盐酸沙拉沙星溶液(成品)检验操作规程
荧光偏振免疫分析方法快速检测沙拉沙星残留
荧光偏振免疫分析方法快速检测沙拉沙星残留宋佩;孟萌;Sergei A Eremin;张太昌;田溪;薛虎寅;张昱;尹永梅;郗日沫【摘要】以异硫氰酸荧光素(FITC)标记沙拉沙星合成荧光标记物,采用薄层色谱法提纯,优化了反应时间、标记物和抗体的工作浓度,建立了沙拉沙星的快速荧光偏振免疫分析法( FPIA).本方法测定沙拉沙星在缓冲液中的半数抑制浓度(IC50)为43.2 μg/L；检测范围为5.7～327 μg/L,可以达到国家规定的动物性食品中兽药最高残留限量(80 μg/kg)的要求.本研究考察了FPIA测定沙拉沙星的动力学过程及对其它4种喹诺酮类药物的交叉反应.结果表明,环丙沙星、恩诺沙星、加替沙星及氧氟沙星的交叉反应率分别为3.3％,1.8％,1.7％和0.7％.在牛奶和猪尿中沙拉沙星的回收率分别在71％～94％和74％～102％之间.本方法操作简单快捷,整个检测过程只需5 min、而且灵敏度较高、特异性强,适用于动物性食品中沙拉沙星残留的快速筛选检测.%To develop a rapid and sensitive fluorescence polarization immunoassay (FPIA) for the determination of sarafloxacin (SAR), fluorescein-labelled tracer (SAR-FITC) was synthesized and purified by TLC. The reaction time, tracer and polyclonal antibody concentration were optimized, and the FPIA method showed a dynamic range from 5. 7 to 327.6 μg/L with IC50 value of 43. 23 μg/L to SAR in buffer. The specificity of the FPIA for SAR was investigated using other 4 quinolones and the cross-reactivity for ciprofloxacin, enrofloxacin, gatifloxacin, ofloxacin were 3. 3%, 1.8%, 1. 7%, 0. 7%, respectively. The recoveries in milk samples ranged from 71% -94%, and those of pig urine samples were in the range of 74% -102%. The FPIA developed in this study is a rapid and convenient method,which is suitable to be used as a screening method to detect residues of sarafloxacin.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2012(040)008【总页数】5页(P1247-1251)【关键词】荧光偏振免疫分析;沙拉沙星;喹诺酮类药物;荧光标记【作者】宋佩;孟萌;Sergei A Eremin;张太昌;田溪;薛虎寅;张昱;尹永梅;郗日沫【作者单位】南开大学药学院,南开大学药物化学生物学国家重点实验室,天津市分子药物研究重点实验室,天津300071;南开大学药学院,南开大学药物化学生物学国家重点实验室,天津市分子药物研究重点实验室,天津300071;Faculty of Chemistry, M.V.Lomonosov Moscow State University, Moscow 119991, Russia;南开大学药学院,南开大学药物化学生物学国家重点实验室,天津市分子药物研究重点实验室,天津300071;南开大学药学院,南开大学药物化学生物学国家重点实验室,天津市分子药物研究重点实验室,天津300071;南开大学药学院,南开大学药物化学生物学国家重点实验室,天津市分子药物研究重点实验室,天津300071;南开大学药学院,南开大学药物化学生物学国家重点实验室,天津市分子药物研究重点实验室,天津300071;南开大学药学院,南开大学药物化学生物学国家重点实验室,天津市分子药物研究重点实验室,天津300071;南开大学药学院,南开大学药物化学生物学国家重点实验室,天津市分子药物研究重点实验室,天津300071【正文语种】中文沙拉沙星(Sarafloxacin,SAR，图1)属于动物专用的氟喹诺酮类药物，其盐酸盐主要用于治疗鸡与猪的细菌及支原体感染所致的疾病[1]。
盐酸沙拉沙星溶液内控质量标准
GMP管理文件
一、目的：制定盐酸沙拉沙星溶液（成品）的内控标准，规范公司盐
酸沙拉沙星溶液的生产。
二、适用范围：适用于盐酸沙拉沙星溶液的生产与检验。
三、责任者：生产部、检验员、仓库保管员
四、正文：
盐酸沙拉沙星溶液
本品为盐酸沙拉沙星的水溶液.含沙拉沙星(C20H17F2N3O3)应为标示量的91.0%～109.0%.
【性状】本品为淡黄色或黄色澄清液体.
【鉴别】(1)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰保留时间应与对照品溶液的主峰保留时间一致.
(2)本品显氯化物的鉴别反应.
【检查】PH值应为9.6～10.0.
【含量测定】照高效液相色谱法测定.
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.05mol/l枸橼酸-0.05mol/l醋酸铵-乙腈(80:10:18)用高氯酸调节PH
值至2.4为流动相;检测波长为274nm。
理论板数按沙拉沙星计算应不低于1600。
测定法精密量取本品适量，用0.1mol/l氢氧化钠溶液制成每1ml中含20ug的溶液，精农牧民量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取沙拉沙星对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
【作用与用途】同盐酸沙拉沙星。
【用法与用量】混饮每1l水鸡20～50mg（以有效成计）连用3～5日
【停药期】（1）100ml：1g (2)100ml:2.5g (3)100ml:5g
【规格】遮光，密封保存。
盐酸沙拉沙星注射液(成品)检验记录
盐酸沙拉沙星注射液
检验单号
批 号
请验单位
取样数量
取 样 人
规 格
送检日期
年 月 日
报告日期
年 月 日
检验依据
<<盐酸沙拉沙星注射液内控质量标准>>
检验项目 标准规定 检验结果 项目结论
(1)性状 本品应为淡黄色或黄色澄明液体。规定
(2)鉴别 （1）在含量测定项下记录的色
谱图中，供试品溶液的主峰保留
负责人： 复核人： 检验人:
有限公司
注射液检验记录报告单
文件编号: 00 第 3 页 共 3页
检品名称
盐酸沙拉沙星注射液
检验单号
批 号
请验单位
取样数量
取 样 人
规 格
送检日期
年 月 日
报告日期
年 月 日
检验依据
<<盐酸沙拉沙星注射液内控质量标准>>
检验项目 标准规定 检验结果 项目结论
(1)性状 本品应为淡黄色或黄色澄明液体。规定
按无水物计，样品含量X(%)
含 量 平 均 值（%）
A－B
相对偏差 ×100%
A＋B
标准规定：按干燥品计，含C20H17F2N3O3的量应为标示量的92.0%.～ 108.0%
项目结论：本品按《盐酸沙拉沙星注射液内控质量标准》检验，结果
规定.
检验人： 复核人：
有限公司
注射液检验记录报告单
文件编号:00 第 3 页 共 3页
(2)鉴别 （1）在含量测定项下记录的色
谱图中，供试品溶液的主峰保留
时间应与对照品溶液的主峰保留
时间一致。规定
（2）本品显氯化物的鉴别反应。规定
液相法测定盐酸沙拉沙星脂质体含量和包封率
药物的含量和 包封率 。
一
方 量的大豆 卵磷脂 、 胆固醇 ， 溶于适量 的无水 乙醇中 ， 得到
类脂溶液。取盐酸 沙拉沙 星溶 液于圆底烧瓶 中 ， ６ ０ ￣ Ｃ 水浴 加热。在搅拌下 ， 缓缓将上述类脂溶液滴注到盐酸 沙拉 沙 星溶液 ， 搅拌 １ ０ ａｉ ｒ ｎ ， 旋转蒸发除去 乙醇 ， 过０ ． ４ ５ １ Ｔ Ｉ 滤膜 ， 灌装 ， 充氮气 ， 封 口， 即得盐酸沙拉 沙星脂质体。
ＭＳ － Ｐ Ａ数显加热型磁 力搅拌器 ， 上海 沃元科技有 限公司 ； 循 环 水 式 多 用 真 空 泵 ，郑 卅Ｉ 长城 科工 贸有限公 司 ； １ ＜ Ｅ 一 ５ ２ ９ ９ 旋转 蒸发器 ， 上海 亚荣生化仪器 厂 ； 微量可调加 样器 ， 德国 Ｅ ｐ ｐ ｅ ｎ ｄ ｏ ｆ公司。
培公司研制的动物专用的第三代氟喹 诺酮 类抗 菌药物 ， 具 有抗菌谱广 ， 抗菌活性强 ， 对革兰氏阴性菌 、 革兰 氏阳性菌
及霉形 体等均表现 出 良好的抗菌作 用 ，尤 其是对大肠 杆 菌、 沙 门氏菌 、 克雷伯氏菌 、 变形杆菌 、 多杀性巴氏杆菌 、 弯 曲杆菌等肠杆菌 。由于盐酸沙拉沙星溶解度小 ， 化学稳定 性差 ， 有引湿性 ， 遇光 、 热色渐变深 。市信 的盐酸 沙拉 沙星 注射液 ｐ Ｈ高 ， 肌 肉注射后刺激性较大。 目前 ， 临床现有的
相， 定容 至刻度 ， 用 ０ ． ４ ５ ｕ ｍ 滤膜 过 滤， 吸取上清 液 ２ ０ ｕ Ｌ ， 按照 以上 色
１
．
空岛糍艇 体
谱条件 ， 测定药物含 量。 标准 曲线 的绘 制 称取 沙拉沙
星对 照品 ２ ５ ． ０ ｍｇ ，溶于 Ｏ ． １ Ｍ 氢氧 化钠溶液 中 ， 配制成 １ ０ ０ ｕ ｇ ／ ｍＬ的
JAP-126 沙拉沙星和达氟沙星检测方法
沙拉沙星和达氟沙星检测方法1．分析目标化合物农药等成分物质 分析目标化合物 沙拉沙星 沙拉沙星达氟沙星 达氟沙星2．仪器设备带荧光检测器的高效液相色谱仪和液相色谱--质谱仪。
3．试剂除下列试剂外，使用附录2所列试剂。
二乙烯基苯基－N－乙烯基吡咯烷酮共聚物小柱（60mg）：在内径 8～9 mm聚乙烯管中装填60mg二乙烯基苯基－N－乙烯基吡咯烷酮共聚物或具有同等分离特性的物质。
4．标准品盐酸沙拉沙星：含沙拉沙星90％以上。
甲磺酰酸达氟沙星 ：含达氟沙星77％以上，熔点为327℃。
5．试验溶液的制备a 肌肉和脂肪① 提取方法肌肉：尽可能除去脂肪层，搅碎混合均匀后，称取其5.0g。
脂肪：尽可能除去肌肉层，搅碎混合均匀后，称取其5.0g。
加入100mL乙腈：0.3%偏磷酸溶液(2：3)的混合溶液，搅拌后，用涂布2～3mm 厚硅藻土的滤纸，抽滤于磨口减压浓缩器中。
取出滤纸上的残留物，加入20mL乙腈：0.3%偏磷酸溶液(2：3)的混合溶液，搅拌后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约30mL。
② 净化方法在二乙烯基苯基－N－乙烯基吡咯烷酮共聚物小柱（60mg）中顺次注入5mL甲醇和10mL水，弃去流出液。
柱中注入①提取方法所得的溶液后，注入水10mL，弃去流出液。
注入10mL甲醇，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去甲醇。
残留物中加入1.0mL乙腈：水（1：4）混合溶液溶解，此为试验溶液。
b 肝脏和肾脏① 提取方法搅碎混合均匀后，称取其5.00g。
加入100mL乙腈：0.3%偏磷酸溶液(2：3)的混合溶液，搅拌后，加入5g硅藻土，振荡混匀后，用涂布2～3mm 厚硅藻土的滤纸，抽滤于磨口减压浓缩器中。
取出滤纸上的残留物，加入20mL乙腈：0.3%偏磷酸溶液(2：3)的混合溶液，搅拌后，按上述同样操作，合并滤液于磨口减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约30mL。
② 净化方法采用a 肌肉和脂肪中② 净化方法。
2017年版《兽药质量标准》勘误表
352
驱球止痢合剂说明书
【规格】
【规格】每1ml相当于原生药2g。
生物制品卷
序号
页码
标准名称
原内容
修正内容
1
320
猪白细胞干扰素
附加说明：
1．本标准由山东省乐至县世红生物技术有限公司提出。
附加说明：
1．本标准由四川省乐至县世红生物技术有限公司提出。
2
352
猪伪狂犬病活疫苗（HB-98株）
反应体系：
【主要成分与含量】疫苗中含有鸡传染性法氏囊病低毒力A80株，每0.1ml病毒含量应≥106.0ELD50。
中国兽医药品监察所办公室2018年3月23日印发
【药物相互作用】……②Ca2+、Mg2+、Fe3+和Al3+等重金属离子可与本品可发生螯合，……
590、
591
盐酸沙拉沙星可溶性粉
592、593
盐酸沙拉沙星注射液
594、
595、596
盐酸沙拉沙星溶液
596、597、598
盐酸环丙沙星可溶性粉
599、600
盐酸环丙沙星注射液
16
620、621、622
【规格】按C22H24N2O7计算……。
【规格】按C14H24N2O7计算……。
13
577
盐酸吖啶黄注射液说明书
兽用非处方药
兽用处方药
14
578
盐酸多西环素子宫注入剂说明书
兽用处方药
兽用非处方药
15
588、
589
盐酸沙拉沙星片
【药物相互作用】……②Ca2+、Mg2+、Fe3+和Ab3+等重金属离子可与本品可发生螯合，……
盐酸沙拉沙星可溶性粉生产工艺规程
制药有限公司盐酸沙拉沙星可溶性粉工艺规程颁发单位：GMP办公室工艺规程批准程序目录1、产品概述 (3)2、生产的工艺流程图 (5)3、操作过程及工艺条件 (6)4、工艺过程中所需SOP名称及要求 (9)5、工艺卫生及环境卫生 (9)6、工艺验证及具体要求 (10)7、设备一览表及主要设备生产能力 (10)8、物料平衡及经济技术指标计算 (10)9、技术安全及劳动保护 (11)10、岗位定员 (12)1．产品概述1.1 产品名称：通用名：盐酸沙拉沙星可溶性粉商品名：1.2 性状：本品为白色或淡黄色粉末。
1.3 规格：2.5%1.4 处方：盐酸沙拉沙星2.5g，口服葡萄糖加至100g。
1.5 依据：2005版《中国兽药典》一部。
1.6 适应症：抗菌药，主要畜禽细菌感染1.7 有效期：二年1.8 成品贮存方法及注意事项：遮光、密封，在干燥处保存。
1.9 原辅材料、半成品和成品质量标准：盐酸沙拉沙星质量标准见盐酸沙拉沙星内控质量标准。
口服葡萄糖质量标准见口服葡萄糖内控质量标准。
半成品质量标准见盐酸沙拉沙星可溶性粉半成品内控质量标准。
成品内控质量标准见盐酸沙拉沙星可溶性粉内控质量标准。
1.10 原辅材料贮存注意事项：盐酸沙拉沙星：遮光、密封，在干燥处保存。
口服葡萄糖：密封保存。
1.11 半成品检查方法及岗位控制：a质量控制要点：b 半成品检查方法见盐酸沙拉沙星可溶性粉半成品检验操作规程。
1.12 包装要求：应符合铝箔袋质量内控标准要求。
1.13 用法用量：1.14 标签：见样本。
1.15 批准文号：2．生产的工艺流程图注：加粗部分为主要控制点3 ．操作过程及工艺条件3．1 生产前准备：3.1.1 上一批次是否进行清场。
清场者、检查者是否签字，将“清场合格证”副件归入本批生产记录。
未取得清场合格证不得进行下一批次的生产。
3.1.2 检查生产场所的环境、设施卫生是否符合该区域清洁卫生要求。
不得有上批生产遗留物。
成品检验操作规程
河南惠通天下生物工程有限公司GMP管理文件一、目的：规范氧氟沙星可溶性粉的检验操作规程。
二、适用范围：适用于氧氟沙星可溶性粉的质量检验。
三、责任者：QC负责执行，质量管理部主管负责监督。
四、正文：本品为氧氟沙星与葡萄糖或乳糖配制而成。
含氧氟沙星（C18H20FN3O4）应为标示量的92.0～108.0%。
1.性状本品为白色或微黄色粉末。
2.鉴别2.1吸收度2.1.1仪器及试剂分光光度计、电子天平、容量瓶（100ml）、盐酸溶液（0.1mol/L）。
2.1.2操作方法及结果判断取含量测定项下的照分光光度法（附录17页）侧定，在293nm的波长处有最大吸收。
则符合规定，反之，则不符合规定。
2.2薄层法2.2.1仪器及试剂电子天平、紫外灯、展开缸、氯仿、甲醇、氨溶液、硅胶GF254薄层板。
2.2.2操作方法及结果判断取本品适量（约相当于氧氟沙星40mg），加氯仿10ml，振摇使氧氟沙星全部溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取氧氟沙星对照品适量，加氯仿制成每1ml中含4mg 的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲醇-氨溶液（4→100）（10：5：1）为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液的主斑点相同，则符合规定，反之，则不符合规定。
3.检查3.1溶解性3.1.1仪器及试剂天平、烧杯，玻璃棒。
3.1.2操作方法及判定结果取本品1.0g，加水50ml，搅拌，应全部溶解。
全部溶解则符合规定，反之，则不符合规定。
3.2干燥失重3.2.1仪器及试剂恒温干燥箱、电子天平、干燥器、扁形称量瓶。
3.2.2操作方法照干燥失重检查法操作规程，依法检查，取本品1g，置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定，放入105℃的恒温干燥箱中进行干燥，干燥后取出置干燥器中放冷至室温一般约30分钟，精密称定，接着继续按上法干燥，直至恒重。
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GMP管理文件
一、目的：为规定盐酸沙拉沙星溶液生产过程中的质量控制和检
验操作要求，特制定此操作规程。
二、适用范围：适用于盐酸沙拉沙星溶液成品的检验。
三、责任者：生产部经理、检验员、生产人员
四、正文：
质量标准：见盐酸沙拉沙星溶液（成品）内控质量标准
操作内容：
【性状】本品为淡黄色或黄色澄清液体.
【鉴别】(1)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰保留时间应与对照品溶液的主峰保留时间一致.
(2)本品显氯化物的鉴别反应.
【检查】PH值应为9.6～10.0.
【含量测定】照高效液相色谱法测定.
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.05mol/l枸橼酸-0.05mol/l醋酸铵-乙腈(80:10:18)用高氯酸调节PH值至2.4为流动相;检测波长为274nm。
理论板数按沙拉沙
星计算应不低于1600。
测定法精密量取本品适量，用0.1mol/l氢氧化钠溶液制成每1ml 中含20ug的溶液，精农牧民量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取沙拉沙星对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。