雄黄染毒后大鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量的变化_霍韬光

第２３卷第２期化　学　研　究中国科技核心期刊２０１２年３月ＣＨＥＭＩＣＡＬ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　ｈｘｙｊ＠ｈｅｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ雄黄染毒后大鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量的变化霍韬光，畅　蓓，李维凯，杨卉蕾，张颖花，姜　泓＊（中国医科大学公共卫生学院，辽宁沈阳１１０００１）摘　要：研究了雄黄对大鼠脑组织氨基酸类神经递质含量的影响．将３２只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为对照组（０．５％ＣＭＣ－Ｎａ）以及低剂量（０．３ｇ／ｋｇ）、中剂量（０．９ｇ／ｋｇ）、高剂量（２．７ｇ／ｋｇ）雄黄染毒组，通过连续灌胃给予雄黄混悬液两周．采用高效液相色谱－柱前衍生化法测定了大鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量的变化．结果表明，与对照组比较，低剂量组大鼠脑组织中丝氨酸、甘氨酸和γ－氨基丁酸含量明显增加．中、高剂量组大鼠脑组织中同型半胱氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸和天冬氨酸含量明显比对照组的低．总体而言，雄黄可对大鼠脑组织氨基酸类神经递质产生影响，氨基酸类神经递质可能是雄黄毒性作用的靶点之一．关键词：雄黄；大鼠；脑组织；氨基酸类神经递质中图分类号：Ｏ　６１３．６３文献标志码：Ａ文章编号：１００８－１０１１（２０１２）０２－００８７－０４Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｅａｌｇａｒ　ｏｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓｉｎ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｏｆ　ｒａｔｓＨＵＯ　Ｔａｏ－ｇｕａｎｇ，ＣＨＡＮＧ　Ｂｅｉ，ＬＩ　Ｗｅｉ－ｋａｉ，ＹＡＮＧ　Ｈｕｉ－ｌｅｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｙｉｎｇ－ｈｕａ，ＪＩＡＮＧ　Ｈｏｎｇ＊（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ，Ｃｈｉｎａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０００１，Ｌｉａｏｎｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｅａｌｇａｒ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅｓｏｆ　ｒａｔｓ　ｗａｓ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．３２Ｗｉｓｔａｒ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｃａｔｅｇｏｒｉｚｅｄ　ｉｎｔｏ　ｃｏｎｔｒｏｌ，ｌｏｗ　ｄｏｓａｇｅ，ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｄｏｓａｇｅ，ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓａｇｅ　ｒｅａｌｇａｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ　ｒｅａｌｇａｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｒｅａｌｇａｒ　ｂｙ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ａｔ　ａ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｆ　０．３ｇ／ｋｇ，０．９ｇ／ｋｇ，ａｎｄ　２．７ｇ／ｋｇ，ａｎｄｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｏｒａｌｌｙ　ｇｉｖｅｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　０．５％ｓｏｄｉｕｍ　ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ（ＣＭＣ－Ｎａ）ｆｏｒ　２ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅｒａｔｓ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｉｎ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈｐｒｅｃｏｌｕｍｎ　ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｓｅｒｉｎｅ，ｇｌｙｃｉｎｅ　ａｎｄγ－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃａｃｉｄ　ｉｎ　ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｒｅａｌｇａｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ　ａｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｅｌｅｖａｔｅｄ　ａｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ａｓｐａｒｔａｔｅ，ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，ｇｌｕｔａｍｉｎｅ　ａｎｄ　ｓｅｒｉｎｅ　ｉｎ　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ａｎｄ　ｈｉｇｈｄｏｓｅ　ｒｅａｌｇａｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ　ａｒｅ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ａｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｉｎ　ｏｎｅｗｏｒｄ，ｒｅａｌｇａｒ　ｈａｓ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｏｆ　ｒａｔｓ，ａｎｄ　ａｍｉｎｏａｃｉｄ　ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ　ｍａｙ　ｂｅ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｘｉｃ　ｔａｒｇｅｔｓ　ｏｆ　ｒｅａｌｇａｒ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｅａｌｇａｒ；ｒａｔ；ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅｓ；ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ 雄黄为硫化物类矿物，作为药用在我国已有上千年的历史，主要成分为二硫化二砷（Ａｓ２Ｓ２）［１］．近些年，收稿日期：２０１１－０７－２３．基金项目：国家自然科学基金（８１０７３１４４）；辽宁省自然科学基金（２００９２１３３）；辽宁省教育厅高等学校科研资助项目（Ｌ２０１０７０８）．作者简介：霍韬光（１９８３－），女，讲师，博士，研究方向：含重金属矿物药毒作用机制研究．＊通讯联系人．８８　化　学　研　究２０１２年由于未能科学合理的应用，由雄黄引起的不良反应或慢性砷中毒事件时有报道［２－３］．研究表明，砷可引起认知障碍、智力低下等神经行为异常［４］，因此，雄黄及含雄黄中成药对中枢神经系统的毒性引起了人们的广泛关注．氨基酸类神经递质在中枢神经系统中具有重要作用．已有文献报道砷可影响脑组织中氨基酸类神经递质含量［５－６］，而雄黄对脑组织中氨基酸类神经递质的影响还未见报道．作者采用高效液相色谱法测定雄黄染毒后大鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量的变化，为探讨雄黄对中枢神经系统的毒性机制提供依据．１　实验部分１．１　药品、材料与仪器市售雄黄（成大方圆药店），天冬氨酸（Ａｓｐ）、谷氨酸（Ｇｌｕ）、同型半胱氨酸（Ｈｃｙ）、谷胺酰胺（Ｇｌｎ）、丝氨酸（Ｓｅｒ）、甘氨酸（Ｇｌｙ）、牛磺酸（Ｔａｕ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）对照品、丹磺酰氯（Ｓｉｇｍａ公司），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯．初断乳Ｗｉｓｔａｒ大鼠３２只（中国医科大学实验动物部），体重５０±１０ｇ，雌雄各半．高效液相色谱仪（美国Ｗａｔｅｒｓ公司），包括６００Ｅ型输液泵，２４８７型紫外检测器，Ｅｍｐｏｗｅｒ　２色谱数据工作站．ＥＲ－１８２Ａ全自动电子天平（十万分之一）（日本Ａ＆Ｄ公司）；组织匀浆器（ＩＫＡ广州仪科实验室技术有限公司）；３Ｋ－１８超速冷冻离心机（Ｓｉｇｍａ公司）；ｐＨ－３ｃ型酸度计（上海精密科学实业有限公司）；ＸＷ－８０Ａ旋涡混合器（上海精科实业有限公司）；Ｌ－１２８Ｂ型试管氮吹浓缩仪（北京来亨科贸有限公司）；Ｅａｓｙｐｕｒｅ纯水系统（美国Ｂａｒｎｓｔｅａｄ公司）．１．２　色谱条件色谱柱为Ｔｈｅｒｍｏ　ＯＤＳ　ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ　ｉｄ，５μｍ）；流动相Ａ相为磷酸二氢钠－磷酸氢二钠缓冲液（ｐＨ　７．２），Ｂ相为乙腈，梯度洗脱；０～７ｍｉｎ，Ｂ相由１４％变化至２０％；７～１４ｍｉｎ，Ｂ相由２０％变化至２７％；１４～２５ｍｉｎ，保持Ｂ相２７％．检测波长２５４ｎｍ，柱温２５℃，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，进样量２０μＬ．１．３　标准储备液的配制精密称取０．１ｍｍｏｌ氨基酸对照品，用碳酸钠缓冲液（ｐＨ　９．５）溶解并定容至１００ｍＬ容量瓶中，得浓度为１ｍｍｏｌ／Ｌ的氨基酸储备液．１．４　动物分组及给药Ｗｉｓｔａｒ大鼠３２只，体重５０±１０ｇ，雌雄各半．按体重随机分成４组，每组８只．以０．５％羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）水溶液为混悬介质，对照组（０．５％ＣＭＣ－Ｎａ）、实验用药组（０．３ｇ／ｋｇ，０．９ｇ／ｋｇ，２．７ｇ／ｋｇ）灌胃给药，每日１次，连续给药２周．在动物灌胃期间每３天称重１次，调节灌胃剂量．所有动物均自由饮水和进食普通饲料．最后一次灌胃２ｈ后，１０％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，迅速开颅取大脑（冰浴下进行）．１．５　样品处理、测定与统计分析称取脑组织０．１ｇ加入２ｍＬ乙腈匀浆２ｍｉｎ，于４℃离心１０ｍｉｎ（１３　０００ｒ／ｍｉｎ），取出上清液，在氮气流下吹干（４０℃）．残渣溶于０．４ｍＬ碳酸钠缓冲液中（ｐＨ　９．５），涡旋１ｍｉｎ，加入０．２ｍＬ丹磺酰氯（１０ｍｍｏｌ／Ｌ），涡旋３０ｓ，在６５℃水浴避光反应２５ｍｉｎ．冷至室温后过０．２２μｍ滤膜，进样２０μＬ，测定各组大鼠脑组织中氨基酸类神经递质的含量．采用ＳＰＳＳ统计软件处理，数据用ｍｅａｎ±ＳＤ表示，用单因素方差分析（ＡＮＯＶＡ）比较各染毒组与对照组大鼠脑组织氨基酸类神经递质含量的统计学差异，以Ｐ＜０．０５作为检验的显著性差异．２　结果与讨论２．１　色谱行为在上述色谱条件下进样分析，标准溶液和脑组织样品的色谱图见图１．由图１可见，８种氨基酸类神经递质在２５ｍｉｎ内实现了完全分离，脑组织中内源性物质不干扰测定．２．２　标准曲线与精密度精密量取储备液适量，用碳酸钠缓冲溶液稀释，得标准系列溶液．在上述色谱条件下，取８种氨基酸类物质标准溶液经丹磺酰氯衍生化后进样分析．以各组分标准物质的峰面积为纵坐标（Ｙ），以各组分的浓度为横坐标（Ｘ，μｇ／Ｌ）进行回归运算，得到线性回归方程（见表１）．在上述色谱条件下，连续６次测定同一标准溶液，计算６次测定所得峰面积的ＲＳＤ值，结果ＲＳＤ均小于２％，表明仪器精密度良好．第２期霍韬光等：雄黄染毒后大鼠脑组织中氨基酸类神经递质含量的变化８９（Ａ）标准溶液（Ｂ）脑组织样品图１　氨基酸类神经递质色谱图Ｆｉｇ．１　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ表１　氨基酸类神经递质标准曲线Ｔａｂｌｅ　１　Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ氨基酸范围（μｍｏｌ／Ｌ）线性方程ＲＡｓｐ　０．５～１００　Ｙ＝７７６．５　Ｘ－４２５．１　０．９９７　６Ｇｌｕ　０．５～１００　Ｙ＝９２４．２　Ｘ－６１３．８　０．９９８　９Ｈｃｙ　５０～８００　Ｙ＝７４９．３　Ｘ－４　１４９　０．９９９　１Ｇｌｎ　１０～２００　Ｙ＝８００．３　Ｘ＋２　０２０　０．９９９　３Ｓｅｒ　０．５～１００　Ｙ＝１　０３１　Ｘ＋９６．９０　０．９９８　１Ｇｌｙ　０．５～１００　Ｙ＝３　２０５　Ｘ－５９５．７　０．９９９　６ＧＡＢＡ　５０～８００　Ｙ＝１　４９２　Ｘ－１　８３１　０．９９９　９Ｔａｕ　５０～８００　Ｙ＝１　０６４　Ｘ＋１２　４２１　０．９９７　３２．３　雄黄染毒大鼠脑组织氨基酸类神经递质含量的变化对照组、雄黄染毒组大鼠脑组织中氨基酸类神经递质的含量见表２．经统计分析发现低剂量雄黄染毒组大鼠脑组织中Ｓｅｒ、Ｇｌｙ和ＧＡＢＡ含量明显增加．中、高剂量雄黄染毒组大鼠脑组织中Ｈｃｙ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ和Ａｓｐ含量明显低于对照组．表２　脑组织中氨基酸类神经递质含量Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅｓＡｓｐ　Ｇｌｕ　Ｈｃｙ　Ｇｌｎ对照组（ｎ＝８）２．２７±０．８２　９．５６±１．９４　１　２７４．６６±１５９．２５　６３．７９±６．４９低剂量组（ｎ＝８）２．８７±０．５３　７．８５±１．９８　１　４４５．３０±７４．６６　９０．７８±２４．１６中剂量组（ｎ＝８）２．３４±０．５１　７．４２±１．８０　１　０３６．７８±１５７．２１＊４９．８５±６．７８＊高剂量组（ｎ＝８）０．８３±０．２２＊８．８９±３．３５　６６４．１２±４２５．１５＊４０．５４±７．７７＊Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　ＧＡＢＡ　Ｔａｕ对照组（ｎ＝８）６．０６±０．８０　９．４１±１．４９　５７．３７±３．９８　３２２．３３±３０．２３低剂量组（ｎ＝８）１４．５６±２．６１＊１６．３９±２．２１＊８９．２６±１５．４３＊３９５．５０±６６．５６中剂量组（ｎ＝８）５．０６±０．７３＊１０．９６±１．３７　５２．６５±９．１８　２９２．８７±３７．８７高剂量组（ｎ＝８）３．０３±１．８３＊５．５９±２．８２　５３．０６±１３．２３　３０４．３７±７３．５３ ＊Ｐ＜０．０５２．４　衍生化条件的选择影响衍生化反应效率的因素包括衍生化缓冲液的ｐＨ、反应时间、衍生化反应温度和衍生化试剂浓度．作者在实验中考察了衍生化缓冲盐种类（碳酸盐和磷酸盐）、ｐＨ（９．０～１１．０）、衍生化反应温度（５０～７０℃）、反应时间（１５～４５ｍｉｎ）和衍生化试剂浓度，结果发现以ｐＨ　９．５的碳酸盐为衍生化缓冲液，与０．２ｍＬ　１０ｍｍｏｌ／Ｌ的丹磺酰氯在６５℃反应２５ｍｉｎ的条件下各氨基酸的衍生化效率最大．２．５　实验结果分析氨基酸类神经递质在中枢神经系统中发挥重要作用．本研究发现低剂量雄黄染毒组大鼠脑组织中ＧＡ－ＢＡ和Ｇｌｙ含量增加．ＧＡＢＡ和Ｇｌｙ是中枢神经系统主要的抑制性神经递质，然而，有文献报道未成熟大鼠９０　化　学　研　究２０１２年脑中ＧＡＢＡ和Ｇｌｙ发挥兴奋性作用［７］，所以低剂量雄黄染毒组大鼠脑组织中ＧＡＢＡ和Ｇｌｙ含量的增加可能提示低剂量的雄黄具有兴奋性神经毒性．Ａｓｐ和Ｇｌｎ为中枢神经系统主要的兴奋性神经递质，它们能激活ＮＭＤＡ受体，在学习和记忆中发挥重要作用．实验中发现中、高剂量雄黄染毒组大鼠脑组织中Ａｓｐ和Ｇｌｎ含量明显低于对照组，提示中、高剂量雄黄可能对学习、记忆能力产生影响．本研究表明，氨基酸类神经递质可能是雄黄神经毒性作用的靶点之一．参考文献：［１］国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｓ］．北京：中国医药科技出版社，２０１０：３１６．［２］郭集军，潘金城．长期大量服用牛黄解毒片致慢性砷中毒及黑皮病１例报告［Ｊ］．中国职业医学，２００３，３０（２）：７．［３］刘恩生，李玉珍．含雄黄中成药致慢性砷中毒２例［Ｊ］．药物不良反应杂志，２００５，（４）：２７６．［４］ＲＯＤＲＩＧＵＥＺ　Ｖ　Ｍ，ＬＩＭＯＮ－ＰＡＣＨＥＣＯ　Ｊ　Ｈ，ＣＡＲＲＩＺＡＬＥＳ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈｒｏｎｉｃ　ｅｘｐｏｓｕｒｅ　ｔｏ　ｌｏｗ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｉｎｏｒｇａｎｉｃ　ａｒｓｅｎｉｃｃａｕｓｅｓ　ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｌｂｉｎｏ　ｒａｔ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｏｌ　Ｔｅｒａｔｏｌ，２０１０，３２（６）：６４０－６４７．［５］ＮＡＧＡＲＡＪＡ　Ｔ　Ｎ，ＤＥＳＩＲＡＪＵ　Ｔ．Ｒｅｇｉｏｎａｌ　ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｂｒａｉｎ　ｂｉｏｇｅｎｉｃ　ａｍｉｎｅｓ，ｇｌｕｔａｍａｔｅ，ＧＡＢＡ，ａｎｄＧＡＤ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｄｕｅ　ｔｏ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｏｒｇａｎｉｃ　ａｒｓｅｎｉｃ　ｉｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ａｎｄ　ａｄｕｌｔ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｂｕｌｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｃｏｎｔａｍ　Ｔｏｘｉ－ｃｏｌ，１９９３，５０（１）：１００－１０７．［６］ＮＡＧＡＲＡＪＡ　Ｔ　Ｎ，ＤＥＳＩＲＡＪＵ　Ｔ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｏｐｅｒａｎｔ　ｌｅａｒｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｂｒａｉｎ　ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇｃｈｒｏｎｉｃ　ｉｎｏｒｇａｎｉｃ　ａｒｓｅｎｉｃ　ｉｎｔａｋｅ［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｅｘｐ　Ｔｏｘｉｃｏｌ，１９９４，１３（５）：３５３－３５６．［７］ＣＬＡＲＫ　Ｄ　Ｌ，ＢＯＵＴＲＯＳ　Ｎ　Ｎ，ＭＥＮＤＥＺ　Ｍ　Ｆ．Ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ　ａｎｄ　ｂｅｈａｖｉｏｒ［Ｍ］．１００Ｂｒｏｏｋ　Ｈｉｌｌ　Ｄｒｉｖｅ　Ｗｅｓｔ　Ｎｙａｃｋ，ＮＹ１０９９４－２１３３：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ，２０１０：２１－２２．。