粗多糖检测方法(葡萄糖)
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
粗多糖含量测定方法
粗多糖含量测量：1、称量0.2克的短序落葵薯的根粉末，加水4ml，100摄氏度水浴4小时。
2、4000转每分离心10min，将上清液全部转入另一个新管中（约3ml），加入7ml无水乙醇进行醇降，5000转每分离心10min，倒掉上清液，向每管中加入5ml无水乙醇，震荡起沉淀，然后5000转每分离心10min，倒掉上清，放入烘箱烘干。
3、向每个试管中加入6ml的蒸馏水，放入水浴锅中溶解，用sevag法除蛋白，加入氯仿和正丁醇混合液2ml（氯仿：正丁醇=4:1），5000转每分离心10min，通过几次预试实验后，确定所用多糖溶液的量为10ul，进行测量，具体方法如下：硫酸酚法：1）葡萄糖标准液的配制2）准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
3）2）苯酚液的配制4）准确移取苯酚6 mL，蒸馏水定容至100 mL，即得6％苯酚液，棕色瓶中避光保存。
表1 标准曲线的制作步骤取8支干净的具塞试管按表2方法操作,摇匀后放置5 min,置沸水浴中加热15min,取出迅速冷却至室温,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处测定吸光度。
以葡萄糖浓度Y 为纵坐标（ug/mL），吸光度X为横坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程。
计算百分含量：百分含量=L*600*10^（-6）/0.2蒽酮法：1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为纵坐标，光密度值为横坐标，作出标准曲线。
样品含量测定：百分含量= L*600*10^（-6）/0.2。
分光光度法测定桑黄中粗多糖(以葡聚糖计)的方法研究
2018年10月控制器、日本的SMOC 控制器等已经是较为成熟的控制器。
从这一点来看，石油化工仪表控制系统在先进控制方面做出良好的应用后，很多工作的部署都能够顺利的开展，同时在潜在问题的改善、解决过程中，也可以取得较多的帮助。
2.3制造执行系统通过在石油化工仪表控制系统的应用过程中开展积极的创新，很多地方的工作都取得了较多的肯定，并且对于行业的发展产生了良好的推动作用。
结合以往的工作经验和当下的工作标准，认为石油化工仪表控制系统的应用过程中，还需要在制造执行系统方面投入较多的努力。
首先，制造执行系统的存在，能够促使石油化工仪表控制系统的一些内部协调取得更好的效果，对于不同的仪表搭配，以及功能实践等，都可以取得较好的效果，整体上获得的价值非常突出。
其次，制造执行系统的应用，还必须在计算机、云计算、人工智能等方面投入较多的努力。
这些技术是当代比较先进的内容，而且在研发成果以及硬件搭配上，都能够达到多元化的目标。
通过对这些内容开展积极的融入，可以促使执行制造系统更加的完善，对于石油化工仪表控制系统的日后进步而言，能够提供更多的支持。
3石油化工仪表控制系统的发展新时代的研发工作中，石油化工仪表控制系统是非常有代表性的内容，未来应继续在石油化工仪表控制系统的内容上不断的增加，最大限度的促使系统的可靠性、可行性获得大幅度的提升。
例如，在石油化工仪表控制系统的智能理念上，需要划分出不同的模块，以及差异性的功能，这样才能在具体工作的运作成绩上，不断得到更高的水准。
与此同时，石油化工仪表控制系统的相关硬件搭配，也要得到深入的测试分析，尤其是在承载能力方面，必须做出较多的保障，这样才能对日后工作的进行，提供较多的支持与参考。
4总结我国在石油化工仪表控制系统的研发力度上不断提升，无论是固有问题的解决，还是新的理念拓展，或者是在工作效率的提升上，都能够取得较好的效果。
日后，应继续加强石油化工仪表控制系统的对比分析，充分模拟不同的环境来观察系统的运作效果，从而确保在工作的实践层面上，能够创造出较高的价值。
粗多糖的测定
粗多糖的测定：按王光亚主编，《保健食品功效成分检测方法》P19（分光光度法测定粗多糖的含量）1、适用范围本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104的水溶液性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
2、原理食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
3、主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器4、试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）NaOH溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
粗多糖检测方法
粗多糖的测定方法（分光光度法）本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104以上的水溶性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
1. 方法提要食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
2. 主要仪器（1）分光光度计。
（2）离心机（3000r/min）。
（3）旋转混匀器。
3. 试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
[指导]多糖检测方法（保健品）
![[指导]多糖检测方法（保健品）](https://img.taocdn.com/s3/m/548707a8f021dd36a32d7375a417866fb84ac0ea.png)
A.2 粗多糖A.2.1 方法本方法参照《保健食品功效成分检测方法》（王光亚主编，中国轻工业出版社2002年出版）中“粗多糖的测定方法”中“（一）碱性酒石酸铜滴定法”制订。
A.2.2原理样品中多糖经乙醇沉淀分离后，加酸、加热、回流水解成单糖，以次甲基蓝作指示剂，在加热条件下，滴定经标定过的碱性酒石酸钾钠铜溶液，根据样品液消耗体积，计算其含量。
A.2.3仪器与试剂A.2.3.1全玻璃标准磨口回流装置(500ml)，水解用；A.2.3.2碱性酒石酸铜甲液称取15g硫酸铜(CuSO4·5H2O)，及0.05g次甲基蓝，溶于水并稀释至1000ml。
A.2.3.3碱性酒石酸铜乙液称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000ml，储存于橡胶塞玻璃瓶内。
A.2.3.4葡萄糖标准溶液准确称取1.0000g 经过98~100℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后，并以水稀释至1000ml此溶液1ml含1mg葡萄糖，现配现用。
A.2.4 操作方法A.2.4.1 样品处理准确称取均匀研碎的样品粉末2.0g，置于250ml的磨口烧瓶中，精密加入50ml水，称定重量，至沸水浴中加热回流2h，冷却至室温，用水补足减失重量，混匀，滤过，精密吸取续滤液15ml加75ml无水乙醇搅拌均匀，在离心机中以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液，再加15ml热水（温度>90℃），冲洗离心瓶中沉淀物，重复一次后再以4000r/min离心30min，小心用吸管将上层液体吸去。
用离心瓶中醇析物用50ml热水（温度>90℃）少量多次转移至250ml磨口三角瓶中，加入15ml浓盐酸，开启冷凝管，在沸水浴中加热2h，冷却，然后先用40%的氢氧化钠溶液（约15ml）粗调pH值，后用稀的氢氧化钠溶液细调，再置于pH计上调整pH在6.8~7.2之间，（不要用pH试纸调）。
多糖测定方法
2.3.4 微藻细胞内、外总糖含量的测定(1) 配制葡糖糖标准溶液（100 μg/mL）①使用数显式电热恒温干燥箱在80℃下将分析纯无水葡萄糖烘干至恒重。
②使用电子精密天平准确称取1g无水葡萄糖。
③加入蒸馏水，使无水葡萄糖溶解。
④充分震荡摇匀后，再加入蒸馏水使之定容至100 mL。
⑤这样就成功配制1 %葡萄糖标准溶液。
⑥准确吸取1mL 1 %葡萄糖标准液，加入蒸馏水，摇匀后，使之定容到100 mL容量瓶中。
(2) 配制蒽酮溶液①使用电子精密天平准确称取0.2 g蒽酮。
②加入100 mL 95 %浓硫酸中。
③充分搅拌使之溶解，然后置于棕色瓶中。
④待用。
最好现用现配。
(3) 制作标准曲线①准确吸取一些葡萄糖标准溶液。
②吸取量分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL。
③放入10 mL的具有塞试管中，分别各添加蒸馏水至到1 mL。
④然后再加入4.0 mL的蒽酮溶液，充分震荡摇匀。
⑤放入电热恒温水浴锅的沸水浴中煮沸10min，然后再用水冷快速冷却至室内温度。
⑥等它们稳定之后，用紫外分光光度计测波长为620 nm的吸光度。
A = 6.8540 C + 0.0027，R2 = 0.9988。
(4) 配制亚铁氰化钾和硫酸锌溶液硫酸锌溶液的配制：①使用电子精密天平准确称取15 g分析纯硫酸锌。
②放入50 mL蒸馏水中，充分震荡搅拌，使之溶解。
亚铁氰化钾的配制：①使用电子精密天平准确称取0.3 g分析纯亚铁氰化钾。
②放入50 mL蒸馏水中，充分震荡搅拌，使之溶解。
(5) 测定总糖含量①测定细胞内总糖含量1)精确吸取藻液10 mL，使用台式离心机在5000 r/min转速下离心。
2)等待10 min后，把上清液吸出，作为待测胞外总糖。
3)放进冰箱冷冻，30min后拿出来融化。
4)然后再放进冰箱，反复3次，藻泥冻融破碎3次后。
5)分别准确加入3 mL PBS溶液，使用数控超声波清洗仪超声破碎，30 min后取出，充分摇晃振荡。
粗多糖检测方法
粗多糖（以葡萄糖计）的测定方法
1． 主要仪器
分光光度计；水浴锅；分析天平等
2． 试剂
蒽酮：分析纯；浓硫酸：分析纯；水为去离子水或蒸馏水。
蒽酮硫酸溶液：精密称取蒽酮0.1g ，加80%的硫酸溶液100ml 使溶解，摇匀。
3． 对照品溶液的制备
取葡萄糖对照品适量，于105℃干燥至恒重，精密称定，加水制成每1ml 含0.1mg 的溶液，即得。
4． 标准曲线的制备
分别精密量取对照品溶液0.2ml 、0.4ml 、0.6ml 、0.8ml 、1.0ml 、1.2ml ，置10ml 具塞试管中，加水至2.0ml ，精密加入硫酸蒽酮溶液6ml ，摇匀，置沸水浴中加热15分钟，取出，放入冰水浴中冷却15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在625nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
5． 供试品溶液的制备
精密量取本品1ml ，置于50ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液2ml 至20ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
6． 测定法
精密量取供试品溶液2ml ，置10ml 具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml ”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg ），计算，即得。
7． 结果计算
1000
1001⨯⨯⨯=V V m X 式中 X ——样品中粗多糖含量（以葡萄糖计）（g/100ml ）
m ——供试品溶液中含葡萄糖的重量（mg ）
V ——样品稀释倍数
V 1——比色时所取的样品溶液体积（ml ）。
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多糖的检测方法
粗多糖的苯酚-硫酸分光光度测定法
1.方法提要
多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，再与苯酚- 硫酸作用成橙红色化合物，其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比，在485nm波长下比色定量。
2.仪器
（1）离心机：4000r/min。
（2）离心管：50ml或具塞15ml。
（3）分光光度计。
（4）水浴锅。
（5）旋涡混合器。
3.试剂
实验用水为双蒸水，所用试剂为分析纯级。
(1) 无水乙醇。
(2) 80%（v/v）乙醇溶液。
(3) 葡萄糖标准液：准确称取干燥恒重的分析纯葡萄糖0.5000g加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（0.1mg/ml）。
(4) 5%苯酚溶液（W/V）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
(5) 浓硫酸（比重1.84）。
(6) 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5）：31.5ml（0.2mol/L）磷酸氢二钠与68.5ml（0.2mol/L）磷酸二氢钠混合。
4.测定步骤
（1）样品提取：称取混合均匀的固体样品1.0~2.0g，置于100ml容量瓶中，加水80ml 左右，于沸水浴中加热1小时（如保健食品添加的已是多糖提取物，则加热15min），冷却至室温后补加水至刻度（v1）,混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。
(2)沉淀粗多糖：准确吸取上滤液（或液体样品）5.0ml（V2），置于50ml离心管中（或2.0ml于15ml具塞离心管中），加入无水乙醇20ml（或8ml），混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。
残渣用水溶解并定容至10~25ml（V3）（根据糖浓度而定）。
(3)标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0ml、0.10ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml（相当于葡萄糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg、0.10mg）置于25ml比色管中，补加水至2.0ml，加入5%苯酚溶液1.0ml，在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10ml，在旋涡混合器上小心混匀，置沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
(4)样品测定：准确吸取上液适量（V4）（含糖0.02~0.08mg）置于25ml比色管中，补加水至2.0ml，然后按（3）法测定吸光度值。
从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算样品中粗多糖含量。
5.结果计算 X=4
22311V V m V V ⨯⨯⨯⨯m ×0.9×100 式中 X ──样品中粗多糖含量[mg/100g （ml ）]；
m 1——样品测定液中葡萄糖的质量（mg ）； m 2——样品质量（g 或ml ）； V 1——样品提取液总体积（ml ）； V 2——沉淀粗多糖所用样品提取液体积（ml ）； V 3——粗多糖溶液体积（ml ）； V 4——测定用样品液体积（ml ）； 0.9──葡萄糖换算为粗多糖的系数。