氨基酸类物质的紫外光谱分析和定量测定
高效液相色谱法快速直接测定酪氨酸_苯丙氨酸和色氨酸
(3)A ccQ. T ag 法测定 172300 氨基酸样品 处理方法, 参见 A ccQ. T ag 法测定水解氨基酸 标准手册。
2. 3 色谱条件 流动相: 8. 5 mM N aA c- 5% 甲醇溶液, 用
4 讨论 4. 1 测定波长的选择 本方法在测定酪氨酸、 苯丙氨酸和色氨酸时, 选择了三种不同的波长, 即在 230 nm 处测定酪氨酸、在 210 nm 处测定 苯丙氨酸、在 278 nm 处测定色氨酸, 其根据是 这三种氨基酸的紫外吸收图谱 (见图 2)。
图 2 T yr, Phe, T rp 的紫外吸收光谱图
测定波长的选择本方法在测定酪氨酸苯丙氨酸和色氨酸时选择了三种不同的波长即在230nm处测定酪氨酸在210nm处测定苯丙氨酸在278nm处测定色氨酸其根据是这三种氨基酸的紫外吸收图谱见图氨基酸投料量5010的计算结果可以看出在测定172300氨基酸注射液时以稀释10倍最为合适测定结果与投料最为接近而稀释50和不稀释时测定的结果均偏低且与投料量相差较大
磷酸调节 pH = 4. 0; 流速: 1. 2 m l m in; 柱温: 36℃; AU FS: 2. 000; 波长开始设为 230 nm , 分 析至 2 m in 时自动变换为 210 nm , 4 m in 时变 换为 278 nm , 至 7 m in 分析结束。
3 结果分析 3. 1 各组分的分离效果
从表 2 的计算结果可以看出, 在测定 172 300 氨基酸注射液时, 以稀释 5 倍或 10 倍最为 合适, 测定结果与投料最为接近, 而稀释 50 倍 和不稀释时测定的结果均偏低, 且与投料量相 差较大。 通过计算可知: 将样品稀释 50 倍时,
肥料氨基酸含量检测方法
肥料氨基酸含量检测方法
肥料中氨基酸含量的检测方法可以采用多种技术和方法，以下是其中一些常用的方法：
1.高效液相色谱法（HPLC）：这是一种常见的氨基酸含量检测方法。
它通过将样品中的氨基酸分离，并使用紫外检测器或荧光检测器检测各种氨基酸的浓度。
HPLC法通常具有高灵敏度和高分辨率，能够准确地测定各种氨基酸的含量。
2.气相色谱法（GC）：气相色谱法也可用于氨基酸含量的检测。
在这种方法中，样品中的氨基酸首先转化为相应的氨基酸甲酯衍生物，然后通过气相色谱柱进行分离和检测。
GC法通常需要较长的分析时间，但具有较高的精确度和可靠性。
3.红外光谱法（IR）：红外光谱法可以用于氨基酸的快速检测。
该方法通过分析样品中氨基酸分子的振动和拉伸模式来确定其含量。
红外光谱法具有快速、简便的优点，但灵敏度相对较低。
4.比色法：比色法是一种常用的定性和定量分析方法。
对于氨基酸含量的检测，可以使用特定的试剂与氨基酸反应产生显色反应，然后通过比色计或分光光度计测定溶液的吸光度来确定氨基酸的含量。
5.离子交换色谱法（IEC）：离子交换色谱法是一种常用于分析氨基酸的方法。
在这种方法中，氨基酸根据其电荷性质在离子交换树脂柱上进行分离，并通过检测器检测各个氨基酸的浓度。
在选择合适的检测方法时，需要考虑样品的性质、所需的分析精度和灵敏度、分析时间以及实验室设备和经验等因素。
常见的检测方法通常会结合使用，以确保结果的准确性和可靠性。
氨基酸分析的检测方法评述_戴红
文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA 647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。
主要研究方向:分析检验。
氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘 要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。
关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q 503 文献标识码:ADete rmination Methods of Amino Acids AnalysisDAI Hong ,ZHANG Zong -cai ,ZHANG X in -shen(Key Laboratory of Leather Chemistry and Engineering(Sichuan University ),Ministry of Education ,Chengdu 610065,China )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec -tric -chemistry determination ,spectrophotometer determination and co nductivity detectionmethod w ere review ed fo r the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy .The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualy tic methods .Key words :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。
化学实验中的常见光谱分析方法
化学实验中的常见光谱分析方法光谱分析是化学实验中常用的一种分析方法，通过不同物质吸收或发射特定波长的电磁辐射来分析物质的组成和性质。
在化学实验室中，常见的光谱分析方法包括紫外-可见吸收光谱、红外光谱、质谱以及核磁共振等。
本文将详细介绍这些常见的光谱分析方法及其应用。
一、紫外-可见吸收光谱紫外-可见吸收光谱（UV-Vis）是一种常用的分子光谱分析方法，通过测量物质在紫外-可见光区域的吸收特性，可以推断物质的分子结构和浓度。
在紫外-可见光谱实验中，常用的仪器是分光光度计。
该仪器可以测量物质溶液对不同波长光线吸收的程度，从而得到吸收光谱图。
通过对比标准物质的吸收光谱，可以确定待测物质的浓度。
紫外-可见光谱广泛应用于有机化合物的分析，如药物检测、环境监测等。
在药物领域，紫外-可见光谱可以用于测定药物的纯度以及药物在体内的代谢率。
在环境监测中，紫外-可见光谱可以检测水中有机物的浓度，监测水质污染状况。
二、红外光谱红外光谱是一种分析物质结构和功能的常见方法，通过测量物质与红外辐射的相互作用来分析物质的化学特性。
红外光谱仪是红外光谱实验中使用的仪器，它可以测量物质在不同波长的红外辐射下的吸收情况。
红外光谱广泛应用于有机分子的结构确定和功能分析。
通过红外光谱，可以确定有机化合物中的官能团、化学键类型以及分子的组成。
在药物研究中，红外光谱常被用于药物质量控制和表征。
通过对比标准物质的红外光谱，可以鉴定未知药物的成分。
三、质谱质谱是一种通过分析化学物质的离子质量与荷质比（m/z）的比例来确定其分子结构和分子量的方法。
质谱仪是质谱分析中使用的仪器，它可以将化学物质转化为离子，并测量不同离子质荷比的强度。
通过质谱仪得到的质谱图，可以确定化合物的分子式和分子结构。
质谱广泛应用于有机化学和生物分析等领域。
在有机化学中，质谱可以用于鉴定化合物的结构和确定分子量。
在生物分析中，质谱可以用于鉴定蛋白质的氨基酸序列和脂肪酸的结构。
生物有机化学氨基酸的分析方法综述
生物有机化学氨基酸的分析方法综述A Review on Amino acid Analysis Methods摘要:氨基酸电分析研究是生命科学中令人关注的课题。
本文就各种氨基酸的分析化学研究的最新进展进行了综述。
关键词:氨基酸分析方法综述Abstract：The analysis methods of amino acids are very important in ream of industry, agriculture and life science. Inthis paper，the analysis methods of amino acid are reviewed，with focus on chemistry method, spectrophotometry method, chromatography method and electrochemistry method.Key words: amino acids;analysis;review1 前言氨基酸是生物体中重要的生命物质,是组成酶和蛋白质的基本单元。
作为小分子,氨基酸对生物大分子的活性及其生理功能起着极为重要的作用;作为配体,它可与多种金属离子配位,为研究抗肿瘤、抗癌药物提供信息。
各种氨基酸在生物体中具有不同的生物功能,如生物体中的色氨酸与脑的正常代谢有密切的关系,L 一半胱氨酸能增强生物体的抗病能力,因此,准确灵敏地测定食物、药品和生物样品中氨基酸的含量具有十分重要的意义。
目前,对氨基酸的分析测定多采用离了交换色谱( IEC) [1]、高效液相色谱(HPLC) [2] 或气相色谱(GC) [3]等仪器,这些仪器所用的检测器包括紫外可见光谱吸收、荧光、化学发光等。
然而,由于多数氨基酸的紫外可见光谱的吸收极弱, 自身又无荧光,因此不能直接检测。
通常需要衍生化处理来提高检测的灵敏度和选择性。
电化学方法以其简单、灵敏、无放射、无污染等特点越来越受到人们的关注。
氨基酸的荧光激发、发射及同步荧光光谱的测量
实验二.氨基酸的荧光激发、发射及同步荧光光谱的测量093858 张亚辉一. 实验目的1.学习荧光分析法的基本原理和LS －55B 发光分析仪的操作。
2.学习同步荧光的操作，了解同步荧光的优点。
二.实验原理荧光是分子从激发态的最低振动能级回到原来基态时发射的光。
利用物质被光照射后产生的荧光辐射对该物质进行定性分析和定量分析的方法，称为荧光分析。
在一定光源强度下，若保持激发波长ex λ不变，扫描得到的荧光强度与发射波长em λ的关系曲线，称为荧光发射光谱；反之，保持em λ不变，扫描得到的荧光强度与ex λ的关系曲线，则称为荧光激发光谱。
在一定条件下，荧光强度与物质浓度成正比，这是荧光定量分析的基础。
荧光分析的灵敏度不仅与溶液的浓度有关，而且与紫外光照射强度及所选测量波长等因素有关。
酪氨酸(Tyr)、色氨酸（Try ）、苯丙氨酸（Phe ）是天然氨基酸中仅有的能发射荧光的组分，可以用荧光分析法测定。
它们的激发光谱和发射光谱有互相重叠的现象。
同步扫描荧光光谱技术可以简化、窄化光谱，提高选择性。
三.实验仪器和试剂 1. LS-55型发光谱仪;2. 移液枪(德国BRAND 公司生产);3. 100ml 容量瓶2支; 废液池（烧杯）一只；4. 氨基酸储备液：色氨酸20mg/l ，苯丙氨酸20mg/l.双酚A;5. 去离子水; 四.实验步骤1．打开电脑和光谱仪主机，将仪器预热20分钟左右。
设定仪器参数：全波长预扫描参数，用储备液在100ml 容量瓶中配置溶液，加水定溶后，使得色氨酸浓度为0.1mg/l, 苯丙氨酸1mg/l ；对两种溶液进行预扫描，并记录扫描结果。
同时查看其拉曼波长、瑞利散射波长、以及双倍频峰波长。
2．从预扫描得到激发和发射波长的初步结果（200 –600nm），分别对两种氨基酸溶液测量它们的荧光激发、发射和同步荧光光谱。
激发光谱参数：扫描波长范围200 - 350nm。
emλ(Phe)=287nm，扫描速度=500nm/min, Ex-Slit=5nm, Em-slit=5nm,记录信息；emλ(Try)=357nm, 扫描速度=500nm/min, Ex-Slit=5nm, Em-slit=5nm,记录信息。
有机化学氨基酸分析
有机化学氨基酸分析1.色谱法色谱法是一种广泛使用的氨基酸分析方法，主要包括气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。
气相色谱法：气相色谱法主要适用于描绘和鉴定原料氨基酸的种类、含量和结构等信息。
在该方法中，氨基酸样品首先通过酸水解生成对应的酸，然后酸再经甲醇酯化生成甲酯化酸。
最后通过气相色谱分离并检测酸甲酯化物。
液相色谱法：液相色谱法主要适用于定量分析氨基酸含量。
液相色谱法将氨基酸样品进行衍生化反应，如酰氯化反应或酸酐酯化反应，生成稳定的色氨酸酰胺衍生物，然后分离并检测各个衍生物。
2.光谱法主要包括紫外-可见吸收光谱法、红外光谱法和核磁共振光谱法等。
这些方法可以用于研究和确定氨基酸的结构和功能。
紫外-可见吸收光谱法：氨基酸溶液在特定波长范围内对紫外或可见光的吸收程度可以用来定量分析氨基酸的含量。
红外光谱法：红外光谱法可以用来研究氨基酸分子中的官能团和结构信息。
核磁共振光谱法：核磁共振光谱法可以提供关于氨基酸分子中原子的化学位移和耦合常数等信息。
3.电化学法电化学法主要包括电位滴定法和电化学发光法。
电位滴定法：通过测定氨基酸溶液的电化学行为，如氧化还原电位的变化，可以定量分析氨基酸的含量和测定其在酸碱条件下的酸解离常数。
电化学发光法：氨基酸在特定条件下通过电化学反应发光，凭借发光的强度可以定量分析氨基酸的浓度。
4.质谱法质谱法主要包括质子化时间飞行质谱法（PIT-TOFMS）和质子化辅助激光解吸电离质谱法（PALDIMS）等。
质子化时间飞行质谱法：PIT-TOFMS可以在非常短的时间内通过氨基酸分析样品中的氨基酸类型和含量。
该方法的优势在于可以同时测定样品中的多种氨基酸。
质子化辅助激光解吸电离质谱法：PALDIMS利用激光对氨基酸样品进行解离和电离，然后通过质谱仪进行质量分析。
该方法可以提供对氨基酸的结构、组成和含量等信息。
综上所述，有机化学氨基酸分析方法包括色谱法、光谱法、电化学法和质谱法等。
这些方法可以用于氨基酸的种类、含量、结构和功能的研究和分析。
绘制吸收光谱及测定摩尔吸光系数
实验一绘制吸收光谱及测定摩尔吸光系数一.实验目的通过紫外吸收光谱的绘制和摩尔吸光系数的测定，掌握Agilent8453 UV-Vis的使用方法。
学习导数光谱计算方法及特点。
二.实验原理1．本实验用Agilent8453型分光光度计绘制氨基酸（苯丙氨酸，色氨酸）的紫外吸收光谱，找出它的吸收峰波长并计算摩尔吸光系数。
CH2CHCOOHNH2CNHCH2CHCHCOOHNH2苯丙氨酸色氨酸紫外分光光度法是利用物质对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，波长范围为200-400nm的紫外光谱。
各种分子都有其特征的吸收光谱，即吸光度与摩尔吸光系数随波长的变化而变化的规律。
吸收光谱的形状与物质的特征有关，以此进行定性分析。
为了清楚地描述各种物质对紫外区域电磁辐射的选择性吸收的情况，往往需绘制吸收光谱曲线，即吸光度对波长的曲线。
在吸收光谱曲线上可以找到最大吸收峰波长。
根据比尔定律：A = εb c式中A—吸光度ε—摩尔吸光系数b—液槽厚度，单位：cmc—摩尔浓度，单位：mol/l摩尔吸光系数可按下式计算：Abc ε=2．导数分光光度法：利用紫外-可见分光光度计软件系统带有的数学处理功能，对吸收光谱进行处理，可以获得导数光谱。
利用导数光谱进行分光光度测定，称为导数分光光度法。
通常可以获得1-4阶导数光谱。
在各阶导数光谱中，吸光度对波长的微分值与溶液中组分的浓度c保持线性关系：ssd Acdλ∝。
其中s为导数的阶数。
因此，可以利用导数光谱进行定量测定。
导数光谱可用于放大图谱间差别，定性分析中分辨重叠谱带，而且还可以减少定量分析中来自散射、基体、及其它吸收物的干扰影响。
由于导数光谱灵敏度高，因此对于试样纯度检验，多组分混合物的测定，消除共存杂质的干扰和背景吸收，测定混合式样都具有特殊的优越性。
三.实验仪器和试剂1.Agilent8453 UV-Vis分光光度计;2.移液枪(德国BRAND公司生产);3.50ml容量瓶2支; 废液池（烧杯）一只；4.氨基酸储备液：色氨酸0.400 g/l，苯丙氨酸2.00 g/l;5.去离子水四.实验步骤1.吸收光谱的测定（1）用氨基酸储备液及去离子水在50ml容量瓶中配置氨基酸溶液，色氨酸浓度为40mg/l, 苯丙氨酸800mg/l；（2）分别取上述溶液，用1cm石英比色皿，以水作参比溶液，在波长范围为190nm—400nm 间测定他们的吸收光谱。
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氨基酸类物质的紫外光谱分析和定量测定
zuozhe
一、 实验目的
（1）掌握紫外–可见分光光度计的工作原理与基本操作。 （2）学习紫外–可见吸收光谱的绘制及定量测定方法。 （3）了解氨基酸类物质的紫外吸收光谱的特点。
二、 实验原理
紫外-可见分光光度法属于吸收光谱法，分子中的电子总是处在某一种运动状 态中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定的能级。电子由于受到光、热、 电等的激发，从一个能级转移到另一个能级，称为跃迁。当这些电子吸收了外来 辐射的能量，就从一个能量较低的能级跃迁到另一个能量较高的能级。物质对不 同波长的光线具有不同的吸收能力，如果改变通过某一吸收物质的入射光的波 长，并纪录该物质在每一波长处的吸光度（A）,然后以波长为横坐标，以吸光度 为纵坐标作图，这样得到的谱图为该物质的吸收光谱或吸收曲线。 当一定波长的光通过某物质的溶液时，入射光强度 I0 与透过光强度 It 之比的 对数与该物质的浓度 c 及厚度 b 成正比。其数学表达式为：
312.87
图 7 对待测波长处的放大图像 根据峰值绘制标准曲线：
仪器分析实验报告
图12 酪氨酸溶液的4阶导数标准曲线 然后带入未知样品在峰值处的一阶导数强度，可以得出c=82.4mg/L。
六、
思考题
（1）本实验是采用紫外吸收光谱中最大吸收波长进行测定的，是否可以在波长较短的吸 收峰下进行定量测定，为什么？ 答：不可以，因为在波长较短的吸收峰处很窄的波长范围内随λ的变化改变很大， 此工作条件难于控制准确一致，将会影响测定结果的精密度和准确度。 （2）被测物浓度过大或过小对测量有何影响？应如何调整？调整的依据是什么？ 答：浓度过大容易超出线性范围，浓度过小则会造成较大的误差。应当在粗略估 计待测浓度之后将其稀释或浓缩至工作曲线浓度范围内后再进行测量。 （3）思考紫外-可见分光光度法应用于蛋白质测量的依据，并设计相应的实验方案，测 定奶粉中蛋白质的含量。
A log
I0 log T kbc It
（一）
式（一）为 Lambert-Beer 定律，是分光光度法定量分析的基础，其中 T 为透 光率(透射比） 。 物质的吸收光谱反映了它在不同的光谱区域内吸收能力的分布情况，不同的 物质，由于分子结构不同，吸收光谱也不同，可以从波形、波峰的强度、位置及 其数目反映出来，因此，吸收光谱带有分子结构与组成的信息。 氨基酸类物质的一个重要光学性质是对光有吸收作用。20 种氨基酸在可见光 区域均无光吸收，在远紫外区（<220 nm）均有光吸收，在紫外区（近紫外区） （220 nm—300 nm）只有三种 AA 有光吸收能力，这三种氨基酸分别是苯丙氨 酸、酪氨酸、色氨酸，因为它们的结构均含有含有苯环共轭双键系统。苯丙氨酸 最大吸收波长在 259 nm、酪氨酸在 278 nm、色氨酸在 279 nm，蛋白质一般都含 有这三种氨基酸残基，所以其最大光吸收在大约 280 nm 波长处，因此能利用分 光光度法很方便的测定蛋白质的含量。 本实验将对苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸三种氨基酸进行光谱测定及相关定量 测定。
仪器分析实验报告
0.21
0.10
0.00
Abs.
-0.10
-0.20
-0.28 201.37
250.00
nm.
300.00
326.03
图 6 不同浓度的酪氨酸 1 阶导数光谱图
0.02
0.00
Abs.
-0.02
-0.04
-0.06
-0.07 276.53
280.00290.00源自nm.300.00
310.00
三、 仪器和试剂
1. 仪器 紫外-可见-近红外分光光度计（UV-2401）；分析天平； 0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL移液管若干；10 mL带塞比色管若干。
仪器分析实验报告
2. 试剂 标准溶液(a): 2.0 g/L的苯丙氨酸溶液； 标准溶液(b)：0.4 g/L的酪氨酸溶液； 标准溶液(c)：0.4 g/L的色氨酸溶液（所有溶液均用去离子水配制）；酪氨酸待 测样。
答：先将蛋白质水解成氨基酸后利用紫外-可见光度法找到每种氨基酸 的特征吸收峰，根据标准曲线计算浓度后即可间接得出蛋白质的含量。
0.09
0.00
Abs.
-0.10
-0.18 201.37
250.00
nm.
300.00
311.19
图 2 苯丙氨酸-酪氨酸 1 阶导数光谱图
0.04
0.02
Abs.
0.00
-0.02
-0.03 200.46
250.00
nm.
300.00
348.40
图 3 苯丙氨酸-酪氨酸 2 阶导数光谱图
仪器分析实验报告
四、
实验步骤
（1）分别移取标准溶液(a)（2.0 g/L，1.0 mL） 、标准溶液(b)（0.4 g/L，1 mL）和标准 溶液(c)（0.4 g/L，0.4 mL）标准溶液于10 mL比色管中，用去离子水稀释、定容、摇匀， 待用。 （2）分别移取0.00、0.5、1.0、1.5、2.0 mL标准溶液（b）于5个10 mL比色管中，并 用去离子水稀释、定容，摇匀，待用。 （3）双击分光光度计图标“UVProbe”,出现软件界面，点左下角“连接”，系统开始自 检，等系统自检结束。预热15-30分钟。待仪器稳定后方可使用。 （4）在光谱测量模式下，以去离子水为参比溶液，分别绘制步骤（1）中各溶液在 200～350nm波长范围内的吸收光谱。并记录各标准溶液的λmax 。 （5）在定量测定模式下，以去离子水为参比溶液，测定步骤（2）中的各标准溶液 在λmax处的吸光度。 （6）在步骤5同样条件下，测定未知样品溶液在λmax处的吸光度。
0.02
0.01
Abs.
0.00
-0.01 201.37
250.00
nm.
300.00
342.24
图 4 苯丙氨酸-酪氨酸 3 阶导数光谱图
0.01
Abs.
0.00
-0.01 202.66
250.00
nm.
300.00
340.52
图 5 苯丙氨酸-酪氨酸 4 阶导数光谱图 由上面 4 幅图可知，1 阶导数光谱图中苯丙氨酸的影响最小，可以用于对酪氨酸的定 量分析。 将不同浓度的酪氨酸的 1 阶导数光谱图绘制如图 6。对于波长为 295 处左右的吸收峰 进行放大，如图 7
五、
数据处理
1． 氨基酸的定性分析
图1 三种氨基酸的紫外吸收峰比较示意图
仪器分析实验报告
通过比较可以发现， 三种氨基酸均具有一个E2带和一个B带。 其中E2带的峰为C≈B<A， 原因是色氨酸的吲哚环以及酪氨酸的羟基均为推电子的助色团，使得E2带红移。此外，B 的B带由于连有-OH，导致其精细结构消失，可能与新生成的R带与B带重叠所致。 由于E1带在小于200nm处才有吸收，因此本图中无法观察到E1带。 2． 酪氨酸的标准曲线绘制以及未知样浓度的测定 以上述步骤6测得的各标准酪氨酸溶液的吸光度为纵坐标，相应的浓度为横坐标绘制 工作曲线，再根据未知溶液的吸光度，利用标准曲线求出待测样浓度。 首先根据酪氨酸标准溶液的紫外光谱图，作出1-4阶导数光谱图。为了比较苯丙氨酸 吸收峰对其的干扰，同时也作出它的1-4阶导数光谱图。