菌落总数检测SOP
菌落总数检验操作规程
A.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤A.1.1成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g氯化钠5.0 g乳糖5.0 g磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75 g磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g月桂基硫酸钠0.1 g蒸馏水1 000 mL pH 6.8±0.2 制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。
分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL 。
121 ℃高压灭菌15 min 。
菌落总数检验操作规程一、目的建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。
二、适用范围适用于菌落总数的检验操作。
三、职责1.检验人员严格按检验操作规程进行检验。
2.QC主管监督检查执行情况。
四、程序1.范围本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定2.术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
3. 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4天平：感量为0.1 g。
3.5均质器。
3.6振荡器。
3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
3.11放大镜或和菌落计数器。
4.培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.24.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。
5.检验程序菌落总数的检验程序见图1。
图1 菌落总数的检验程序6.操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
菌落总数测定操作流程
菌落总数测定操作流程一、前期准备。
咱得先把要用的东西都准备好呢。
那都需要啥呢？像培养皿，这可是让菌落安家的小房子，得干净又透亮的。
还有移液管，就像小吸管一样，用来准确吸取各种液体。
再有就是培养基啦，这就好比是菌落的食物，得营养丰富，像牛肉膏蛋白胨培养基就很不错呢。
还有各种消毒用品，像酒精啥的，要把咱们操作的小天地都打扫干净，不能让那些杂菌来捣乱呀。
二、样品采集与处理。
这一步可重要啦。
如果是测食品里的菌落总数，那可得小心地采集样品。
要是固体的食物，比如说一块面包，就从不同的地方取一点，混合到一起。
要是液体的，像牛奶，就得先把它摇一摇，让里面的东西均匀了再取样。
取样之后呢，可能还得稀释，为啥要稀释呢？因为要是菌落太多，长得到处都是，咱可就数不过来了呀。
按照一定的比例，把样品和无菌水混合，就像调果汁一样，调出合适的浓度。
三、接种。
这就像是把小种子种到地里一样。
用咱们之前准备好的移液管，吸取稀释好的样品，小心地滴到培养皿里。
然后呢，再把温热的培养基倒进去，要轻轻地倒，就像给小种子盖被子一样，可不能把它们给冲跑了。
培养基一倒进去，就得赶紧把培养皿晃一晃，让样品和培养基充分混合均匀，这样菌落才能在里面舒舒服服地生长呢。
四、培养。
把接种好的培养皿放到培养箱里。
这个培养箱就像是小温室，要给菌落创造一个合适的生长环境。
温度一般设定在37℃左右，这就像咱们人感觉比较舒服的温度一样。
时间呢，大概是24 - 48小时，在这个时间里，那些小小的菌落就会像小蘑菇一样慢慢地长出来啦。
五、计数。
时间一到，就可以把培养皿拿出来数菌落啦。
这可需要点耐心呢。
拿着小本子和笔，一个一个地数那些小小的菌落点。
有时候菌落会长得密密麻麻的，就像天上的星星一样，可不好数了。
这时候就得小心仔细，别数错了。
如果有连成一片的，那可不能算一个，要按照一定的规则来数呢。
六、结果报告。
数完菌落之后，就可以算出菌落总数啦。
根据咱们之前的稀释倍数，算出每克或者每毫升样品里大概有多少个菌落。
菌落总数检验作业指导书
A、以无菌操作取检样25ml于225ml灭菌生理盐水中，经充分振摇作成1：10的均匀稀释液。
B、用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇做成1：100的样品稀释液。
C、另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释度，注意每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌吸管。
6.2.2生理盐水：(0.9%浓度)定量分装于锥形瓶或试管内。
6.2.3乙醇：（75%）
菌落总数检验作业指导书
6.3操作步骤：
6.3.1样品处理
6.3.1.1成品直接吸取5ml于灭菌平皿中；半成品、水样以无菌操作直接吸取1ml于灭菌平皿中；原材料、成品复检及一些可疑样品可以视污染情况作不同的稀释处理。
7.0相关文件
7.1《食品卫生微生物学检பைடு நூலகம்菌落总数测定》
8.0质量记录表单
无
E、若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
F、若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6.3.4菌落数的报告
菌落数在100以内时，按其实有数报告；大于100时用二位有效数字，在二位有效数字后的数字，以四舍五入方法计算。
6.3.2.2待琼脂凝固后，翻转平皿，置37℃生化培养箱内培养48±2h，取出计算平皿内菌落数目，乘以稀释倍数，即得5ml或1ml检样中所含的细菌菌落总数。
6.3.3菌落计数
6.3.3.1平板菌落数的选择
选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数计数标准。
6.3.3.2稀释度的选择
A、应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数，报告之。
菌落总数操作手册
菌落总数操作手册
一、概述
菌落总数是指在一定条件下生长的细菌菌落数，用于评估食品或环境的卫生质量。
本操作手册将详细介绍如何进行菌落总数检测，以确保实验结果的准确性和可靠性。
二、实验材料
1. 培养基：平板计数琼脂（PCA）
2. 试剂：无菌生理盐水
3. 器具：无菌棉签、无菌培养皿、无菌移液管（1mL）、天平、pH计、恒温培养箱、计时器、灭菌锅
三、实验步骤
1. 样品采集：使用无菌棉签采集适量样品，并放入无菌容器中。
对于液体样品，直接使用无菌移液管取样；对于固体或半固体样品，需将样品研磨或搅拌均匀后取样。
2. 样品稀释：将采集的样品进行稀释，使细菌能更好地在培养基上生长。
根据样品性质和预计菌落数，选择适当的稀释倍数。
一般采用10倍稀释法。
3. 制备平板：将PCA培养基加热融化后，冷却至45℃左右，倒入无菌培养皿中，每皿约15mL。
4. 接种样品：将稀释后的样品取1mL加入已制备好的平板中，用无菌玻璃棒均匀涂布在培养基上。
5. 培养：将培养皿倒置放入恒温培养箱中，在37℃下培养24-48小时。
6. 计数：计数平板上的菌落数，并记录结果。
根据实验要求，计算出样品中的菌落总数。
7. 结果报告：根据实验数据，撰写实验报告并向上级汇报检测结果。
四、注意事项
1. 实验前应保证所有器具和试剂的无菌状态，避免交叉污染。
2. 实验过程中要保持清洁卫生，避免人为误差。
菌落总数检验操作规程
菌落总数检验操作规程一、实验室准备工作1.准备培养基：根据实验需求选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、大肠埃希氏菌选择性培养基等。
注意培养基的成分和质量。
2.准备培养基平板：测量合适的培养基量并加入培养皿中，使用无菌技术将培养基均匀倒入培养皿，标明编号和日期。
二、样品处理1.准备样品：如食品样品，需要将样品称重并加入适当的生理盐水中，用搅拌器或均质仪进行均匀悬浮。
2.稀释样品：根据实验需要，对样品进行系列稀释。
取适量的悬浮样品，依次加入尺量瓶中的生理盐水，振摇均匀。
三、接种培养1.无菌操作：在无菌工作台内进行操作，穿戴好无菌手套，将培养皿放入工作台上，注意防止污染。
2.接种样品：使用无菌移液器，取适量的稀释样品均匀滴入培养皿上。
3.均匀涂布：使用无菌匀涂棒，将样品在培养皿上均匀涂抹，注意避免混入外来微生物。
四、培养条件1.始菌箱：将接种后的培养皿置于始菌箱中，设定适当的温度和湿度（如37℃，24小时）。
2.孵化箱：将始菌箱中的培养皿转移到恒温培养箱中适当孵育时间，保持适宜温度及湿度。
五、菌落计数1.观察菌落：取出培养好的菌落总数平板，放在均匀光源下观察菌落的形态、颜色、大小等特征，标记异常菌落。
2.计数菌落：使用计数器或显微镜对菌落进行计数，记录结果，并用公式计算菌落总数。
每个菌落总数平板至少计数两遍，计算平均值。
六、数据分析与结果判定1.数据分析：对不同样品的检测结果进行归类整理，统计菌落总数的分布情况。
2.结果判定：根据相应的标准或规定，比较样品的检测结果与标准要求，判定样品是否合格。
七、清洗和消毒1.清洗：将培养皿彻底清洗干净，清除残留的培养基和菌落。
2.消毒：将使用过的器材进行高温高压消毒或化学消毒，确保无菌环境。
以上就是菌落总数检验操作规程的简要示例，实验过程中需严格遵守无菌操作规范，并根据具体实验要求进行相应的调整。
在实验过程中，及时记录实验数据，注意安全操作。
实验完成后，对结果进行统计分析和归档保存。
SOP-013洁净室(区)手菌总数监测标准操作规程
操作规程文件编号：SOP-013 版号：A/0编制：审核：2020.3.1洁净室（区）手菌总数监测标准操作规程批准：生效日期：1目的：建立洁净室（区）手菌总数监测标准操作规程，保证监测人员操作的规范化、标准化。
2范围：适用于洁净室（区）人员手菌表面微生物监测和洁净度等级的验证。
3职责：3.1质量控制部负责本规程的起草、修订、审核、培训、执行和监督。
3.2质量控制部QA负责对表面微生物的取样，QC负责菌落的培养，结果的判定，被测部门配合监测的工作。
4 编制依据：《一次性使用卫生用品卫生标准》 GB/T 15979-2002《医疗器械生产质量管理规范》5.基本概念：5.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
6.内容：6.1 监测方法：接触平皿法6.2 操作原理通过接触平皿法用无菌培养基表面与被测试表面直接接触，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触、吸附收集被测试表面的微生物培养，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净室内人员表面的活微生物数。
它适用于对平整的有规则性表面进行取样监测。
该方法有以下局限性：不适用于不规则表面；如果培养基比较湿，会造成微生物的混合和漫延；必须将培养基的残留物从取样点的位置清除干净。
6.3 仪器、用具经校正并在有效期内的恒温培养箱、培养基平板。
6.3.1 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
选定3只培养皿作对照培养，将培养基平皿倒置于30℃～35℃恒温培养箱中培养3天，若培养基平皿上确无菌落生长，本批培养基可供表面微生物监测（接触平皿法）采样用。
6.4 监测条件6.4.1 表面微生物（接触平皿法）测试前，被测试洁净室(区)的温湿度、压差、换气次数监测必须合格，在日常生产操作中，表面微生物监测（接触平皿法）应在关键操作完成后进行（验证需要在生产前、生产过程中的测试的除外）。
菌落总数的测定标准
菌落总数的测定标准一、采样方案1.1 采样对象：本标准适用于各类食品、药品、化妆品等产品。
1.2 采样量：根据产品类型及实际需要，一般采样量为10-50g（mL）。
1.3 采样方法：用无菌采样器随机取样，然后将样品混匀，制成1:10的稀释液。
二、培养基2.1 选择培养基：使用国家规定的标准培养基，如营养琼脂、孟加拉红培养基等。
2.2 培养基配制：按照培养基说明书进行配制，加入适量添加剂以满足实验要求。
三、培养温度3.1 培养温度：菌落总数培养温度为36℃±1℃。
3.2 恒温培养：培养过程中需保持恒温，不得超过±2℃。
四、培养时间4.1 培养时间：菌落总数培养时间为48小时±2小时。
4.2 时间记录：记录每个平皿的培养时间，以获得准确的菌落计数。
五、结果报告5.1 计数方法：使用菌落计数器对各稀释度平皿进行计数，并记录每个稀释度的平均菌落数。
5.2 结果报告：根据平均菌落数计算出每克（mL）样品中的菌落总数，并按照规定格式填写结果报告。
六、精度要求6.1 重复精度：同一稀释度同一平皿的菌落数偏差不得超过10%。
6.2 仪器精度：菌落计数器的精度应符合国家相关标准要求。
七、空白对照7.1 空白培养基：取适量空白培养基放入恒温培养箱中，观察其是否受到污染。
7.2 空白样品：取适量空白样品（如无菌水）进行实验，观察其是否受到污染。
八、重复试验8.1 重复次数：同一批次样品至少进行两次独立实验，以验证实验结果的可靠性。
8.2 异常情况处理：如出现异常数据或不符合要求的数据，应重新进行实验或采用备用样品进行实验。
菌落总数检验步骤1很详细
菌落总数检验步骤第一法平板菌落计数法1 操作步骤1.1 样品的稀释1.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，5 000r/min~10 000r/min 均质 1 min~2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min ，制成1：10 的样品匀液。
1.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 ：10 的样品匀液。
1.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1： 10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100 的样品匀液。
1.1.4 按1.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用一次1 mL 无菌吸管或吸头。
1.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）, 在进行10 倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液加人两个无菌平皿内。
同时分别取1 mL 稀释液加人两个无菌平皿作空白对照。
1.1.6 及时将15 mL~20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
1.2 培养1.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48h±2h 。
水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3h.1.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL ) ，凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。
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6.3.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。
使用的窗体
使用的工器具
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版本别A页次4 Nhomakorabea66.1.13酒精灯。
6.1.14均质器或乳钵。
6.1.15试管架。
6.1.16灭菌刀或剪子。
6.1.17灭菌镊子。
6.2培养基和试剂
6.2.1营养琼脂培养基：按GB4789.28中4.7规定。
稀释度选择及菌落数报告方式
例次
稀释液及菌落数
两稀释液之比
菌落总数
报告方式
1×10-1
1×10-2
1×10-3
个/g或mL
个/g或mL
1
多不可计
164
20
─
16400
16000或1.6×104
2
多为可计
295
46
1.6
37750
38000或6.8×104
3
多不可计
271
60
2.2
27100
27000或2.7×104
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6.3.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46±1℃水浴保温）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
6.3.1.6待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。
6.3.1.4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
使用的窗体
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6.3.3.2稀释度的选择
6.3.3.2.1应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。
6.3.3.2.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。
6.3.3.2.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
4
多为可计
多为可计
313
─
313000
310000或6.1×105
5
27
11
5
─
270
270或6.1×102
6
0
0
0
─
<1×10
<10
7
多为可计
305
12
─
30500
31000或6.1×104
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6.3.3.2.4若所有稀释度的平均菌落均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6.3.3.2.5若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
6.3.3.2.6若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于或小于30时， 则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
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6.2.2磷酸盐缓冲稀释液：按GB4789.28中6.22规定。
6.2.3生理盐水。
6.2.4乙醇75%。
6.3操作步骤
6.3.1检样稀释及培养
6.3.1.1以无菌操作，将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～10000 r / min的速度处理1 min，做成1：10的均匀稀释液。
6.1.1温箱：36±1℃。
6.1.2冰箱：0～4℃。
6.1.3恒温水浴：46±1℃。
6.1.4天平。
6.1.5电炉。
6.1.6吸管。
6.1.7广口瓶或三角瓶：容量为500ML。
6.1.8玻璃珠：直径约5mm。
6.1.9平皿：直径为90mm。
6.1.10试管。
6.1.11放大镜。
6.1.12菌落计数器。
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6.3.3.3菌落数的报告
菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。
6.3.2菌落计数方法：做平板菌落数计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
6.3.3菌落计数的报告
6.3.3.1平板菌落数的选择：选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。
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1.目的
为了使公司产品的质量保证稳定，对检测方法进行管控。
2.适用范围
本标准规定了原物料、成品、样品的检测方法。
3.权责
3.1资料收集：品管课
3.2标准制定：品管课
4.参考文件：GB/T 4789
5.定义：无
6.作业内容（如下）
6.检验要求
6.1设备和材料