基因工程期末复习考点.doc
基因工程期末试题及答案
基因工程期末试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 基因工程是指利用现代生物技术手段对DNA进行操作和控制的一种技术。
2. 基因工程的主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
3. DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
4. 在基因工程中，限制性内切酶用于切割DNA分子，产生特定片段。
5. 基因工程可以产生转基因生物，通过对生物基因进行改造，使其具有特定的特性。
6. CRISPR/Cas9是一种常用的基因编辑工具，可以精确地修改基因组中的特定片段。
7. 基因工程在医学领域可以用于基因治疗，通过修复或替换异常基因，治疗遗传性疾病。
8. 在农业领域，基因工程可以用于改良作物，提高产量和抗病虫害能力。
9. PCR是一种常用的基因扩增技术，可以通过复制DNA片段来放大特定基因。
10. DNA梯度离心是基因工程中常用的分离DNA片段的方法。
二、问答题（每题10分，共30分）1. 请简要介绍基因工程的基本原理和主要方法。
基因工程的基本原理是通过对DNA进行操作和控制来改变生物的遗传性状。
其主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
基因克隆是通过将特定DNA片段放入载体中，然后转化到宿主细胞中，使重组DNA在宿主细胞中大量复制。
PCR是一种基因扩增技术，通过在DNA复制过程中加入特定引物，使特定基因片段在体外大量扩增。
DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
2. 什么是转基因生物？请举例说明。
转基因生物是指经过基因工程改造，将外源基因导入到目标生物体中，使其具有新的遗传性状的生物。
例如，将耐旱基因导入水稻，使其具有抗旱能力；将Bt毒素基因导入棉花，使其具有抗虫能力。
3. 基因工程在医学领域有哪些应用？举例说明。
基因工程在医学领域可以用于基因治疗、疫苗研发等。
例如，利用基因工程技术可以修复或替换患者体内异常基因，治疗遗传性疾病。
另外，基因工程也可以用于疫苗研发，通过基因工程技术将病原体的基因导入宿主细胞，产生病原体的抗原蛋白，从而刺激免疫系统产生抗体，用于预防传染病。
基因工程期末考点
1．多克隆位点：多克隆位点就是限制性内切核酸酶的单一识别位点，在克隆载体的合适位置上至少有一个多克隆位点，以利于外源基因片段的插入与重组。
2．质粒：是存在于细胞内染色体之外的双链DNA分子，一个质粒就是一个DNA分子。
3．每种质粒在相应的宿主细胞内保持相对稳定的拷贝数，但在不同的宿主细胞内质粒的拷贝数并非一成不变，拷贝数少（1到数个拷贝）的质粒称之为严紧型质粒，而拷贝数较多（10个拷贝数之上）的称之为松弛型质粒。
4．亲和性质粒:能在同一宿主细胞中共存的不同质粒称为亲和性质粒。
5．COS位点：入DNA进入宿主细胞后粘性末端连接后形成环状DNA分子，把此能连接的末端称为COS位点。
6．基因文库：是指贮存了某种生物全部基因信息的一个受体菌群体。
7．cDNA：某种生物材料的基因转录产物mRNA经逆转录形成不同的cDNA片段，与克隆载体重组后贮存在受体菌群体中，这样的群体称之为cDNA基因文库。
8．DNA改组技术：是一种基因的体外同源重组方法，其目的是改变单个基因或基因家族原有核苷酸序列，创造新基因，获得新的表达产物。
9．受体细胞：又称为宿主细胞或寄主细胞，从实验技术上讲是能摄取外源DNA并使其温度维持的细胞；从实验目的上讲是有应用价值和理论研究价值的细胞。
10．转化：是指重组质粒DNA分子通过与膜蛋白结合进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持与表达的过程。
11．感受态细胞：是指处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞。
12．转导：是指通过入噬菌体（病毒）颗粒感染宿主细胞将外源DNA分子导入到受体细胞内并稳定遗传的过程。
13．转染：是采用与质粒DNA转化受体细胞相似的方法，将重组入噬菌体DNA分子直接导入到受体细胞中的过程。
14．分子探针：是指具有同特异性目标分子产生很强的相互作用比并可对其相互作用的产物进行有效检测的DNA分子、RNA分子和蛋白质分子。
15．反义RNA是一类与特定DNA序列互补的小分子RNA。
高中生物基因工程考点精选全文完整版
可编辑修改精选全文完整版高中生物基因工程考点基因工程专题在高中生物中处于重要的地位，我们在生物考试时会遇到哪些相关考点?下面店铺给大家带来高中生物基因工程考点，希望对你有帮助。
高中生物基因工程考点1. 作为运载体必须具备的特点是：能够在宿主细胞中复制并稳定地保存;具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接;具有某些标记基因，便于进行筛选.质粒是基因工程最常用的运载体，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是能够自主复制的很小的环状DNA分子.2.基因工程的一般步骤包括：①提取目的基因②目的基因与运载体结合③将目的基因导入受体细胞④目的基因的检测和表达.3.重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程.4.区别和理解常用的运载体和常用的受体细胞，目前常用的运载体有：质粒、噬菌体、动植物病毒等，目前常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等.5.基因诊断是用放射性同位素、荧光分子等标记的DNA分子做探针，利用DNA分子杂交原理，鉴定被检测标本的遗传信息，达到检测疾病的目的.6.基因治疗是把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的.高中生物基因工程知识点(1)基因工程的概念标准概念：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组细胞在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物.通俗概念：按照人们的意愿，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状.(2)基因操作的工具A.基因的剪刀——限制性内切酶(简称限制酶).①分布：主要在微生物中.②作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点.③结果：产生黏性未端(碱基互补配对).B.基因的针线——DNA连接酶.①连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键.②结果：两个相同的黏性未端的连接.C.基困的运输工具——运载体①作用：将外源基因送入受体细胞.②具备的条件：a、能在宿主细胞内复制并稳定地保存.b、具有多个限制酶切点.c、有某些标记基因.③种类：质粒、噬菌体和动植物病毒.④质粒的特点：质粒是基因工程中最常用的运载体.(3)基因操作的基本步骤A.提取目的基因目的基因概念：人们所需要的特定基因，如人的胰岛素基因、抗虫基因、抗病基因、干扰素基因等.提取途径：B.目的基因与运载体结合用同一种限制酶分别切割目的基因和质粒DNA(运载体)，使其产生相同的黏性末端，将切割下的目的基因与切割后的质粒混合，并加入适量的DNA连接酶，使之形成重组DNA分子(重组质粒)C.将目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌、动植物细胞D.目的基因检测与表达检测方法如：质粒中有抗菌素抗性基因的大肠杆菌细胞放入到相应的抗菌素中，如果正常生长，说明细胞中含有重组质粒.表达：受体细胞表现出特定性状，说明目的基因完成了表达过程.如：抗虫棉基因导入棉细胞后，棉铃虫食用棉的叶片时被杀死;胰岛素基因导入大肠杆菌后能合成出胰岛素等.(4)基因工程的成果和发展前景A.基因工程与医药卫生B.基因工程与农牧业、食品工业C.基因工程与环境保护高中生物基因工程核心知识点1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)(1)来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
基因工程期末复习资料
分子进行切割的一种酶。 6. 黏性末端:指 DNA 分子在限制酶的作用下形成的具有互补碱基的单链延伸形成的末端结
构。 7. 平末端:限制性内切核酸酶在识别序列的对称轴上切割，形成的片段末端。 8. 同裂酶： 指来源不同但识别相同靶序列的限制性内切核酸酶。 9. 同尾酶：指来源各异，识别的靶序列也各不相同，但切割后能产生相同黏性末端的限
达。 18. 质粒的拷贝数
19. 质粒的不相容性：两个质粒在同一宿主中细胞不能共存的现象。 20. α-互补：lacZ 基因产物分为 α 链和 β 链两部分，只有当两者都存在时，才会表现
出酶活性，该作用称之为 α-互补作用。 21. 插入失活：在一个基因位点中插入外源 DNA 片段，从而使该基因活性丧失的现象。 22. 多克隆位点 （MCS）：包含多个单一限制性酶切位点的一段很短的 DNA 序列。 23. 琼脂糖凝胶电泳：以琼脂糖为支持物，在适当的条件下对带电生物大分子进行电泳的
制性内切核酸酶。 10. 酶的星号活性：当条件改变时，许多限制酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列
的非特异性的现象。 11. DNA 连接酶：是一种能够催化双链 DNA 上彼此相邻的 3’-OH 和 5’-P 形成磷酸二酯键
的核酸酶。 12. DNA 聚合酶：是指在引物和模板的存在下，将 dNTP 连续地加到双链 DNA 分子引物链的
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，通系电1，力过根保管据护线0生高不产中仅工资22艺料22高试可中卷以资配解料置决试技吊卷术顶要是层求指配，机置对组不电在规气进范设行高备继中进电资行保料空护试载高卷与中问带资题负料22荷试，下卷而高总且中体可资配保料置障试时23卷，23调需各控要类试在管验最路；大习对限题设度到备内位进来。行确在调保管整机路使组敷其高设在中过正资程常料1工试中况卷，下安要与全加过，强度并看2工且55作尽22下可2都能护1可地关以缩于正小管常故路工障高作高中；中资对资料于料试继试卷电卷连保破接护坏管进范口行围处整，理核或高对者中定对资值某料，些试审异卷核常弯与高扁校中度对资固图料定纸试盒，卷位编工置写况.复进保杂行护设自层备动防与处腐装理跨置，接高尤地中其线资要弯料避曲试免半卷错径调误标试高方中等案资，，料要编5试求写、卷技重电保术要气护交设设装底备备4置。高调、动管中试电作线资高气，敷料中课并3设试资件且、技卷料中拒管术试试调绝路中验卷试动敷包方技作设含案术，技线以来术槽及避、系免管统不架启必等动要多方高项案中方；资式对料，整试为套卷解启突决动然高过停中程机语中。文高因电中此气资，课料电件试力中卷高管电中壁气资薄设料、备试接进卷口行保不调护严试装等工置问作调题并试，且技合进术理行，利过要用关求管运电线行力敷高保设中护技资装术料置。试做线卷到缆技准敷术确设指灵原导活则。。：对对在于于分调差线试动盒过保处程护，中装当高置不中高同资中电料资压试料回卷试路技卷交术调叉问试时题技，，术应作是采为指用调发金试电属人机隔员一板，变进需压行要器隔在组开事在处前发理掌生；握内同图部一纸故线资障槽料时内、，设需强备要电制进回造行路厂外须家部同出电时具源切高高断中中习资资题料料电试试源卷卷，试切线验除缆报从敷告而设与采完相用毕关高，技中要术资进资料行料试检，卷查并主和且要检了保测解护处现装理场置。设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
基因工程期末考试试题及答案
基因工程期末考试试题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然淘汰答案：B2. 下列哪项不是基因工程常用的工具酶？A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 反转录酶D. 聚合酶链反应酶答案：C3. 基因枪技术主要用于：A. 植物基因转化B. 动物基因转化C. 微生物基因转化D. 病毒基因转化答案：A二、填空题1. 基因工程中，常用的载体有________、________和________。
答案：质粒、病毒、人工染色体2. 基因工程中，________是基因表达的调控元件。
答案：启动子三、简答题1. 请简述基因工程的基本步骤。
答案：基因工程的基本步骤包括：目标基因的获取、目标基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有重组DNA的宿主细胞、目的基因的表达和检测。
2. 基因工程在医学领域的应用有哪些？答案：基因工程在医学领域的应用包括：生产重组蛋白质药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。
四、论述题1. 论述基因工程对农业生产的影响。
答案：基因工程对农业生产的影响主要体现在以下几个方面：提高作物的抗病虫能力、增强作物的抗逆性、改善作物的营养价值、提高作物的产量和质量、促进农业可持续发展。
2. 基因工程在环境保护中的应用。
答案：基因工程在环境保护中的应用主要包括：开发生物修复技术，用于污染土壤和水体的净化；利用基因工程改造微生物，用于处理工业废水和废气；通过基因工程改良植物，用于重金属污染土壤的修复等。
五、案例分析题1. 某公司利用基因工程技术成功开发了一种抗虫棉，该抗虫棉能够减少农药的使用，降低农业生产成本。
请分析该技术可能带来的社会、经济和环境效益。
答案：该技术可能带来的社会效益包括提高农民的生活质量，减少因农药使用带来的健康风险。
经济效益包括降低农药成本，提高作物产量，增加农民收入。
环境效益包括减少农药对环境的污染，保护生态平衡，促进农业的可持续发展。
基因工程期末考试题及答案
基因工程期末考试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 基因工程中常用的工具酶是：A. 纤维素酶B. 限制性内切酶C. 淀粉酶D. 过氧化氢酶答案：B2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的获取B. 基因的表达C. 基因的克隆D. 基因的测序答案：D3. 基因枪法是一种：A. 植物转基因方法B. 动物转基因方法C. 微生物转基因方法D. 所有生物的转基因方法答案：A4. 重组DNA技术中，通常使用哪种质粒作为载体？A. 质粒DNAB. 线粒体DNAC. 核糖体RNAD. 染色体DNA答案：A5. 基因工程中，目的基因的表达通常需要：A. 启动子B. 终止子C. 增强子D. 所有选项答案：D二、填空题（每空2分，共20分）1. 基因工程是指按照人们的意愿，将不同来源的基因在体外构建杂合DNA分子，然后导入到活细胞和生物体内，以改变生物的遗传特性并取得新品种或新产品。
2. 基因工程中常用的宿主细胞有大肠杆菌、酵母菌和________。
答案：哺乳动物细胞3. 基因工程中，________是连接目的基因和载体DNA的关键酶。
答案：DNA连接酶4. 目的基因的表达需要________和________的协同作用。
答案：启动子；终止子5. 基因工程产品在医学领域的应用包括生产________、________和基因治疗等。
答案：重组蛋白；单克隆抗体三、简答题（每题10分，共30分）1. 请简述基因工程在农业中的应用。
答案：基因工程在农业中的应用主要包括提高作物的抗病性、抗虫性、抗旱性和提高作物的产量和品质。
例如，通过基因工程培育的抗虫棉可以减少农药的使用，提高棉花的产量和质量。
2. 基因工程在医学领域有哪些应用？答案：基因工程在医学领域的应用包括生产重组蛋白药物、单克隆抗体、基因治疗和疫苗开发等。
例如，利用基因工程技术生产的胰岛素可以治疗糖尿病，单克隆抗体用于治疗癌症和自身免疫性疾病。
3. 请解释什么是转基因生物，并简述其潜在的风险。
大学基因工程复习归纳重点复习资料
基因工程复习归纳第一章绪论1.基因工程的定义：是指按照人们的愿望，经过严密的设计，将一种或多种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体/宿主）内，使之按照人们的意愿稳定遗传、并表达出新的性状的技术。
2.基因工程概念的发展：遗传工程→DNA重组技术→分子/基因克隆（Molecular/Gene→基因工程→基因操作。
应用领域以“基因工程”、“DNA重组”为主基因工程基因工程的历史性事件1973：Boyer和Cohen建立DNA重组技术1978：Genetech公司在大肠杆菌中表达出胰岛素1982：世界上第一个基因工程药物重组人胰岛素上市1988：PCR技术诞生1989：我国第一个基因工程药物rhIFNα1b上市2003: 世界上第一个基因治疗药物重组腺病毒-p53上市3.基因工程的三大关键元件基因（供体）：外源基因、目的基因载体：能将外源基因带入受体细胞，并能稳定遗传的DNA分子（克隆载体、表达载体）。
宿主（受体）：，能摄取外源DNA、并能使其稳定维持的细胞（组织、器官或个体）。
4.基因工程的基本步骤（切、接、转、增、检（大肠杆菌是中心角色）（1）目的基因的获取：从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片断。
（2）重组体的制备：将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记（抗菌素抗性）的载体分子上。
（3）重组体的转化：将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。
（4）克隆鉴定：挑选转化成功的细胞克隆（含有目的基因）。
（5）目的基因表达：使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。
第二章 DNA重组克隆的单元操作一、用于核酸操作的工具酶1.限制性核酸内切酶(主要存在于原核细菌中，帮助细菌限制外来DNA的入侵)。
限制性核酸内切酶的功能与类型其中II型限制性核酸内切酶：切割位点专一，适于DNA重组，是DNA重组中最常用工具酶。
第3章 基因工程 期末复习知识点总结【新教材】人教版高中生物选择性必修三
第3章基因工程1、什么是基因工程：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。
2、基因工程的诞生（三个理论和三个技术）：基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科基础上发展起来的，正是这些学科的基础理论和相关技术的发展催生了基因工程，具体有三大理论发现和三个技术突破。
1)理论基础：DNA是遗传物质；DNA分子的双螺旋结构和半保留复制；遗传密码的通用性和遗传信息传递的方式；2)技术基础：限制性核酸内切酶的发现与DNA的切割；DNA连接酶的发现与DNA片段的连接；基因工程载体的构建与应用●理论上的三大发现⑴、发现了遗传物质——DNA1944年，艾弗里（O.T.Avery）的肺炎双球菌转化实验⑵、揭示了遗传物质的分子机制：DNA分子的双螺旋结构和半保留复制1953年，沃森（J.D.Watson）和克里克（F.Crick）的DNA双螺旋结构模型、半保留复制图，获1958年诺贝尔奖。
⑶、确立了遗传信息的传递方式：以密码形式传递1963年，美国尼伦伯格（M.W.Nirenberg）和马太（H.Matthaei）确立了遗传信息以密码形式传递，破译了编码氨基酸的遗传密码(3个核苷酸=1个密码子=1个aa)。
●技术上的三大突破⑴、世界上第一个重组DNA实验：实现不同来源DNA的体外重组1972年斯坦福大学化学家伯格（P.Berg）借助内切酶和连接酶将猴病毒SV40的DNA 和大肠杆菌λ噬菌体的DNA在试管中连接在了一起，第一次成功地实现了DNA的体外重组。
⑵、第一个基因克隆实验：重组DNA表达实验，是世界上第一个基因工程实验1973年美国斯坦福大学医学院遗传学家科恩（S.Cohen）将体外构建的含有四环素和卡那霉素抗性基因的重组质粒导入大肠杆菌，获得了具有双抗性的大肠杆菌转化子，成功完成了第一个基因克隆实验。
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Marshall W. Nirenberg Har G. Khoranat信使RNA 麟密码tDNA浙江万里学院基因工程期末复习考点第一章绪论1. 分子生物学与基因工程发展的代表性事件：（客观题） 1928年,Griffith 实验——肺炎双球菌体内转化实验，证明了转化因子（DNA ）是遗传物质,没有得出蛋白质与遗传物质的关系1944年，Avery 实验——体外转化实验，证实了蛋白质不是遗传物质。
1952年，Hershey-Chase 实验一一利用放射性同位素标记大肠杆菌T2噬菌体的捣碎实验证 明了遗传物质是DNA,而不是蛋白质。
1953年，沃森和克里克发现了 DNA 双螺旋的结构，开启了分子生物学时代。
威尔金斯富兰克林（填空）1958年，Matthew Meselson Franklin Stahl 采用氯化艳密度梯度离心法验证DNA 复制的半保留复制Robert W. Holley 1965年破译了所有氨基酸的密码子2. 镰刀型贫血：氨基酸突变血红蛋白亚基N 端的第六个氨基酸残基是缴氨酸（val ）,而不是下正常的谷氨酸残基（Glu ）。
ttGAAGUAt tC T T 值出| C AT “A A\ 反rpj A A A A ■ ' — ■ A 」A GAA 突变 G TA嫌刀型细胞贫血控必因的图解3. 胰岛素（公司+事件）1921年，加拿大科学家Banting 和Best 发现胰岛素，是糖尿病治疗史上的里程碑 1922年，开始用于糖尿病的治疗胰岛素发现四人组”：Banting 、Best 、科利普和麦克莱德1922年5月，多伦多大学与礼来公司（EliLilly and Company ）it 成协议，由科学家们帮助礼来 开展胰岛素的规模生产。
因苏林：第一支商业化胰岛素的诞生1982年5月14 口，礼来向美国FDA 提交了生物合成人胰岛素NDA18-790的申请 1982年10月28日，FDA 发布了批准书，第一支基因重组人胰岛素正式上市 1997年，第一支基因重组人胰岛素进入中国Sanger 测序法：蛋白质的结构和功能是由氨基酸序列所决定的中国科学家的贡献：人工合成牛胰岛素1973年，斯坦福大学的Stanley Cohen 和加州大学旧金山分校的Herbert Boyer 合作发表了一 篇学术论文一一重组DNA 技术4.1990年，美国批准了第一例临床基因治疗申请，患者为四岁女孩Ashanti de Silva,由于 缺乏腺苜脱氢酶ADA 基因而患有严重综合性免疫缺陷症，研究者W.F. Anderson 将ADA 基因 导入患者的淋巴细胞，然后将经改造的淋巴细胞回输到患者体内，取得了成功。
5.HIV被治愈唯一成功的例子：柏林病人Endonucleas eBam HI ECO RI Hind III Hae III PstJ Q |QATC C CCTAG I —► 8 CCTAG GATCC G "Sticky- ends GjAATTCCTTAAG —► Ki CTTAA AATTC G “Sticky” ends AAGCTT TTCGAlAv *—► M TTCGA AGCTTA "Sticky” ends G CC GGc(M Blunt C GGCCGGendsCTGCAG GACGTC —►CTGCAG G ACGTC “Sticky” ends CCCGGGccc GGG6.基因编辑技术：ZFN 锌指核糖核酸酶、TALEN 转录激活因子样效应物核酸酶、CRISPR/Cas9第二章基因操作的工具酶L 限制性核酸内切酶的作用：能在特异位点（酶切位点）上催化双链DNA 分子的断裂，产生相应的限制性DNA 片段 切割不同来源的DNA 分子将产生特征性限制性酶切图谱，具有重大应用价值（分子手术刀）2.细菌细胞内特异性降解外源核酸分子的核酸酶，其作用特点是：（知道）特异性降解异源DNA 分子（甲基化修饰差异）I 类限制酶随机切割双链DNA 分子，II 类限制酶识别、切割特殊的回文（对称）序列 3. 核酸工具酶分类：核酸水解酶类：核酸内切酶、核酸外切酶（填空） 核酸合成酶类：DNA 聚合酶、RNA 聚合酶、DNA 连接酶核酸修饰酶类：甲基化酶、核甘酸激酶、核昔酸转移酶、磷酸酶4.56. 一种限制酶只能识别一种特定的核昔酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断7. 分子剪刀——限制性内切酶%1 分布：主要在微生物中%1 作用特点：专一性：一种限制酶只能识别一种特定的核苻酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA 分子多样性：限制酶有200多种%1 结果：产生黏性末端或平末端（填空）8. 判断粘性还是平末端DNA sequence Cleavage products9 .限制性内切核酸酶和甲基化酶一起称为限制一修饰系统5' ： | | [ "AA丁TCEcoRI IE CO RI. 「' —1 「1限制:作用|修饰作用］S' [ | 5f/XAT TC I I | i | 3" 5’ yr I n I I^A A J" TC—rrT-rr S'3。
「TAA5* 3'(3 1J JJJ 5> 3, Il 山 1 [5 T・ ViG、n【’’ 3,EcoRIT110.内切核酸酶分为三类：即I型、II型、HI型酶，通常所用的限制性内切核酸酶是指II型表2.1限制性内切核酸酶类型及主要特性特性I型11型皿型限制和修饰活性双功能的酶核酸内切酶和甲基化酶分开双功能的酵桐市rfq Z¥ T K H3种不同的亚基单一亚基两种不同的亚基限制作用所需的辅助因子ATP、Mg2*Mg2*ATP、Mg2 +特异性识别位点非对称序列回文对称结构非对称序列切割位点在距识别位点至少lOOObp 的地方随机的切割位于识别位点上距识别位点下游24~26bp 处序列特异的切割不是是是在基因工程中的应用无用广泛使用用处不大11.采用Smith和Athens提议的方案，根据限制性内切核酸酶来源和菌株命名（选择判断）a)b)c)d)e) Eg.Hind 用来源细菌的英文缩写斜体符号命名它的第一个字母大写，来源细菌属名的第1个字母第二、三字母小写，来源细菌种名的头2个字母第四个字母代表菌株最后用罗马字母表示同一菌株中不同限制酶的编号III代表从流感噬血杆菌（Haemophilus influenzae） d株中分离到的第3个限制酶12.不同限制性内切酶切割的三种结果：（填空）a.产生5'突出粘性末端cohesive end (EcoR I)5 ' ------- G|AATT C ---- 3' 5 ' -------------------------- p OH AATTC --------------- 3'3 ' —-C TT叫G一-5' EcoR I 3 ' —- TTA&H pG---5'b.产生3'突出粘性末端（Pst I> Bam H I ）c.产生平末端blunt end （Nru I）13.同尾酶（判断题）BamH I和Bglll, Sal I和Xho I14.限制性内切核酸酶Hpall和Mspl是同位酶，切割同样的DNA序列CCGG,但对这个序列的甲基化状态有不同的限制性反应Mspl切割所有状态下的CCGG序列，而Hpall仅切割非甲基化的CCGG序列。
这样Mspl被用来识别所有的CCGG序列，而Hpall能用来确定是否甲基化15.影响内切酶酶切反应的条件（简答，如何调整）%1温度：一般37°C%1盐离子浓度：Na+, Mg2 +%1缓冲体系：具有稳定pH环境的Tris-HCI缓冲体系，DTT用于保持酶稳定性和活性%1反应体积和甘油浓度：商品化的限制性内切核酸酶均加50%甘油作为保护剂，一般在-20°C保存。
酶切反应时，加酶的体积一般不超过总反应的10%,否则甘油浓度过高，影响酶切反应%1反应时间：通常为lh；（不超过4h,否则产生非特异性结合，HF-高保真酶）进行大量DNA酶切反应时一般让酶解过夜%1DNA纯度和结构：一个酶单位定义：lh内完全酶解lMgX噬菌体DNA所需的酶量DNA样品中所含的蛋白质、有机溶剂、RNA等杂质会影响酶切反应的速度和完全程度；酶切的底物一般为双链DNA, DNA的甲基化位置（用甲基化酶切割）会影响酶切反应评估DNA是否满足酶切条件：跑胶看下面有没有亮条带酶切反应注意事项：价格昂贵；决不能用水稀释，以免变性失活；预先加入除酶以外的所有其他试剂；取酶立即放于冰上。
分装小份避免反复冻融；使用无菌的新吸头；少加水，使体积最小，但保证酶液体积不超过总体积的10%,否则酶液中的甘油会抑制酶活性16.“星”活性产生非特异性切割17.DNA连接酶：催化DNA上裂口两侧（相邻）核苜酸裸露的3'羟基和5’磷酸之间形成共价结合的磷酸二酯键（梯子的扶手），不是狙键（梯子的踏板）），使断开的DNA裂口连接起来（填空）结果：使粘性末端（平末端）连接起来，粘性末端效率高（判断题）18.DNA连接酶的作用过程（简答）1）连接酶与辅助因子ATP或NAD +形成酶-AMP复合物2）AMP作用于DNA缺口的5'-末端磷酸基团3）缺曰3' -0H对活跃的磷原子作亲核攻击，形成新的磷酸二酯键，封闭切口19.DNA连接酶的反应条件连接反应的温度是影响转化效率的最重要参数。
多数内切酶产生的粘性末端的Tm值在15°C 以下，然而保持连接酶活性的最佳反应温度却是37°C但在该温度下，粘性末端之间的氢键结合是不稳定的，因此最适温度是粘性末端的Tm值和连接酶最适温度的折衷，所以连接反应一般采用16°C过夜20.平末端DNA片段的连接（了解，客观）a）直接用T4DNA连接酶连接：效率不高，较少采用b）同聚物连接平末端DNA片段：先用末端核昔酸转移酶，给平末端DNA分子加上同聚物尾巴后再用DNA连接酶进行连接1)2) 3) c ）用衔接物连接平末端DNA 分子：目的是在平末端分子上构建限制性核酸内切酶酶切 位点，经酶切后产生特异的粘性末端，从而与具有互补末端的DNA 连接21. 重组DNA 实验的一般程序（掌握）选用一种对载体DNA 只具唯一限制识别位点的限制酶（如EcoRI ）作位点特异的切割， 形成全长的具粘性末端的线性DNA 分子再将外源DNA 片段也用同一种酶作相同的消化混合，加入DNA 连接酶。