流动相配制及色谱方法注意事项
流动相配制及色谱方法注意事项
流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。
选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。
常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
1、选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
万通离子色谱流动相配制注意事项
万通离子色谱流动相配制注意事项1.选择合适的溶剂：在配制离子色谱流动相前，首先要选择合适的溶剂。
一般来说，溶剂要具备一定的溶解能力，能够将需要分析的样品溶解，并且不能与固定相发生化学反应。
常用的溶剂包括水、乙腈、甲醇等。
2.确定适当的流速：流速是影响色谱分离的一个重要因素。
过高或过低的流速都会对分离效果产生不良的影响。
一般来说，流速过高会导致峰形变宽、尾峰扩散，流速过低会导致分离时间过长。
因此，在配制离子色谱流动相时需要根据实际需求确定适当的流速。
3.pH值的调节：pH值是离子色谱中一个非常重要的参数。
在配制离子色谱流动相时，要根据分析物的特性和分析需求来确定适当的pH值。
一般来说，pH值的调节可以通过溶剂的选择、缓冲溶液的添加等方式进行。
4.缓冲剂的选择：缓冲剂的选择也是离子色谱流动相配制的重要步骤之一、缓冲剂的选择要考虑其缓冲范围、溶解性、稳定性等因素。
常用的缓冲剂包括磷酸盐、醋酸盐等。
5.溶解气体的去除：在配制离子色谱流动相过程中，要注意去除其中的溶解气体。
溶解气体的存在会对离子色谱仪的运行产生一定的影响，包括峰形变宽、气泡生成等问题。
一般可以通过使用超声波清洗溶液、用氮气替代空气等方式去除溶解气体。
6.过滤和除气：配制离子色谱流动相前，需要对溶剂进行过滤和除气处理。
过滤可以去除其中的杂质和微粒，提高流动相的纯度；除气可以去除其中的氧气和二氧化碳，减少对离子色谱仪的影响。
7.定期检查：使用离子色谱仪前，要定期检查流动相的状态，包括pH值、流速等参数的调整，加装缓冲剂的情况等。
同时，要检查流动相中的溶解气体和杂质的情况，确保流动相的质量。
总之，配制离子色谱流动相是一个非常重要的步骤，需要注意溶剂的选择、流速的调节、pH值的调整、缓冲剂的选择等因素。
同时，要定期检查流动相的状态，确保流动相的质量。
只有做好流动相的配制，才能保证离子色谱分析的准确性和可靠性。
高效液相色谱仪流动相配置操作规程
高效液相色谱仪流动相配制标准操作规程1.目的明确高效液相色谱法流动相配制过程，保证操作过程的规范性.2.适用范围适用于实验室高效液相色谱法流动相配制。
3.职责实验室分析人员负责按本规程进行操作。
4. 内容4.1流动相批号的编写原则：流动相批号按配制日期编制,如批号20150609，代表2015年06月09日配制。
4。
2流动相配制4.2。
1含水流动相和不含水流动相的配制所用量筒应区分开，配制不含水的有机溶剂类流动相所用量筒必须是干燥状态，不得有水。
4。
2.2根据样品分析方法所规定的流动相体积比例配制,在清洁的带塞量筒中分别倒入相应的溶剂,若该流动相需加入适量的酸或碱，则戴上一次性手套，用专用注射器吸取规定体积的酸或碱，加入量筒,盖上塞子摇匀，振动过程应主要排气。
4。
2.3含盐的缓冲液类流动相的配制应根据规定比例配制，分别秤取规定重量的盐于清洁的带塞量筒中，加入适量纯水，振摇,待固体完全溶解后，再加纯水至规定刻度，盖上塞子，摇匀。
4.2。
4若该流动相对PH值有特殊要求，根据流动相配制规定的体积比例,用酸或碱调节PH值，用PH计测定直至规定范围内。
4。
3流动相抽滤4.3。
1含水流动相和不含水流动相的抽滤装置应区分,抽滤不含水的有机溶剂类流动相所用装置必须是干燥无水的.4.3。
2抽滤装置准备：将过滤器套在三角烧瓶上，用镊子夹取0。
45μm的水系或有机滤膜一张，放在砂芯过滤器上（注意：滤膜应将过滤面完全覆盖)；再将量杯压在滤膜上,量杯边缘和过滤器的边缘对齐;用配套的夹子将过滤器和量杯接头边缘固定（注意夹子位置应避开抽滤嘴)；将抽滤软管套在抽滤嘴上。
4.3.3抽滤：将少量配置好的流动相倒入量杯内，观察是否有漏液现象，若出现漏液须重新固定过滤器和量杯。
如未漏液则继续倒入流动相(注意不要超过量杯最大刻度线），开启真空泵抽滤。
抽滤结束先拔掉与抽滤嘴连接的真空软管,再关闭真空泵。
4。
3。
4脱气：将抽滤好的流动相转入流动相试剂瓶内(少量润洗一次倒入废液桶内再盛装)，盖上瓶盖（瓶盖不得拧紧），常温下超声波超声15至20分钟。
21项注意让你更懂液相流动相
21项注意让你更懂液相流动相流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。
选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。
常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
1、选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
液相色谱流动相的选择依据及使用注意事项
液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，它使用液体作为流动相，在不同组分之间进行分配和分离。
在液相色谱分析中，流动相是至关重要的，它直接影响分离效果、分析速度和结果准确度。
合理选择液相色谱流动相并注意使用时的一些问题是非常重要的。
一、液相色谱流动相的选择依据1. 样品的性质液相色谱中流动相的选择应考虑样品的性质，包括溶解性、稳定性、挥发性等。
对于极性样品，常使用极性溶剂作为流动相；对于不容易溶解的非极性样品，可以选择非极性溶剂作为流动相。
2. 柱子的选择不同的柱子需要选择不同的流动相，以保证分离效果。
对于反相色谱柱，一般使用的是乙腈或甲醇和水的混合物作为流动相；对于正相色谱柱，则需要选用不同的极性溶剂作为流动相。
3. 分离效果流动相的选择应考虑到所需的分离效果。
对于需要高分离效果的分析，流动相的组成和流速需要进行精细调控；对于一些不需要高分离效果的分析，可以适当简化流动相的组成，提高分析效率。
4. 色谱柱的保护对于某些对色谱柱有损害的物质，可以考虑在流动相中添加一些保护剂，以延长柱子的使用寿命。
二、使用注意事项1. 流动相的配制在使用液相色谱分析时，需要注意流动相的配制。
流动相的配制应准确、稳定，避免在实验中因流动相的质量问题导致结果失真。
2. 流速的控制流速的控制对于分析结果的准确性和重现性有着重要影响。
在选择流速时，需要根据分离效果的要求以及柱子的性能来进行合理的设定。
3. 流动相的贮存流动相在储存和使用过程中需要注意避免受到污染和氧化。
定期更换和清洗流动相的储存容器，保持流动相的纯净度和稳定性。
4. 流动相的回收在实验结束后，应注意对流动相进行回收和处理，避免对环境造成污染。
总结回顾：液相色谱分析中流动相的选择和使用是至关重要的。
合理选择流动相，可以提高分析的准确性和重现性；注意使用时的一些问题，可以延长柱子的使用寿命并保护环境。
需要根据样品的性质、柱子的选择以及分离效果来综合考虑流动相的配制和使用。
高效液相色谱仪1流动相的配置及其注意事项
二 配置过程的注意事项 1 取瓶子的时候要记住要拿稳，由于瓶子很高，脚下要垫台 阶才能取瓶子。 2 瓶子取下后要立即用封口膜封口，防止有灰尘进入瓶中。
5 抽滤甲醇，水和冲洗液的顺序是超纯水，冲洗液和纯甲醇。因为超纯水过滤完后会有 残留，对冲洗液的影响不大，冲洗液需要用有机系滤膜，甲醇可以继续使用该滤膜。 6 抽滤完毕后用保鲜膜将各瓶封口，放到超声洗涤机里面超声30分钟，赶出液体内的 空气。
7 超声结束后，将各瓶放在高效液相色谱仪上面，记住要对号入座，甲醇瓶放在A处， 超纯水瓶放在B处，冲洗瓶放在C处，空瓶放在D处。吸液管也要仔细查看管线上的编号， 盖住各瓶，切记不要弄错。
2 打开通风橱电源，照明，抽风，由于有机相有毒，戴手套和口罩。手套不能有破洞， 有毒液体不要滴到身上。 3 取超纯水，使用纯水机制备，一定要用超纯水。制备方法参看纯水机操作手册。超纯 水要用专用的干净的玻璃容器盛装，玻璃容器不能用作其他用途。 4安装抽滤装置，抽滤有机液选择有机系滤膜，抽滤水选择水系滤膜。冲洗液也要用水 系滤膜. 滤膜要使用镊子夹取，不要用手。每次用一张即可。
??8将一切做完之后就要清洗过滤装置和使用的仪器流动相的配置和过滤装置记住不要用任何洗涤剂进行清洗只用超纯水进行淋洗冲洗还可以浸泡于装超纯水的烧杯中然后放在超声机中进行清洗
高效液相色谱仪流动相的配 置及其注意事项
以甲醇水流动相为例
一 流动相的配置过程
1 取下色谱瓶，由于没有封盖，需要用保鲜膜迅速封口，拿到通风橱。
(最新)液相色谱使用注意事项
流动相：1. 流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2. 流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3. 含水流动相最好在临实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。
最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
4. 流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
5. 流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
色谱柱:1. 要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
2. 长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
3. C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
4. 一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会迅速降低柱效。
5. 经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。
6. 保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。
绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
使用注意事项：1. 使用中避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行。
2. 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）。
3. 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇/乙腈中。
安捷伦1260液相色谱仪操作流程及注意事项
安捷伦1260液相色谱仪操作流程及注意事项1、配制流动相，水相置于棕色玻璃瓶中，有机相置于相应无色玻璃瓶中。
水相和有机相必须过滤，滤膜选用0.45有机系滤膜（尼龙）。
注意：过夜的流动相必须重新过滤。
2、流动相过滤后，置超声仪中超声20min。
3、将已超声的流动相轻轻换上，动作不要太剧烈，会产生气泡，注意不要把有机相和水相换反了（A是有机相，B是水相）。
4、将色谱柱接上，注意：流动相的流动方向必须和色谱柱上的箭头方向一致。
5、打开计算机电源、显示器开关，并输入密码。
6、依次从上往下打开液相色谱仪上的所有开关。
7、打开液相色谱在线工作站（online），输入密码。
8、打开的液相工作站上分为四个小部分，依次为进样器、泵、柱温箱及检测器。
在第二个部分设置流动相的体积及溶剂瓶的总体积。
9、脱气：旋开purge阀开关，右击泵部分，选择“method”，选择B相100%，流速1ml/min，选择确定；右击泵部分，选择“control”，选择pump“on”，10秒后，调节流速为3ml/min，10秒后，调节流速5ml/min，开始水相脱气3min，水相脱气结束后，将流速按照5ml/min-3ml/min-1ml/min的流程往下调。
然后开始有机相脱气，步骤同上，注意流速不可一下子从1ml/min调到5ml/min，需慢慢调节。
流动相脱气结束后，旋紧purge阀开关。
10、建立样品的色谱方法：设置进样体积，选择洗针进样，注明洗针位置；设置流动相比例、流速及梯度洗脱条件，序列进样时设置样品运行时间和后运行时间；打开柱温箱，设置柱温；打开紫外检测灯，设置检测波长。
全部设置好后，保存方法，不要覆盖别人的方法。
11、谱图保存路径的设置：View—preferences—data path（第二个选项）—remove旧的文件夹，add自己的文件夹。
再打开Sequence—Sequence parameter—选择Data path为自己的文件夹即可。
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流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。
选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。
常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
1、选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1～2mL甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
2、注意保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
3、注意保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
4、注意流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。
HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。
系统中气泡的产生：流动相本身存在，梯度淋洗混合后放出气泡；气泡的影响：存在于管路中，系统压力不稳定，实验结果有偏差；存在于单向阀中，易造成液体回流，流量不准确，甚至是不吸液存在于检测器中，出现鬼峰，影响检测准确性。
所以做液相对流动相的气泡和杂质要求比较严格。
气泡会影响柱的分离效率，检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。
（噪声增大，基线不稳，突然跳动）。
此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。
溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。
溶解氧能与某些溶剂（如，甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰（假峰）。
在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。
在某些情况下，荧光响应可降低达95%。
在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。
除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。
常用的脱气方法有：加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。
对混合溶剂，若采用抽气或煮沸法，则需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。
（1）氦气脱气：氦气脱气是很有效的脱气方法。
氦气缓缓的通过流动相赶去溶入的空气，如果使用得当，在10min内可除去80%～90%的溶入气体。
由于氦气在流动相中的溶解度极低，所以用氦气脱气保护的流动相可以认为是一个无气体溶解体系。
其缺点是氦气价格比较昂贵，会增加检验成本。
一般说来有机溶剂中的气体易脱除，而水溶液中的气体较顽固。
在溶液中吹氦是相当有效的脱气方法，这种连续脱气法在电化学检测时经常使用。
但氦气昂贵，难于普及。
（2）真空脱气：也是比较常用的脱气方法。
现在多数企业都最常用这种办法，贮液器被抽成部分真空，溶入的气体蒸发形成气泡溢出，其效果仅次于氦气脱气。
象Agileng1200液相色谱使用的是在线脱气机。
在线脱气只适合脱完气之后的流动相，在使用过程中的微量脱气。
（3）超声波脱气：将配制好的流动相连容器放入超声水槽中脱气10～20min。
这种方法比较简便，又基本上能满足日常分析操作的要求，所以，目前仍广泛采用。
这种方法只能除去30%的溶解气体，有时还会引起气体溶解度的增加。
对氧敏感的检测器不宜用此法。
超声脱气比较好，10~20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了（一般500ml溶液需超声20~30min方可），关于超声时间问题众说纷纭，各实验室内5～30分钟不等，一般来说流动相组成为无机（缓冲盐溶液）时，5～15分钟即可，流动相为是水和有机容积混合时，超声时间要相对长一些，这个方法只能除去30%的溶解气体，时间的延长不和效果成正比，且其中气泡对色谱峰基线稳定性与信噪比有一定影响，一般来说影响不大，15min超声即可足够。
此法不影响溶剂组成。
超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。
（4）加热回流脱气：该方法虽然效果很好，但是适用范围较窄。
对于有机溶剂或混合流动相不适合用此法，因为挥发性组分会损失掉，改变流动相的组成。
综合来说，用真空抽滤后，再用超声脱气还是最常用的办法，用氦气的方法是效果最好的办法，而在线脱气本身也是真空脱气，但它可以放到仪器上使用，是一种保证性的办法。
A.离线（系统外）脱气法不能维持溶剂的脱气状态，在你停止脱气后，气体立即开始回到溶剂中。
在1~4小时内，溶剂又将被环境气体所饱和。
B.在线（系统内）脱气法无此缺点。
最常用的在线脱气法为鼓泡，即在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。
严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体（通常是氦）将空气替换出来。
此外还有在线脱气机。
5、注意流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。
过滤器被微粒所阻塞或长霉，去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的过滤器则可。
有时候换上新的过滤器仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器。
不管如何，流动相都需要重新过滤。
流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。
如果流速大于10mL/min，常会出现这种现象。
使用下列方法解决：（1）使用低流速；（2）换大孔径的过滤器；（3）增加进液管道内径；（4）抬高或加压储液器；（5）不用过滤器，但流动相一定要先过滤；（6）储液器盖子太紧，在储液器内形成真空，打出的流动相不连续。
应松开盖子或留有1mm的缝隙；（7）进液管道阻塞或弯曲使泵抽不到液，注意调整进液管道或更换新的。
其它问题包括渗漏或接头松动、泵部件损坏等，都能引起供液不正常。
6、注意防止流动相和储液器被污染由于污染，噪音越来越大，检测器基线上升。
污染物可能被泵以稳定的浓度打入系统，而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出多余的峰。
用梯度洗脱时弱流动相可以使污染物聚在柱顶，流动相强度增加后污染物可能被洗脱出来一个大的伪峰。
有时基线噪音突然增大或突然提高，都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久（通宵）所造成的。
新加进的流动相有污染物或者流动相长霉，繁殖了细菌。
脏的储液器会污染清洁的流动相。
每种流动相备有专用的储液器，或者定期报废储液器。
流动相污染来自这几个方面：试剂质量不高，玻璃器皿不合格；微生物的影响；配制流动相时操作不当等，因此要求高纯度化学试剂和HPLC级溶剂。
要注意玻璃器皿按规定清洗干净；为防止微生物生长，每天要用甲醇清洗系统；怀疑系统内生长了微生物，可用稀硝酸冲洗即可（注意不要损坏柱和管道系统）；真空脱气时防止泵油带入流动相；用清洁的惰性塞子、搅棒、过滤器和玻璃器皿配制流动相；已经污染的流动相一定要废弃掉。
7、注意选择流动相应不改变填料的任何性质低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
8、选择流动相应注意纯度色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
9、选择流动相应注意必须与检测器匹配使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
10、选择流动相应注意粘度要低（应<2cp）：高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长，最好选择沸点在100℃以下的流动相。
11、选择流动相应注意对样品的溶解度要适宜如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
12、选择流动相应注意样品易于回收应选用挥发性溶剂13、选择流动相应注意由强到弱一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
14、选择流动相应注意三倍规则每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
15、选择流动相应注意粗调转微调当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
16、流动相的配制注意有机溶剂和水性溶剂的混合方法有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的，但由于混合方法不同，有时分析结果相差很大。