到具随体染色体。
1、材料培养：将玉米或大麦的种子充分浸种后，摆 在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温箱发芽培养 2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入 盛有1ml0.2%秋水仙素的小瓶中预处理2-3小时 3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放 入0.075mol/L氯化钾低渗液中，在25℃条件下处理30 分钟。以下可分两种方法进行处理
4、第一种方法： （1）、酶解去壁：吸去氯化钾溶液，加入混 合酶液（2ml滴管5滴左右），在25℃下处理12小时。 （2）、后低渗：吸去酶液，慢慢加入 (25±0.5) ℃的双蒸水,轻轻洗一次,然后在双蒸 吸去前低渗液，立即加入甲醇：冰醋酸（3：1） 固定液固定20-30分钟
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去壁低渗法制备植物染色体标本实验
方法步骤：
1、材料培养：将高粱的种子充分浸种后，摆在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温
箱发芽培养
2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入盛有0.2%秋水仙素和
0.002mol/L 8-羟基喹啉水溶液等量混合液的小瓶中预处理2-3小时3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放入0.075mol/L氯化钾低渗液中，
在25℃条件下处理30分钟。
以下可分两种方法进行处理
4、（1）吸去前低渗液，立即加入甲醇：冰醋酸（3：1）固定液固定不少于1h。
（2）水洗：将固定好的材料用蒸馏水洗三次，除去材料中的固定液，在1mol/L 的HCl于60℃处理15分钟。
（3）酶解去壁：在小瓶内加入混合酶液（酶液量以浸过材料为合适），在25℃下酶解30-60分钟
（4）后低渗：吸去酶液，慢慢加入(25±0.5) ℃的双蒸水,轻轻洗一次,然后在双蒸水中浸泡10分钟。
5、悬液法：
（1）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞悬液
（2）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液1-2ml，使成细胞悬液时间在10分钟到数小时不等。
（3）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另一个小瓶中。
（4）去上清夜：将上层细胞悬液静置30分钟左右，即可见细胞沉淀，用吸管轻轻吸去上清夜，留约0.5ml左右细胞悬液置备标本
(5)标本制备:在一张经过充分洗净脱脂,并预先在蒸馏水中冷冻的清洁载玻片
上,用吸管滴2-3滴细胞悬液,立即将载玻片一端抬起,并轻轻吹
气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热烤干。
（6）染色：经干燥的玻片标本，用Giemsa染色液染色30分钟，然后用自来水细流冲洗，甩干水珠空气干燥
6、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体。