内源性活性物质51页PPT
测定时，受检标本与固相载体表面的抗原 或抗体起反应，洗涤加入酶标记抗原或抗 体，加入酶反应的底物后，底物被酶催化 成为有色产物，产物的量与标本中受检物 质的量直接相关，由此进行定性或定量分 析。
免疫测定在临床检验中的应用的可行性
由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，均 可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体，利 用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原， 尤其采用基因工程方法制备包被抗原来检测样 本中的相应抗体，都大大提高了ELISA的特异 性，加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的使 用，使ELISA更为简便实用和标准化，从而使 其成为最广泛应用的检测方法之一。
第二向是将在 IPG 胶条中经过第一向分离的蛋白质转移到 SDS-PAGE凝 胶上，根据蛋白质的相对质量或分子量 (MW) 大小与第一向相垂直的分离。沿 垂直的方向进行 SDS-PAGE电泳（聚丙烯酰氨凝胶电泳），按分子量大小进行 分离。样品经过电荷和质量两次分离后，得到等电点和分子量的信息。
2D胶电泳数据库
免疫组织化学染色法
免疫组织化学染色法是指在抗体上结合 萤光或可呈色的化学物质，利用免疫学原理中 抗原和抗体间专一性的结合反应，检测细胞或 组织中是否有目标抗原的存在，此方式不只可 以用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现 的位置。只要是能够让抗体结合的物质，也就 是具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、 病原体等都可侦测。
将发光系统与免疫反应相结合，用于 检测抗原或抗体的技术。
以发光物质标记抗原或抗体，免疫反 应后引发发光反应，根据发光强度对抗体或 抗原进行的测定。
层析 chromatography
基于不同物质在流动相和固定相之 间的分配系数不同而将混合组分分离的技 术。当流动相(液体或气体)流经固定相(多 孔的固体或覆盖在固体支持物上的液体)时， 各组分沿固定相移动的速度不同而分离。 能用于微量样品的分析和大量样品的纯化 制备。 层析是应用蛋白质的等电点不同而 分析分离蛋白质的。
细胞因子的测定
ELISA系列的试剂盒
细胞因子绝大部分是蛋白质， 并且一般都用ELISA试剂盒测定。
ELISA法
酶联免疫吸附剂测定是主要的 测蛋白的方法
ELISA Biblioteka 原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗 体的特异性反应与酶对底物的高效催化作 用相结合的一种 敏感性很高的实验技术。
基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的 酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗 体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或 抗体既保留其免疫学活性，又保留其酶的 活性。
双向凝胶电泳（2D胶电泳）的基本原理
先将蛋白质根据其等电点在 pH 梯度胶内进行等电聚焦，然后按照它们的 相对分子质量大小进行 SDS-PAGE 第二次电泳分离。
第一向进行等电聚焦 (isoelectric focusing, IEF)，由于蛋白质具有两性解离 和等电点特性，将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，会向与其所 带电荷相反的电极方向移动。移动过程中，蛋白分子可能获得或失去质子，并 随着移动的进行，该蛋白所带的电荷数和迁移速度下降。当蛋白迁移至其等电 点 pH 位置时，其净电荷数为零，在电场中不再移动。当蛋白扩散到低于其等 电点 pH 区域时，带正电荷，在电场的影响下重新向阴极移动。同样，如果蛋 白质扩散到高于其等电点的 pH 区域时，则带负电，在电场的作用下会向阳极 移动。根据各自不同的等电点，蛋白质最终被聚焦在一个很窄的pH 梯度介质 区域内。目前常使用预制胶条 (IPG, immobilized pH gradient) 用于蛋白质的等 电聚焦分离，将聚焦好的 IPG 胶条在含有 SDS 的缓冲液中平衡。
可以分为荧光素类探针、无机离子 荧光探针、荧光量子点、分子信标几类
与G蛋白偶联受体相关的内源性活性物 质对心肌细胞功能和形态的影响
免疫组织化学法
免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色 剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体 反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、 定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特 异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显 微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作 用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白 质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 免疫化 学技术近年来得到迅速发展。50年代还仅限于免疫 荧光技术，50年代以后逐渐发展建立起高度敏感， 且更为实用的免疫酶技术。
免疫组织化学染色法
免疫组织化学的优势在于专一性、灵 敏度、简便快速以及成本低廉，所以广为医 院采用，通常是借由特定的肿瘤标记来筛选 癌症。免疫组织化学染色法对基础研究及预 防和诊疗上都是相当重要的一个方法。
发光免疫测定
luminescence immunoassay;LIA;luminescent immunoassay
体内药物分析
内源性活性物质的分析
王伟
内源性活性物质
1、定义
内源性生物活性物质是指人类和哺乳动物体内天然存 在的具有生理功能和生物学活性的物质，它们可以是 小分子化学物质，也可能是糖类、生物活性肽类、核 苷和核酸、生长因子、内源性调节因子、细胞因子和 蛋白质等。
2、研究意义
许多重大的突破都是由于发现了体内那些具有 重要生理活性的物质，并发现调节这些物质的其它相 关物质。基因克隆使“ 受体一指导” 和 “ 酶一指导” 的新药的发现在方法学上得到完善。D NA 重组和转 基因技术的发展已使蛋白质和肽类药物的生产及其它 内源性分子作为新药成为可能。
蛋白质类内源性活性物质的 分析
Western Blot
Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常 用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性 抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品 进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获 得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达 情况的信息。
荧光探针
定义： 与蛋白质、核酸(DNA或RNA)或其他大 分子结构非共价相互作用而使一种或几种荧光 性质发生改变的小分子物质。可用于研究大分 子物质的性质和行为。
荧光探针
荧光探针除应用于核酸和蛋白质 的定量分析外，在核酸染色、DNA电泳、 核酸分子杂交、定量PCR技术以及DNA 测序上都有着广泛的应用。
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内源性活性物质和药物
吗啡是一个历史悠久而且非常有效的镇痛药，至今仍 用于临床，特别是用于晚期肿瘤病人的止痛。但吗啡 也是公认的最具有代表性的毒品，因有成瘾性(药物依 赖性)而严格限制使用。 同样有镇痛作用，甚至活性比吗啡本身还强的化合物， 如埃托啡、美沙酮等，它们均已成为临床使用的镇痛 药，但仍然有不同程度的成瘾性。
源于内源性活性物质的药物分类
以内源性活性物质本身作为药物。胰岛素
对内源性活性物质的分子结构进行改造和优化。性激素类、 皮质激素类、前列腺素类
针对由于某种内源性活性物质过量释放引起的疾病，设计和 研究可减少其过量释放或抑制其生理作用的药物，著名的例 子如抗组胺药．临床上用于治疗过敏和消化道溃疡。 研究与某种疾病有关的内源性活性物质在体内的受体(或相 关的酶)，以它们为靶点设计药物。如降压药、抗过敏药、 抗溃疡药等。
6.3 要镇痛，不要成瘾 镇痛药研究任重道远
6.3 要镇痛，不要成瘾 镇痛药研究任重道远
吗啡类的作用有高度的选择性和立体特异性，还发现 有特异的拮抗剂，说明吗啡的镇痛作用是通过与体内 特异受体相互作用而发生效应的，从而推测体内一定 存在能和吗啡特异结合的生物大分子——吗啡受体。 20世纪70年代最终证明，体内确实存在吗啡受体，称 为阿片受体。阿片受体有不同的亚型，它们能与吗啡 类药物发生特异性结合，这种结合是吗啡类药物产生 镇痛效应的第一步。
6.3 要镇痛，不要成瘾 镇痛药研究任重道远
从研究内源性活性物质入手，一直是新药研究的主要途径 之一，并已取得了辉煌的成就，无疑在药物发展史中占有 重要位置。时至今日，对人体内各种活性物质的研究仍然 是生命科学的重要课题。 多肽、蛋白、核酸和糖类体内活性物质的研究已有许多重 要的进展和成果，但存在更多的未知领域。在新的世纪， 从内源性多肽、蛋白、核酸和糖中发展新药将成为最具吸 引力的课题，新药研究的新突破和变革也许正孕育其中。
《内源性活性物质》PPT课件
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标准品溶液的制备 取重组人白介素-2 生物学活性测定的国家标准品，按使用说 明书复溶后，用基础培养液稀释至每lml 含200IU。在96孔细胞培养板中，做2倍系 列稀释，共8个稀释度，每个稀释度做2个 孔。每孔分别留50ul标准品溶液，弃去孔 中多余溶液。以上操作在无菌条件下进行。
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然后每孔加入 MTT溶液20ul，于37℃、5％ 二氧化碳培养4～6小时后，每孔加入裂解 液150ul，于37℃、5％二氧化碳条件下保 温18～24小时。以上操作均在无菌条件下 进行。混匀细胞板中的液体，放入酶标仪， 以630nm为参比波长，于波长570nm处测定 吸光度，记录测定结果。
将发光系统与免疫反应相结合，用于检 测抗原或抗体的技术。
以发光物质标记抗原或抗体，免疫反应 后引发发光反应，根据发光强度对抗体或抗 原进行的测定。
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层析 chromatography
基于不同物质在流动相和固定相之 间的分配系数不同而将混合组分分离的技 术。当流动相(液体或气体)流经固定相(多 孔的固体或覆盖在固体支持物上的液体) 时，各组分沿固定相移动的速度不同而分 离。能用于微量样品的分析和大量样品的 纯化制备。 层析是应用蛋白质的等电点 不同而分析分离蛋白质的。
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蛋白质类内源性活性物质 Blot
Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它 是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用 的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗 体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进 行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得 特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情 况的信息。
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炎症细胞因子
内源性活性物质和药物
上述内容总结
人体是由无数种有机分子构成的； 生命过程是体内各种分子间相互作用的结果； 参与此种相互作用的体内有机小分子称为内源性活性
物质； 内源性活性物质的失衡导致了体内正常生理过程的改
变，是产生疾病的重要原因； 可以而且应该从研究内源性活性物质人手，寻找治疗
相应疾病的有效药物。
6.1 缺什么补什么 胰岛素治疗糖尿病
产生
体内性激素
垂体前叶分泌促性腺
反馈
通过给予外源性激素或具有相同活性的药物，影响和改变 体内性激素水平，治疗与性腺功能和生殖有关以及内分泌 失调引起的疾病，或者控制生殖过程的某一环节，如抑制 排卵，从而达到避孕的目的。
6.2 既正常又不正常 避孕药造就人工生理周期
内源性雌激素和孕激素最主要的代表是雌二醇和黄体 酮，它们的分子结构分别如下
胰岛素由胰脏的-细胞合成及分泌，通过血流转运到 身体各部位的靶细胞，与靶细胞膜表面的胰岛素受体 特异结合形成胰岛素-受体复合物，从而激活靶细胞， 影响体内糖、脂肪及蛋白质的代谢，是重要的体内活 性多肽。
胰岛素的重要功能是调节体内血糖水平，它通过加速 葡萄糖的利用和减少肝脏释出葡萄糖，从而降低血糖 水平。
6.2 既正常又不正常 避孕药造就人工生理周期
激素 体内特异性内分泌细胞所分泌的，同专一载体结 合后随血液遍布全身的靶细胞，与靶细胞上的受体结 合从而产生效应。
激素的作用是全身性的，而且在血液中滞留时间可达 数小时，从而引起较持久的反应。
6.2 既正常又不正常 避孕药造就人工生理周期
体内存在的天然性激素有三种：雌激素、孕激素和雄激素， 女性体内与生殖有关的激素是雌激素和孕激素。
内源性物质的含义
参与体内正常的生理和生化过程相互作用，并表现某种生理 活性的分子，在广义上均可称为内源性活性物质。
《内源性活性物质》课件
08
总结与展望
研究成果总结
成功筛选出具有抗癌活性的内 源性物质
揭示了内源性物质的作用机制 和靶点
为抗癌药物研发提供了新的思 路和方向
为未来癌症治疗提供了新的策 略和方法
未来研究方向
深入研究内源性 活性物质的作用 机制
拓展内源性活性 物质的应用领域
加强内源性活性 物质与疾病治疗 的关联研究
推动内源性活性 物质在临床实践 中的应用
医学研究人员
临床医生
对医学感兴趣的 人
03
内源性活性物质概 述
定义与分类
内源性活性物质的定义 内源性活性物质的分类 内源性活性物质的特点 内源性活性物质的作用与功能
生理作用
调节生理过程
参与细胞信号传 导
增强免疫力
抗氧化作用
发现历程
早期研究：科学家对生物体内产 生的活性物质的探索
21世纪的研究：内源性活性物质 在疾病治疗和预防中的应用
免疫细胞化学法：通过标记抗体或抗原，对细胞内的内源性活性物质进行定位和定性分析
免疫印迹法：用于检测内源性活性物质在组织或细胞中的表达水平，常用于蛋白质组学研 究
酶联免疫吸附法：利用抗原抗体反应的原理，通过酶标记抗体或抗原，对内源性活性物质 进行定量分析
分子生物学方法
基因克隆和表达 蛋白质分离和纯化 生物信息学分析 细胞实验和动物模型验证
《内源性活性物质》 PPT课件
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汇报人：PPT
目录
添加目录项标题 内源性活性物质概述 内源性活性物质与疾病关 系 内源性活性物质应用前景
课件介绍 内源性活性物质种类 内源性活性物质检测方法 总结与展望
01
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02
自体活性物质药理ppt课件
醉作用。 与氨茶碱、维生素C或钙剂合用能提高疗效。 应用：过敏性疾病及组织损伤并伴有全身组 胺释放的疾病。
2018/10/23
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盐酸异丙嗪(Promethazium)
作用：抗组胺作用。
可加强镇静药、镇痛药和局部麻醉药的作用。 降温止吐作用。 应用：过敏性疾病及组织损伤并伴有全身组
小。 应用：常用于中小动物的解热和镇痛药。
注意：本品不宜用 于猫，易引起猫的 红细胞溶解和肝坏 死。
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氨基比林Amidopyrinum
作用：解热镇痛作用徐缓而持久，与巴比妥类 配伍使用可加强镇痛效果。 本品还有消炎和抗风湿的作用。 应用：用于肌肉痛、关节痛、马骡疝痛，也可 用于治疗急性风湿性关节炎，药效可持续1~4h。
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解热机理
解热镇痛药是通过抑制PGE合成和释放而发
挥解热作用，其作用部位在体温中枢，使散 热加强，而对产热过程无影响。
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镇痛机理
发炎组织的疼痛是由于组织促使致痛物质如
组胺、5-羟色胺、血管缓激肽等释放及前列 腺素合成，作用于神经末梢而发生致痛反应。 镇痛作用主要是抑制前列腺素的合成以及缓 激肽、组胺和5-羟色胺等自体活性物质的释 放。
自体活性物质药 理
第一节抗组胺药
肥大细胞 H1受体 皮肤 眼睛 血管 肺 胃
理化等因素 或抗原抗体反应
刺激
组胺
H2受体 过敏反应
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理化因素
各种机械损性伤、X线、紫外线、烧伤、细
菌毒素、抗原抗体复合物及蛋白水解酶等。
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自体活性物质PPT课件
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一、组胺受体激动药
2.倍他唑（氨乙吡唑）和普英咪定（甲双咪胍）： 均是选择性H2受体激动药， 能刺激胃酸分泌，用于胃功能检查。 普英咪定对H2受体具有高度选择性，还可增强人心室收缩功能，试用于治疗心 衰。
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二、组胺受体阻滞药
人工合成的H1受体阻断药多具有乙基胺的共同结构，乙基胺与组胺的侧 链相似，对H1受体有较大亲和力，但无内在活性，故能竞争性阻断之。 根据对组胺受体选择性的不同，可分成H1、H2和H3受体阻滞药。
发挥抗高血压作用。
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三、5-羟色胺受体阻滞药
1.赛庚啶和苯塞啶 均有抗5-HT作用，选择性阻滞5-HT2受体，也可阻滞组胺H1受体和较弱的
抗胆碱作用。 用于荨麻疹、湿疹、过敏性和接触性皮炎、皮肤瘙痒等过敏反应。也可预
防偏头痛发作。 2.酮色林 有扩张阻力血管和毛细血管，降低血压作用。临床上治疗高血压。 3.昂旦司琼 用于癌症患者和化疗伴发的严重恶心、呕吐。
影响激肽释放酶-激肽系统的药物 1.激肽释放酶抑制剂 抑制激肽的合成。 2.激肽受体阻滞药 艾替班特通过阻滞B2受体治疗支气管哮喘
三、钠尿肽 包括心房钠尿肽、脑钠尿肽、C型钠尿肽都有排钠利尿、舒张血管作用。
四、P物质 一种肽类神经递质，为十一肽。存在于脑和消化道，主要分布在神经组
织的突触颗粒中，是一种引起肠道收缩的强促进剂和血管舒张剂。
正常情况下自体活性物质以其前体或贮存状态存在，但当受到某种因素影响 而激活或释放时，释放的量虽然很微，但能产生非常广泛、强烈的生物效应。
自体活性物质通常有局部产生，仅对邻近的组织细胞起作用，多数都有自己 的特殊受体，所以也称“局部激素”。
与神经递质或激素另一不同之处，是机体没有产生它们的特定器官或组织。
内源性活性物质研究报告
第二向是将在 IPG 胶条中经过第一向分离的蛋白质转移到 SDS-PAGE凝 胶上，根据蛋白质的相对质量或分子量 (MW) 大小与第一向相垂直的分离。沿 垂直的方向进行 SDS-PAGE电泳（聚丙烯酰氨凝胶电泳），按分子量大小进行 分离。样品经过电荷和质量两次分离后，得到等电点和分子量的信息。
2D胶电泳数据库
双向凝胶电泳（2D胶电泳）的基本原理
先将蛋白质根据其等电点在 pH 梯度胶内进行等电聚焦，然后按照它们的 相对分子质量大小进行 SDS-PAGE 第二次电泳分离。
第一向进行等电聚焦 (isoelectric focusing, IEF)，由于蛋白质具有两性解离 和等电点特性，将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，会向与其所 带电荷相反的电极方向移动。移动过程中，蛋白分子可能获得或失去质子，并 随着移动的进行，该蛋白所带的电荷数和迁移速度下降。当蛋白迁移至其等电 点 pH 位置时，其净电荷数为零，在电场中不再移动。当蛋白扩散到低于其等 电点 pH 区域时，带正电荷，在电场的影响下重新向阴极移动。同样，如果蛋 白质扩散到高于其等电点的 pH 区域时，则带负电，在电场的作用下会向阳极 移动。根据各自不同的等电点，蛋白质最终被聚焦在一个很窄的pH 梯度介质 区域内。目前常使用预制胶条 (IPG, immobilized pH gradient) 用于蛋白质的等 电聚焦分离，将聚焦好的 IPG 胶条在含有 SDS 的缓冲液中平衡。
体内药物分析
内源性活性物质的分析
王伟
内源性哺乳动物体内天然存 在的具有生理功能和生物学活性的物质，它们可以是 小分子化学物质，也可能是糖类、生物活性肽类、核 苷和核酸、生长因子、内源性调节因子、细胞因子和 蛋白质等。
2、研究意义
许多重大的突破都是由于发现了体内那些具有重
2D胶电泳数据库
双向凝胶电泳（2D胶电泳）的基本原理
先将蛋白质根据其等电点在 pH 梯度胶内进行等电聚焦，然后按照它们的 相对分子质量大小进行 SDS-PAGE 第二次电泳分离。
第一向进行等电聚焦 (isoelectric focusing, IEF)，由于蛋白质具有两性解离 和等电点特性，将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，会向与其所 带电荷相反的电极方向移动。移动过程中，蛋白分子可能获得或失去质子，并 随着移动的进行，该蛋白所带的电荷数和迁移速度下降。当蛋白迁移至其等电 点 pH 位置时，其净电荷数为零，在电场中不再移动。当蛋白扩散到低于其等 电点 pH 区域时，带正电荷，在电场的影响下重新向阴极移动。同样，如果蛋 白质扩散到高于其等电点的 pH 区域时，则带负电，在电场的作用下会向阳极 移动。根据各自不同的等电点，蛋白质最终被聚焦在一个很窄的pH 梯度介质 区域内。目前常使用预制胶条 (IPG, immobilized pH gradient) 用于蛋白质的等 电聚焦分离，将聚焦好的 IPG 胶条在含有 SDS 的缓冲液中平衡。
体内药物分析
内源性活性物质的分析
王伟
内源性哺乳动物体内天然存 在的具有生理功能和生物学活性的物质，它们可以是 小分子化学物质，也可能是糖类、生物活性肽类、核 苷和核酸、生长因子、内源性调节因子、细胞因子和 蛋白质等。
2、研究意义
许多重大的突破都是由于发现了体内那些具有重
神经递质和内源性活性物质
1 胆碱类 乙酰胆碱 Ach, Acetylcholine, 2 单胺类 monoamines （1） 儿茶酚胺catecholamine, CA a 去甲肾上腺素 norepinephrine( noradrenaline) b 多巴胺 dopamine c 肾上腺素 epinephrine (2) 吲哚胺（indole amine , IA） 5-羟色胺（5-hydroxytryptamine, 5-HT, serotonin 血清紧 张素） 3 氨基酸类amino acids (1) 抑制性氨基酸类：γ -氨基丁酸，甘氨酸 （2） 兴奋性氨基酸类：谷氨酸，天冬氨酸 4 多肽类，神经肽类 阿片肽，其他 神经肽 5 其他可能的神经递质 putative 前列腺素，组胺， NO（内皮源性舒张因子），嘌呤类 （ ATP，腺苷可能是外周抑制性递质，腺苷可能是脑内调 质）
拮抗剂：仅能与受体发生特异性的结合，但不产生生 物效应的化学物质称为拮抗剂（antagonist）. 反向激动剂（负性拮抗剂）：与受体的非活性构像状 态有亲和力，与受体结合后产生与激动剂作用相反的 效应的化学物质称为反向激动剂（inverse agonist）。
nAch Receptor
Structure, PNS N1 N2 CNS α,α,β,γ,δ N-M junction 植物神经节 8α，3β Agonist, nicotine (烟碱) Antogonist, （筒箭毒碱） 十烃季胺 六 烃季胺
6）影响因素
7）胆碱能神经元的分布与投射（location and Projection local circuit neuron，Projection neuron）
胆碱能躯体运动和内脏运动系统