介导的高效克隆系统的建立及载体重建ppt课件
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高中生物《克隆技术》课件ppt
4
想一想：
无性生殖
• 说说你知道的无性生殖实例。
5
无性生殖——分裂生殖
6
无性生殖——出芽生殖
酵母菌
7
无性生殖——孢子生殖
青霉菌
青霉的孢子
8
无性生殖——营养生殖
营养生殖是由高等植物体的营养器官---根、茎、叶 的一部分,与母体脱落后，发育成一个新的个体。
9
嫁接
扦插
人
接穗
工
营
养
砧木
繁
殖
方
法
10
卵细胞 （去核）
体外培养形 成早期胚胎
母羊C
胚胎发育 克隆羊
（代理母亲怀孕）
—多莉
16
想一想： 这两项技术的实施过程中，是否 存在共性呢？
如果根据研究需要停留在该阶段， 是否还属于个体克隆呢？
体外培养 成早期胚胎
都有在体外进行细胞培养的阶段
17
细胞克隆 获得遗传背景相同的细胞群
18
想一想：
•细胞克隆有哪 些用途？
个个体的结合，只由一个模板分子、 母细胞或母体直接形成新一代分子、 细胞或个体，就是无性繁殖，即克 隆。
22
想一想： •个体水平的克隆能够从一个细胞 克隆繁殖出一个生物，它的理论 基础是什么？
23
个体克隆的理论基础 体细胞具有全部遗传信息，即具有细
胞的全能性。
24
想一想： •为什么个体水平克隆较难实现？ 尤其是动物个体的克隆？ •植物体细胞实现全能性需要什么
得到特定类型 细胞及其产物
单 克 隆 抗 体 制 备
19
想一想： 在获得转基因植物过程中是否
涉及到了克隆？属于什么水平
土壤农杆菌
想一想：
无性生殖
• 说说你知道的无性生殖实例。
5
无性生殖——分裂生殖
6
无性生殖——出芽生殖
酵母菌
7
无性生殖——孢子生殖
青霉菌
青霉的孢子
8
无性生殖——营养生殖
营养生殖是由高等植物体的营养器官---根、茎、叶 的一部分,与母体脱落后，发育成一个新的个体。
9
嫁接
扦插
人
接穗
工
营
养
砧木
繁
殖
方
法
10
卵细胞 （去核）
体外培养形 成早期胚胎
母羊C
胚胎发育 克隆羊
（代理母亲怀孕）
—多莉
16
想一想： 这两项技术的实施过程中，是否 存在共性呢？
如果根据研究需要停留在该阶段， 是否还属于个体克隆呢？
体外培养 成早期胚胎
都有在体外进行细胞培养的阶段
17
细胞克隆 获得遗传背景相同的细胞群
18
想一想：
•细胞克隆有哪 些用途？
个个体的结合，只由一个模板分子、 母细胞或母体直接形成新一代分子、 细胞或个体，就是无性繁殖，即克 隆。
22
想一想： •个体水平的克隆能够从一个细胞 克隆繁殖出一个生物，它的理论 基础是什么？
23
个体克隆的理论基础 体细胞具有全部遗传信息，即具有细
胞的全能性。
24
想一想： •为什么个体水平克隆较难实现？ 尤其是动物个体的克隆？ •植物体细胞实现全能性需要什么
得到特定类型 细胞及其产物
单 克 隆 抗 体 制 备
19
想一想： 在获得转基因植物过程中是否
涉及到了克隆？属于什么水平
土壤农杆菌
生物ppt课件克隆
克隆技术的实现需要深入理解 细胞分裂、胚胎发育和核质互 作等生物学过程，以及掌握相 关的实验技术。
03
CHAPTER
克隆技术的生物学意义
对生物多样性的影响
生物多样性是地球上生命经过亿万年进化的结果，包含了物 种内、物种间以及生态系统的多样性。克隆技术可能会导致 生物多样性的减少，因为它可能导致物种的基因库单一化， 降低物种的遗传多样性。
克隆技术可以用于保护和恢复濒危物种，通过克隆技术可以 保存和繁殖具有重要价值的基因库，从而保护生物多样性。
对生物进化的影响
生物进化是物种在适应环境变化的过程中不断演变的过程 ，而克隆技术可能会对生物进化产生影响。由于克隆技术 可以快速繁殖具有优良性状的个体，这可能会导致某些物 种的进化速度减缓甚至停滞。
克隆植物
快速繁殖
通过克隆技术，可以快速繁殖出 大量植物，用于园艺、林业和农 业等领域，提高植物资源的利用
效率。
遗传改良
克隆植物可用于遗传改良，通过 基因编辑等技术，培育出具有优
良性状的植物新品种。
生态恢复
克隆技术可用于生态恢复工程， 快速繁殖出濒危植物和受损生态 系统所需的植物种类，促进生态
系统的恢复和重建。
育成为成熟的个体。
克隆动物的出生通常需要采用胚 胎移植技术，将人工胚胎转移到 代孕母体中，使其完成妊娠过程
。
克隆技术的科学原理
克隆技术的科学原理基于细胞 的全能性，即一个细胞具有发 育成完整个体的全部遗传信息 。
通过将供体细胞的细胞核移植 到受体细胞中，科学家可以重 新编程受体细胞，使其发育成 一个全新的个体。
克隆技术的潜在风险与挑战
伦理道德问题
克隆技术涉及到人类生命 的起源和尊严，引发了伦 理道德方面的争议和挑战 。
基因工程原理第3章基因克隆载体[可修改版ppt]
![基因工程原理第3章基因克隆载体[可修改版ppt]](https://img.taocdn.com/s3/m/d56699a9ddccda38366baf0a.png)
ccc-DNA l-DNA oc-DNA
2. 质粒DNA分子大小
3. 质粒的复制
——严紧型质粒：1个寄主内仅含1-3拷贝 ——松弛型质粒：1个寄主内含10-60拷贝
• 质粒DNA复制：单向复制，受宿主细胞和质粒遗传系统 双重控制，不会无限制复制。
Ori
•质粒控制： 序列
拷贝数：细胞内某种质粒的数量与染色体的数量之比。
的成熟有关（占20%）
4.λ噬菌体DNA的包装限制问题
包装能力： λDNA×75%——λDNA ×105%， 即从36kb——51kb
• 野生型λDNA的必要区是28kb，所以能加入的外源DNA长度最大为 51kb-28kb=23kb。实际为15kb。
• 若λ基因组缺失大于25%时，也不能有效包装。
5.ion）：寄主细胞捕获噬菌体DNA 的过程。或 重组噬菌体DNA分子感染并进入大肠杆菌的过程。
• 转导作用（transduction）：以噬菌体颗粒为媒介转移遗传物质的 过程。
• 转化作用（transformation）：将质粒等外源DNA引入细胞的过 程。
2. 就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：（复制 区： 含有复制起点）；（选择标记： 主要是抗性基因）；（克隆位点： 便于外 源DNA的插入）。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
3. 载体的功能是（ d ）
（a）外源基因进入受体的搭载工具
（b）不能为外源基因提供整合能力
cos位点：cohesive-end site 粘性末端位点
线性双链DNA分子两端各有1条由12个核苷酸组成的完全互补的5'单链突出序列，即粘性末端。 注入到寄主细胞内的线性DNA分子会迅速的通过粘性末端之间的互补作用，形成环状双链DNA分 子。然后在DNA连接酶的作用下，将相邻的5'—P和3'—OH基团封闭起来，进一步超盘旋化，这种 由粘性末端结合形成的双链DNA区域称为cos位点。
最新高考生物一轮总复习专题26克隆技术课件ppt
过程
应用
微型繁殖 ①繁殖作物脱毒 人工种子
克服远缘杂交的不亲和性， 培育作物新品种
②培育新品种 ③生产细胞产品
考点二
动物细胞工程
1.动物细胞培养过程及条件
培养液 用具 清除 更换
2.动物体细胞核移植技术和克隆动物 (1)动物体细胞核移植技术的过程
细胞培养
重组细胞
去核
供体
(2)动物体细胞核移植技术的原理、结果及应用
原理
细胞增殖
动物细胞核的全能性
过程
结果
获得细胞群
获得与供体遗传物质基本相同的个体
动物细胞融合与单克隆抗体制备的归纳 (1)制备单克隆抗体时选用一种抗原处理的 B淋巴细胞与骨髓瘤 细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，杂交瘤细胞兼有两个亲
本细胞的特性——在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生
出某种特异性的抗体。 (2)进行动物细胞的诱导融合，形成的杂种细胞有三种： AA型、 BB型、AB型。只有AB型才是我们所需要的杂种细胞，所以需 要用选择性培养基进行筛选。
2.误认为动物细胞培养液中加入5%CO2的目的是维持气体平衡 或用于呼吸 点拨 动物的细胞培养时，需向培养液中加入5%CO2(＋95%
空气)，加入CO2的目的是“维持培养液的pH”。
3.不清楚动物细胞克隆化培养时为何常选 10代以内的细胞，而 “瘤细胞”却为“50代以后” 点拨 取供体动物的体细胞培养，一般选用传至10代以内的细
(3)单克隆抗体制备过程中的两次筛选
1. 不清楚动物细胞培养时，为何使用胰蛋白酶而不使用胃蛋 白酶 点拨 进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明
细胞间的物质主要是蛋白质。分散细胞时不能用胃蛋白酶， 因为胃蛋白酶作用的适宜 pH 约为 1.8 。胰蛋白酶作用的适宜 pH为7.2～7.8，而多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4。
高中生物PPT课件克隆技术
细胞克隆的最基本要求－－－必须保证分离出来 的细胞是一个而不是多个，即必须肯定所建成的 克隆来源于单个细胞。克隆培养法强调培养产物 的单一性而排除异质性，所获得的培养产物遗传 特性几乎完全相同。 容易克隆的细胞----提高细胞克隆形成率的措施---细胞克隆的最主要的用途-----
根据分子细胞生物学机理可以说明克隆羊获得成功的部 分原因：重组卵细胞最初分裂时虽然复制了 DNA，但基因 的转录并未开始；同时，供体核DNA开始丢失来源于乳腺 细胞的调节蛋白，而正是这些调节蛋白最初阻止了核基 因的表达；在重组卵细胞开始第三次时，原乳腺细胞的 调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此 核DNA被重新编排，胚细胞开始表达自己的基因，进而调 控胚在代孕母亲子宫中的进一步发育。因此，罗斯林研 究所的科研人员采用电脉冲细胞融合技术，选择分裂 3次 时的细胞进行移植，并在核移植前对乳腺细胞进行特殊 处理（血清饥饿法，以恢复体细胞核的全能性），以利 于细胞核的一系列变化和细胞融合后基因表达的分子开 关的启动。
诱导形成愈伤组织阶段，除极少数情形外，光 照不是一个必要条件。 由愈伤组织经细胞有丝分裂和分化形成试管 苗的过程中需要光照，原因是叶绿素的合成 需要光照条件，实现由异养-------自养的转 变。
动物的克隆
动物的细胞和组织培养是 动物克隆的技术基础
取动物组织块
剪碎组织
用胰蛋白酶酶解，消化组织中的胶原纤维和 细胞外的其他成分，获得单个的成纤维细胞 悬浮液
4．单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株，经人
为加倍后可得到完全纯合的个体。
形成再生植株的两条途径
1 从离体组织------愈伤组织-----再生植株 1.1器官形成途径：在愈伤组织的不同部位分别独
根据分子细胞生物学机理可以说明克隆羊获得成功的部 分原因：重组卵细胞最初分裂时虽然复制了 DNA，但基因 的转录并未开始；同时，供体核DNA开始丢失来源于乳腺 细胞的调节蛋白，而正是这些调节蛋白最初阻止了核基 因的表达；在重组卵细胞开始第三次时，原乳腺细胞的 调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此 核DNA被重新编排，胚细胞开始表达自己的基因，进而调 控胚在代孕母亲子宫中的进一步发育。因此，罗斯林研 究所的科研人员采用电脉冲细胞融合技术，选择分裂 3次 时的细胞进行移植，并在核移植前对乳腺细胞进行特殊 处理（血清饥饿法，以恢复体细胞核的全能性），以利 于细胞核的一系列变化和细胞融合后基因表达的分子开 关的启动。
诱导形成愈伤组织阶段，除极少数情形外，光 照不是一个必要条件。 由愈伤组织经细胞有丝分裂和分化形成试管 苗的过程中需要光照，原因是叶绿素的合成 需要光照条件，实现由异养-------自养的转 变。
动物的克隆
动物的细胞和组织培养是 动物克隆的技术基础
取动物组织块
剪碎组织
用胰蛋白酶酶解，消化组织中的胶原纤维和 细胞外的其他成分，获得单个的成纤维细胞 悬浮液
4．单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株，经人
为加倍后可得到完全纯合的个体。
形成再生植株的两条途径
1 从离体组织------愈伤组织-----再生植株 1.1器官形成途径：在愈伤组织的不同部位分别独
克隆载体课件
装到噬菌体颗粒中，以实行对大肠杆菌非常有效的侵染。 噬菌斑的形成：将λ侵染的细胞分布在未被侵染的大肠杆菌菌苔中会形成噬菌斑，是由 于侵染和细胞裂解循环而抑制了细胞生长的区域。 λ溶原体：利用λ噬菌的溶原生长期将克隆基因整合进大肠杆菌基因组，以使其长期表达。 溶原体 样操作双链环状M13NDA，但产生的噬菌体颗粒内仅含有环状ssDNA。 克隆到M13：用标准质粒克隆方法将重组DNA整合到M13载体，重组的M13DNA侵染敏 克隆到 感性大肠杆菌细胞，并形成生长缓慢的噬菌斑，然后从纯培养基中的噬菌体颗粒中分离出 ssDNA。 质粒－ 质粒－M13杂合载体：在辅助噬菌体帮助下，对宿主细胞的侵染，可诱导含有M13复 杂合载体 制起点的质粒形成单链噬菌体颗粒。
连接产物
将目的片段与质粒载体连接时，最常见的非目标产物就是 线性载体片段自身环化所形成的空质粒载体。自环化载体 可通过从转化克隆中小量提取质粒，然后酶解及随后的琼 脂糖凝胶电泳分析的方法来与重组体相区分，但用此法进 行大规模筛选是极不方便的，目前已开发出更有效的、便 于筛选的一系列载体。
双抗生素抗性
λ溶原体
λ 感染的溶原期也被克隆技术所利用。通过 含有目的序列的λ载体的整合作用可将基因或 外原序列整合进大肠杆菌基因组，这种基本 上是永久性的。该方法应用例子之一就是用 T7系统来过量表达蛋白质的菌株。含有Lac 启动子控制下的T7RNA聚合酶基因的菌株 BL21及其衍生物，作为λ溶原菌被命名为 DE3.该基因可被IPTG诱导，然后聚合酶将转 录出表达载体上的目的基因。
已克隆位点
因为在pUC载体上与克隆片段的插入位点相邻处有 一个启动子，很容易想象这样的启动子可用来转录 DNA，无论是在体外产生用作杂交探针的RNA转录 物，还是表达插入片段内基因的蛋白质产物，都不 成问题。 目前已构建了多种 转录型载体，以便开在体外进行 克隆片段的转录。例如，pGEM系列载体中就含有 来自噬菌体T7和SP6的启动子，两启动子间是MCS。 来自噬菌体的启动子只能被各自相应的噬菌体RNA 聚合酶所识别，上述两启动子中的任一种均可用于 体外转录克隆片段 的目的链。
基因克隆载体 (3)PPT课件
现在您正浏览在第8页，共37页。
（二）构建依据
1、λ噬菌体是一种温和噬菌体
2、能承载较大的外源DNA片段 野生型λDNA头部可包装约36.4～ 51kb(自身的75%～105%)，且约有 20kb λDNA可缺失（生长非必需）
3、在λDNA上有多种限制性内切酶位点
现在您正浏览在第9页，共37页。
（三）构建的基本策略与技术路线 策略: 切去部分非必需区 删掉多余的限制性内切酶位点 插入选择性标记基因 建立体外包装系统
成具有两个cos位点而且相距达36.4～51kb之间时， 才能被包装。
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现在您正浏览在第24页，共37页。
利用Cos质粒进行克隆
（四）使用cosmid载体的基本程序
利用cosmid的质粒性质，可按质粒操作转化受体细胞 利用cosmid的λ噬菌体性质→转导受体细胞（下图）
区插入ＭＣＳ连杆
构建成对M13载体，保证外源DNA两条链都能随“+” 链一起复制包装。
现在您正浏览在第32页，共37页。
HindⅡ
B H H
现在您正浏览在第33页，共37页。
（四）M13克隆载体的优点与应用
优点：
1、以双链环形DNA为中间媒介复制，可与质粒一样体外纯化操作 2、制备的M13 DNA单、双链都能转化大肠杆菌，直接转染受体细
现在您正浏览在第5页，共37页。
2、λ噬菌体 基因组有 基因61个 以上
J与N、P 与Q之间 为非必需 序列
现在您正浏览在第6页，共37页。
迄今已经定位的λ噬菌体基因至少有61个， 其中有一半左右参与了噬菌体生命周期的 调控（必需基因）；
另一部分基因则被称为非必需基因；当它 们被外源基因取代后，不影响噬菌体的生 命周期。
（二）构建依据
1、λ噬菌体是一种温和噬菌体
2、能承载较大的外源DNA片段 野生型λDNA头部可包装约36.4～ 51kb(自身的75%～105%)，且约有 20kb λDNA可缺失（生长非必需）
3、在λDNA上有多种限制性内切酶位点
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（三）构建的基本策略与技术路线 策略: 切去部分非必需区 删掉多余的限制性内切酶位点 插入选择性标记基因 建立体外包装系统
成具有两个cos位点而且相距达36.4～51kb之间时， 才能被包装。
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利用Cos质粒进行克隆
（四）使用cosmid载体的基本程序
利用cosmid的质粒性质，可按质粒操作转化受体细胞 利用cosmid的λ噬菌体性质→转导受体细胞（下图）
区插入ＭＣＳ连杆
构建成对M13载体，保证外源DNA两条链都能随“+” 链一起复制包装。
现在您正浏览在第32页，共37页。
HindⅡ
B H H
现在您正浏览在第33页，共37页。
（四）M13克隆载体的优点与应用
优点：
1、以双链环形DNA为中间媒介复制，可与质粒一样体外纯化操作 2、制备的M13 DNA单、双链都能转化大肠杆菌，直接转染受体细
现在您正浏览在第5页，共37页。
2、λ噬菌体 基因组有 基因61个 以上
J与N、P 与Q之间 为非必需 序列
现在您正浏览在第6页，共37页。
迄今已经定位的λ噬菌体基因至少有61个， 其中有一半左右参与了噬菌体生命周期的 调控（必需基因）；
另一部分基因则被称为非必需基因；当它 们被外源基因取代后，不影响噬菌体的生 命周期。
ExoIII介导的LIC高效克隆系统的建立及载体重建
带缺口和突出端的DNA复合物在细菌中能被 有效地修复
载体和目的片段间，只要带有足够长的同源 粘性末端（>8bp），经退火，转化E.coil. 即 可获得完整的质粒DNA
如何获得粘性末端
如何获得同源序列
获得粘性末端
ExoIII 全名 Exonuclease III(核酸外切 酶III)，其 具有3’=>5’的外切酶活性
获得5'粘性末端
获得同源序列
用带同源序列的引or
Gene
引物
Gene
我们最关注的问题是： 采用ExoIII是否能进行高效的克隆？
二、实验过程
ExoIII的验证
条件的优化和系 统的建立
载体重建
用ExoIII进行处理，能够达到高效克隆的目的
700
Amount of clones(cfu)
600 500 400 300 200 100 0 0 20
25, 629
40
60
80
100
120
DNA concentration(ng)
25-50ng 载体和片段
最高效的克隆条件
1. 用ExoIII（20units）处理含目的片段和载体的 反应体系； 2. 4℃ 下反应1h； 3. 保证目的片段和载体的浓度在25-50ng之间；
PET 28a 100ng 4ul Gene-A3 100ng 1ul 10ⅹExo Ⅲbuffer 1ul Ddw 4ul +Exo III 20units 室温 5min 转化、涂板 15h 5 个克隆
寻求适合的条件来延长ExoIII处理的时间
条件优化一
Time cause for the Exo III(20units) in 4℃:
载体和目的片段间，只要带有足够长的同源 粘性末端（>8bp），经退火，转化E.coil. 即 可获得完整的质粒DNA
如何获得粘性末端
如何获得同源序列
获得粘性末端
ExoIII 全名 Exonuclease III(核酸外切 酶III)，其 具有3’=>5’的外切酶活性
获得5'粘性末端
获得同源序列
用带同源序列的引or
Gene
引物
Gene
我们最关注的问题是： 采用ExoIII是否能进行高效的克隆？
二、实验过程
ExoIII的验证
条件的优化和系 统的建立
载体重建
用ExoIII进行处理，能够达到高效克隆的目的
700
Amount of clones(cfu)
600 500 400 300 200 100 0 0 20
25, 629
40
60
80
100
120
DNA concentration(ng)
25-50ng 载体和片段
最高效的克隆条件
1. 用ExoIII（20units）处理含目的片段和载体的 反应体系； 2. 4℃ 下反应1h； 3. 保证目的片段和载体的浓度在25-50ng之间；
PET 28a 100ng 4ul Gene-A3 100ng 1ul 10ⅹExo Ⅲbuffer 1ul Ddw 4ul +Exo III 20units 室温 5min 转化、涂板 15h 5 个克隆
寻求适合的条件来延长ExoIII处理的时间
条件优化一
Time cause for the Exo III(20units) in 4℃:
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2019/5/7
可编辑
用ExoIII进行处理，能够达到高效克隆的目的
PET 28a 100ng 4ul Gene-A3 100ng 1ul 10ⅹExo Ⅲbuffer 1ul Ddw
+Exo III 20units 室温 5min
转化、涂板 15h
5 个克隆
4ul
寻求适合的条件来延长ExoIII处理的时间
条件优化一
Amount of clones(cfu)
Time cause for the Exo III(20units) in 4℃:
800
700
60, 675
600
500
400
300
200
100
0
0
100
200
300
400
500
600
Exo III processing time(min)
4℃,60 minutes
条件优化二
Amount of clones(cfu)
DNA concentration ladder:
700
600
25, 629
500
400
300
200
100
0
0
20
40
60
80
100
120
DNA concentration(ng)
25-50ng 载体和片段
最高效的克隆条件
1. 用ExoIII（20units）处理含目的片段和载体 的反应体系；
2. 4℃ 下反应1h； 3. 保证目的片段和载体的浓度在25-50ng之间；
载体重建
• pBKS • pcDNA3.1 • pcDNA6 • pBOB-CMV
通用序列：（No-tag）
Kpn I Cla I EcoR I EcoR V Bgl II BamH I Hpa I GGT ACC ATC GAT GAA TTC GAT ATC AGA TCT GGA TCC GTT AAC
Exo III 介导的LIC高效克隆系统 的建立及载体重建
答辩人：梁耀极 导 师：韩家淮
•L I C背景 •总 结
一、L I C背景
经典连接克隆方法的极限：
1. 长片段进大载体难度大； 2. 酶切位点有限，受酶切位点限制大。
L I C
Ligation Independent Cloning
L I C 原理
带缺口和突出端的DNA复合物在细菌中能被 有效地修复
载体和目的片段间，只要带有足够长的同源
粘性末端（>8bp），经退火，转化E.coil.
即可获得完整的质粒DNA
如何获得粘性末端 如何获得同源序列
获得粘性末端
ExoIII 全名 Exonuclease III(核酸外切 酶III) ，其具有3’=>5’的外切酶活性
N-terminal
Stu I Xba I Xho I Hind III Sma I
Sal I
AGG CCT TCT AGA CTC GAG AAG CTT CCC GGG TAG GTC GAC GAG CT体都带上了共有的序列
我们所获得的带通用序列的载体：
pBKS-CS pBKS-N- Flag pBKS-N-HA pBKS-N-Myc pBKS-C-Flag pBKS-C-HA pBKS-C-Myc
pcDNA3.1-CS pcDNA3.1-N-Fla pcDNA3.1-N-HA pcDNA3.1-N-Myc pcDNA3.1-C-Flag pcDNA3.1-C-HA pcDNA3.1-C-Myc
获得5'粘性末端
获得同源序列
用带同源序列的引物对目的基因进行扩增， 即可 获得带同源序列的目的片段和载体。
Vector
Gene
引物
Gene
我们最关注的问题是： 采用ExoIII是否能进行高效的克隆？
二、实验过程
ExoIII的验证 条件的优化和系 统的建立 载体重建
THANK YOU
SUCCESS
pcDNA6-CS pcDNA6-N-Flag pcDNA6-N-HA pcDNA6-N-Myc pcDNA6-C-Flag pcDNA6-C-HA pcDNA6-C-Myc
pBOB-CS pBOB-N-Flag pBOB-N-HA pBOB-N-Myc pBOB-C-Flag pBOB-C-HA pBOB-C-Myc
仅需要用同一对引物对目的基因进行PCR即可同 时将其接进不同的载体，并带上不同的tag
THANK YOU
SUCCESS
2019/5/7
可编辑