细胞因子检测
细胞因子检测与临床意义
细胞因子检测与临床意义细胞因子种类包括：白细胞介素、干扰素、趋化因子、肿瘤坏死因子、转化生长因子β 家族、集落刺激因子或生长因子。
细胞因子检测临床应用：1.脓毒症目的：评估全身炎症反应综合征的状态检测因子：TNF-a、IIL-1、IL-6、IL-12、IL-8、MIF、sCD74、HMGB1等IL-6临界值为52.6 pg/mL时可诊断败血症，当其超过348.92 pg/mL时可诊断败血症休克，且28天病死率明显增高。
TNF-α随着脓毒症疾病进展而升高，TNF-α的高表达提示患者预后不良。
IL-8是强烈的中性粒细胞趋化因子，在早期预测脓毒症有重要价值，其诊断敏感度和阴性预测值均比PCT高。
IL-8还可以预示脓毒症患者存在多器官功能障碍可能，可作为脓毒症患者的死亡风险指标。
IL-10是机体关键的抗炎性细胞因子，IL-10升高与脓毒症不良预后相关，持续高表达的IL-10反映脓毒症处于免疫抑制状态。
HMGB1可促进促炎性细胞因子的释放，诱导中性粒细胞、DC等细胞活化。
HMGB1水平与脓毒症休克患者预后密切相关，HMGB1水平越高，患者的预后越差，HMGB1可作为脓毒症病情变化的重要监测指标。
巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是一种具有多效炎症介质功能的细胞因子，包括抑制巨噬细胞迁移、化学趋化作用及促进白细胞在炎症部位募集。
脓毒症及脓毒症休克患者血清中MIF浓度显著升高，并与疾病严重程度相关。
2.感染炎症因子IL-6、TNF-α和抗炎因子IL-10等可用于急性感染的早期诊断、评价病情严重程度及判断预后。
IL-6的升高早于CRP和PCT，其持续时间长，2h达到高峰。
IL-6＞1000ug/L，提示预后不良。
IFN-γ：病毒感染患者主要升高的细胞因子，IFN-γ显著升高、伴随IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10和TNF-α等因子升高，多提示为病毒感染。
IL-6和IL-10＞正常值的10倍以上，考虑革兰阴性菌感染。
细胞因子7项检测的说明
细胞因子7项检测的说明1. 什么是细胞因子检测？好啦，今天咱们来聊聊一个听起来挺高大上的话题——细胞因子检测。
别担心，不用背什么复杂的术语，咱们就像在茶馆聊天一样，轻松愉快。
细胞因子，简单来说就是咱们身体里的一些小信使，它们帮助调节免疫系统，像个小精灵一样，在体内穿梭，传递信息。
细胞因子检测就像是给这些小精灵做个体检，看看它们的状态如何，能不能把咱们的免疫系统调得更加给力。
1.1 检测的意义说到检测的意义，简直就是一部大片啊！想象一下，你在打游戏，突然屏幕上出现了一个小提示：“你的角色状态不佳，快去补给！”这就是细胞因子检测的作用。
通过检测，我们可以了解到身体的免疫反应是否正常，是否存在潜在的疾病，甚至可以提前预判一些问题，像个神预言家一样，给咱们的健康把把关。
1.2 细胞因子的种类细胞因子可多了，七项检测听上去就像一场音乐会，里面有主唱、吉他手、鼓手等等。
它们分别是：肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素（IL1、IL2、IL6、IL10），还有干扰素（IFN）。
每一项都有自己的特点，像不同乐器演奏出的旋律，合在一起才能奏响健康的交响曲。
2. 检测的过程说到检测，很多人会担心，啊呀，要抽血吗？对的，没错，细胞因子检测确实是需要抽血的，听起来有点紧张，但实际上，抽血就像是捡个小便宜，可能有点疼，但为了健康，值得啊。
首先，你得去医院或者诊所，前台的小姑娘会给你登记，像是在填一份VIP通行证，接着就是护士小姐姐出场，温柔地告诉你，稍微捏一下拳头，深呼吸，不用太紧张哦。
然后就抽一管血，咕咚一下，搞定！2.1 检测结果解读等着结果的时候，就像等快递，心里七上八下的。
结果出来后，你可能会看到一些数据，别慌，这些数字就像考试卷上的分数，医生会根据你的情况来给你解读。
比如说，如果某项细胞因子的水平偏高，那可能说明你的身体在和某种疾病作斗争，或者免疫系统在“开会”呢。
如果一切正常，那就恭喜你，继续保持健康的生活方式，咱们要做个“健康达人”！2.2 注意事项不过，做检测也有一些小窍门，首先，最好提前预约，不然一到医院就像去赶集，热闹得很。
10种常用细胞因子检测方法盘点
10种常用细胞因子检测方法盘点细胞因子是一类在细胞间相互作用中发挥重要作用的蛋白质，对免疫调节、炎症反应、细胞增殖和分化等过程起着关键的调控作用。
因此，检测细胞因子的水平对于研究疾病发病机制、诊断和治疗具有重要意义。
以下是常用的10种细胞因子检测方法盘点：1. 酶联免疫吸附法（ELISA），ELISA是一种常用的细胞因子检测方法，通过将待检测的细胞因子与特异性抗体结合，然后用酶标记的二抗结合，最后通过底物染色来检测细胞因子的含量。
2. 免疫荧光法（IF），IF方法利用激光共聚焦显微镜观察标记的抗体与细胞因子结合的情况，适用于定量和定位分析。
3. 流式细胞术（FCM），FCM结合荧光标记的抗体，可以对多种细胞因子进行快速、高通量的检测和分析。
4. 生物传感器技术，生物传感器技术结合了生物学和传感器学的优势，可以实现对细胞因子的高灵敏度、高选择性检测。
5. 蛋白质芯片技术，蛋白质芯片技术可以同时检测多种细胞因子的含量，具有高通量、高灵敏度的特点。
6. 质谱法，质谱法可以通过检测细胞因子的质荷比来定量和鉴定细胞因子。
7. 生物学功能法，生物学功能法通过观察细胞因子对细胞生物学功能的影响来间接检测细胞因子的活性。
8. 核酸杂交技术，核酸杂交技术可以通过检测细胞因子的mRNA水平来间接反映细胞因子的表达水平。
9. 免疫印迹法（Western blot），Western blot可以用于检测细胞因子的蛋白质水平，结合特异性抗体可以实现对细胞因子的定量分析。
10. 细胞因子生物学活性检测，通过细胞因子对细胞增殖、分化、凋亡等生物学活性的影响来检测细胞因子的活性水平。
以上是常用的10种细胞因子检测方法，它们各自具有特定的优势和局限性，在实际应用中可以根据需要选择合适的方法进行检测分析。
细胞因子检测
细胞因子检测
细胞因子检测是一种重要的生物医学检测方法，用于分析生物体内不同细胞产
生的特定蛋白质分子。
细胞因子是一类能调节细胞功能的蛋白质，广泛参与调节免疫反应、细胞增殖和凋亡等生物过程。
通过检测细胞因子的水平，可以帮助医生诊断疾病、评估疗效，以及指导个体化治疗方案的制定。
在细胞因子检测中，常用的方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、流式细胞术、蛋白质芯片技术等。
ELISA是一种常见的定量检测方法，通过将待检测样本加入带
有特异性抗体的酶标记物后，再加入底物使酶发色，通过颜色的变化来反映细胞因子的含量。
流式细胞术主要通过将单个细胞悬浮液通过激光进行检测，可以同时检测多种细胞因子，并分析不同细胞亚群之间的作用关系。
蛋白质芯片技术是一种高通量的检测方法，可同时检测多种细胞因子及其相互作用。
细胞因子检测在临床应用中有着广泛的价值。
例如，在肿瘤治疗中，细胞因子
检测可以评估肿瘤微环境中细胞因子的分泌水平，及时调整治疗方案。
在自身免疫性疾病中，细胞因子检测可以帮助医生了解患者免疫炎症状态，指导用药选择。
在感染性疾病中，细胞因子检测可以帮助快速诊断病原体感染，加快治疗进程。
总的来说，细胞因子检测作为一种重要的生物医学检测方法，为疾病的诊断、
治疗和监测提供了重要的信息。
随着技术的不断进步，相信细胞因子检测将在未来发挥更为重要的作用，为个体化医疗和疾病预防提供更多可能性。
细胞因子九项检测科普
细胞因子九项检测科普什么是细胞因子细胞因子是一类介导细胞间相互作用的蛋白质，它们可以作为信号分子在细胞和细胞之间进行通讯。
细胞因子在机体的免疫反应、炎症反应以及许多其他生理过程中发挥重要的调节作用。
不同类型的细胞产生不同种类的细胞因子，比如肿瘤坏死因子、白细胞介素等。
为什么需要进行细胞因子九项检测细胞因子九项检测是通过检测某些关键细胞因子的水平，来评估机体的免疫状态和炎症程度的一种检测方法。
这些细胞因子的水平变化与很多疾病的发生和发展密切相关，包括慢性炎症性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等。
进行细胞因子九项检测可以帮助临床医生更好地了解疾病的病理过程、判断疾病的严重程度以及制定更合理的治疗方案。
此外，对于某些疾病的预后判断和效果评价也具有一定的参考价值。
细胞因子九项检测包括哪些指标细胞因子九项检测通常包括以下几个重要的指标：1.白细胞介素-2（IL-2）：它是一种重要的T细胞生长因子，对免疫系统的调节具有重要作用。
2.白细胞介素-4（IL-4）：它是一种重要的T细胞细胞因子，能够促进B细胞的增殖和抗体产生。
3.白细胞介素-6（IL-6）：它是一种重要的炎症介质，能够促进炎症反应的发生和发展。
4.白细胞介素-8（IL-8）：它是一种重要的趋化因子，在炎症反应中发挥重要作用。
5.白细胞介素-10（IL-10）：它是一种重要的免疫抑制因子，能够抑制炎症反应和免疫系统的活性。
6.肿瘤坏死因子-α（TNF-α）：它是一种重要的炎症介质，参与许多炎症性疾病的发生和发展。
7.干扰素-γ（IFN-γ）：它是一种重要的免疫调节因子，能够促进宿主免疫系统的抗病毒和抗肿瘤反应。
8.变态反应因子（IgE）：它是一种抗体，参与机体的过敏反应。
9.血清白细胞介素-17（sIL-17）：它是一种炎症介质，与自身免疫性疾病的发生和发展密切相关。
细胞因子九项检测的应用领域细胞因子九项检测在许多疾病的诊断和治疗中具有重要的应用价值。
以下是一些常见领域：1. 免疫性疾病细胞因子九项检测可以帮助医生评估免疫性疾病的炎症程度和免疫状态，例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
细胞因子的ELISA方法检测
实验报告1.取已包被抗体并完成封闭的酶标条2条，分别装于酶标架上。
在每条酶标条的1~6孔分别加入稀释液100微升。
2.向第6、7孔加入分别加入2000pg/ml PGFβ1标准品100微升。
3.用加样枪吹吸混匀第6孔的液体，注意避免气泡形成。
混匀后其浓度约为1000pg/ml。
4.再吸出100微升加入第5孔，吹吸混匀。
其浓度变为500pg/ml。
以此类推，一直加到第2孔。
吸去多余的100微升。
5.向第8、9孔各加入100微升样品1。
10、11孔加入100微升样品2.6.封口膜覆盖酶标板，防止水分挥发。
7.将酶标板置于37℃温箱孵育120min。
8.取出孵育后的酶标板，揭开封口膜，甩去孔中液体，注意甩动方向，避免液体流入相邻酶标孔，造成交叉污染。
9.加入洗涤液，注意不要溢出至相邻孔，造成交叉污染。
静置3min后甩去孔中液体，重复以上洗涤过程4次。
在吸水纸上拍干孔中液体。
10.每个孔各加入酶标记抗体100微升。
封口膜覆盖酶标板，将酶标板置于37℃温箱孵育60min。
11. 取出孵育后的酶标板，揭开封口膜，甩去孔中液体。
再加入洗涤液，静置3min后，甩去孔中液体，重复以上洗涤过程4次。
在吸水纸上拍干孔中液体。
12. 每个孔各加入底物A 100微升，再加入底物B各100微升。
晃动酶标板混匀。
将酶标板放入37℃温箱孵育15min显色。
13. 取出孵育后的酶标板，见酶标板孔中液体呈蓝色。
14. 每个孔各加入终止液100微升，可见液体变成淡黄色。
15.用酶标仪在450nm处测OD值。
结果如下：16. 分析结果：将2组标准品的OD值和标本1、标本2的4个副本的OD值合并得到平均值。
根据各自的OD值，在半对数坐标上标出62.5、125、250、500、1000、2000这6个不同稀释度标准品所处的位置，将6个点连线集会成标准曲线。
根据2个标本的OD值标出其在OD值普通坐标上的位置，虚线连接其在标准曲线上的位置，再用虚线连接确定其在浓度坐标上的位置。
细胞因子检测是检查什么的？
细胞因子检测是检查什么的？免疫系统是人体抵御疾病入侵的重要防线，而细胞因子作为免疫系统中的重要调节分子，对于维持免疫平衡和正常功能起着关键作用。
细胞因子检测是一种现代医学手段，通过测量体内特定细胞因子的水平，帮助医生评估患者的免疫状态、诊断疾病并制定个体化治疗方案。
一.让我们一起来了解什么是细胞因子细胞因子是一种生物素类蛋白质，是由细胞分泌的，具有广泛的生物活性分子。
它们在机体的免疫系统中扮演着重要的角色，调节和控制免疫细胞的生长、分化、功能和生存。
细胞因子可分为许多类型，包括肿瘤坏死因子、干扰素、白细胞介素、趋化因子等。
它们可以促进细胞增殖、分化、迁移、存活，促进炎症反应、抗病毒防御、组织修复等生物过程。
在各种疾病中，例如恶性肿瘤、自身免疫病、感染等，细胞因子的异常水平可能导致免疫功能失调和疾病进展。
因此，细胞因子被广泛地应用于检测和治疗疾病，如肝炎、艾滋病、乳腺癌、骨髓移植和器官移植等。
对于细胞因子的深入研究和应用，将有助于更好地理解和治疗各种疾病。
二.你知道医院检实验室测细胞因子的方法有哪些吗？细胞因子检测是通过测量体内特定细胞因子的水平来评估免疫状态的方法。
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：将检测细胞因子蛋白特异性的抗体固定在微孔板上，与待检样品中的细胞因子结合后再加上二抗或底物，通过波长的变化来测定细胞因子的含量。
2. 流式细胞术（FACS）：用流式细胞术检测特定免疫细胞表面的特异性标志物，并测定其在单个细胞水平上细胞因子含量的方法。
3.蛋白质芯片技术：将细胞因子蛋白分子固定在芯片上，通过荧光标记或质谱技术检测特定抗体与蛋白结合的信号强度，从而定量测量细胞因子的浓度。
4. RT-PCR技术：通过反转录先把RNA转变为cDNA，再通过PCR扩增细胞因子的mRNA数量，从而间接定量细胞因子的含量。
三.为什么医生会开具细胞因子相关检查，有何作用呢？医生会开具细胞因子相关检查是为了了解患者体内某些细胞因子的水平是否异常，以帮助诊断和治疗一些疾病。
细胞因子检测方法
细胞因子检测方法细胞因子是一类存在于细胞内的小分子蛋白质，它们在细胞间扮演着重要的信号传递和调节作用。
细胞因子的产生和释放常常与某些疾病的发生和发展密切相关。
因此，对细胞因子的检测成为了许多疾病的诊断和治疗的重要手段之一。
本文将介绍几种常用的细胞因子检测方法。
一、酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的细胞因子检测方法。
该方法通过专门的ELISA 试剂盒，利用特异性的抗体对目标细胞因子进行检测。
ELISA方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点，可以用于检测多种细胞因子，如白细胞介素、肿瘤坏死因子等。
二、流式细胞术流式细胞术（Flow Cytometry）是一种通过检测细胞表面或细胞内标记物来分析和鉴定细胞的方法。
在细胞因子检测中，可以通过标记抗体来检测细胞表面的特定细胞因子。
流式细胞术具有高通量、高灵敏度、多参数等优点，可以同时检测多种细胞因子的表达水平，并对细胞因子的分布、数量等进行分析。
三、PCR方法聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一种常用的分子生物学技术，可以通过扩增目标DNA片段来检测细胞因子的基因表达水平。
PCR方法可以通过设计特异性引物，扩增细胞因子基因的特定区域，并通过凝胶电泳等方法来检测扩增产物的存在与否。
PCR方法具有高灵敏度、高特异性等优点，可以用于定量和定性分析细胞因子的表达水平。
四、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术（Protein Microarray）是一种高通量的蛋白质检测技术，可以同时检测多种细胞因子。
蛋白质芯片技术通过将不同的细胞因子蛋白固定在芯片上，然后与标记有荧光物质的样品中的细胞因子进行特异性结合，最后通过荧光扫描仪来检测荧光信号的强度，从而获得细胞因子的表达水平。
蛋白质芯片技术具有高通量、高灵敏度等优点，可以用于筛选和鉴定细胞因子。
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HIV-peptide specific recall response shows dissociated production of IFN- and GzB
HIV- peptide recall patient B
Medium Peptide 1 Peptide 21
Peptide 47 PHA
细胞因子的检测方法
左大明 zdaming@
细胞因子
一类由细胞分泌，具有多种功能的高活性小分 子蛋白，参与免疫调节和多种生理病理过程等。 白细胞介素(interleukin, IL) 干扰素(interferon, IFN) 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF) 集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF) 生长因子(growth factor, GF) 趋化因子(chemokine)
优点：灵敏度高，是目前为止最灵敏的检测技术。 可检测到百万分之一阳性细胞率; 单细胞水平、活 细胞功能检测; 操作简便，可进行高通量筛选。
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1.特异性单抗包被在培养板孔底部； 2.封闭能结合单抗的其他部位；
3.加入细胞及刺激物培养，阳性细胞 分泌的细胞因子被单抗捕获； 4.移出细胞，洗涤；
5.加入生物素标记的二抗；
Lab Invest 2003, 83:1131–1146
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LOGO 18
ELISPOT(酶联免疫斑点实验) ELISPOT 技术利用结合在固相载体上的抗细胞因子 的特异性抗体，在分泌细胞周围直接扑获待检细胞 因子。实验中每个斑点（spot）是激活的淋巴细胞 分泌的细胞因子区域，代表一个活性淋巴细胞。它 可在单细胞水平检测淋巴细胞对特异性抗原的反应 能力。
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Cell Proliferation ELISA Kit, BrdU (colorimetric)
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Chromium-51 (51Cr) release assays
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细胞 微孔 滤膜 趋化因子 计数受趋化细胞
趋化实验示意图
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免疫标记技术
用示踪物质标记抗体或抗原，使其与相应的 抗原或抗体反应，使微量的、不可见的反应成为
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Calculation of Proliferative Index (P.I.)
4 3 2 1 0
CFSE --->
The Proliferative Index is the sum of the cells in all generations divided by the calculated number of original parent cells. It is useful for comparing quantity of cell division between cultures of the same cells undergoing different treatments.
可见的或可测定的。
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高通量细胞因子检测
CBA (Cytometric Bead Array)是一种微珠多 用途检测分析技术，它由一系列的微珠组合 来捕获并结合流式细胞仪技术检测细胞培养 液、EDTA血浆、血清样本中被检测物质的量。 其采用夹心法分析策略，与传统的 ELISA 分 析技术相比，此方法可以同时检测多项指标。 用已知的标准品和对照标准曲线就可以得出 被测样本的浓度。此分析方法不受样本量的 限制，而且可以得到一个样本的多个数据。
ELISPOT技术应用领域：自身免疫诊断和预后分析、器官 移植后排斥反应的预测、过敏性疾病脱敏治疗的监测、疫 苗和药品的研发与检测等。
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胞内细胞因子的检测
LPS活化单核细胞内TNF-α的测定
R1：淋巴细胞；R2：单核细胞
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Cytokine network
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CBA原理示意图
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cytokine bead arrays(CBA)
Th0/Th1/Th2细胞转换分析
自体免疫研究--免疫调节及免疫治疗研究 癌症研究--肿瘤反应T细胞作用 过敏机制探讨 --IL-4 诱导免疫球蛋白亚型转换，其它参 与过敏机制之细胞因子的研究 传 染 疾 病 研 究 --Lyme disease, Chlamydia infections, Helicobacter pylori infections, HIV infections, multiple sclerosis, 等
待检样品（细胞上清） IFN-指示细胞（wish）
按不同稀 释度加入 37º C，4小时 弃取上清，加入VSV(水泡性口炎病毒) 37º C，24-48小时 观察细胞病变（镜检或比色）
5
Using CFSE to track CML progenitor proliferation
SDM
SDM + Glivec
2
利用抗体对抗原表位的 识别，测定的是可溶性 细胞因子的抗原性。 ELISA RIA FIA ELISPOT 。。。
3
利用基因探针，检测特 定细胞因子基因表达， 即mRNA水平。
斑点杂交 Northern印迹 细胞和组织原位杂交 RT-PCR 。。。
优点：方便、迅速 缺点：价格昂贵，结 果仅代表CK的量而非 活性，敏感性较低。
LOGO 25
TNF-的诱生和检测
主要由单核/巨噬细胞及其他多种细胞产生，能 使杀伤肿瘤细胞;
THP-1( 人单核细胞系 ) 在 LPS( 脂多糖 ) 刺激下可 分泌TNF-;
L929( 小鼠成纤维细胞 ) 可被 THP-1 分泌的 TNF- 杀伤，且细胞的死亡率与TNF-活性成正比; 四甲基偶氮唑盐(MTT)在活细胞线粒体的琥珀酸 脱氢酶的作用下，被还原呈蓝黑色的 MTT- 甲瓒。
局限性：仅能检测基因表 达情况，不能直接提供有 关细胞因子的浓度和活性， 只用于机制探讨。
3
细胞增殖实验
待检样品(细胞上清) 按不同稀 释度加入 指示细胞（CTLL-2） IL-2依赖细胞系
37º C，16-20小时 加入3HTdR（1-5Ci） 37º C，4-6小时 收集细胞 测定
4
细胞病变抑制实验
6.加入酶标链霉亲和素； 7.加入显色底物，在酶的催化分解下， 产生不可溶的色素，就近沉淀在局 部的膜上形成斑点； 8.斑点计数（可人工计数，也可用自 动读板仪计数），数据处理，结果 分析。
ELISPOT
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应 用
移植研究--allograft rejection 疫苗开发--亦可评估疫苗效力，或是疫苗注射路径影响
2
ห้องสมุดไป่ตู้胞因子的检测方法
生物学检测法 免疫学检测法 分子生物学检测法
1
不 同的 CK 具 有不同的 生 物学活性 ，选 择 CK 独特的生物学活性，即 可检测。 细胞增殖/抑制实验 细胞病变抑制实验 细胞毒实验 细胞趋化实验 。。。 优点：敏感、可靠； 缺点：需长期饲养细 胞、检测耗时长、步 骤繁杂。
GzB
IFN-
Kleen T. et al, AIDS 2003, 18: 383-392
ELISPOT 和 ELISA的区别
ELISPOT 法源自 ELISA ，又突破传统 ELISA 法，是定量 ELISA 技术的延伸和新的发展，它们最大的不同:
1.ELISA通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比较得出可 溶性蛋白总量(整体水平);ELISPOT也是通过显色反应，在细胞分泌这种可 溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下人工计数 斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从 而计算出分泌该蛋白的细胞的频率（单细胞水平）； 2.ELISPOT比ELISA更敏感。
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TNF-的诱生和检测
吸出上清，加入 DMSO，测OD570
37º C, 5%CO2, 4-6h 37º C, 5%CO2, LPS, 18-24h
加入四甲基偶 氮唑盐(MTT)
37º C, 5%CO2, 18-24h
离心收集 培养上清 加入 放线菌 素D处理
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