基因工程总复习
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第9章 转基因及其表达
一、名词解释 受体细胞、感受态细胞、转化子、重组子、α-互补、目的重组子、转基因 沉默、启动子、增强子、终止子、绝缘子、反义子、SD序列、外显子、内 含子、融合蛋白、表达标签蛋白、包涵体、RNAi、 MicroRNA
2 简要回答下列问题 1）基因工程中常用的酶有哪些？各有何的用途？ 2）何谓定向克隆？如何进行？ 3）说明限制性核酸内切酶产生Star活性的原因及其克服 措施。
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1 名词解释
第4、5章 分子克隆载体
载体，克隆载体，表达载体, 质粒，cccDNA(scDNA)，松 弛型质粒，严谨性质粒，附加体， 选择标记，转化子， 重组子，cosmid，噬菌粒载体，YAC，PAC，BAC， MAC，基因打靶，定位整合平台，定位整合克隆载体， 穿梭载体，结合型质粒，非结合型质粒，迁移作用，显性 质粒，隐蔽质粒，组织特异性表达载体，分泌型表达载体， 诱导型表达载体，报告载体，反义表达载体，RNAi
二、思考题 1 简述转基因的主要方法与原理。 2 简述在基因工程主要表达受体中提高表达效 率的策略。 3 简述重组子的筛选与分子鉴定的主要方法和原理。 4 说明原核与真核生物基因表达调控的特点。 5 说明转基因沉默的机制与克服措施。
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第10章 细菌基因工程 1 名词解释
融合表达, 融合蛋白, 分泌表达, 包涵体, 转导, 转化，转 染，表面展示. 2 简要回答下列问题 试述促进转基因在大肠杆菌中表达的策略。 简述原核生物基因工程常用的载体和受体细胞。 简述细菌基因工程的主要应用。
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2020/11/11
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基因工程
1 基因工程概论 2 天然DNA的制备 3 分子克隆工具酶 4 分子克隆载体 5 表达载体 6 PCR技术及其应用 7 目的基因的制备
8 基因克隆的筛选策略
9 转基因及其表达
10 细菌基因工程 11 酵母基因工程 12 植物基因工程 13 动物基因工程 14 基因工程的安全
2 简要回答问题 特殊PCR主要有那些? 各自的原理是什么? 如何设计PCR引物?
3 分析讨论 试述PCR反应的原理与应用.
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第7、8章 目的基因制备与筛选策略
1 名词解释 SSH、RDA、DDRT-PCR、ES理与步骤
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1. 酵母2µ质粒复制原点
2.
3．
4.
5.
6.
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演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
2020/11/11
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简述外源基因在细菌中的主要表达形式及优缺点。
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第11章 酵母基因工程
1 名词解释 YEp; YIp; YRp; YCp; 营养缺陷型
2 简答题 简要描述表面展示和酵母双杂交的原理。 酵母基因工程的主要宿主有哪些 ? 酵母基因工程的载体有哪些 ?各有和特点? 酵母转基因的方法有哪些? 为什么说酵母是一个非常重要的基因工程宿主?
第2章 天然DNA的制备
1 名词解释
DNA变性；DNA复性；Tm值
2 简要回答下列问题 • 1） 举例说明浓缩DNA或RNA的方法。 • 2） 简述DNA与基因工程有关的主要特性。 • 3） 简要说明天然DNA的主要提取过程。
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第4章 分子克隆工具酶
1 名词解释 限制性核酸内切酶；同裂酶；同尾酶；限制性核酸内切 酶星活性；限制性图谱；平末端；粘性末端；衔接头；连 接子
2 简要回答下列问题
1）按来源可将基因克隆载体分为哪几类？并说明各自的主 要特点。
2）作为克隆载体必须具备的主要条件是什么？ 3）作为表达载体必须具备的主要条件是什么？ 4）如何鉴定转化子、重组子和转基因生物？
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第6章 PCR技术及其应用
1 名词解释 PCR, RT-PCR, 定量PCE, 反向PCR, RACE, TAIL-PCR, 巢式PCR
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第1章 概论
1 名词解释 基因工程、遗传工程、DNA重组、基因克隆、基因操作
2 简要回答下列问题 1） 简述基因工程研究发展历史。 2） 简述基因工程研究的主要内容。 3） 说明基因工程的理论基石和技术基础。 4） 简述基因工程的主要应用领域。 5） 用5个词描述基因工程的过程。
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2 简答题 进行动物细胞转基因的目的是什么? 主要载体有哪些？转基 因方法有哪些？ 怎样获得转基因老鼠？ 如何获得转基因蛙? 转基因羊乳腺生物反应器是如何获得的?
3 分析讨论 如何实现在高等动物中细胞中的高效稳定表达?
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考试题型
1 名词解释（10个30分） 2 填空题（有的话20分） 3 载体填图（10分） 4 匹配题（10分） 5 简答题（10分或30分） 6 设计题 （20分）
3 分析和讨论 如何在酵母中实现高效章 植物基因工程
1 名词解释 植物整体转化, 全能性, 组成性表达启动子, 组织转星星表达启
动子, 诱导表达启动子, 花蕾浸泡转化法, 清洁DNA转化, Ti质粒, 卸甲Ti质粒, 双元载体系统
2 解答题 植物转基因的方法主要有那些?
植物转基因的载体主要有那些? 如何利用农杆菌进行植物遗传转化? 转基因植物的主要成就有哪些?
3 分析讨论题 如何控制转基因在转基因植物中的表达?
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第13章 动物基因工程
1 名词解释 胚胎干细胞, 限制性内切酶介导的整合, 插入载体, 替代载 体, 稳定表达，瞬时表达，脂质体转化，乳腺生物反应器
基因工程复习资料
基因工程复习指导第一章绪论1、基因：就是存在于DNA上承载遗传信息的核苷酸序列，是位于染色体上呈直线排列的遗传物质的最小单位，也是携带遗传信息的结构单位和控制遗传性状的功能单位。
2、基因工程：又称重组DNA技术，分子水平进行遗传操作，将任何生物体（供体）的基因或基因组提出来，或通过人工合成的目的基因，按照先设置好的蓝图，插入质粒或病毒复制子（载体），而形成一杂合分子（DNA重组体），然后将重组体转移到复制子所属的宿主生物体复制，或转移到另一生物体（受体）的细胞内（原核或真核），使之在受体细胞内遗传并使受体细胞获得新的性状。
3、基因工程的三要素：供体、载体、受体4、基因工程的基本流程：（1）DNA的制备包括从供体生物的基因组分离或人工合成，以获得带有目的基因的DNA片段。
（2）在体外通过限制性核酸内切酶分别分离得到的外源DNA和载体分子进行定点切割，使之片段化或线性化（3）在体外将含有外源基因的不同来源的DNA片段通过DNA连接酶到载体分子上，构建重组DNA分子。
（4）将重组DNA分子通过一定的方法引入到受体细胞进行扩增和表达，从培养细胞中获得大量细胞繁殖群体。
（5）筛选和鉴定转化细胞，剔除非必需重组体，获得引入的外源基因稳定高效表达的基因工程菌或细胞，即将所需要的阳性克隆挑选出来。
（6）将选出的细胞克隆的基因进一步分研究，并设法使之实现功能蛋白的表达。
第三章基因工程工具酶1、基因工程中常用的工具酶：限制酶、连接酶、聚合酶、修饰酶2、细菌的限制—修饰系统（简称R—M体系）：细菌中存在位点特异性限制酶和特异性甲基化酶，构成了寄主控制的限制—修饰系统R-M体系说明的问题和作用：R-M系统是细菌安内御外的积极措施。
细菌R-M系统的限制酶可以降解DNA，为避免自身DNA的降解，细菌可以修饰（甲基化酶）自身DNA，未被修饰的外来DNA则会被降解。
个别噬菌体在被降解之前已经发生了修饰，则可免予被降解。
3、限制性内切酶的切割方式（识别哪种末端）（1）平齐末端：（切割位点在识别序列中心轴处）（2）5’黏性末端：（DNA片段末端的5’端比3’端长）梅园复印店打印复印只要一毛打好后送货上门。
2025高考生物总复习基因工程的基本工具和基本操作程序
第54讲基因工程的基本工具和基本操作程序课标内容(1)阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。
(2)阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定等步骤。
(3)DNA的粗提取与鉴定实验。
(4)利用聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验。
考点一重组DNA技术的基本工具1.基因工程概述基因工程的理论基础2.重组DNA技术的基本工具(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”)①将一个基因从DNA分子上切割下来需要切两处，同时产生四个黏性末端或平末端。
②限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。
(2)DNA连接酶①DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。
②DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为模板，而DNA连接酶不需要模板。
(3)载体构建基因表达载体时，需要选择合适的限制酶切割含有目的基因的DNA片段和载体。
已知限制性内切核酸酶Ⅰ的识别序列和切点是，限制性内切核酸酶Ⅱ的识别序列和切点是，根据图示分析回答下列问题：(1)请用图示法写出限制性内切核酸酶Ⅰ和限制性内切核酸酶Ⅱ切割后形成黏性末端的过程。
提示限制性内切核酸酶Ⅰ：限制性内切核酸酶Ⅱ：(2)切割图示中的目的基因和质粒应选用哪类限制酶？请说明理由。
提示用限制酶Ⅱ切割目的基因，用限制酶Ⅰ切割质粒。
限制酶Ⅰ的识别序列包含限制酶Ⅱ的识别序列，因此限制酶Ⅱ也可切割限制酶Ⅰ的位点，故使用限制酶Ⅱ时，可在目的基因两端同时作切割，从而切出“目的基因”，但若使用限制酶Ⅱ切割质粒，会同时破坏质粒中的两个“标记基因”，故只能使用限制酶Ⅰ切割质粒。
1.限制酶的选择原则(1)不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SmaⅠ。
基因工程复习题及答案
基因工程复习题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然进化答案：B2. 基因工程中常用的载体是：A. 噬菌体B. 质粒C. 病毒D. 所有以上选项答案：D3. 以下哪个不是基因工程中常用的受体细胞？A. 细菌B. 酵母C. 植物D. 动物答案：C4. 基因枪法属于哪种基因转移技术？A. 化学介导法B. 电穿孔法C. 微注射法D. 粒子轰击法答案：D5. 基因编辑技术CRISPR-Cas9中，Cas9蛋白的主要作用是：A. 识别目标DNA序列B. 切割目标DNA序列C. 连接DNA片段D. 转录mRNA答案：B二、填空题6. 基因工程的基本操作步骤包括：目的基因的________、________、检测与表达。
答案：提取、重组7. 基因工程在医学领域的应用包括________、________和基因治疗。
答案：基因诊断、基因疫苗8. 在基因工程中，________技术可以用于快速繁殖转基因植物。
答案：组织培养9. 基因工程中，________是将目的基因导入植物细胞的常用方法。
答案：农杆菌介导法10. 基因工程在农业上的应用包括提高作物的________、________和改良品质。
答案：抗病性、抗虫性三、简答题11. 简述基因工程在环境保护方面的应用。
答案：基因工程在环境保护方面的应用主要包括：- 利用基因工程改造微生物，以降解环境中的有毒物质，如石油污染物。
- 通过基因工程改良植物，使其能够耐受重金属污染，从而净化土壤。
- 利用基因工程改造的微生物处理工业废水，减少水体污染。
12. 阐述基因工程在生物制药领域的主要应用。
答案：基因工程在生物制药领域的主要应用包括：- 生产重组蛋白质药物，如胰岛素、干扰素等。
- 利用转基因动物生产药物，如转基因羊产生的抗凝血酶。
- 利用基因工程改造的微生物生产抗生素等药物。
- 开发基因治疗药物，用于治疗遗传性疾病。
基因工程理论课复习整理
基因工程理论复习整理1、基因工程（gene engineering）的定义：在分子水平上进行遗传操作，即将任何生物体（供体）的基因或基因组提取出来，或通过人工合成的目的基因，按照人们预先设计的蓝图，插入质粒或病毒复制子（载体），而形成一杂合分子（DNA重组体），然后将重组体转移到复制子所属的宿主生物体中复制，或转移到另一种生物体（受体）的细胞内（可以是原核细胞也可以是真核细胞），使之能在受体细胞内遗传并使受体细胞获得新的性状。
2、基因工程四大要素：目的基因、载体、工具酶、受体细胞。
3、基因工程特点：分子水平操作，细胞水平表达。
4、基因组DNA提取条件（1）提取DNA总的原则：a保证核酸一级结构的完整性；b其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；c核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；d其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
（2）影响因素①减少化学因素对DNA的降解：避免过碱、过酸对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH 4-10条件下进行；②减少物理因素对DNA的降解：避免强烈振荡、搅拌，细胞突置于低渗液中等操作，以避免破坏大分子量的线性DNA分子；③防止核酸的生物降解：避免细胞内、外各种核酸酶对核酸磷酸二酯键的水解作用，DNA酶需要Mg2+、Ca2+的激活，因此实验中常利用金属二价离子螯合剂EDTA，柠檬酸盐，可基本抑制DNA 酶的活性。
5、细胞的破碎:一般采用温和处理法裂解细胞。
6、沉淀基因组DNA：加入一定量的预冷的异丙醇或乙醇。
7、质粒可分为紧密控制型和松弛控制型，基因工程中一般用到的是松弛控制型。
8、利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在，当两种质粒同时导入同一细胞时，它们在复制及随后分配到子细胞的过程中彼此竞争，这种现象称为质粒的不相容性。
9、碱裂解法原理：当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共价闭环的质粒DNA 在回到中性pH时即恢复其天然构象；变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相中，从而可通过离心将两者分开。
基因工程复习资料
第一章一．名词解释1、基因工程:按工程学原理,将外源基因切割,与载体结合，导入受体细胞,使其稳定表达的过程.2、目的基因：开发人们特殊需要的基因产物或与优良性状相关的基因。
3、工具酶：体外进行DNA合成、切割、连接、修饰等过程需要的酶。
4、DNA药物：在受体细胞内表达产物有药理作用或通过定位整合直接抑制致病基因的DNA。
二．基因工程理论依据（1)基因具有相同的物质基础(2)基因可以切割（3）基因可以转移（4）基因与多肽有对应关系(5）基因的密码是通用的（6）基因可以通过复制遗传给下一代三．基因工程研究内容（1）克隆载体的研究（2)受体的研究（3）工具酶的研究（4）目的基因的研究（5）新技术的研究第二章一．名词解释1、DNA变性：DNA在较高温下，双链间氢键断开，形成单链DNA的过程。
2、DNA复性：变性的DNA，降温时恢复为双链DNA的过程。
3、解链温度:让DNA达到50%变性的温度.4、复制子:从复制起点开始复制出一个DNA分子或片段的核苷酸序列。
5、启动子：不转录RNA，是RNA聚合酶的识别结合位点.6、转录区:能转录相应RNA,包括编码区和终止子。
7、操纵子：原核生物中两个以上基共用一个启动子。
8、内含子:真核生物转录区中的非编码间隔序列.9、限制性核酸内切酶:使一个磷酸二酯键断开的脱氧核糖核酸酶。
10、稀切酶：有较长的识别序列和富含GC或AT的识别序列的限制性核酸内切酶。
11、同裂酶:不同的酶有相同的识别序列。
12、同尾酶：切割不同识别序列产生相同末端的不同酶。
13、黏性末端：两条链断开位置是交错的，叫黏性末端。
14、平末端：两条链断开位置是平齐的,叫平末端。
15、位点偏爱:某些限制酶对同一介质中的有些位点表现出偏爱性切割，即对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象称作位点偏爱。
16、酶活单位：限制酶最适条件下60分钟切割1ugDNA所需的酶活性.17、容积活性：1ul酶活单位所具有的酶活性。
第3章 基因工程 期末复习知识点总结【新教材】人教版高中生物选择性必修三
第3章基因工程1、什么是基因工程：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。
2、基因工程的诞生（三个理论和三个技术）：基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科基础上发展起来的，正是这些学科的基础理论和相关技术的发展催生了基因工程，具体有三大理论发现和三个技术突破。
1)理论基础：DNA是遗传物质；DNA分子的双螺旋结构和半保留复制；遗传密码的通用性和遗传信息传递的方式；2)技术基础：限制性核酸内切酶的发现与DNA的切割；DNA连接酶的发现与DNA片段的连接；基因工程载体的构建与应用●理论上的三大发现⑴、发现了遗传物质——DNA1944年，艾弗里（O.T.Avery）的肺炎双球菌转化实验⑵、揭示了遗传物质的分子机制：DNA分子的双螺旋结构和半保留复制1953年，沃森（J.D.Watson）和克里克（F.Crick）的DNA双螺旋结构模型、半保留复制图，获1958年诺贝尔奖。
⑶、确立了遗传信息的传递方式：以密码形式传递1963年，美国尼伦伯格（M.W.Nirenberg）和马太（H.Matthaei）确立了遗传信息以密码形式传递，破译了编码氨基酸的遗传密码(3个核苷酸=1个密码子=1个aa)。
●技术上的三大突破⑴、世界上第一个重组DNA实验：实现不同来源DNA的体外重组1972年斯坦福大学化学家伯格（P.Berg）借助内切酶和连接酶将猴病毒SV40的DNA 和大肠杆菌λ噬菌体的DNA在试管中连接在了一起，第一次成功地实现了DNA的体外重组。
⑵、第一个基因克隆实验：重组DNA表达实验，是世界上第一个基因工程实验1973年美国斯坦福大学医学院遗传学家科恩（S.Cohen）将体外构建的含有四环素和卡那霉素抗性基因的重组质粒导入大肠杆菌，获得了具有双抗性的大肠杆菌转化子，成功完成了第一个基因克隆实验。
基因工程 考试复习资料
基因工程复习资料一．基因工程：在体外对不同生物的遗传物质进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（质粒、病毒、噬菌体DNA）插入微生物、植物、动物细胞内进行无性繁殖、并表达出基因产物。
二．一）1.同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。
同裂酶的类型：1)同序同切酶：识别位点和切点完全相同。
如Hind Ⅲ和Hsu I。
2)同序异切酶：识别位点相同，但切点不同。
如Kpn I 和Acc65 I。
3)同功多位酶：许多识别简并序列的限制酶包含了另一种限制酶的功能。
4）其他：有些限制酶识别的序列交叉。
2 同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。
如BamH I、Bgl Ⅱ、Bcl I、Xho Ⅱ等。
同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新位点一般不能再被原来的酶识别。
3. 限制性内切酶的命名：1）用属名的第一个字母和种名的头两个字母组成3个字母的略语表示寄主菌的物种名。
2. ）用一个右下标的大写字母表示菌株或型。
如Ecok, EcoR（现在都写成平行，如EcoRI）。
3）如果一种特殊的寄主菌内有几种不同的限制与修复系统，用罗马字母表示。
如EcoR I。
EcoR I: E, 属名的第一个字母; co种名的头两个字母;R, 菌株或型号; I,序号；Eco为斜体，R为正体。
4.限制性内切酶产生的末端：1）产生匹配黏端：即黏性末端，识别位点为回文对称结构的序列经限制性内切酶切割后产生的末端。
2）产生平末端：回文对称轴上同时切割DNA的两条链。
3）产生非对称突出末端：识别序列为非对称序列时，切割的DNA产物末端是不同的。
5、常用的DNA聚合酶的：1.）共同特点：把dNTPs连续地加到引物的3‟—OH端。
2. ）主要区别：（1）持续合成能力和外切酶活性不同。
（2）T7 DNA聚合酶可以连续添加数千个dNTPs而不从模板上掉下来。
（3）其它几种DNA聚合酶只能连续添加10多个dNTPs就会从模板上解离下来。
5、星星活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称为星星活性。
高考生物5年高考3年模拟总复习(新高考)基因工程(训练册)
别序列)
4. (新情境)(2021山东,25,12分)人类γ基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A蛋 白结合位点,该位点结合BCL11A蛋白后,γ基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的 序列,解除对γ基因表达的抑制,可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增 了γ基因上游不同长度的片段,将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测, 以确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。
考点2 DNA的粗提取与鉴定、PCR扩增与电泳鉴定
5.(2023福建,4,2分)关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”(实验Ⅰ)和“DNA的粗提取 与鉴定”(实验Ⅱ)的实验操作,下列相关叙述正确的是 ( C ) A.实验Ⅰ中,PCR实验所需的移液器、枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理 B.实验Ⅰ中,将扩增得到的PCR产物进行凝胶电泳,加样前应先接通电源 C.实验Ⅱ中,取洋葱研磨液的上清液,加入等体积冷酒精后析出粗提取的DNA D.实验Ⅱ中,将白色丝状物直接加入二苯胺试剂中并进行沸水浴,用于鉴定DNA
(1)根据美西螈CD14基因的核苷酸序列,合成引物,利用PCR扩增CD14片段。已知 DNA聚合酶催化引物的3‘-OH与加入的脱氧核苷酸的5’-P形成磷酸二酯键,则新合成链
的延伸方向是
(填“5'→3'”或“3'→5'”)。
(2)载体和CD14片段的酶切位点及相应的酶切序列如图所示。用XhoⅠ和SalⅠ分别酶
6.(2023辽宁,19,3分)(不定项)基质金属蛋白酶MMP2和MMP9是癌细胞转移的关键 酶。MMP2和MMP9可以降解明胶,明胶可被某染液染成蓝色,因此可以利用含有明胶 的凝胶电泳检测这两种酶在不同条件下的活性。据图分析,下列叙述正确的是( B ) A.SDS可以提高MMP2和MMP9活性 B.10 ℃保温降低了MMP2和MMP9活性 C.缓冲液用于维持MMP2和MMP9活性 D.MMP2和MMP9降解明胶不具有专一性
基因工程期末复习题(含答案)
一、填空题1、基因文库的构建通常采用cDNA法和鸟枪法两种方法。
2、限制性内切酶识别序列的结构一般为具有 180度旋转对称的回文结构。
3、DNA连接酶主要有两种：T4噬菌体和大肠杆菌DAN连接酶。
4、根据质粒在宿主细胞中所含拷贝数的多少，可以把质粒分为两种类型：紧密型质粒和松弛型质粒。
5、原核受体细胞通常包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和蓝细菌。
6、原核生物或低等真核生物，将外源重组 DNA导入受体细胞的方法有借助生物载体的转化、转染、转导。
7、对细菌细胞进行转化的关键是细胞处于感受态。
8、基因工程是_____1970’____年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
9、部分酶切可采取的措施有：(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积等。
10、第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是EcoRl。
11、DNA聚合酶 I的 Klenow大片段是用枯草杆菌蛋白酶切割 DNA聚合酶I得到的分子量为 76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶的活性。
12、为了防止 DNA的自身环化，可用_碱性磷酸酶__去双链 DNA_5’端的磷酸基团_。
13、测序酶是修饰了的 T7DNA聚合酶，它只有5'-3'合成酶的活性，而没有 3'-5'外切酶的活性。
14、切口移位(nick translation)法标记 DNA的基本原理在于利用 DNA聚合酶 I的5'一 3'合成酶和 5'一 3'合成酶的作用。
15、欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用S1核酸酶切割或DNA聚合酶补平。
16、反转录酶除了催化 DNA的合成外，还具有核酸水解酶 H的作用，可以将DNA-RNA杂种双链中的 RNA水解掉。
17、 pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于pMBl，它的四环素抗性基因来自于pSCl01，18、pSCl01是一种严紧复制的质粒。
基因工程复习资料
基因工程复习资料第一章核酸的制备1.主要步骤：分、切、接、转、筛、表2.基因工程的概念：基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。
第二章基因工程工具酶1.生物催化剂：核酶、抗体酶、模拟酶。
2.限制性内切核酸酶：定义：限制性内切核酸酶是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列（识别序列），并在识别序列上使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。
命名：限制性内切核酸酶一般是以第一次提取到这类酶的生物的属名的第一个字母和种名的第一、第二个字母命名的，有的在后面还加菌株（型）代号中的一个字母。
如果从同一种生物中先后提取到多种限制性内切核酸酶，则依次用罗马数字Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表示。
并且名称的前三个字母须用斜体，第一个字母用大写。
3.DNA连接酶：定义：DNA连接酶也称DNA黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是连接DNA链3‘-OH末端和，另一DNA链的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链的一种酶。
种类：大肠杆菌DNA连接酶、T4DNA连接酶、TscDNA连接酶、真核生物细胞发现的连接酶，如酶Ⅰ、酶Ⅱ、酶Ⅲ等多种类型。
4.DNA片段的连接方法：①具互补黏性末端DNA片段之间的连接：可用E?coli DNA连接酶，也可用T4 DNA连接酶。
②具平末端DNA片段之间的连接：只能用T4 DNA连接酶，并且必须增加酶的用量。
③DNA片段末端修饰后进行连接：DNA片段末端同聚物加尾后进行连接，可按互补粘性末端片段之间的连接方法进行连接；粘性末端修饰成平末端后进行连接；DNA片段5′端脱磷酸化后进行连接；DNA片段加连杆或衔接头后连接。
5.DNA聚合酶：①定义：DNA聚合酶是指以DNA单链为模板，以4种脱氧核苷酸为底物，催化合成一条与模板链序列互补的DNA新链的酶。