分子生物学实验思考题答案
分子生物学复习思考题附答案二

分子生物学复习思考题二1.写出分子生物学广义的与狭义的定义,现代分子生物学研究的主要内容,以及5个分子生物学发展的主要大事纪(年代、发明者、简要内容)。
广义上:分子生物学包括对蛋白质和核酸等生物大分子结构与功能的研究、以及从分子水平上阐明生命的现象和生物学规律。
狭义概念:既将分子生物学的范畴偏重于核酸(基因)的分子生物学,主要研究基因或DNA结构与功能、复制、转录、表达和调节控制等过程。
其中也涉及到与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。
现代分子生物学研究的主要内容有:基因与基因组的结构与功能,DNA的复制、转录和翻译,基因表达调控的研究,DNA重组技术,结构分子生物学等。
5个分子生物学发展的主要大事纪(年代、发明者、简要内容):1.1944年,著名微生物学家Avery 等人在对肺炎双球菌的转化实验中证实了DNA是生物的遗传物质。
这一重大发现打破了长期以来,许多生物学家认为的只有象蛋白质那样的大分子才能作为细胞遗传物质的观点,在遗传学上树立了DNA是遗传信息载体的理论。
2. 2.1953年,是开创生命科学新时代具有里程碑意义的一年,Watson和Crick发表了“脱氧核糖核酸的结构”的著名论文,他们在Franklin和Wilkins X-射线衍射研究结果的基础上,推导出DNA双螺旋结构模型,为人类充分揭示遗传信息的传递规律奠定了坚实的理论基础。
同年,Sanger历经8年,完成了第一个蛋白质——胰岛素的氨基酸全序列分析。
3. 1954年Gamnow从理论上研究了遗传密码的编码规律, Crick在前人研究工作基础上,提出了中心法则理论,对正在兴起的分子生物学研究起了重要的推动作用。
4. 1956年Volkin和Astrachan发现了mRNA(当时尚未用此名)。
5. 1985年,Saiki等发明了聚合酶链式反应(PCR);Sinsheimer首先提出人类基因组图谱制作计划设想;Smith等报导了DNA测序中应用荧光标记取代同位素标记的方法;Miller等发现DNA结合蛋白的锌指结构。
分子生物学实验思考题李明

分子生物学实验思考题李明集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN]思考题1.在基因组DNA提取过程中应注意哪些问题?1)EB一种诱变剂,操作时一定要注意安全操作,必须戴塑料或乳胶手套。
2)点样的时候要特别小心,注意不要把点样孔底部给刺穿,也要注意防止样品扩散到别的点样孔中去。
3)每取完一种试剂,必须换枪头,避免造成污染。
4)注意电极方向不要弄反。
5)操作是动作要轻柔,避免液体内以及液体与容器间产生的剪切力。
6)混合不同的液体时切忌震荡,甚至要静置。
7)之一各试剂的添加顺序。
2.在电场中,带负电荷的DNA向阳极迁移,该过程受哪些因素的影响1)、 DNA的分子大小: 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中蠕行,因而迁移得越慢。
2)、琼脂糖浓度一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。
DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。
凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。
分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA 片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。
3)、 DNA分子的构象当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。
相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢。
如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。
4)、电源电压在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。
分子生物学 思考题

第3章核酸的结构和功能DNA结构域:组蛋白:是真核生物体细胞染色质中的碱性蛋白质,富含精氨酸和赖氨酸等碱性氨基酸:H1、H2A、H2B、H3和H4。
核小体:是构成真核生物染色质的基本结构单位。
核基质:为真核细胞核内的网架结构。
30nm纤丝:核小体进行高度有序的组装,形成左手螺旋的螺线管。
每个螺旋约6个核小体。
H1组蛋白的功能:ⅰ稳定作用;ⅱ保护DNA免受核酸酶降解。
1、DNA双螺旋结构有哪些形式?说明其主要特点和区别。
A型、B型及Z型螺旋;A型螺旋比较粗短,碱基倾角大,大沟深度明显超过小沟;B型比较适中;Z型细长,大沟平坦,核苷酸构象顺反相间,螺旋骨架呈Z字形。
2、什么是DNA的拓扑异构体,它们之间的相互转变依赖于什么?一级结构相同(序列相同)而L值不同的环形DNA分子称为拓扑异构体,它们之间的相互转变依赖于DNA 的拓扑异构酶。
3、简述真核生物染色体的组成,它们是如何组装的?细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构。
DNA--核小体--30nm纤丝--核基质固定--压缩--染色体4、简述细胞内RNA的结构特点以及与DNA的区别。
P575、引起DNA变性的主要因素有哪些?核酸变性后分子结构和性质发生了哪些变化?1)加热;2)极端pH值;3)有机溶剂、尿素和酰胺等。
DNA双螺旋解链。
性质变化:DNA溶液的黏度大大下降、沉降速度增加、浮力密度上升、紫外吸收光谱升高、酸碱滴定曲线改变、生物活性丧失。
6、检测核酸变性的定性和定量方法是什么?具体参数如何?紫外吸收光谱的变化。
以50μg/ml DNA溶液在A260下测定,三者的A260数值为:双链DNA A260=1.00;单链DNA=1.37;游离碱基、核苷酸=1.6。
(结构越有序,吸收光越少)7、DNA的T m值一般与什么因素有关?Tm=4(G+C)+2(A+T)1)DNA的均一性(均质较小);2)G-C碱基对的含量;3)介质中离子强度。
现代分子生物学第4版朱玉贤课后思考题答案word文档良心出品

第一章1 简述孟德尔、摩尔根和沃森等人对分子生物学发展的主要贡献 答:孟德尔的对分子生物学的发展的主要贡献在于他通过豌豆实验,发现了遗传规律、分离规律及自由组 合规律;摩尔根的主要贡献在于发现染色体的遗传机制,创立染色体遗传理论,成为现代实验生物学奠基 人;沃森和克里克在 1953 年提出 DAN 反向双平行双螺旋模型。
2 写出 DNARNA 的英文全称答:脱氧核糖核酸( DNA, Deoxyribonucleic acid ), 核糖核酸( RNA, Ribonucleic acid )3 试述“有其父必有其子”的生物学本质 答:其生物学本质是基因遗传。
子代的性质由遗传所得的基因决定,而基因由于遗传的作用,其基因的 一半来自于父方,一般来自于母方。
4 早期主要有哪些实验证实 DNA 是遗传物质?写出这些实验的主要步骤 答:一,肺炎双球菌感染实验, 1, R 型菌落粗糙,菌体无多糖荚膜,无毒,注入小鼠体内后,小鼠不死亡。
2,S 型菌落光滑,菌体有多糖荚膜,有毒,注入到小鼠体内可以使小鼠患病死亡。
3,用加热的方法杀死 S型细菌后注入到小鼠体内,小鼠不死亡; 二,噬菌体侵染细菌的实验: 1,噬菌体侵染细菌的实验过程:吸附7侵入7复制7组装7释放。
2, DNA 中P 的含量多,蛋白质中 P 的含量少;蛋白质中有 S 而DNA 中没有S,所以用放射性同位素 35S 标记一部分噬菌体的蛋白质, 用放射性同位素32P 标记另一部分噬菌体的 DNA 。
用35P 标记蛋白质的噬菌体侵染后,细菌体内无放射性,即表明噬菌体的蛋白质没有进入细菌内部; 而用32P 标记DNA 的噬菌体侵染细菌后,细菌体内有放射性,即表明噬菌体的DNA 进入了细菌体内。
三,烟草TMV 的重建实验:1957年,Fraenkel-Conrat 等人,将两个不同的 TMV 株系(S 株系和HR 株系)的蛋 白质和RNA 分别提取出来,然后相互对换,将 S 株系的蛋白质和 HR 株系的RNA ,或反过来将HR 株系的蛋 白质和S 株系的RNA 放在一起,重建形成两种杂种病毒,去感染烟草叶片。
朱玉贤现代分子生物学第一章思考题参考答案

简述孟德尔、摩尔根和沃森等人对分子生物学发展的主要贡献。
孟德尔、摩尔根和沃森等人都是分子生物学研究领域中的杰出科学家,他们对分子生物学发展做出了重要贡献,简述如下:孟德尔:格雷戈里·孟德尔是遗传学的奠基人,他进行的果蝇和豌豆杂交实验发现了基因的遗传规律,为后来遗传学领域提供了有力的实验和定量分析方法,奠定了遗传学的基础。
摩尔根:托马斯·摩尔根在研究果蝇的遗传学时,发现了基因在染色体上的位置,提出了遗传连锁的概念,发明了连锁遗传图,在研究遗传突变产生的变异时,提出了基因突变的概念,并通过实验研究证明了遗传物质的DNA分子是遗传信息的携带者。
沃森:詹姆斯·沃森和弗兰西丝·克里克是现代分子生物学的奠基人之一,在探索DNA 的结构和功能方面取得了突破性的成果。
他们基于罗托谷的x线衍射图像,发现了DNA分子是由两个互补的螺旋结构组成的,并提出了广为人知的“双螺旋模型”,深入揭示了DNA作为遗传信息载体的核心机制,开创了基因组学和癌症基因研究等当前分子生物学和医学领域的重要分支。
总的来说,孟德尔、摩尔根和沃森等人都是分子生物学研究领域中的卓越科学家,他们的研究和发现推动了遗传学、分子生物学领域的快速发展,为现代生命科学领域的进展和应用奠定了坚实的基础。
写出DNA、RNA、mRNA和siRNA的英文全名。
DNA: Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸RNA: Ribonucleic acid 核糖核酸mRNA: Messenger RNA 信使RNAsiRNA: Small interfering RNA 小干扰RNA试述“有其父必有其子”的生物学本质。
“有其父必有其子”是指在有性繁殖中,子代继承了父代的遗传物质,遗传基因、表达内容和表型特征都受到遗传基因的影响而与父亲有着密切的联系。
这一原则体现了细胞和遗传学基础的生物学本质。
遗传学上,遗传物质是存在于生物体内的基因,基因是控制生物所有性状的一种遗传单位,也是一个生物体的DNA序列。
分子生物学思考题汇总版

分子生物学思考题一、总论:人类基因与基因组学1、人类基因组计划的精髓是什么?答案一:人类基因组计划的精髓是人类基因组图谱,包括遗传图谱、物理图谱、序列图谱、转录图谱。
1)遗传图谱:又称连锁图谱,是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”,以遗传学距离为图距的基因组图。
遗传图谱的建立为基因识别和完成基因定位创造了条件。
2)物理图谱:指有关构成基因组的全部基因的排列和间距的信息。
绘制物理图谱的目的是把有关基因的遗传信息及其在每条染色体上的相对位置线性而系统地排列出来。
3)序列图谱:指测定每条染色体的DNA序列,通过DNA序列可以直接推出基因结构、定位已知基因、研究基因起源。
4)转录图谱:指在识别基因组所包含的蛋白质编码序列的基础上绘制的结合有关基因序列、位置及表达模式等信息的图谱。
通过这张图可以了解某一基因在不同时间不同组织、不同水平的表达;也可以了解一种组织中不同时间、不同基因中不同水平的表达,还可以了解某一特定时间、不同组织中的不同基因不同水平的表达。
答案二:人类基因组计划(Human Genome Project, HGP)是一项规模宏大,跨国跨学科的科学探索工程。
其宗旨在于测定组成人类染色体(指单倍体)中所包含的30亿个碱基对组成的核苷酸序列,从而绘制人类基因组图谱(包括遗传图谱、物理图谱、序列图谱、转录图谱),并且辨识其载有的基因及其序列,达到破译人类遗传信息的最终目的。
基因组计划精髓在于让人类解码生命、了解生命的起源、了解生命体生长发育的规律、认识种属之间和个体之间存在差异的起因、认识疾病产生的机制以及长寿与衰老等生命现象、为疾病的诊治提供科学依据。
1)草图,许多疾病相关的基因被识别;2)SNP(人与人之间的区别),草图提供了一个理解遗传基础和人类特征进化的框架。
3)草图后,研究人员有了新的工具来研究调节区和基因网络。
4)比较其它基因组可以揭示共同的调控元件,和其他物种共享的基因的环境也许提供在个体水平之上的关于功能和调节的信息。
分子生物学实验思考题 李明

1)样本材料老化或反复动容导致DNA含量下降。
解决:应选择新鲜的材料样品,不能及时处理的样品应立即放入液氮或-70℃低温保存,以避免DNA降解。
样品破壁或裂解不完全,DNA未充分释放。
解决:动植物材料应在液氮中充分研磨匀浆,G+细菌就、酵母等破壁较困难的样品应用溶菌酶、Lyticase酶或机械协助破壁。
习题:若PCR反应后琼脂糖凝胶电泳检测发现有多条扩增片段,如何获得单一、纯度高的目的基因片段,以保证后续实验的进行。简述方法及原理
DEAE-纤维素膜电泳法
透析袋电洗脱法
低熔点琼脂糖凝胶法
凝胶冻融法
滤纸法
挖孔法
DEAE-纤维素膜电泳法
原理:醋酸纤维素薄膜电泳仪醋酸纤维薄膜为支持物,他是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮酸等有机溶液中,既可以涂布成为一系咪的微孔薄膜,厚度为0.1mm~0.15mm为宜。太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。
载体T突出端丢失,引起载体平端连接
插入片段与载体比例不理想
污染
转染过程中,反应条件控制不当。
3.进行重组子筛选和鉴定时,若菌落PCR反应后无扩增产物,分析其原因 ?
1)挑出的菌落在转化的过程中出现了污染,导致在平板上长出的菌落并不是通过转化的细胞,而是污染的菌落。
2)挑出的菌落中转化的是空载体
透析袋电洗脱法
原理:将含有DNA片段的凝胶切下置于充满1xTAE的透析袋中,使凝胶块沉下,去掉大部分缓冲液,在凝胶上方加紧透析袋,不留气泡,将透析袋浸泡在1xTAE电泳槽中,电泳2至3小时,使DNA从凝胶中洗脱下来。
(0462)《分子生物学》复习思考题答案

(0462)《分子生物学》复习思考题答案一、名词解释1. 狭义的分子生物学——是研究核酸、蛋白质等生物大分子的结构与功能,并从分子水平阐明蛋白质与核酸、蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系及其基因表达调控机理的学科。
2. 广义的分子生物学——包括对蛋白质和核酸等生物大分子结构与功能的研究,以及从分子水平上阐明生命的现象和生物学规律。
例如,蛋白质的结构、运动和功能,酶的作用机理和动力学,膜蛋白结构与功能和跨膜运输等。
3. 基因(gene)——是原核、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列,是遗传的基本单位。
包括编码蛋白质和tRNA、rRNA的结构基因,以及具有调节控制作用的调控基因。
基因可以通过复制、转录和决定翻译的蛋白质的生物合成,以及不同水平的调控机制,来实现对遗传性状发育的控制。
基因还可以发生突变和重组,导致产生有利、中性、有害或致死的变异。
4. 断裂基因或割裂基因——指基因的编码序列在DNA分子上不连续排列,而被不编码的序列所隔开。
5. 外显子——基因中编码的序列称为外显子(exon),外显子是基因中对应于信使RNA序列的区域。
6. 内含子——编码的间隔序列称为内含子(intron),内含子是在信使RNA被转录后的剪接加工中去除的区域。
7. C值——指生物单倍体基因组中的DNA含量。
C值矛盾(C value paradox)——指真核生物中DNA含量的反常现象。
8. 半保留复制——在DNA分子上的每一条链都含有合成它的互补链所必需的全部遗传信息。
在复制过程中首先是双链解旋并分开,之后以每条链作为模板在其上合成新的互补链,其结果是由一条链可以形成互补的两条链。
这样新形成的两条双链DNA分子与原来DNA 分子的碱基顺序完全一样。
在此过程中,每个子代分子的一条链来自亲代DNA,另一条链则是新合成的,这种方式称为半保留复制。
9. 遗传转化(genetic transformation)——细菌品系由于吸收了外源DNA(转化因子)而发生遗传性状的改变现象。
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分子生物学实验思考题答案
实验一、基因组DNA的提取
1、为什么构建DNA文库时,一定要用大分子DNA
答、文库的大小(即数目)取决于基因组的大小和片段的大小,片段大则文库数目小一些也可以包含99%甚至以上的基因组。
而文库数目小则方便研究人员操作和文库的保存。
所以构建文库要用携带能力大的载体克隆尽量大的DNA片段.
2、如何检测和保证DNA的质量
答、用凝胶电泳看,有没有质白质和RNA等物质的污染,还可以测OD,用OD260/280来判断,当OD260/OD280< ,表示蛋白质含量较高当OD260/OD280> ,表示RNA含量较高当OD260/OD280=~,表示DNA较纯。
实验二、植物总RNA的提取
1、RNA酶的变性和失活剂有哪些其中在总RNA的抽提中主要可用哪几种
答、有DEPC,Trizol,氧钒核糖核苷复合物,RNA酶的蛋白抑制剂以及SDS,尿素,硅藻土等;在总RNA提取中用PEPC,Trizol
2、怎样从总RNA中进行mRNA的分离和纯化。
答、、利用成熟的mRNA的末端具有polyA尾的特点合成一段oligo(dT)的引物,根据碱基互补配对原则,可将mRNA从总RNA中分离出来
实验四、大肠杆菌感受态细胞的制备
1、感受态细胞制备过程中应该注意什么
答、A)细菌的生长状态:不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌,最好从-80℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。
细胞生长密度以刚进入对数生长期时为宜,可通过监测培养液的OD600 来控制。
DH5α菌株的OD600为时,细胞密度在5×107 个/mL 左右,这时比较合适。
密度过高或不足均会影响转化效率。
B)所有操作均应在无菌条件和冰上进行;实验操作时要格外小心,悬浮细胞时要轻柔,以免造成菌体破裂,影响转化。
C)经CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加,24小时达到最高,之后转化率再下降(这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的);D)化合物及无机离子的影响:在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子(如Mn2+或Co2+)、DMSO或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高(100-1000倍);
E)所使用的器皿必须干净。
少量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率;
2、感受态细胞制备可用在哪些研究和应用领域
答、在基因工程中将质粒导入受体细胞是如果受体细胞是细菌则将它用Ca2+处理变为感受态细胞质粒进入。
实验五、质粒在大肠杆菌中的转化和鉴定
1、在热激以后进行活化培养,这时的培养基中为什么不加入抗生素
答、活化培养用的一般是SOC培养基,这种培养基比LB培养基营养,此时进行的活化培养只是为了让大肠杆菌迅速复苏,恢复分裂活性,此时的细胞还不具抗性,加入抗生素会细胞会死亡。
2、什么是质粒根据在细菌中的复制,质粒有几种类型用于基因重组的主要用到哪些质粒答、质粒是细菌体内的环状DNA分子。
质粒也是作为细菌遗传载体的一部分,但通常其携带的基因对细菌而言必要性要比核内DNA 的小很多。
比如,抗性基因,荧光蛋白基因等等。
根据质粒随细胞分裂而分裂的次数,将其分为两类:一类是严紧型质粒,当细胞染色体复制一次时,质粒也复制一次,每个细胞内只有1~2个质粒;另一类是松弛型质粒,当染色体复制停止后仍然能继续复制,每一个细胞内一般有20个左右质粒。
常用于基因重组的质粒是pBR322质粒,因为其基因测序已经完成,而且它携带了两个标记基因,一个是氨苄青霉素抗性基因Apr,另一个是四环素抗性基因Tetr。
实验六、质粒DNA的分离纯化和鉴定
1、在实验过程中,加入的EDTA、SDS分别起什么作用
答、EDTA可以结合DNA酶等,可以抑制其活性;SDS主要是裂解细菌和沉淀蛋白。
2、乙酸钾在实验过程中主要起什么作用
答、主要是在分离过程中起着中和PH的作用,DNA经碱(NaoH)裂解后,染色体DNA氢键断裂,双螺旋解开,质粒DNA氢键断裂,互补链不能完全分离,再经乙酸钾中和成中性后则复性离心就可以达到分离的效果。
3、氯仿在核酸的提取过程中有何作用
答、克服酚的特点,加速有机层和液相的分层。
最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中迹量酚。
4、本实验整个过程中应该注意些什么
答、1、提取过程应尽量保持低温;
2、提取质粒DNA过程中除去蛋白质很重要,采用酚、氯仿去除蛋白质要比单独用酚或者氯仿要好,要将蛋白尽量除干净需多次抽提。
3、沉淀DNA一般使用冰乙醇,在低温条件下放置时间稍长可以使沉淀完全。
沉淀DNA 也可以使用异丙醇(一般使用等体积),且沉淀完全,速度快,但常把盐沉淀,所以多数还是用乙醇。
实验七、聚合酶链式反应——一般原理和技术
1、降低退火温度对反应有何影响
答、变性所需的加热温度取决于模板及PCR 产物双链DNA 中的G+C 含量。
双链DNA 中的G+C 的比率越高,则双链DNA 分离变性的温度也就越高。
变性所需的时间与DNA 分子的长度相关,DNA 分子越长,在特定的变性温度下使双链DNA 分子完全分离所需的时间就越长。
若变性温度太低或变性时间太短,则只能使DNA 模板中富含AT 的区域产生变性,当PCR 循环中的反应温度降低时,部分变性的DNA 模板又重新结合成双链DNA,从而导致PCR 的失败。
非特异性条带数增多。
2、PCR 循环次数是否越多越好为何
答、循环次数越多,非特异性产物的量亦随之增多。
3、PCR技术可应用与哪些方面举例。
答、1、核酸的基础研究:基因组克隆
2、不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序
3、反向PCR测定未知DNA区域
4、反转录PCR(RT-PCR)用于检测细胞中基因表达水平、RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA
5、荧光定量PCR用于对PCR产物实时监控
6、cDNA末端快速扩增技术
7、检测基因的表达
8、医学应用:检测细菌、病毒类疾病;诊断遗传疾病;诊断肿瘤;应用于法医物证学
实验八、DNA的限制性内切酶酶切和鉴定
1、写出ECORI和Hind3两种内切酶消化产物的末端序列。
答、G^AATTC EcoRI的识别序列和切割位点,粘性末端即:AATTC- CTTAA^G G- HindⅢ的识别序列为:A^AGCTT “^”为切割位点,黏性末端为:AGCTT- A-
2、什么是粘性末端和平末端
答、用限制酶切割后得到的末端齐平就是平末端,一长一短就是粘性末端
3、限制性内切酶在基因工程中有什么作用
答、用同种限制酶对含目的基因的DNA分子和运载体(如:质粒)进行切割,产生同种黏性末端(核苷酸序列),从而进行重组(加DNA连接酶),以导入目的基因。