结核病实验室
结核病实验室要求
结核病实验室要求结核病实验室是一种特殊的实验室，其主要任务是检测和诊断结核病。
为了确保安全和高效的运行，结核病实验室有一些特殊的要求，本文将介绍这些要求。
以下是本文的内容：1. 实验室环境要求结核病实验室应具备良好的环境条件，包括适宜的温度（20℃-26℃）和湿度（45%-60%）。
实验室内应保持干净整洁，防止尘埃和污垢对实验结果产生干扰。
同时，实验室要有足够的空间容纳实验设备和样本。
2. 实验设备要求结核病实验室必须具备一系列专业的实验设备，如显微镜、培养箱、离心机等。
这些设备应保持良好的工作状态，定期进行检测和维护，以确保其准确性和稳定性。
3. 材料和试剂要求在结核病实验室中，使用的材料和试剂应具备优良的质量，以确保实验结果的准确性和可靠性。
实验室应定期检查材料和试剂的过期日期，并且在使用前进行充分的准备和储存。
4. 实验操作要求结核病实验室的工作人员应严格遵守操作规程，确保实验过程的安全和准确性。
他们应接受专业培训，熟悉各种实验方法和操作技巧。
在进行实验时，他们应佩戴防护手套和口罩，避免与样本直接接触，以防止交叉感染。
5. 样本收集和处理要求结核病实验室在样本的收集和处理过程中必须遵循相应的规定和标准。
样本应进行正确的标识和保存，并及时送往实验室进行检测。
在处理样本时，要采取适当的防护措施，避免污染和传播。
6. 数据管理要求结核病实验室必须建立完善的数据管理系统，确保实验结果的可追溯性和准确性。
实验数据应及时记录和备份，并妥善管理。
此外，实验室还应加强数据的安全性，防止数据泄露和丢失。
7. 实验质量控制要求结核病实验室要建立有效的实验质量控制体系，确保实验结果的准确性和可靠性。
这包括定期进行质量控制和校准，参加外部质量评估等。
实验室应建立质量控制记录和文件，并及时纠正和改进不合格的实验结果。
8. 废弃物处理要求结核病实验室产生的废弃物必须按照相关规定进行妥善处理，以防止对环境和健康造成污染和危害。
结核病的实验室诊断方法及评价
结核病的实验室诊断方法及评价耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性，1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行，2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。
耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。
因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。
1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。
其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。
2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。
3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。
基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。
多种以PCR 为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。
这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。
由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测的金标准是基于培养和鉴定结核分枝杆菌。
以下是具体步骤：
1.痰液样本收集：患者需要提供早晨醒来时的深咳痰液样本，
以获得有效的细菌数量。
2.痰液预处理：痰液样本经过预处理，包括离心和去除杂质。
这一步通常包括液体化和浓缩痰液。
3.痰液培养：将预处理后的痰液接种到培养基上，通常是液体
培养基。
培养基中的结核分枝杆菌将逐渐增殖形成菌落。
4.鉴定：通过常规培养、染色和生化试验等方法，鉴定已培养
的菌落是否为结核分枝杆菌。
5.药敏试验：对已鉴定的结核分枝杆菌进行药敏试验，以确定
哪些药物对其具有抗菌作用，从而为治疗方案的选择提供依据。
此方法被认为是金标准，因为它能够准确检测到结核分枝杆菌，并且可以确定其对药物的敏感性，为结核病的诊断和治疗提供可靠的结果。
但是，该方法需要相对较长的时间（通常需要几周）来进行培养和鉴定，因此在临床实践中可能需要其他更快速的检测方法来尽早确诊结核病。
结核病实验室检查
结核病实验室检查结核病是一种严重的传染病，通常由结核分支杆菌引起。
这种病菌会侵入肺部并引起肺结核，而也可以通过血液传播到其他部位，如淋巴、骨髓和肝脾等。
在许多地方，特别是在发展中国家，结核病仍然是一种普遍的疾病，因此及早诊断和治疗至关重要。
结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
结核病实验室检查通常涉及多种类型的检测，例如：1.酸杆菌检测结核分支杆菌是酸杆菌，因此酸杆菌检测是一种常用的实验室检查方法。
该方法不需要复杂的设备并且具有高度的特异性和灵敏度。
患者的样本可以是咳嗽的痰液、唾液或肺组织，也可以通过胃镜获得胃肠液。
如果酸杆菌检测呈阳性，则可以确诊结核病。
但是，该方法也存在一些局限性，例如在一些情况下不能检测出结核分支杆菌，如某些菌株可以耐受某些药物。
2. 结核抗体检测结核抗体检测是另一种可以用于诊断结核病的实验室检查方法。
该方法通常使用ELISA（酶联免疫吸附试验）或其他类似方法检测患者的血清中是否存在结核抗体，如果测试结果呈阳性，则表示患者可能感染了结核分支杆菌。
但是，结核抗体检测的结果可能会出现假阳性或假阴性的情况，这限制了其在临床实践中的应用。
3.结核病PCR检测PCR检测是检查抗原核酸序列的一种方法。
由于PCR技术可以扩增极微量的DNA，并且非常特异和灵敏，因此可以检测出非常小的感染量。
在结核病中，PCR检测可以用于检测结核分支杆菌的DNA，以确认病原体的存在。
但是，该方法对样本中的DNA污染非常敏感，因此必须进行严格的实验室操作和质量控制。
总之，结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
这些测试方法都具有不同的优缺点，并且结果可能受到许多因素的影响。
因此，必须在临床实践中综合考虑这些方法的结果和临床表现，以取得最佳的诊断结果。
同时，实验室技术人员必须受过专业培训，严格遵守操作规程，以确保准确诊断和最佳治疗效果。
结核病细菌学实验室分级标准
五人员
6名以上专业技术人员，其中高级 和（或）副高技术职称1名以上，中级 技术人员2名以上。经专业技术培训2周 合格后上岗。
国家级、省级、地市级、 县级结核病细菌学实验室均统 一使用本标准，得分90分以上 为达标。
返回实验室分级
1 实验室内按功能划分为毒菌操作区（进 行痰涂片、染色等试验操作）和相对洁净 区（进行镜检、登记记录等）。 （5分）
2 有室内消毒灭菌措施（包括物理灭菌和 化学灭菌）和简单的通气排风装置。
（5分）
3 有严格的消毒隔离制度。
（2分）
二、工作能力
1. 具备I级实验室的全部功能。 （18分）
2. 按国家标准规范常规开展分离培养工作，月工
作量20例以上。
（10分）
3. 具备开展结核菌药物敏感性试验的实验室条件
和能力。
（5分）
4. 具有一定的科研实施能力。 （5分）
三、仪器设备（一）
①生物安全操作台
1台
②双目光学显微镜（油镜清晰、功能完好）
2台
③培养基蒸汽凝固灭菌器
1台
④蒸汽高压灭菌锅
1台
⑤离心机
1台
三、仪器设备（二）
⑥恒温培养箱
恒温培养箱： 3台
(2分)
普通冰箱：
2台
(2分)
涂片染色、分离培养药敏试验、菌种鉴定所需的
其他材料
（3分）
独立使用的计算机1台
（2分）
四、业绩考核
应用统一的实验室登记本，记 录准确，保存完整。应用统一的实 验室登记本，记录准确，保存完整。
四、业绩考核
应用统一的实验室登记本，记 录准确，保存完整。应用统一的实 验室登记本，记录准确，保存完整。
结核病细菌学实验室分级标准
结核病实验室诊断技术介绍
1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。
目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。
2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
结核病实验室检测流程标准
结核病实验室检测流程标准结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，其传染性强，严重威胁人类健康。
为了及时发现和诊断结核病，实验室检测是必不可少的一环。
本文将从标本采集、实验室检测和结果判读三个方面，介绍结核病实验室检测流程标准。
一、标本采集结核病的标本采集是实验室检测的第一步，其质量直接影响后续检测结果的准确性。
标本采集应在严格的无菌条件下进行，采集的标本应包括痰液、胸腔积液、尿液、脑脊液等。
在采集痰液时，应让患者深呼吸数次，然后咳出痰液，避免口腔分泌物的污染。
采集胸腔积液时，应在穿刺前进行消毒，并在穿刺后立即将标本送至实验室。
采集尿液时，应让患者在清晨第一次排尿时采集，避免尿液的稀释。
采集脑脊液时，应在穿刺前进行消毒，并在穿刺后立即将标本送至实验室。
二、实验室检测结核病的实验室检测主要包括涂片法、培养法、PCR法等。
涂片法是最常用的检测方法，其操作简单、快速，但灵敏度较低。
培养法是检测结核分枝杆菌的“金标准”，其灵敏度高，但需要较长的培养时间。
PCR法是一种新兴的检测方法，其灵敏度高、特异性强，但需要较高的技术水平和设备支持。
实验室检测应在严格的无菌条件下进行，避免标本污染和交叉感染。
检测结果应及时记录和报告，确保患者能够及时接受治疗。
三、结果判读结核病的实验室检测结果应根据临床表现和其他检查结果进行综合判读。
涂片法和PCR法的阳性结果可以初步诊断结核病，但需要进一步的确认。
培养法的阳性结果可以确诊结核病，但需要排除其他细菌感染。
实验室检测结果应及时通知临床医生，以便制定合理的治疗方案。
综上所述，结核病实验室检测流程标准包括标本采集、实验室检测和结果判读三个方面。
标本采集应在严格的无菌条件下进行，实验室检测应遵循相应的操作规范，结果判读应综合考虑临床表现和其他检查结果。
只有严格按照标准操作，才能确保结核病的及时发现和诊断，保障人民群众的健康。
生物安全实验室结核病诊断实验室的建设要求
生物安全实验室结核病诊断实验室的建设要求结核病诊断实验室是用于结核病痰涂检测和结核杆菌培养、药敏试验等实验诊断的专用场所。
因结核杆菌主要通过呼吸道传播感染，所以，规范结核病诊断实验室建设和实行严格的个人防护及推行科学的实验室规范化管理显得十分重要。
结核病诊断实验室的建设应根据不同的实验内容和实验性质来考虑。
在实验室建设、设备配置和个人安全防护方面遵循相关的管理规定，确保实验人员和实验环境的安全。
从生物安全防护基本要求考虑，结核病诊断实验室应尽量和其他区域分开，宜形成一个相对独立的实验区域。
结核病诊断实验室主要分为涂片实验室和培养与药敏实验室。
其实验室建设的基本要求分述如下：结核病诊断实验室中的涂片实验室应符合BSL-2实验室要求，但开展结核菌培养与药敏实验时实验室应符合BSL-3实验室的基本要求。
（一）涂片实验室基本要求1.涂片实验室应进行合理分区布局，并应在实验室出口处设专用洗手池。
2.实验室的墙面、地板和天花板应平整、防滑，便于清洁，不渗水，并耐化学品和消毒剂的腐蚀。
3.实验台面应耐高温、耐酸碱、防水。
4.实验台柜应牢固、平稳，台柜间应留有一定距离，便于清洁。
5.实验室如采用开窗自然通风时，应设置防蚊虫纱窗。
6.实验室应有符合要求的照明，但要防止强光和避免反光。
7.实验室应配备必要消毒设备，如高压灭菌器和消毒喷雾装置。
8.实验室人口处宜设置更衣处。
（二）培养与药敏实验室基本要求本实验室除满足涂片实验室的要求外，还应达到以下要求：1.实验室应设带锁并能自动关闭装置及可视窗。
2.实验室应设实验操作区和准备区，应具有足够的空间用于实验操作和实验用品的放置。
3.实验区域内应配备高压灭菌器及其他消毒装置。
4.实验操作区应配置Ⅱ级生物安全柜。
5.实验室宜设应急洗眼和喷淋冲洗装置。
6.实验室应有可靠的电力供应保障和应急照明系统。
重要设备如生物安全柜、培养箱、冰箱等应有备用电源或UPS等辅助电源。
7.实验室入口处应有明显的生物危害标识，实验室内应设有在黑暗中能辨别方向的标识。
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实验室方法
阳性培养物经MPT64抗原检测以确定其是否属于 结核分枝杆菌菌属。 L-J培养基比例法药敏 /MIGT 快速药敏法。 常规的DNA核酸扩增 hain方法检测耐药
实验室方法
试剂分别按2:1和3:1加入未经处理的痰标本 和去污处理的痰标本中。 室温下手工晃动密闭痰盒，15分钟内2次， 然后取2ml灭活后的物质加入检测盒(其内含 相当于0.7ml未处理痰液或0.5ml已去污处理 的痰液)，检测盒放入检测平台。 MTB/RIF检测系统直接输出电子结果。
发光二极管荧光显微镜（LED）
镜下视野
发光二极管荧光显微镜（LED）
不需要加热玻片，步骤简单 视野比普通的显微镜大大2-4倍
• 对数目少的不必使用镜油
• 节省人力时间，时间为普通的 1/4 每天可检查至少 60 个涂
片
• 可帮助早期诊断肺结核 – 即使菌浓度较低 • 杆菌也有很高的灵敏度，与 ZN 相比阳性发现率平均增加
适用范围： 1、TB的诊断 2、一线抗结核药物耐药诊断 3、二线抗结核药物耐药的诊断 4、目前，利福平（rpoB基因） 、异烟肼（Kat基 因、inhA基因）耐药的诊断
所需仪器设备：生安柜、超声振荡仪、PCR扩增 仪、可调温振荡仪
原理：基于分子生物学扩增技术。 rpoB基因突变位点有：4个
重大专项：泰兴、江阴地区部分实验结果比较
阳性检出率 标本及性状 754份痰标本 脓性痰 非脓性痰 即时痰 夜间痰 液基法 23.50% 47.50% 13.50% 20.48% 25.6% 直涂法 16.80% 40.90% 4.66% 15.06% 17.01%
三、线性探针耐多药检测方法（HAIN）
Kat基因、inhA基因突变位点有：2个、4个
正确流程
痰液前处理
MIX制备
DNA提取
PCR
杂交
操作步骤
一、痰标本处理 去污染前处理液：氢氧化钠+柠檬酸三钠+N-乙 酰半胱氨酸。 痰标本+等体积去污染前处理液：振荡-离心-静 置-PBS清洗-离心-留取沉淀。 二、DNA提取 处理后痰标本沉淀 ： 95°C孵育-超声裂解-取 上清液用于PCR扩增。 三、扩增产物杂交 PCR产物变性，与探针试条上的标记突变位点杂 交，标记物显色。
结核病实验室检测 诊断技术
发光二极管荧光显微镜（LED）方法 液基夹层杯技术 线性探针耐多药检测技术（HAIN） 基因芯片耐多药检测技术（GENECHIP） TB和利福平耐药快速分子鉴定（X-Pert）
一、发光二极管荧光显微镜（LED） 方法
适用范围：痰涂片镜检 所需试剂/仪器： LED显微镜、荧光染色液 中盖项目：淮安市（淮阴区、楚州区） 原理：
适用范围： 1、TB复合群鉴定。 2、TB菌种鉴定。 3、利福平和异烟肼耐药检测 。 原理：多重PCR扩增和反向杂交来识别。
基因芯片
将核酸片段有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚 丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二 维分子排列。 采用光导原位合成或微量点样等方法。 然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交。 通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机 （CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测 分析，从而判断样品中靶分子的数量。 ，
讨论
MTB/RIF优点：简单、安全 标本处理简单，操作方便，检测全自动，2 小时内出结果，机器判读，结果精确，减 少核酸污染。 该检测方法产生的气溶胶无传染性。 对实验室生物安全级别要求较低，可以在 基层开展（从生物安全要求出发），由于 较快速，可以减少诊断延迟，检测更多标 本。
讨论
四、结果判读
试剂质控 位点质控
HAIN和目前常规药敏方法比较
比较项目 时间 生物安全级别要求 人员培训 操作简易程度 仪器设备 HAIN 1-2天 较低 2-3天 简单 性价比较高 常规药敏方法 2-3个Leabharlann 二级实验室 2-3个月 复杂 --
对环境洁净度要求
较高，易出现 假阳性
较高
四、GENECHIP基因芯片耐多药 检测技术
rpoB基因突变位点：13个位点。 katG基因突变位点：2个位点。 /inhA基因突变位点：2个突变位点。
耐药分子诊断的基本原理
操作较复杂。 特异度与灵敏度不高。 基因芯片耐多药检测试剂已获得欧盟体外 诊断试剂证书（CE-IVD）。 中国药品食品监督管理局的医疗器械证书。 可以作为临床耐药结核病临床诊断和治疗 的依据。
五、结核和利福平耐药的快速分子 鉴定（x-pert）
适用范围： 1、TB复合群鉴定。 2、利福平耐药检测 。 原理：多重PCR扩增和反向杂交来识别。 可以在2小时出报告结果。
实验室方法
痰标本的前处理：同前方法。 试剂加入去污处理的痰标本中。 室温下手工晃动密闭痰盒，15分钟内2次，然 后取2ml灭活后的物质加入检测盒(其内含相 当于0.7ml未处理痰液或0.5ml已去污处理的痰 液)，检测盒放入检测平台。 MTB/RIF检测系统直接输出电子结果。
与PCR比较
高
无差异
灵敏度
特异度
211例利福平耐药
99.10%
506例利福平敏感
100%
讨论
该检测方法适用于低收入国家精确诊断肺 结核并能够进行福平耐药筛选的快速检测 方法。 以培养方法作金标准，该方法可以检测出 97%以上的肺结核患者，包括90%的涂阴病 人。 南非有60%-80%的人感染HIV，鉴于合并 HIV+TB阳性出率较低，尤其HIV+TB-， MTB/RIF有较高的检出率。
耐药检测基因芯片
基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通 过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断 特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。 结核分枝杆菌耐药检测基因芯片基于rpoB/katG/inhA的基 因突变，快速检测分离株或者痰样本中结核杆菌耐药性 （利福平、异烟肼）。
灵敏度 培阳 涂阳培阳 涂阴培阳 检测一份标本 检测两份标本 检测三份标本 检测HIV合并感染 97.60% 99.80% 90.20% 72.50% 85.10% 90.20% 93.90%
特异度 99.20% 98.60% 98.10% -
检测HIVTB 与HAIN比较
98.40% 无差异
无差异
适用范围：痰涂片镜检 十一五国家重大科技专项：泰兴、江阴 厂家：湖南天骑公司 原理：集菌法
流程图 痰标本消化灭活 基片的夹层杯 离心 细菌附着在基片 在夹层杯中 直接染色 取出基片 于载玻片上 镜检 自动阅片计算机报告系统。
所需仪器设备：普通的抗酸染色液、彭氏杯 （专利）、涂片机、KP21型快速干片机、抗 酸杆菌自动阅片计算机报告系统。
10%
不需要空调设施 不需要暗室 诊断性能优于标准荧光显微镜 寿命长（~ 15-20,000小时） 荧光染色液有致癌作用，推荐自动染色机。 涂片需避光低温保存。 需加强操作人员的培训和质量控制。
• 成本低廉，价格低于现有的光学显微镜。
适合县、乡级基层实验室使用。
二、液基夹层杯技术
MTB/RIF缺点：
基层实验室人员培训、温度控制、电力保障、是 否到位。
但是每年一次的仪器校准对于基层实验室是个挑 战，不过已经大量开展能否在基层实验室应用的 验证了。 技术尖端，生产费用较高。尽管基金会试图通过 谈判降低价格和低检测费用，但仍会比显微镜价 格要高，但比培养和药敏检测仪器要便宜。